钙通道阻断剂在制备降低哺乳动物体内呼吸道合胞病毒活性的组合物中的应用

本发明涉及抗病毒，具体而言，涉及钙通道阻断剂在制备降低哺乳动物体内呼吸道合胞病毒活性的组合物中的应用。

背景技术：

1、人呼吸道合胞病毒(rsv)属正肺病毒科肺炎病毒属非节段单股负链rna病毒，是婴幼儿，老年人和免疫功能低下成年人急性下呼吸道感染的主因[1]。rsv感染的主要病理特征是急性毛细支气管炎，粘膜和粘膜下水肿[2]。rsv感染的肺外表现，即心肌损伤和易并发心血管事件等也被逐渐重视[3,4]。感染rsv的儿童出现心律失常，包括室性心动过速[5]室上性心动过速[6,7]，复杂性房性心动过速和完全的心脏阻滞[8]。

2、目前，尚无安全有效的特异性药物治疗rsv感染，具有广谱抗病毒活性的核苷类似物利巴韦林虽被证实对rsv感染有一定治疗效果，但总体疗效不稳定，潜在毒性高[9]。唯一获得批准针对rsv感染的帕利珠单克隆抗体被动免疫防御治疗方法昂贵且需定期注射，仅适用于高危婴儿群体，尚未引入国内临床应用[10,11]。2019年，呼吸道病毒的rsv受到重视，尽管研究人员对rsv的结构，功能和感染机制已有了更深入的认识，但进一步开发抗rsv药物的需求仍然十分迫切[12,13]。

3、细胞膜离子通道在病毒复制中发挥着至关重要的作用，钾离子(k+)与bunyamwera病毒感染相关[14,15]；双孔钙离子通道是埃博拉病毒感染的通道[16]；氯离子(cl-)与基孔肯雅病毒、丙型肝炎病毒、bk多瘤病毒和默克尔细胞多瘤病毒感染密切相关[17-19]。

4、维拉帕米(verapamil)是临床上首批使用的抗心律不齐、抗心绞痛和抗高血压苯烷胺类药物，它通过阻断细胞钙离子内流拮抗钙离子超负荷，从而缓解上述心血管疾病。由于其快速的药理学及药效学作用，维拉帕米目前在临床诊疗中广泛用于治疗心律不齐[20]。此外，维拉帕米缓释制剂的开发使维拉帕米被公认为是高血压(特别是有糖尿病的患者)的综合治疗药物[21]。

5、鉴于此，特提出本发明。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供钙通道阻断剂在制备降低哺乳动物体内呼吸道合胞病毒活性的组合物中的应用以解决上述技术问题。

2、本发明是这样实现的：

3、第一方面，本发明提供了钙通道阻断剂在制备降低细胞和/或哺乳动物体内呼吸道合胞病毒活性的组合物中的应用。

4、发明人发现，通过阻断细胞钙离子内流，可以拮抗rsv对细胞和动物的感染。表现为：抑制细胞中rsv的病毒复制、降低细胞表达病毒融合蛋白的水平、降低哺乳动物的呼吸道合胞病毒载量、添加钙通道阻断剂可以显著减轻肺部炎症、使得哺乳动物的体重回升、提高哺乳动物的存活率、减轻哺乳动物的肺损伤、减少哺乳动物肺泡中的炎性细胞浸润、缓解哺乳动物的肺泡壁厚的增厚、肺泡的塌陷等。因此，钙通道阻断剂有望用于制备降低哺乳动物体内呼吸道合胞病毒活性的组合物，从而开发新的特异性药物治疗rsv感染。

5、在本发明应用较佳的实施方式中，钙通道阻断剂选自维拉帕米或其衍生物、尼群地平、地尔硫及其衍生物。发明人体内和体外实验证明，维拉帕米具有良好的拮抗rsv对细胞和动物的感染的效果。表现为：抑制细胞中rsv的复制、降低细胞表达病毒融合蛋白的水平、降低哺乳动物的病毒载量、添加钙通道阻断剂可以显著减轻肺部炎症、使得哺乳动物的体重回升、提高哺乳动物的存活率、减轻哺乳动物的肺损伤、减少哺乳动物肺泡中的炎性细胞浸润、缓解哺乳动物的肺泡壁厚的增厚、肺泡的塌陷等。

