一种自体富细胞因子血浆的制备方法及其应用与流程

本发明属于生化细胞治疗，尤其涉及一种自体富细胞因子血浆的制备方法及其应用。

背景技术：

1、慢性子宫内膜炎(chronic endometritis,ce)是一种持续性的子宫内膜疾病。传统意义上的慢性子宫内膜炎被描述为慢性浆细胞性子宫内膜炎，其诊断依据是在子宫内膜间质中存在淋巴细胞、浆细胞的浸润，同时伴有中性粒细胞。这种疾病的病因目前尚不完全清楚，但过去的研究表明，慢性子宫内膜炎可能与细菌感染、宫内节育器、子宫内膜息肉、不全流产、黏膜下肌瘤以及输卵管阻塞等因素有关。

2、慢性子宫内膜炎患者的临床表现包括月经紊乱、异常阴道出血、盆腔疼痛等症状。该疾病可以对生育能力产生负面影响，增加了不孕症的风险，并可能导致早期流产和复发性流产。因此，对于患有慢性子宫内膜炎的患者，及时准确地进行诊断并采取适当的治疗策略非常重要。

3、传统治疗慢性子宫内膜炎的方法主要是抗生素治疗和手术切除。抗生素被认为是治疗慢性子宫内膜炎的有效方案之一，大约90％的患者在经过抗生素治疗后可以治愈并恢复正常。然而，仍有一部分患者在多周期抗生素治疗后子宫内膜仍然持续呈现炎性的情况，且临床长期疗效不佳。此外，手术切除对于慢性子宫内膜炎的治疗可能带来一定的风险，并且治疗后的结果也不尽如人意。

4、因此，对于已经接受传统治疗无效的难治性慢性子宫内膜炎患者，寻找并开发新的临床治疗策略以满足其生育需求变得迫切，这样的治疗策略需要根据对慢性子宫内膜炎病因的进一步研究，寻找并验证更有效的治疗方法和技术手段。

