一种葡萄籽提取物及其制备方法与在制备具有提高皮肤中胶原蛋白含量作用的产品中的应用与流程

本发明涉及生物医药，具体涉及一种葡萄籽提取物及其制备方法与在制备具有提高皮肤中胶原蛋白含量作用的产品中的应用。

背景技术：

1、胶原蛋白是一种细胞外蛋白质，它是曲3条肽链拧成螺旋形的纤维状蛋白质；当胶原蛋白不足时，不仅皮肤及骨骼会出现问题，对内脏器官也会产生不利影响；其是维持身体正常活动所不可缺少的重要成分，同时也是使身体保持年轻、防止老化的物质。目前，胶原蛋白正慢慢进入美容护肤领域；当皮肤被紫外线损伤后，其中的胶原蛋白或发生断裂或变性，进行对表皮的支撑作用就消失了，因此造成不均一的塌陷以及产生皱纹；如目前针对脸部的皱纹以及皮肤缺陷，胶原蛋白回填疗法是一种已经由临床证实其安全性之疗法。

2、葡萄籽是葡萄的种子，经晒干后分离葡萄皮、葡萄梗后所得产物；现有从葡萄籽中分离出的多酚类化合物主要为儿茶素类和原花青素类。现有的葡萄籽提取物通常是采用乙醇提取得到，本发明发明人在研究中发现，仅仅采用乙醇提取得到的葡萄籽提取物，其对于紫外损伤后的皮肤中的胶原蛋白含量的提高作用并不显著，有待进一步提高。

技术实现思路

1、为了克服现有技术中存在的至少之一的技术问题，本发明首先提供了一种葡萄籽提取物的制备方法。

2、本发明的技术方案如下：

3、本发明首先提供了一种葡萄籽提取物的制备方法，其包含如下步骤：

4、(1)取葡萄籽，用有机溶剂进行提取，将提取液浓缩干燥后得葡萄籽有机溶剂提取物；

5、(2)将葡萄籽有机溶剂提取物上大孔树脂柱，用乙醇水溶液进行洗脱，收集洗脱液浓缩干燥后得葡萄籽大孔树脂洗脱部位；取葡萄籽大孔树脂洗脱部位即得所述的葡萄籽提取物。

6、本发明提供了一种全新的葡萄籽提取物的制备方法；研究表明，通过该方法制备得到的葡萄籽提取物，其对于紫外损伤后的皮肤中的胶原蛋白含量的提高作用要显著高于仅仅采用乙醇提取得到的葡萄籽提取物。

7、优选地，步骤(1)中所述的有机溶剂是指体积分数为50％～95％的乙醇水溶液。

8、最优选地，步骤(1)中所述的有机溶剂是指体积分数为70％的乙醇水溶液。

9、优选地，步骤(1)中所述的提取为加热回流提取，提取的时间为1～2h。

10、优选地，步骤(1)中葡萄籽与有机溶剂的用量比为1kg:5～15l。

11、优选地，步骤(1)中葡萄籽与有机溶剂的用量比为1kg:10l。

12、优选地，步骤(2)中大孔树脂柱的具体洗脱条件为：

13、将葡萄籽有机溶剂提取物上大孔树脂柱，先用4～6倍柱体积的体积分数为31～33％的乙醇水溶液进行洗脱除杂；接着再用4～6倍柱体积的体积分数为46～48％的乙醇水溶液进行洗脱，收集体积分数为46～48％的乙醇水溶液洗脱下来的洗脱液浓缩干燥后得葡萄籽大孔树脂洗脱部位；取葡萄籽大孔树脂洗脱部位即得所述的葡萄籽提取物。

14、最优选地，步骤(2)中大孔树脂柱的具体洗脱条件为：

15、将葡萄籽有机溶剂提取物上大孔树脂柱，先用5倍柱体积的体积分数为32％的乙醇水溶液进行洗脱除杂；接着再用5倍柱体积的体积分数为47％的乙醇水溶液进行洗脱，收集体积分数为47％的乙醇水溶液洗脱下来的洗脱液浓缩干燥后得葡萄籽大孔树脂洗脱部位；取葡萄籽大孔树脂洗脱部位即得所述的葡萄籽提取物。

16、发明人在研究中发现，本发明的大孔树脂洗脱条件十分关键；在不同的大孔树脂洗脱条件下制备得到的葡萄籽大孔树脂洗脱部位(葡萄籽提取物)，其对于紫外损伤后的皮肤中的胶原蛋白含量的提高作用是完全不同的。

17、发明人在研究中惊奇的发现，在本发明上述大孔树脂柱洗脱条件下制备得到的葡萄籽大孔树脂洗脱部位(葡萄籽提取物)，其对于紫外损伤后的皮肤中的胶原蛋白含量的提高程度要显著高于仅仅采用乙醇提取得到的葡萄籽提取物；而在其它大孔树脂柱洗脱条件下制备得到的葡萄籽大孔树脂洗脱部位(葡萄籽提取物)，其对于紫外损伤后的皮肤中的胶原蛋白含量的提高作用并不能显著高于仅仅采用乙醇提取得到的葡萄籽提取物。

18、优选地，所述的大孔树脂柱为d101型大孔树脂柱。

19、优选地，所述的葡萄籽提取物制备方法还包括硅胶柱洗脱步骤，具体如下：将葡萄籽大孔树脂洗脱部位上硅胶柱，先用2～4倍柱体积的体积比为100:12～14的环己烷和乙酸乙酯组成的混合物溶剂进行洗脱除杂；接着再用4～6倍柱体积的体积比为100:17～19的环己烷和乙酸乙酯组成的混合物溶剂进行洗脱，收集体积比为100:17～19的环己烷和乙酸乙酯组成的混合物溶剂洗脱下来的洗脱液浓缩干燥后得葡萄籽硅胶柱洗脱部位；取葡萄籽硅胶柱洗脱部位即得所述的葡萄籽提取物。

