一种鸭源沙门氏菌二价灭活疫苗及其制备方法与流程

本发明涉及灭活疫苗制备领域，更具体地说，它涉及一种鸭源沙门氏菌二价灭活疫苗及其制备方法。

背景技术：

1、目前樱桃谷鸭养殖过程中沙门氏菌感染的发病越来越严重，沙门氏菌的危害在种鸭孵化端表现非常突出，可以导致早期死胚，种鸭垂传的可能性非常大；在商品代鸭苗的危害主要是感染后表现“三炎”导致较高的死淘，给养殖带来了很大的困扰。种鸭养殖环境的落后，无法做到完全的细菌净化。因此针对鸭源的沙门氏菌目前主要依赖药物防控治疗，对沙门氏菌敏感的药物主要有磺胺类和喹诺酮类抗生素，但是抗生素的频繁使用势必会产生耐药性，并且对于种鸭来讲用药后产蛋率、受精率、孵化率是否受到影响不明确，对于商品鸭来讲，频繁过量使用抗生素对屠宰后的药残检验造成一系列的问题。因此，沙门氏菌的防控治疗方法非常迫切。

2、目前，目前现有的疫苗血清型单一，或不区分血清型等问题。

技术实现思路

1、本发明提供一种鸭源沙门氏菌二价灭活疫苗及其制备方法，解决现有技术中，目前现有的疫苗血清型单一，或不区分血清型的技术问题。

2、根据本发明的一个方面，提供了一种鸭源沙门氏菌二价灭活疫苗的制备方法，包括如下步骤：

3、s1：统计情况：从当地养殖场内选取死亡的商品鸭作为统计样品，统计导致商品鸭死亡升高的沙门氏菌血清型检出情况；

4、s2：细菌分离：从养殖场选取死亡的商品鸭，从肝脏上进行细菌的分离，通过ss培养基分离、沙显培养基鉴定、国标的分子pcr鉴定方法进行鉴定，最终得到纯化的肠炎沙门氏菌和鼠伤寒沙门氏菌菌株；

5、s3：细菌扩繁：纯化后的细菌，挑选单菌落放置到lb肉汤中进行细菌的增殖扩繁，37℃摇床，过夜培养18h以上，收获菌液，进行活菌计数；

6、s4：抗原制备：将s3中获得的菌液加入2‰的甲醛溶液进行灭活，灭活48h，将灭活后的菌液进行灭活检验，检验灭活完全后，将菌液离心后，弃掉上清液，保留底部细菌，运用生理盐水将菌液重悬，使菌量达到50*109cfu/ml以上，备用；

7、s5：疫苗制备：将获得的灭活抗原与成品的50％铝胶按照9：1进行混合，肠炎沙门氏菌和鼠伤寒沙门氏菌含菌量每种至少50*109cfu/ml，疫苗中可加入1％硫柳汞进行防腐；