技术实现思路

1、为解决上述问题，本发明提供一种自体富细胞因子血浆的制备方法，包括：

2、采集得到全血样本，依次经过二步离心法取得血浆样本；

3、测定所述血浆样本的离心后生物指标数据并计算得到血浆状态参数，并将测定后的所述血浆样本作为所述自体富细胞因子血浆。

4、优选地，所述采集得到全血样本，依次经过二步离心法取得血浆样本，包括：

5、采集枸缘酸钠抗凝全血样本；

6、对所述全血样本进行离心前的生物指标检测，获得离心前生物指标数据；

7、通过二步离心法对检测后的所述全血样本进行离心处理，获取到所述血浆样本。

8、优选地，所述通过二步离心法对检测后的所述全血样本进行离心处理，获取到所述血浆样本，包括：

9、利用离心机，对所述全血样本依次进行第一次离心处理和第二次离心处理，再经过混匀处理后，得到所述血浆样本。

10、优选地，所述第一次离心处理和所述第二次离心处理的步骤，包括：

11、对所述全血样本进行第一次离心处理，得到第一离心样本；

12、分离所述第一离心样本中含有白膜层的第一血浆层，并转移至acrp离心容器中；

13、将所述第一血浆层进行第二次离心处理，得到第二离心样本。

14、5.如权利要求4所述自体富细胞因子血浆的制备方法，其特征在于，所述混匀处理，包括：

15、去掉所述acrp离心容器内所述第二离心样本中2/3体积的血浆层；

16、利用移液装置吹打所述acrp离心容器内所述第二离心样本剩余的血浆层进行混合，即得到所述血浆样本。

17、优选地，所述对所述全血样本进行离心前的生物指标检测，获得离心前生物指标数据，包括：

18、取出所述全血样本，利用全血细胞分析仪进行生物指标检测并记录所述全血样本对应的全血血小板浓度、白细胞浓度和红细胞浓度，作为所述离心前生物指标数据。

19、优选地，在进行利用全血细胞分析仪检测并获得所述离心前生物指标数据之前，取出所述全血样本后，进行颠倒振摇混合至少8次。

20、优选地，所述测定所述血浆样本的离心后生物指标数据，包括：

21、取所述血浆样本，利用全血细胞分析仪检测并记录所述全血样本对应的全血血小板浓度、白细胞浓度和红细胞浓度，作为所述离心后生物指标数据。

22、优选地，所述计算得到血浆状态参数，包括：

23、分别对所述血浆样本进行生物安全性、流式细胞术和酶联免疫吸附试验测定，获得测定结果；

24、根据所述测定结果计算得到所述血浆样本的细菌含量、细胞成分和细胞因子浓度，作为所述血浆状态参数。

25、此外，为解决上述问题，本发明还提供一种基于如上述所述的制备方法所得到的自体富细胞因子血浆在制备防治难治性慢性子宫内膜炎的产品中的应用。

26、本发明提供一种自体富细胞因子血浆的制备方法，包括：采集得到全血样本，依次经过二步离心法取得血浆样本；测定所述血浆样本的离心后生物指标数据并计算得到血浆状态参数，并将测定后的所述血浆样本作为所述自体富细胞因子血浆。本发明针对现有难治性慢性子宫内膜炎临床治疗现状存在的问题与不足，研究了一种安全可靠、疗效确切、生物安全性和稳定性更好的易于生产的治疗难治性慢性子宫内膜炎的自体富细胞因子血浆。该方法能够满足方法验证过程中对标准化和稳定性(包括重复性和人员操作误差)等方面的要求，该方法对于难治性慢性子宫内膜炎治疗药物的研究开发，质量控制乃至临床应用都具有重要的意义。

27、本发明采用的二步离心法，分离制备acrp，该方法重复性和人员操作误差rsd均小于10％；生物安全性高，供试品中的细菌和支原体培养结果均为阴性，内毒素含量为0.0146-0.0154eu/ml；供试品中富含高浓度的细胞因子如vegf(259.4±3.6pg/ml)和tgf-β(622.2±15.4pg/ml)；该方法分离提取的acrp中含有nk细胞(72.0±5.60％)、肥大细胞(72.7±9.1％)和巨噬细胞(55.0±7.0％)，以及部分的t细胞(18.0±6.1％)和b细胞(11.1±4.6％)。

28、因此，采用本发明提供的方法能够简便、准确、高效地制备acrp，稳定安全，使用方便，易于生产，这对于治疗难治性慢性子宫内膜炎人群的质量控制乃至临床应用都具有重要的意义。

技术特征：

1.一种自体富细胞因子血浆的制备方法，其特征在于，包括：

2.如权利要求1所述自体富细胞因子血浆的制备方法，其特征在于，所述采集得到全血样本，依次经过二步离心法取得血浆样本，包括：

3.如权利要求2所述自体富细胞因子血浆的制备方法，其特征在于，所述通过二步离心法对检测后的所述全血样本进行离心处理，获取到所述血浆样本，包括：

4.如权利要求3所述自体富细胞因子血浆的制备方法，其特征在于，所述第一次离心处理和所述第二次离心处理的步骤，包括：

5.如权利要求4所述自体富细胞因子血浆的制备方法，其特征在于，所述混匀处理，包括：

6.如权利要求2所述自体富细胞因子血浆的制备方法，其特征在于，所述对所述全血样本进行离心前的生物指标检测，获得离心前生物指标数据，包括：

7.如权利要求6所述自体富细胞因子血浆的制备方法，其特征在于，在进行利用全血细胞分析仪检测并获得所述离心前生物指标数据之前，取出所述全血样本后，进行颠倒振摇混合至少8次。

8.如权利要求1所述自体富细胞因子血浆的制备方法，其特征在于，所述测定所述血浆样本的离心后生物指标数据，包括：

9.如权利要求1所述自体富细胞因子血浆的制备方法，其特征在于，所述计算得到血浆状态参数，包括：

10.一种基于如权利要求1-9任一项所述的制备方法所得到的自体富细胞因子血浆在制备防治难治性慢性子宫内膜炎的产品中的应用。

技术总结
本发明提供一种自体富细胞因子血浆的制备方法及其应用，属于生化细胞治疗技术领域。其中，所述制备方法包括：采集得到全血样本，依次经过二步离心法取得血浆样本；测定所述血浆样本的离心后生物指标数据并计算得到血浆状态参数，并将测定后的所述血浆样本作为所述自体富细胞因子血浆。采用本发明提供的方法能够简便、准确、高效地制备ACRP，稳定安全，使用方便，易于生产，这对于治疗难治性CE人群的质量控制乃至临床应用都具有重要的意义。

技术研发人员：陈现,陈明烨,连若纯,刘梦,张宏展
受保护的技术使用者：深圳中山妇产医院
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15