6、在本发明应用较佳的实施方式中，哺乳动物选自人、鼠、猴、兔、马、羊、大猩猩或牛。

7、在其他实施方式中，哺乳动物选自：

8、人类、狮子、老虎、灰狼、赤狐、白犀牛、河马、长颈鹿、普通斑马、细纹斑马，山斑马，黄麂，驴骡，马骡，狮虎兽、虎狮兽、倭河马、老鼠、驼鹿、鼷鹿、麋鹿、梅花鹿、紫貂、猴子、骆驼、马来貘、树懒、英国斗牛犬、德国牧羊犬、秋田犬、腊肠犬、斑点狗、可卡颇犬、拉布拉多犬、喜乐蒂牧羊犬、比利时牧羊犬、苏格兰牧羊犬、金毛犬、拉布拉多犬，马犬，藏獒、波斯猫、缅甸猫、暹罗猫、英国短毛猫、布偶猫、金吉拉猫、马恩岛猫、缅因猫、郊狼、貂熊、猪獾、狗獾、蜜獾、美洲獾、白鲸、长江江豚、白鳍豚、鼠海豚、虎鼬、川金丝猴、滇金丝猴、黔金丝猴、亚洲野犬、鹿豚、盘羊、绵羊、山羊、鬣狗、猎豹、黑背胡狼、棕熊、马来熊、懒熊、眼镜熊、亚洲黑熊、美洲黑熊、豪猪、澳洲野狗、亚洲象、非洲象、猛犸象、美洲乳齿象、剑齿象、铲齿象、恐象、互棱齿象、始祖象、尤因它兽、巴基鲸、安氏中兽、双门齿兽、巨型短面袋鼠、雕齿兽、星尾兽、花豹、麝牛、小熊猫、疣猪、狐獴、黑斑羚、汤姆森瞪羚、跳羚、长角羚、长颈羚、叉角羚、大捻角羚、大角斑羚、旋角羚、藏羚羊、紫羚羊、弯角大羚羊、貂羚、犬羚、驴羚、果子狸、红白鼯鼠、鼬獾、毛冠鹿、非洲野犬、驯鹿、树袋熊、猞猁、穿山甲、大熊猫、大食蚁兽、小食蚁兽、红毛猩猩、大猩猩、黑猩猩、长臂猿、海牛、儒艮、水獭、海獭、小灵猫、大灵猫、树熊猴、眼镜猴、原驼、金豺、大羚羊、袋熊、树袋鼠、高原鼠兔、大西洋黑白海豚、毛丝鼠、睡鼠、跳鼠、跳兔、弓头鲸、灰鲸、印度犀牛、苏门答腊犀牛、爪哇犀牛、黑犀牛、耳廓狐、草原狐、大耳狐、灰狐、象海豹、海狗、海狮、蜂猴、宽吻海豚、海象、鸭嘴兽、针鼹、星鼻鼹、环尾狐猴、领狐猴、白头美狐猴、白领美狐猴、灰头美狐猴、红领美狐猴、冠美狐猴、蓝眼黑美狐猴、褐美狐猴、黑美狐猴、红腹美狐猴、红额美狐猴、桑氏美狐猴、阿劳特拉湖驯狐猴、金竹驯狐猴、灰驯狐猴、桑河驯狐猴、阔鼻驯狐猴、大竹狐猴、红领狐猴、蓝马羚、跑犀、犬熊、古巨猪、恐颌猪、恐狼、洞狮、刺猬、北极狐、北极熊、袋鼠、袋貂、袋狸、袋鼬、袋狼、袋狮、始祖马、有角囊地鼠、大地懒、刃齿虎、袋剑虎、斑驴、箭齿兽、王雷兽、埃及重脚兽、板齿犀、披毛犀、始祖兽、砂犷兽、大角雷兽、森林古猿、加勒比僧海豹、巨犀、泰国猪鼻蝙蝠、狨猴、马麝、犰狳、格陵兰海豹、一角鲸、座头鲸、蓝鲸、抹香鲸、虎鲸、伪虎鲸、长须鲸、布氏鲸、小须鲸、黄鼠狼、黄喉貂、石貂、马、牛、驴、猪、沙狐、巨松鼠、地松鼠、兔子、松鼠、豚鼠、仓鼠、岩羊、羊驼、骆马、南浣熊、角马、羚牛、河狸、袋獾、浣熊、山魈、狒狒、狍子、獐子、旅鼠、沙鼠、土拨鼠、云豹、黑足猫、豹猫、非洲水牛、红河猪、黄鼠、蒙古野驴、非洲野驴、藏野驴、野猪、印度野牛、美洲野牛、普氏野马、欧洲野马、美洲狮、美洲豹、牦牛、长鼻浣熊、臭鼬、熊狸、马鹿、狞猫、薮猫、雪豹、鬃狼、兔狲、黑足鼬、缟灵猫、狐鼬、水豚、土豚、狐蝠、吸血蝠中的任意一种。