8、s6：疫苗检验：对s5中制备的疫苗进行安全性检验，确保疫苗的对活体商品鸭的安全性；

9、s7：效力检验：从养殖场选取幼龄活鸭作为实验样品，对其注射检验后的疫苗，从而对检验后的疫苗进行效力检验。

10、进一步地：所述针对s1中，沙门氏菌检出的检测方法还包括免疫标记、免疫酶技术、噬菌体裂解技术、核酸探针以及pcr检测技术。

11、进一步地：所述针对s1中，沙门氏菌血清型检出方法包括以下步骤：

12、采用没有用过药物治疗的病死鸭，可取其肝、脾或有病变的心肌作为病料，进行分布增菌培养，预增菌，使病料中细菌在高营养的培养基中扩大生长；

13、选择性增菌，通常用孔雀石绿增菌液，增长沙门氏菌浓度的同时抑制其他细菌的增殖；

14、选择性平板分离，应用主体包括bs琼脂平板和dhl琼脂平板，固体培养基上划线培养，肉眼观察菌落特征；

15、生化反应，将可疑菌落接种于三糖铁以及辨别沙门氏菌的生化管中，可做出初步判断；

16、血清型鉴定，做出血清型检出判定。

17、进一步地：所述针对s6中，疫苗检验包括如下步骤：

18、将制备的沙门氏菌二价灭活疫苗，进行活菌检验，在培养基上无任何细菌生长，再进行活体检验；

19、进行5日龄的雏鸭进行免疫，免疫剂量为1ml/只，免疫10只，免疫后观察10天，试验鸭全部健活完成疫苗安全性检验。

20、进一步地：所述针对7中，效力检验包括如下步骤：

21、取5日龄鸭40只，随机分成4组，10只/组；

22、组1、组2为疫苗免疫组，颈部皮下注射疫苗，0.5ml/只；

23、组3、组4为对照组，颈部皮下注射生理盐水，0.5ml/只；

24、免疫后观察试验鸭的精神状态和生长情况，在试验鸭14日龄时，对组1、组3进行肠炎沙门氏菌菌株攻毒，颈部皮下注射攻毒剂量为109cfu/只，

25、对组2、组4进行鼠伤寒沙门氏菌菌株攻毒，颈部皮下注射攻毒剂量为109cfu/只；

26、攻毒后观察试验鸭的精神状态和死亡情况，并记录。

27、进一步地：所述在效力检验过程中，将4组5日龄鸭进行隔离分开饲养，连续观察两周实验鸭健康状态，并持续记录。

28、本发明的有益效果在于：

29、本发明为制备多价灭活疫苗提供了思路，不同沙门氏菌的血清型做成二价的疫苗，增加保护效果，因此将两种血清型的菌株组合到一起，可以增加疫苗的保护率，本发明的疫苗为沙门氏菌二价灭活疫苗，保护肠炎和鼠伤寒两种沙门氏菌，对有致病力的沙门氏菌均可保护，本发明的灭活疫苗为铝胶佐剂的疫苗，吸收快，见效快，主要是针对商品鸭10日龄之后发病，起效快，二价灭活疫苗，可以通过免疫的方式产生抗体保护鸭群不受细菌的感染，或者感染但是不会造成死亡，从而降低损失。

技术特征：

1.一种鸭源沙门氏菌二价灭活疫苗的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种鸭源沙门氏菌二价灭活疫苗的制备方法，其特征在于，所述针对s1中，沙门氏菌检出的检测方法还包括免疫标记、免疫酶技术、噬菌体裂解技术、核酸探针以及pcr检测技术。

3.根据权利要求2所述的一种鸭源沙门氏菌二价灭活疫苗的制备方法，其特征在于，所述针对s1中，沙门氏菌血清型检出方法包括以下步骤：

4.根据权利要求3所述的一种鸭源沙门氏菌二价灭活疫苗的制备方法，其特征在于，所述针对s6中，疫苗检验包括如下步骤：

5.根据权利要求4所述的一种鸭源沙门氏菌二价灭活疫苗的制备方法，其特征在于，所述针对7中，效力检验包括如下步骤：

6.根据权利要求5所述的一种鸭源沙门氏菌二价灭活疫苗的制备方法，其特征在于，所述在效力检验过程中，将4组5日龄鸭进行隔离分开饲养，连续观察两周实验鸭健康状态，并持续记录。

技术总结
本发明涉及灭活疫苗制备技术领域，具体公开了一种鸭源沙门氏菌二价灭活疫苗及其制备方法，包括如下步骤：包括如下步骤：S1：统计情况：S2：细菌分离：S3：细菌扩繁：S4：抗原制备：S5：疫苗制备：S6：疫苗检验：S7：效力检验，本发明为制备多价灭活疫苗提供了思路，本发明的疫苗为沙门氏菌二价灭活疫苗，保护肠炎和鼠伤寒两种沙门氏菌，对有致病力的沙门氏菌均可保护，本发明的灭活疫苗为铝胶佐剂的疫苗，主要是针对商品鸭10日龄之后发病，起效快，二价灭活疫苗，可以通过免疫的方式产生抗体保护鸭群不受细菌的感染，或者感染但是不会造成死亡，从而降低损失。

技术研发人员：许明清,汪建华,张中波,马芹,褚新星,王胜
受保护的技术使用者：山东和康源生物育种股份有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/3/31