交替单胞菌在大西洋鲑抗病中的应用

本发明涉及微生物，具体涉及交替单胞菌在大西洋鲑抗病中的应用。

背景技术：

1、大西洋鲑(salmo salar)隶属于硬骨鱼纲(osteichthyes)、辐鳍亚纲(actinopterygii)、鲑形目(salmoniformes)、鲑科(salmonidae)、鲑属(salmo)。大西洋鲑属于冷水性养殖鱼类，富含多种氨基酸，营养价值高，受到世界各地消费者的喜爱，对大西洋鲑的需求较多。在大西洋鲑的养殖过程中，一般采用普通的饲料进行投喂，该种投喂方式普遍存在饲料利用率低，浪费大，水体污染严重，饲料成本高的问题。同时，大西洋鲑的高密度养殖使得鱼易发病，且治愈难度大，损失较大。

2、交替单胞菌科(alteromonadaceae)是生活在需氧海洋环境中的革兰氏阴性异养细菌，隶属于变性菌门，γ变性菌纲，交替单胞菌目。交替单胞菌(alteromonas)，是γ变性菌(gammaproteobacteria)类的广泛海洋复制营养菌，可促进氮循环。交替单胞菌是浮游植物的重要共生细菌，gammaproteobacteria中一种普遍，丰富和浮游植物相关的海洋成员，其范围从热带水域延伸到极地地区。交替单胞菌的菌种生物学特征如下：杆状，单个，革兰氏染色呈阴性，菌落形态为圆形，不透明，菌落呈米白色，表面光滑湿润。交替单胞菌的生存比例达到80％，相对丰度一直很高，在浮游植物大量繁殖中，交替单胞菌对细菌总生物量的贡献与噬细胞-黄杆菌-拟杆菌组和玫瑰杆菌的水平相似。

3、现有技术中已经发现交替单胞菌对铁代谢做出了重大贡献，并在海洋有机碳和氮循环中发挥重要作用。对免疫系统有促进作用，使巨噬细胞功能增强，并产生特异性抗体。由于氮通常是海洋生产力的共同限制性营养物质，碳循环与氮的生物地球化学转化密切相关。交替单胞菌表现出广泛的底物偏好，可以利用光自养生物提供的溶解有机碳和颗粒有机碳。

4、中国专利cn202010762698中公开了一种交替单胞菌，所述的交替单胞菌的保藏编号为cgmcc no.19848。该发明所述的交替单胞菌同时具有降解琼胶、卡拉胶、褐藻酸钠和纤维素钠活性的多功能深海菌株，该发明的交替单胞菌能够将褐藻酸钠、卡拉胶、琼胶和纤维素钠等胶体降解为小分子的寡糖和单糖；特别是该菌能够在室温条件下直接降解褐藻和红藻，因而为海洋海藻和藻胶等污染物的绿色治理提供了新的解决思路，具有广阔的应用前景。

5、中国专利cn202110708774中公开了一株交替单胞菌ht1及其培养方法与应用，该发明所述的交替单胞菌的保藏编号为cctcc no.m2021217。该发明所述的交替单胞菌ht1可以在以浒苔为唯一碳源的培养基中生长，降解浒苔多糖所得到的产物为浒苔寡糖，主要以二糖、三糖、四糖和五糖的形式存在。该菌株及其所分泌的浒苔多糖裂解酶可以应用于海洋绿藻降解及功能性低聚寡糖的制备，在医药、化妆品以及食品行业等都具有较好的应用潜力。

6、目前并未公开报道交替单胞菌在大西洋鲑养殖方面的应用，并且现有技术中存在大西洋鲑的饲料利用率低且产量差的问题。

技术实现思路

1、本发明的目的是提供交替单胞菌在提升大西洋鲑抗病能力中的应用，通过在饲料中添加交替单胞菌不仅能够加快大西洋鲑的生长，同时还能提高大西洋鲑的免疫力和抗病力。

2、术语解释：

3、术语“培养物”是指经人工接种和培养后，长有微生物群体的液体或固体产物的统称。即通过将微生物进行生长和/或扩增而获得的产物，其可以是微生物的生物学纯培养物，也可以含有一定量的培养基、代谢物或培养过程中产生的其他成分。