9、在本发明应用较佳的实施方式中，组合物为药物或疫苗组合物。

10、在本发明应用较佳的实施方式中，药物还包括药学上可接受的载体。载体例如包括药学上可接受的添加剂或辅料，药学上可接受的添加剂或辅料选自如下一种或多种：溶剂、缓冲液、乳化剂、悬浮剂、分解剂、崩解剂、分散剂、黏结剂(粘合剂)、赋形剂、安定剂(或稳定剂)、螯合剂、稀释剂、胶凝剂、防腐剂、润湿剂、润滑剂、吸收延迟剂、香味剂、甜味剂、色素以及脂质体。

11、赋形剂可以是例如：水、乙醇、2-丙醇、甘油、乙二醇、丙二醇、聚乙二醇、聚丙二醇、葡萄糖、果糖、乳糖、蔗糖、右旋糖、糖蜜、淀粉、改性淀粉、明胶、山梨醇、肌醇、甘露醇、微晶纤维素、甲基纤维素、羧甲基纤维素、乙酸纤维素、虫胶、鲸蜡醇、聚乙烯基吡咯烷酮、石蜡、蜡、天然和合成橡胶、阿拉伯胶、海藻酸盐、右旋糖酐、饱和不饱和脂肪酸、硬脂酸、硬脂酸镁、硬脂酸锌、硬脂酸甘油酯、月桂基硫酸钠、食用油、芝麻油、椰子油、花生油、大豆油、卵磷脂、乳酸钠、聚氧乙烯脂肪酸酯和聚氧丙烯脂肪酸酯、山梨聚糖脂肪酸酯、山梨酸、苯甲酸、柠檬酸、抗坏血酸、鞣酸、氯化钠、氯化钾、氯化镁、氯化钙、氧化镁、氧化锌、二氧化硅、氧化钛、二氧化钛、硫酸镁、硫酸锌、硫酸钙、碳酸钾、磷酸钙、磷酸二钙、溴化钾、碘化钾、滑石、高岭土、果胶、交聚维酮、琼脂和膨润土。

12、粘合剂，例如纤维素、甲基纤维素、羟丙基纤维素、聚丙基吡咯烷酮、明胶、阿拉伯胶、聚乙二醇、蔗糖、淀粉。

13、崩解剂，例如淀粉、水解淀粉、羧甲基纤维素、羧甲基纤维素钙盐、羟丙基淀粉、乙二醇淀粉钠、碳酸氢钠、磷酸钙、柠檬酸钙。

14、润滑剂，例如硬脂酸镁、滑石、月桂基硫酸钠；香味剂，例如柠檬酸、薄荷醇、甘氨酸、橙粉。

15、防腐剂，例如苯甲酸钠、亚硫酸氢钠、对羟基苯甲酸酯(例如对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯)。