20、最优选地，所述的葡萄籽提取物制备方法还包括硅胶柱洗脱步骤，具体如下：将葡萄籽大孔树脂洗脱部位上硅胶柱，先用3倍柱体积的体积比为100:13的环己烷和乙酸乙酯组成的混合物溶剂进行洗脱除杂；接着再用5倍柱体积的体积比为100:18的环己烷和乙酸乙酯组成的混合物溶剂进行洗脱，收集体积比为100:18的环己烷和乙酸乙酯组成的混合物溶剂洗脱下来的洗脱液浓缩干燥后得葡萄籽硅胶柱洗脱部位；取葡萄籽硅胶柱洗脱部位即得所述的葡萄籽提取物。

21、发明人在进一步研究中发现，将葡萄籽大孔树脂洗脱部位进一步在本发明所的硅胶柱洗脱条件下制备得到的葡萄籽硅胶柱洗脱部位(葡萄籽提取物)，其对于紫外损伤后的皮肤中的胶原蛋白含量的提高作用要进一步大幅高于葡萄籽大孔树脂洗脱部位。

22、在此，发明人需要说明的是，本发明进一步采用的硅胶柱的洗脱条件十分关键；研究表明，葡萄籽大孔树脂洗脱部位只有进一步在本发明所述硅胶柱洗脱条件下制备得到的葡萄籽硅胶柱洗脱部位(葡萄籽提取物)，其对于紫外损伤后的皮肤中的胶原蛋白含量的提高作用相比于葡萄籽大孔树脂洗脱部位才能得到进一步大幅高；而在其它硅胶柱洗脱条件下制备得到的葡萄籽硅胶柱洗脱部位(葡萄籽提取物)，其对于紫外损伤后的皮肤中的胶原蛋白含量的提高作用相比于葡萄籽大孔树脂洗脱部位并不能得到大幅提高。

23、本发明还提供了一种上述制备方法制备得到的葡萄籽提取物。

24、本发明还提供了一种上述葡萄籽提取物在制备具有提高皮肤中胶原蛋白含量作用的产品中的应用。

25、优选地，所述的皮肤为紫外损伤后的皮肤。

26、优选地，所述的产品为食品、膳食补充剂、功能性食品、护肤品或药物。

27、有益效果：

28、本发明提供了一种全新方法制备得到的葡萄籽提取物；研究表明，由本发明所述方法制备得到的葡萄籽提取物具有显著的提高紫外损伤后的皮肤中的胶原蛋白含量的作用；因此，将本发明所述的葡萄籽提取物作为有效成分用于制备具有提高皮肤中胶原蛋白含量作用的产品具有重要的应用价值。

技术特征：

1.一种葡萄籽提取物的制备方法，其特征在于，包含如下步骤：

2.根据权利要求1所述的葡萄籽提取物的制备方法，其特征在于，步骤(1)中所述的有机溶剂是指体积分数为50％～95％的乙醇水溶液。

3.根据权利要求2所述的葡萄籽提取物的制备方法，其特征在于，步骤(1)中所述的有机溶剂是指体积分数为70％的乙醇水溶液。

4.根据权利要求1所述的葡萄籽提取物的制备方法，其特征在于，步骤(1)中所述的提取为加热回流提取，提取的时间为1～2h。

5.根据权利要求1所述的葡萄籽提取物的制备方法，其特征在于，步骤(1)中葡萄籽与有机溶剂的用量比为1kg:5～15l。

6.根据权利要求1所述的葡萄籽提取物的制备方法，其特征在于，步骤(1)中葡萄籽与有机溶剂的用量比为1kg:10l。

7.根据权利要求1所述的葡萄籽提取物的制备方法，其特征在于，步骤(2)中大孔树脂柱的具体洗脱条件为：

8.根据权利要求1所述的葡萄籽提取物的制备方法，其特征在于，步骤(2)中大孔树脂柱的具体洗脱条件为：

9.权利要求1～8任一项所述的制备方法制备得到的葡萄籽提取物。

10.权利要求9所述的葡萄籽提取物在制备具有提高皮肤中胶原蛋白含量作用的产品中的应用。

技术总结
本发明公开了一种葡萄籽提取物及其制备方法与在制备具有提高皮肤中胶原蛋白含量作用的产品中的应用。所述的葡萄籽提取物的制备方法，其包含如下步骤：(1)取葡萄籽，用有机溶剂进行提取，将提取液浓缩干燥后得葡萄籽有机溶剂提取物；(2)将葡萄籽有机溶剂提取物上大孔树脂柱，用乙醇水溶液进行洗脱，收集洗脱液浓缩干燥后得葡萄籽大孔树脂洗脱部位；取葡萄籽大孔树脂洗脱部位即得所述的葡萄籽提取物。研究表明，由本发明所述方法制备得到的葡萄籽提取物具有显著的提高紫外损伤后的皮肤中的胶原蛋白含量的作用；因此，将本发明所述的葡萄籽提取物作为有效成分用于制备具有提高皮肤中胶原蛋白含量作用的产品具有重要的应用价值。

技术研发人员：牛文芳,谭君,田明慧,龚翔,刘晓蕾,姜伟,郭奕彤
受保护的技术使用者：深圳海璞诺生物科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/2/19