SLCO4C1在制备治疗肝细胞癌的产品中的应用的制作方法

本发明属于生物，涉及slco4c1在制备治疗肝细胞癌的产品中的应用。

背景技术：

1、肝细胞癌(hepatocellular carcinoma，hcc)的特点是其侵袭行为，与其快速的疾病进展密切相关。一些证据表明，失巢抗性与肿瘤进展、侵袭和转移密切相关。然而，目前缺乏对肝细胞癌的失巢分型及在此背景下对新型生物靶向机制的研究，故需要进一步探索。

2、失巢是导致细胞死亡的一种途径。其机制是细胞与其基质之间的不接触导致死亡。最初在哺乳动物中发现，当细胞从基质的相互作用中分离出来时，它会触发细胞凋亡的机制，促进异常细胞的消除。在正常细胞中，由于其机制，缺氧发挥了肿瘤抑制作用。然而，肿瘤细胞可以通过不同的机制避免凋亡的影响，癌细胞的增殖和转移不受抑制。细胞凋亡是抗肿瘤治疗的重要靶点。

3、slco4c1是一种属于slco(溶质载体有机阴离子转运体)家族的载体蛋白。它是一种人肾脏特异性的有机阴离子转运肽。slco4c1可作为头颈部癌的抑癌基因。干扰slco4c1的表达可导致子宫内膜癌细胞中pi3k/akt信号通路失活，从而导致子宫内膜癌细胞的凋亡。slco4c1在每个肿瘤中的作用可能存在异质性。目前尚无关于slco4c1在肝细胞癌中的研究报道。一些证据表明，失巢抗性与肿瘤进展、侵袭和转移密切相关，然而，目前缺乏对肝细胞癌的失巢分型及在此背景下对新型生物靶向机制的研究，故需要进一步探索。

4、综上所述，探究肝细胞癌凋亡，挖掘治疗靶点，对于肝细胞癌治疗具有重要意义。

技术实现思路

1、针对现有技术的不足和实际需求，本发明提供slco4c1在制备治疗肝细胞癌的产品中的应用，利用失巢相关基因构建模型研究肝细胞癌中失巢细胞的分型，利用生物信息学手段和相关实验挖掘肝细胞癌新的治疗靶点。

2、为达上述目的，本发明采用以下技术方案：

3、第一方面，本发明提供slco4c1在制备治疗肝细胞癌的产品中的应用。

4、优选地，所述slco4c1的氨基酸序列包括seq id no.1所示的序列。

5、本发明中，结合tcga、geo和icgc数据库中的肝细胞癌(hcc)样本，对失巢基因进行聚类分析，揭示了不同亚型之间的新模式，采用加权共表达网络对不同基因亚型进行显著性基因分析，建立与失巢相关的预后基因风险模型，并采用lasso-cox回归分析得出风险评分，go、kegg和gsea方法主要被用于研究高危组和低危组中富集到的信号通路，比较两组患者在免疫浸润、肿瘤突变负荷、肿瘤微环境和药物敏感性等方面的差异，采用rt-qpcr和蛋白印迹法来验证slco4c1在hcc组织和正常组织中的表达水平，采用cck8、集落形成、侵袭迁移、划痕实验和流式细胞术实验去分析slco4c1在hcc细胞中的生物学功能。发现slco4c1在hcc组织中表达下调，且验证了其可抑制hcc细胞的增殖、侵袭和迁移，因此slco4c1可作为治疗肝细胞癌的新靶点。

6、seq id no.1：

7、isssydisfcllslfvsffgerghkprwlafaafmiglgalvfslpq。

8、第二方面，本发明提供提高slco4c1表达量的试剂在制备治疗肝细胞癌的产品中的应用。

9、本发明中，发现与未经处理hcc细胞相比，slco4c1在敲低后的hcc细胞中表达水平显著下调，并验证其具备抑制hcc细胞增殖、侵袭和迁移的能力，即提高hcc细胞中slco4c1的水平，可实现一定治疗效果。

10、优选地，所述试剂包括slco4c1基因或含有所述slco4c1基因的重组载体。

11、优选地，所述slco4c1基因的核酸序列包括seq id no.2所示的序列。

12、优选地，所述重组载体包括质粒载体或病毒载体。

13、seq id no.2：

14、ttccctgactggccctgatttcatcaagctacgatatttcattctgtt tgttgtctttatttgtatcattctttggtgaaagaggacataagccgaga tggcttgc。