16、稳定剂，例如柠檬酸、柠檬酸钠、乙酸和来自titriplex系列的多羧酸，例如二亚乙基三胺五乙酸(dtpa)。

17、悬浮剂，例如甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、硬脂酸铝。

18、分散剂；稀释剂，例如水、有机溶剂。

19、在本发明应用较佳的实施方式中，药物的剂型选自片剂、胶囊剂、颗粒剂、混悬剂、粉剂或注射剂。

20、在本发明应用较佳的实施方式中，药物被配制用于经口施用或注射施用。注射施用包括不限于皮下注射，肌内注射，静脉注射，皮内注射。

21、在本发明应用较佳的实施方式中，组合物用于如下至少一种的用途：

22、(1)降低哺乳动物体内的呼吸道合胞病毒基因拷贝数；

23、(2)抑制哺乳动物体内的呼吸道合胞病毒融合蛋白的水平；

24、(3)使得哺乳动物的体重有所回升；

25、(4)提高哺乳动物的存活率；

26、(5)减轻哺乳动物的肺损伤；

27、(6)降低哺乳动物的呼吸道合胞病毒载量；

28、(7)缓解哺乳动物的肺泡壁厚的增厚、肺泡的塌陷；

29、(8)减少哺乳动物肺泡中的炎性细胞浸润；

30、(9)减轻哺乳动物的肺部炎症；

31、(10)降低细胞内钙离子浓度；

32、(11)抑制细胞中rsv的病毒复制；

33、(12)降低细胞表达病毒融合蛋白的水平。

34、在本发明应用较佳的实施方式中，用途(9)包括：减少哺乳动物的肺部如下至少一种细胞因子的水平：il-1β、ifn-γ、il-6和tnf-α。

35、第二方面，本发明还提供了钙通道阻断剂在制备降低哺乳动物体内呼吸道合胞病毒活性的联合治疗药物中的应用，联合治疗的药物包括金属螯合剂。金属螯合剂选自dtpa、egta及其衍生物、nta、谷氨酸二乙酸四钠及其衍生物、三乙醇胺、8-羟基喹啉、柠檬酸、酒石酸、磷酸、葡糖二酸、硫代二丙酸、醋铜二羧酸、苯丙氨酸、色氨酸、甘油、山梨醇及其可药用盐中的任一种。

36、发明人发现，将金属螯合剂与钙通道阻断剂联合使用，相比于单独的钙通道阻断剂，可以进一步降低哺乳动物体内呼吸道合胞病毒的活性，进一步降低哺乳动物体内的呼吸道合胞病毒基因拷贝数，显著减轻肺部炎症、使得哺乳动物的体重回升、提高哺乳动物的存活率、减轻哺乳动物的肺损伤、减少哺乳动物肺泡中的炎性细胞浸润、缓解哺乳动物的肺泡壁厚的增厚、肺泡的塌陷。金属螯合剂可螯合细胞外钙离子从而降低向胞内流的钙离子量。

37、在一种可选的实施方式中，金属螯合剂为氨羧配合剂，如乙二醇双(2-氨基乙基醚)四乙酸，简称egta，egta也称为依他酸。egta可以与钙离子较稳定的结合。谷氨酸二乙酸四钠，简称glda，是新型绿色螯合剂。

38、在一种可选的实施方式中，钙通道阻断剂选自维拉帕米或其衍生物。

39、金属螯合剂与钙通道阻断剂的摩尔比为(8-128):1；

40、优选地，金属螯合剂与所述钙通道阻断剂的摩尔比为64：1金属螯合剂与所述钙通道阻断剂的摩尔比为64:1。在一种可选的实施方式中，egta的浓度是1.6mm，维拉帕米的浓度是25μm。

41、本发明具有以下有益效果：

42、本发明通过阻断细胞钙离子内流，可以拮抗rsv对细胞和动物的感染。表现为：抑制细胞中rsv的病毒复制、降低细胞表达病毒融合蛋白的水平、降低哺乳动物的rsv载量、添加钙通道阻断剂可以显著减轻肺部炎症、使得哺乳动物的体重回升、提高哺乳动物的存活率、减轻哺乳动物的肺损伤、减少哺乳动物肺泡中的炎性细胞浸润、缓解哺乳动物的肺泡壁厚的增厚、肺泡的塌陷等。因此，钙通道阻断剂有望用于制备降低哺乳动物体内rsv活性的组合物，从而开发新的特异性药物治疗rsv感染。通过与金属螯合剂联用可以进一步提升组合物拮抗rsv感染的效果。