金银花源性细胞外囊泡样纳米颗粒在制备抗流感病毒药物中的应用

本发明属于生物医药，涉及金银花源性细胞外囊泡样纳米颗粒的制药用途，尤其涉及金银花源性细胞外囊泡样纳米颗粒在制备抗流感病毒药物中的应用。

背景技术：

1、流感是由流感病毒引起的呼吸道传染病，是全球最大的公共卫生挑战之一。甲型流感病毒(influenza a virus，iav)是导致不可预测的流感大流行和致命人畜共患的原因。iav有不同的亚型，其中感染人类的主要亚型为h1n1、h2n2和h3n2。

2、金银花为忍冬lonicera japonica thunb.的干燥花蕾或初开的花，以“金银花”为正名入药始载于明代《滇南本草》。金银花性甘、寒，入肺、心、胃、大肠经，能清热解毒、宣散风热。细胞外囊泡(extracellular vesicles，evs)含有多种蛋白质、脂质和核酸，可通过介导细胞与细胞之间的通讯发挥重要的生理功能，几乎所有类型的真核和原核细胞都分泌evs。植物evs在形态方面与哺乳动物evs相似，但其组成和功能等方面研究较少。有研究发现植物evs是植物先天免疫系统的组成成分，具有抗真菌作用。此外，植物evs具有跨物种调节功能，不仅可以调节哺乳动物细胞的生理功能，还可以干预和预防疾病进程，对疾病起到治疗作用。这些研究结论证明植物evs作为一种新型的天然产物有可能成为新药开发的良好候选来源。中药多为植物，成本低，副作用小，但中药源性的evs却很少有人研究。

3、从中药金银花中提取细胞外囊泡是否可行，提取出的金银花源性细胞外囊泡样纳米颗粒是否具有生物活性还未可知。

4、因此，如何提供一种从中药金银花中提取细胞外囊泡的方法，并深入研究提取到的金银花源性细胞外囊泡样纳米颗粒的功能，以发掘其在防治流感方面的应用潜力，是具有意义的。

技术实现思路

1、针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供金银花源性细胞外囊泡样纳米颗粒的制药用途，尤其提供金银花源性细胞外囊泡样纳米颗粒在制备抗流感病毒药物中的应用。

2、为达到此发明目的，本发明采用以下技术方案：

3、第一方面，本发明提供金银花源性细胞外囊泡样纳米颗粒在制备抗流感病毒药物中的应用。

4、中医药因其临床疗效可靠、副作用少和低耐药性，已成为抗病毒研究的主要焦点。中医药具有多种有效成分协同作用以及多靶标的特点，可防止耐药性的产生，在呼吸道病毒相关疾病的治疗中具有独特优势。

5、本发明创造性地提取纯化中药金银花衍生的细胞外囊泡，并对其生理功效进行了研究，发现其能够充分被人支气管上皮细胞和巨噬细胞内化吸收，显著促进巨噬细胞的增殖，而对支气管上皮细胞的生长无明显影响，还能够抑制巨噬细胞中lps刺激引起的激活和炎症反应，具有体内肺靶向性，在小鼠流感病毒模型中显示出显著的保护效果，将其用于制备抗流感病毒的药物具有潜力，为预防或治疗流感的方法提供了新的策略。

6、本发明所涉及的金银花源性细胞外囊泡样纳米颗粒可以通过本领域技术人员公知的任何方法制备得到，更优选下述提取方法，该方法得到的金银花源性细胞外囊泡样纳米颗粒纯度更高，具有更优异的体内肺靶向性和抗流感病毒效果。

7、优选地，所述金银花源性细胞外囊泡样纳米颗粒由包括如下步骤的制备方法制得：

8、将金银花原料浸泡后进行破壁粉碎，汁液离心过滤，滤液进行切向流浓缩富集，得到浓缩液；浓缩液离心，上清液过滤，滤液超速离心，收集沉淀，沉淀重悬，过滤，即得。

9、优选地，所述金银花原料包括金银花饮片。

10、优选地，所述汁液离心在1000-4000g(例如1000g、2000g、3000g、4000g等)下进行，离心时间为20-40min(例如20min、25min、30min、35min、40min等)。