15、第三方面，本发明提供一种药物组合物，所述药物组合物包括提高slco4c1表达量的试剂。

16、优选地，所述药物组合物还包括药剂学上可接受的药用辅料。

17、所述药用辅料包括载体、稀释剂、粘合剂、润湿剂、崩解剂、乳化剂、助溶剂、增溶剂、渗透压调节剂、表面活性剂、包衣材料、着色剂、ph调节剂、抗氧剂、抑菌剂或缓冲剂中的任意一种或至少两种的组合。

18、第四方面，本发明提供提高slco4c1表达量的试剂在制备肝细胞癌细胞增殖抑制剂中的应用。

19、第五方面，本发明提供提高slco4c1表达量的试剂在制备肝细胞癌细胞侵袭和迁移抑制剂中的应用。

20、第六方面，本发明提供提高slco4c1表达量的试剂在制备肝细胞癌细胞凋亡诱导剂中的应用。

21、第七方面，本发明提供提高slco4c1表达量的试剂在制备以非疾病诊断和/或治疗为目的的肝细胞癌细胞增殖抑制剂中的应用。

22、根据本发明的研究结果，slco4c1具有抑制肝细胞癌细胞增殖的作用，因此，该结果表明提高slco4c1表达量的试剂可以作为一种以非诊断和/或治疗为目的的肝细胞癌细胞增殖抑制剂，用于科研领域，例如研究更多的肝细胞癌细胞生长和代谢机制或行为、筛选治疗肝细胞癌的药物等等。

23、第八方面，本发明提供提高slco4c1表达量的试剂在制备以非疾病诊断和/或治疗为目的的肝细胞癌细胞侵袭和迁移抑制剂中的应用。

24、根据本发明的研究结果，slco4c1具有抑制肝细胞癌细胞侵袭和迁移的作用，因此，该结果表明提高slco4c1表达量的试剂可以作为一种以非诊断和/或治疗为目的的肝细胞癌细胞侵袭和迁移抑制剂，用于科研领域，例如研究更多的肝细胞癌细胞生长和代谢机制或行为、筛选治疗肝细胞癌的药物等等。

25、第九方面，本发明提供提高slco4c1表达量的试剂在制备以非疾病诊断和/或治疗为目的的肝细胞癌细胞凋亡诱导剂中的应用。

26、根据本发明的研究结果，slco4c1具有诱导肝细胞癌细胞凋亡的作用，因此，该结果表明提高slco4c1表达量的试剂可以作为一种以非诊断和/或治疗为目的的肝细胞癌细胞凋亡诱导剂，用于科研领域，例如研究更多的肝细胞癌细胞生长和代谢机制或行为、筛选治疗肝细胞癌的药物等等。

27、第九方面，本发明提供降低slco4c1表达量的试剂在制备以非疾病诊断和/或治疗为目的的肝细胞癌细胞凋亡抑制剂中的应用。

28、根据本发明的研究结果，slco4c1具有诱导肝细胞癌细胞凋亡的作用，因此，该结果表明降低slco4c1表达量的试剂可以作为一种以非诊断和/或治疗为目的的肝细胞癌细胞凋亡抑制剂，用于科研领域，例如研究更多的肝细胞癌细胞生长和代谢机制或行为、筛选治疗肝细胞癌的药物等等。

29、优选地，所述降低slco4c1表达量的试剂包括shrna(short hairpin rna)，所述shrna的核酸序列包括seq id no.3或seq id no.4所示。

30、seq id no.3:5’-gccataagtgttacttgtaaa-3’。

31、seq id no.4:5’-gctacgatatttcattctgtt-3’。

32、第十方面，本发明提供降低slco4c1表达量的试剂在制备以非疾病诊断和/或治疗为目的的肝细胞癌细胞迁移诱导剂中的应用。

33、优选地，所述降低slco4c1表达量的试剂包括shrna(short hairpin rna)，所述shrna的核酸序列包括seq id no.3或seq id no.4所示。

34、与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

35、本发明结合生物信息学构建hcc的预后模型，首次分析了风险组在生存预后、免疫细胞浸润、肿瘤突变负荷、肿瘤微环境成分、免疫治疗效果和药物敏感性方面的差异，在hcc组织中发现slco4c1基因表达降低，并通过多种实验对slco4c1的生物学功能进行验证，发现其可抑制hcc细胞的增殖、侵袭和迁移，因此，slco4c1可作为治疗肝细胞癌的新靶点，为肝细胞治疗提供新方法、新思路。