4、为实现上述发明目的，本发明的技术方案如下：

5、一方面，本发明提供了交替单胞菌在提升大西洋鲑抗病能力中的应用。

6、优选地，所述的交替单胞菌选自交替单胞菌菌株、交替单胞菌裂解物、交替单胞菌培养物、交替单胞菌株的提取物、交替单胞菌裂解物的提取物、交替单胞菌培养物的提取物中的一种或多种。

7、优选地，所述的交替单胞菌培养物通过将交替单胞菌在培养基中培养获得。

8、进一步优选地，所述的培养基包括以下组分：蛋白胨，酵母膏，磷酸高铁和琼脂。

9、再进一步优选地，所述的培养基按照重量份数计包括以下组分：蛋白胨1-10份，酵母膏0.1-5份，磷酸高铁0.01-1份，琼脂10-30份。

10、最优选地，所述的培养基按照重量份数计包括以下组分：蛋白胨5份，酵母膏1份，磷酸高铁0.01份，琼脂15-20份。

11、在本发明的一些实施方式中，所述的培养基中包括蛋白胨5克，酵母膏1克，磷酸高铁0.01克，琼脂20克，陈海水1000ml。

12、具体地，所述的蛋白胨的cas号为73049-73-7。

13、具体地，所述的酵母膏的cas号为8013-01-2。

14、具体地，所述的磷酸高铁的化学式为fepo4，cas号为10045-86-0。

15、具体地，所述的琼脂的cas号为9002-18-0。

16、优选地，所述的培养基的ph为7-8.5。

17、进一步优选地，所述的培养基的ph为7.6-7.8。

18、优选地，所述的培养基为固体培养基。

19、优选地，调节ph所用的试剂选自氢氧化钠、氢氧化钾、氨水、盐酸、磷酸、硝酸、硫酸、乙酸中的一种或多种。

20、进一步优选地，所述的调节ph所用的试剂选自氢氧化钠。

21、再进一步优选地，所述的氢氧化钠为煮沸的氢氧化钠。

22、优选地，所述的氢氧化钠的浓度为1-10％。

23、进一步优选地，所述的氢氧化钠的浓度为5％。

24、优选地，所述的培养基中还包含nacl，所述的nacl的浓度为1-10％。

25、进一步优选地，所述的nacl的浓度为5％。

26、优选地，所述的交替单胞菌的培养温度为25-30℃。

27、进一步优选地，所述的交替单胞菌的培养温度为28℃。

28、优选地，所述的交替单胞菌的培养时间为1-5天。

29、进一步优选地，所述的交替单胞菌的培养时间为3天。

30、优选地，所述的交替单胞菌的获得方法包括：从大西洋鲑养殖水池中采取水样16升，使用微孔滤器及0.2微米滤膜过滤，富集水中细菌。将过滤后的滤膜剪碎，加入一定量灭菌陈海水震荡摇匀，取0.1毫升涂布至上述固体培养基。经过48小时培养后沾取菌落划线培养48小时。取单菌落提取基因组dna送测。在分析确认为交替单胞菌后将原种冻存及传代培养。

31、优选地，所述的应用为如下至少一种：

32、(1)在制备用于提高大西洋鲑生长能力的制剂中的应用；

33、(2)在制备增强大西洋鲑免疫力的制剂中的应用；

34、(3)在制备提高大西洋鲑产量的制剂中的应用。

35、优选地，所述的交替单胞菌的菌落特征：在2216e平板上，菌落呈圆形，淡黄色，凸起，表面光滑有光泽半透明直径为2mm-2.5mm。

36、又一方面，本发明提供了交替单胞菌在制备饲料添加剂中的应用。

37、具体地，所述的饲料添加剂能够促进水产动物的生长。

38、进一步具体地，所述的水产生物为大西洋鲑。

39、优选地，所述的交替单胞菌选自交替单胞菌菌株、交替单胞菌裂解物、交替单胞菌培养物、交替单胞菌株的提取物、交替单胞菌裂解物的提取物、交替单胞菌培养物的提取物中的一种或多种。

40、又一方面，本发明提供了一种饲料添加剂，所述的饲料添加剂中包含交替单胞菌。

41、优选地，所述的交替单胞菌选自交替单胞菌菌株、交替单胞菌裂解物、交替单胞菌培养物、交替单胞菌株的提取物、交替单胞菌裂解物的提取物、交替单胞菌培养物的提取物中的一种或多种。

