用于免疫增强剂的冻干保护剂及其应用的制作方法

本发明涉及免疫增强剂的冻干保护剂，尤其涉及重组干扰素γ的冻干保护剂及其应用，属于免疫增强剂的冻干保护剂领域。

背景技术：

1、干扰素γ是活化t细胞和自然杀伤细胞产生。ifn-γ是i型干扰素，具有一定的抗病毒、抗肿瘤细胞增殖和免疫调节等作用。利用大肠杆菌表达系统构建的重组干扰素作为免疫增强剂可以在一定程度上减少牛多杀性巴氏杆菌病灭活疫苗免疫后不良反应。纯化后的重组ifn-γ一般放置在-40℃的冰箱里进行保存。保存时间短，个别批次保存后存在免疫增强剂效果减弱的现象；因此，纯化后的重组干扰素γ存在性状不稳定和不易保存的问题。

2、牛多杀性巴氏杆菌病灭活疫苗存在刺激机体细胞免疫能力较差、刺激机体产生抗体慢、抗体滴度维持时间短、注射增加动物应激风险等缺陷，有待改进。

技术实现思路

1、本发明的目的之一是提供冻干保护剂；

2、本发明的目的之二是提供含有所述冻干保护剂的免疫增强剂；

3、本发明的目的之三将所述的免疫增强剂应用于提高牛多杀性巴氏杆菌病灭活疫苗的免疫效力。

4、为实现上述目的，本发明所采取的主要技术方案包括：

5、本发明的一方面是提供了一种冻干保护剂，包括以下质量份的各成分：磷酸氢二钠1～2份、乳糖1～1.5份、海藻糖3～5份、山梨醇0.4～0.8份、甘露醇0.4～0.8份、牛血清白蛋白2～4份、甘氨酸2份～5份；

6、优选的，各成分的用量为：磷酸氢二钠1.5份、乳糖1.2份、海藻糖4份、山梨醇0.6份、甘露醇0.6份、牛血清白蛋白3份、甘氨酸4份。

7、本发明的另一方面是提供了一种制备所述冻干保护剂的方法，包括：将各成分在溶剂中混合均匀后灭菌即得；其中，所述的溶剂优选是水

8、本发明的另一方面是提供了一种免疫增强剂，所述免疫增强剂由干扰素和冻干保护剂组成；其中，所述的干扰素优选为牛干扰素；所述的冻干保护剂包括以下质量份的各成分：磷酸氢二钠1～2份、乳糖1～1.5份、海藻糖3～5份、山梨醇0.4～0.8份、甘露醇0.4～0.8份、牛血清白蛋白2～4份、甘氨酸2份～5份。

9、本发明的一种优选的具体实施方案，免疫增强剂和冻干保护剂的比例为(4-12):1，优选为6:1。

10、本发明进一步提供了一种制备所述免疫增强剂的方法，包括：将干扰素和灭菌的冻干保护剂混匀后，采用连续注射器进行分装，冻干轧盖制备得到免疫增强剂。

11、本发明的再一方面是提供了一种疫苗组合物，包括彼此独立的灭活疫苗和免疫增强剂；其中，所述的灭活疫苗优选为牛多杀性巴氏杆菌灭活疫苗，所述的免疫增强剂为本发明提供的上述免疫增强剂。

12、作为参考，本发明提供了免疫增强剂的用法与用量：皮下注射，注射用量1-3.0ml。

13、本发明所提供的免疫增强剂与灭活疫苗联合后能够显著提高灭活疫苗的免疫效力，且在免疫后第7-21天时能够显著提高细胞因子il-1β和tnf-α含量。

技术特征：

1.一种冻干保护剂，其特征在于，包括以下质量份的各成分：磷酸氢二钠1～2份、乳糖1～1.5份、海藻糖3～5份、山梨醇0.4～0.8份、甘露醇0.4～0.8份、牛血清白蛋白2～4份和甘氨酸2份～5份。

2.根据权利要求1所述的冻干保护剂，其特征在于，各成分的用量为：磷酸氢二钠1.5份、乳糖1.2份、海藻糖4份、山梨醇0.6份、甘露醇0.6份、牛血清白蛋白3份、甘氨酸4份。

3.本发明的另一方面是提供了一种制备所述冻干保护剂的方法，包括：将各成分在溶剂中混合均匀后灭菌即得。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述的溶剂是水。

5.一种免疫增强剂，所述免疫增强剂由干扰素和冻干保护剂组成；其特征在于，所述的干扰素为牛干扰素；所述的冻干保护剂为权利要求1或2所述的冻干保护剂。

6.根据权利要求5所述的免疫增强剂，其特征在于，免疫增强剂和冻干保护剂的比例为(4-12):1。

7.根据权利要求6所述的免疫增强剂，其特征在于，免疫增强剂和冻干保护剂的比例为6：1。

8.一种制备权利要求5-7任何一项所述免疫增强剂的方法，其特征在于，包括：将干扰素和灭菌的冻干保护剂混匀后，采用连续注射器进行分装，冻干轧盖制备得到免疫增强剂。

9.一种疫苗组合物，包括彼此独立的灭活疫苗和免疫增强剂；其中，所述的免疫增强剂为权利要求5-7任何一项所述的免疫增强剂。

10.根据权利要求9所述的疫苗组合物，其特征在于，所述的灭活疫苗为牛多杀性巴氏杆菌灭活疫苗。

技术总结
本发明公开了用于免疫增强剂的冻干保护剂及其应用。本发明提供了冻干保护剂，包括以下质量份的各成分：磷酸氢二钠1～2份、乳糖1～1.5份、海藻糖3～5份、山梨醇0.4～0.8份、甘露醇0.4～0.8份、牛血清白蛋白2～4份和甘氨酸2份～5份。本发明进一步提供了一种免疫增强剂，由干扰素和本发明提供的所述冻干保护剂组成。本发明还提供了一种疫苗组合物，包括彼此独立的灭活疫苗和本发明提供的免疫增强剂。本发明所提供的免疫增强剂与灭活疫苗联合使用后能够显著提高灭活疫苗的免疫效力，且在免疫后第7‑21天时能够显著提高细胞因子IL‑1β和TNF‑α的含量。

技术研发人员：武啸,柴华,徐刚,方超,于镭,李倩,魏蓝,张悦,李一凡,刘洪斌
受保护的技术使用者：哈药集团生物疫苗有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/4/7