11、优选地，所述浓缩液离心在0-8℃(例如0℃、1℃、2℃、3℃、4℃、5℃、6℃、7℃、8℃等)下以8000-15000g(例如8000g、9000g、10000g、11000g、12000g、13000g、14000g、15000g等)进行40-100min(例如40min、50min、60min、70min、80min、90min、100min等)。

12、优选地，所述超速离心在0-8℃(例如0℃、1℃、2℃、3℃、4℃、5℃、6℃、7℃、8℃等)下以80000-150000g(例如80000g、90000g、100000g、110000g、120000g、130000g、140000g、150000g等)进行40-100min(例如40min、50min、60min、70min、80min、90min、100min等)。

13、优选地，所述浓缩液为浓缩前滤液体积的10-40％，例如10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％等。

14、优选地，所述沉淀重悬后过滤使用0.22μm滤膜过滤。

15、在本发明中，所述流感病毒包括甲型流感病毒。

16、优选地，所述甲型流感病毒包括h1n1病毒、h2n2病毒或h3n2病毒。

17、在本发明中，所述药物的剂型包括片剂、胶囊剂、滴丸剂、粉剂、溶液剂、气雾剂或喷雾剂中的任意一种。

18、优选地，所述药物还包括药学上可接受的辅料，例如稀释剂、调味剂、粘合剂、填充剂、增稠剂、润滑剂或ph调节剂等。

19、第二方面，本发明提供金银花源性细胞外囊泡样纳米颗粒在制备肺靶向制剂中的应用。

20、本发明还研究发现金银花源性细胞外囊泡样纳米颗粒具有显著的肺部靶向性，这一发现可进一步应用于肺靶向制剂的制备中，以进行肺部疾病发病机制的研究和相关病症的治疗。

21、优选地，所述肺靶向制剂还包括负载于所述金银花源性细胞外囊泡样纳米颗粒中的其他抗流感病毒的药物。

22、第三方面，本发明提供金银花源性细胞外囊泡样纳米颗粒在制备巨噬细胞增殖促进剂中的应用。

23、第四方面，本发明提供金银花源性细胞外囊泡样纳米颗粒在制备巨噬细胞炎症反应抑制剂中的应用。

24、根据本发明的研究结果，金银花源性细胞外囊泡样纳米颗粒能够在细胞水平(体外水平)促进巨噬细胞的增殖或抑制巨噬细胞炎症反应，即金银花源性细胞外囊泡样纳米颗粒能被制成一种单纯的试验用制剂，用于探究巨噬细胞的生理代谢过程，本发明所要求保护的细胞增殖促进剂或细胞炎症反应抑制剂并不是用于消除病因或病灶，即是一种以非治疗为目的地在制备巨噬细胞增殖促进剂或巨噬细胞炎症反应抑制剂中的应用。

25、相对于现有技术，本发明具有以下有益效果：

26、本发明创造性地提取纯化中药金银花衍生的细胞外囊泡，并对其生理功效进行了研究，发现其能够充分被人支气管上皮细胞和巨噬细胞内化吸收，显著促进巨噬细胞的增殖，而对支气管上皮细胞的生长无明显影响，还能够抑制巨噬细胞中lps刺激引起的激活和炎症反应，具有体内肺靶向性，在小鼠流感病毒模型中显示出显著的保护效果，将其用于制备抗流感病毒的药物具有潜力，为预防或治疗流感的方法提供了新的策略。

27、目前还未见文献报道有关高纯度金银花源性细胞外囊泡样纳米颗粒的提取方法和功能研究，本发明首次对高纯度金银花源性细胞外囊泡样纳米颗粒进行提取并进行深入研究，为植物源性细胞外囊泡的研究与开发以及流感的研究与治疗提供了新的策略。