42、优选地，所述的饲料添加剂中交替单胞菌的活菌数不少于1×109cfu/g或1×109cfu/ml。

43、优选地，所述的饲料添加剂为水产生物的饲料添加剂。

44、进一步优选地，所述的水产生物为大西洋鲑。

45、优选地，所述的饲料添加剂的制备包括以下步骤：将交替单胞菌的种子液按照100μl接种量接种于固体发酵培养基中，混匀，在25-30℃下发酵1-5天，发酵结束后，即可得到含有交替单胞菌的饲料添加剂。

46、又一方面，本发明提供了交替单胞菌在制备提高大西洋鲑抗病能力的药物中的应用，所述的药物中包含交替单胞菌。

47、优选地，所述的药物的剂型为液剂、乳剂、悬浮剂、粉剂、颗粒剂、可湿性粉剂或水分散粒剂。

48、优选地，所述的药物中可添加药学上可接受的载体。

49、进一步优选地，所述的载体选自表面活性剂、粘合剂、稳定剂、ph调节剂中的一种或多种。

50、再进一步优选地，所述的表面稳定剂选自十二烷基磺酸钠、十二烷基硫酸钠、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、羟丙甲基纤维素、卵磷脂、脱氧胆酸钠、胆酸钠、泊洛沙姆中的一种或多种。

51、再进一步优选地，所述的粘合剂选自乙醇、淀粉浆、糖浆、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、海藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮中的一种或多种。

52、再进一步优选地，所述的稳定剂选自金合欢胶、琼脂、藻酸、纤维素醚、羧甲基甲壳酯中的一种或多种。

53、再进一步优选地，所述的ph调节剂选自盐酸、硫酸、硝酸、氢氧化钠、氢氧化剂、氨水中的一种或多种。

54、本发明的有益效果为：

55、交替单胞菌是一种在水产养殖中具有很大潜力的微生物，通过向养殖池中添加交替单胞菌可以起到如下作用：

56、(1)帮助改善水质：交替单胞菌具有分解和利用有机物的能力，可以有效地降解水中的有机废弃物和浮游植物等，从而改善水质。同时，交替单胞菌也可以氧化硫化合物，减少水中硫化物的含量，避免对水产养殖的危害。为循环养殖体系提供较好的养殖环境，减少因为水质死亡的大西洋鲑数量。

57、(2)提高饵料利用率：交替单胞菌分泌多种酶，可以促进饵料的消化吸收，提高饵料利用率，减少浪费。同时，交替单胞菌可以利用饵料残渣和其他废弃物质，转化为有益的代谢产物，降低环境污染和成本。养殖区日均投喂量的1/5不能被大西洋鲑充分吸收，饵料中加入交替单胞菌可促进大西洋鲑的消化吸收，提高饵料利用率。

58、(3)增强水生动物的免疫力：交替单胞菌可以产生多种生物活性化合物，包括抗生素和抗菌肽等，这些化合物可以增强水生动物的免疫力，提高其抵抗病原体和环境胁迫的能力，降低疾病发生率和死亡率。在大西洋鲑生活周期内，死亡率一直被人们所重视，在使用循环水养殖并及时监测水质以保证大西洋鲑生活环境质量的同时，加强其自身的免疫力，使其有更强的适应能力，降低死亡数量，从而提高产量。

59、(4)促进生长和发育：交替单胞菌可以产生多种生长因子和激素，这些化合物可以促进水生动物的生长和发育，提高其产量和质量。交替单胞菌是一种革兰氏阴性菌，分布在深海，其主要活性成分是一种多糖，可以抑制细胞粘附因子(cam-1)的表达，抑制炎症相关信号的传导，故具有抗炎、舒缓的功效。

60、(5)生物安全性高：交替单胞菌是一种天然的微生物，具有较高的生物安全性，不会对环境和生态造成负面影响。

61、(6)适应性广：交替单胞菌具有较强的适应性，能够适应不同的水质、温度和盐度等环境条件。

62、(7)作用持久：交替单胞菌具有较长的作用持久性，能够在水体中形成稳定的微生物群落，持续发挥其益生作用。

63、(8)该发明所述的菌种及培养基合成方面，原料的价格低廉，适用于水产养殖行业的大面积推广使用。