鬼针草细胞外囊泡对炎症性肠病的治疗用途的制作方法

本申请涉及植物外泌体应用的，更具体地说，它涉及一种鬼针草细胞外囊泡对炎症性肠病的治疗用途。

背景技术：

1、炎症性肠病(ibd)是一种慢性非特异性肠道炎症性疾病，在全球范围内影响着越来越多的人群，主要包括溃疡性结肠炎(uc)和克罗恩病(cd)。uc的特征为结肠粘膜弥漫性炎症，病程呈反复缓解期。目前针对uc的治疗方法仅仅具有一定的有效性，但是还存在一定不可接受的不良事件风险，临床上需要更有效的方法来治疗uc。因此，目前迫切需要开发更好的uc治疗药物，特别是那些能在发炎结肠局部发挥作用，且无全身暴露和相关副作用的药物。

2、植物来源的细胞外囊泡(简称为pdevs)引起了科学界越来越大的兴趣，主要是因为一些研究表明pdevs中含有功能性生物分子，如蛋白质、rna、代谢产物和脂质等，因此pdevs可能影响着哺乳动物细胞。越来越多的研究表明，pdevs具有抗癌、抗炎和抗氧化等活性，使其在治疗上具有吸引力。另外，也有越来越多的研究结果强调了pdevs在体外和体内模型中促进抗炎反应的关键作用。

3、众所周知，鬼针草(bidens pilosa l.)一般被用于食品和药品中，其没有明显的副作用。鬼针草的花、茎等许多部位都可以被用来治疗各种疾病，例如解热剂和镇痛剂，以及治疗胃肠道出血和湿疹等。药理学研究表明，鬼针草提取物具有广泛的生物活性，其中包括抗氧化、抗癌、抗糖尿病、抗炎、抗微生物和免疫调节活性。

4、因此，开发鬼针草外泌体或细胞外囊泡的治疗炎症性肠病的用途是必要的。

技术实现思路

1、针对以上问题，本申请提供一种鬼针草细胞外囊泡对炎症性肠病的治疗用途。

2、本申请提供的鬼针草细胞外囊泡对炎症性肠病的治疗用途采用如下的技术方案：鬼针草细胞外囊泡对炎症性肠病的治疗用途，所述鬼针草细胞外囊泡来源于鬼针草叶片、茎叶、根茎中的任意一种或多种。

3、通过采用上述技术方案，得到鬼针草细胞外囊泡。该细胞外囊泡具有抗炎、抗癌等效果；并且基于细胞外囊泡微的纳米级尺寸，其易被吸收。实验结果发现，鬼针草细胞外囊泡对于炎症性肠炎具有较好的改善效果，未来可将其制备成能够治疗炎症性肠炎的天然药物产品，并在一定程度上解决现有相关药物存在的副作用问题。

4、可选的，所述鬼针草细胞外囊泡用于治疗炎症性肠炎时，所述鬼针草细胞外囊泡作为药物原料添加；

5、所述药物的剂型选自注射剂、胶囊剂、片剂、口服液体剂、颗粒剂以及中药药剂中的任意一种或多种。

6、优选的，所述注射剂选自溶液、粉针剂、水针剂以及油针剂中的任意一种或多种；

7、优选的，所述胶囊剂选自硬胶囊剂、软胶囊剂以及肠溶胶囊剂中的任意一种或多种；

8、优选的，所述片剂选自压制片、糖衣片、泡腾片、咀嚼片、多层片、植入片、缓释片以及控释片中的任意一种或多种；

9、优选的，所述口服液体剂选自溶液剂、糖浆剂、乳剂以及混悬剂中的任意一种或多种；

10、优选的，所述颗粒剂选自溶性颗粒剂、混悬型颗粒剂以及泡腾型颗粒剂中的任意一种或多种；优选的，所述中药药剂选自汤剂、散剂、丸剂以及丹剂中的任意一种或多种。

11、以本申请的鬼针草细胞外囊泡为药用原料制备成药物或者保健品后进行使用，在形成具体的产品时，可以通过常规手段制备成以上任意的药物或者保健品剂型，以满足不同的服用或摄入要求。

12、可选的，所述药物还包括其他辅助组分，所述其他辅助组分选自益生菌、辅料、赋形剂、助剂、分散剂、食品添加剂和药品添加剂中的一种或多种。

13、以本申请的鬼针草细胞外囊泡为药用原料制备成药物或者保健品并形成具体的产品时，可以通过常规手段根据药物或者保健品剂型的需求，添加合适的辅料，以获得药物或者保健品所需的剂型。

14、所述鬼针草细胞外囊泡的制备方法包括以下步骤：

15、步骤s1、取鬼针草叶片、茎叶和根茎部分中的任意一种或多种，粉碎后酶解，固液分离后收集上清，得到鬼针草汁液；

16、步骤s2、将所述鬼针草汁液经过滤、透析和微滤后，收集滤液；

17、步骤s3、将所述鬼针草细胞外囊泡液经浓缩、纯化后得到鬼针草细胞外囊泡。

18、通过采用上述技术方案，在制备鬼针草细胞外囊泡时，鬼针草细胞包括细胞壁和细胞膜，通过酶解后以破坏细胞壁，以使得细胞中的细胞外囊泡释放出来。鬼针草汁液经过步骤s2的处理后，得到的是含有较多杂质的鬼针草细胞外囊泡，进一步经步骤s3处理后，得到纯化后鬼针草细胞外囊泡，以提高其对炎症性肠病的治疗效果。

19、可选的，步骤s1中酶解包括以下步骤：将粉碎后的鬼针草样本以乙醇溶液浸泡后，除去乙醇溶液，加入酶液在45-55℃下酶解5-7h即可。

20、通过采用上述技术方案，乙醇溶液的浸泡处理一方面可以破坏鬼针草细胞结构，改变其通透性；另一方面还可以溶解脂质等杂质。通过酶解处理后，以实现有效破坏细胞壁的效果。

21、可选的，所述酶液的组分包括：1.5-2.5wt％果胶酶，3-5wt％纤维素酶，0.4-0.8mol/l甘露醇。

22、可选的，所述乙醇溶液中乙醇的体积分数为70-80％。

23、可选的，步骤s2中所述过滤包括以250-350目孔径范围的滤网或滤袋过滤，收集滤液；所述透析包括100-200nm孔径的膜过滤，收集透析液；所述微滤包括0.4-0.55μm孔径的膜过滤，收集滤液。

24、可选的，步骤s3中所述纯化包括以尺寸排阻色谱柱过柱纯化。

25、可选的，步骤s3中所述超速离心具体包括以下步骤：

26、将纯化时的洗脱液经1500-2500g离心25-35min；上清液再经8000-12000g离心40-50min后微滤；滤液经80000-120000g离心65-75min；沉淀以pbs缓冲液重悬后再经80000-120000g离心65-75min，即得鬼针草细胞外囊泡。

27、通过采用上述技术方案，以超速离心以获得高纯度的鬼针草细胞外囊泡。

28、综上所述，本申请具有以下有益效果：

29、1、本申请提供的是鬼针草细胞外囊泡对炎症性肠病的治疗用途，通过实验证明，鬼针草细胞外囊泡对于炎症性肠炎具有较好的改善效果，并具有制备具有治疗炎症性肠炎的天然药物产品的潜力，其在一定程度上解决了现有相关药物存在的副作用问题；并且细胞外囊泡微的纳米级尺寸使其易被吸收，疗效更优。

30、2、本申请制备鬼针草细胞外囊泡时以鬼针草茎叶、根茎等为原料，首先主要经酶解使得鬼针草细胞外囊泡释放至细胞外，其次通过多级过滤(例如滤网过滤、膜过滤、微滤等)以及超速离心，最终获得纯化后的鬼针草细胞外囊泡。

技术特征：

1.鬼针草细胞外囊泡对炎症性肠病的治疗用途，其特征在于，所述鬼针草细胞外囊泡来源于鬼针草叶片、茎叶、根茎中的任意一种或多种。

2.根据权利要求1所述的鬼针草细胞外囊泡对炎症性肠病的治疗用途，其特征在于，所述鬼针草细胞外囊泡用于治疗炎症性肠炎时，所述鬼针草细胞外囊泡作为药物原料添加；

3.根据权利要求1所述的鬼针草细胞外囊泡对炎症性肠病的治疗用途，其特征在于，所述药物还包括其他辅助组分，所述其他辅助组分选自益生菌、辅料、赋形剂、助剂、分散剂、食品添加剂和药品添加剂中的一种或多种。

4.根据权利要求1所述的鬼针草细胞外囊泡对炎症性肠病的治疗用途，其特征在于，所述鬼针草细胞外囊泡的制备方法包括以下步骤：

5.根据权利要求4所述的鬼针草细胞外囊泡对炎症性肠病的治疗用途，其特征在于，步骤s1中酶解包括以下步骤：将粉碎后的鬼针草样本以乙醇溶液浸泡后，除去乙醇溶液，加入酶液在45-55℃下酶解5-7h即可。

6.根据权利要求5所述的鬼针草细胞外囊泡对炎症性肠病的治疗用途，其特征在于，所述酶液的组分包括：1.5-2.5wt%果胶酶，3-5wt%纤维素酶，0.4-0.8mol/l甘露醇。

7.根据权利要求5所述的鬼针草细胞外囊泡对炎症性肠病的治疗用途，其特征在于，所述乙醇溶液中乙醇的体积分数为70-80%。

8.根据权利要求4所述的鬼针草细胞外囊泡对炎症性肠病的治疗用途，其特征在于，步骤s2中所述过滤包括以250-350目孔径范围的滤网或滤袋过滤，收集滤液；所述透析包括100-200nm孔径的膜过滤，收集透析液；所述微滤包括0.4-0.55μm孔径的膜过滤，收集滤液。

9.根据权利要求4所述的鬼针草细胞外囊泡对炎症性肠病的治疗用途，其特征在于，步骤s3中所述纯化包括以尺寸排阻色谱柱过柱纯化并收集洗脱液的步骤。

10.根据权利要求4所述的鬼针草细胞外囊泡对炎症性肠病的治疗用途，其特征在于，步骤s3中所述超速离心具体包括以下步骤：

技术总结
本申请涉及植物外泌体应用的技术领域，具体公开了一种鬼针草细胞外囊泡对炎症性肠病的治疗用途。所述鬼针草细胞外囊泡来源于鬼针草叶片、茎叶、根茎中的任意一种或多种。本申请的鬼针草细胞外囊泡具有显著优异的治疗炎症性肠病的效果。

技术研发人员：张志荣,陈翠丽,邱林军,马启文,黄明杰,陈茂立
受保护的技术使用者：厦门鲸泽生物科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/5/9