一种南瓜籽蛋白源抗氧化抗癌小分子肽药片及其制备方法与流程

本发明属于生物医药，具体涉及一种南瓜籽蛋白源抗氧化抗癌小分子肽药片及其制备方法。

背景技术：

1、南瓜(学名：cucurbitapepo)，又名番瓜、饭瓜、菜瓜，是葫芦科南瓜属的植物，一年生蔓生草本。南瓜是重要的蔬菜和粮食作物，其种子富含优质蛋白质，营养价值高，易消化吸收，氨基酸组成与身体组织蛋白质接近，因此近几年被学者们重点关注。同时，南瓜籽蛋白还具有防癌、抗癌、抗菌、抗病毒、抗糖尿病和降血压的生物活性，其在医药领域的应用前景十分广阔。

2、随着分子生物学的发展，越来越多的证据表明，活性肽可以直接被人体吸收并参与多种生物学活动，如细胞凋亡、细胞生长、免疫反应等。活性肽具有分子量小、结构简单、生物活性高等特点，被认为具有极大的医学价值和营养价值。

3、小分子肽在医药领域应用广泛，可用于治疗多种疾病，如糖尿病、炎症和各类癌症。小分子肽还可用于抑菌、抗病毒领域，通过与病毒表面抗原相互作用，影响病毒与宿主细胞间相互识别、结合，达到抗病毒作用。小分子肽也可改善心血管功能，具有降低血胆固醇、降血压、扩张血管、改善心肌缺血等作用。小分子肽还可促进机体营养吸收、促进骨骼发育、提供机体能量、抵抗疲劳，具有多种健康益处。最重要的是，小分子肽还可以调控免疫功能，增强机体免疫活性，有效抑制肿瘤细胞的增殖并促进肿瘤细胞凋亡，防止肿瘤细胞向周围组织扩散，对癌症的治疗和预防具有重要意义。

4、对于小分子肽的筛选，目前多采用“细胞试验筛选-结构鉴定-动物试验验证”的步骤，该方法包括：首先获取大量小分子肽，通过细胞试验筛选，获得具有生物活性的小分子肽，将获得的小分子肽进行结构鉴定，通过动物试验验证小分子肽的生物活性。该方法步骤繁琐，筛选出具有特定生物活性的小分子肽的概率较低，且难以大规模生产。

技术实现思路

1、针对上述现有技术存在的问题和不足，本发明的目的是提供一种南瓜籽蛋白源抗氧化抗癌小分子肽药片及其制备方法，本发明所制得的小分子肽药片，具有优秀的抗氧化和抗乳腺癌活性。

2、为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：

3、一种南瓜籽蛋白源抗氧化抗癌小分子肽药片的制备方法，包括以下步骤：

4、s1、南瓜籽蛋白序列获取：从uniprot获得南瓜籽蛋白序列；

5、s2、将s1步骤中获得的南瓜籽蛋白序列，提交至在线处理工具中，选择胃蛋白酶和胰蛋白酶水解南瓜籽蛋白，获得胃肠道消化后的活性肽序列；

6、s3、利用在线数据库对s2获得的多肽序列进行安全性预测；

7、s4、利用分子对接方法，筛选对氧化应激和乳腺癌相关靶点具有抑制潜力的活性肽；

8、s5、小分子肽的合成；

9、s6、小分子肽药片的制备。

10、优选的，s1步骤中使用的南瓜籽蛋白序列如下：

11、q39649，2s种子贮藏白蛋白，网址https://www.uniprot.org/uniprotkb/q39649/entry；p13744，11s种子球蛋白β亚基，网址https://www.uniprot.org/uniprotkb/p13744/entry；a0a6j1k8h1，11s种子贮藏球蛋白，网址https://www.uniprot.org/uniprotkb/a0a6j1k8h1/entry；a0a6j1i6z1，种子生物素蛋白sbp65，网址https://www.uniprot.org/uniprotkb/a0a6j1i6z1/entry；a0a6j1jdb2，12s种子贮藏蛋白-crd，网址https://www.uniprot.org/uniprotkb/a0a6j1i6z1/entry；a0a6j1iu23，vicilin样种子贮藏蛋白at2g18540，网址https://www.uniprot.org/uniprotkb/p13744/entry；a0a6j1jbk8，2s富含硫的种子贮藏蛋白，网址https://www.uniprot.org/uniprotkb/a0a6j1jbk8/entry。

12、优选的，所述s2中在线处理工具网址为：http://web.expasy.org/peptide_cutter/。

13、优选的，s3步骤中利用peptideranker、toxinpred和innovagen对s2获得的多肽序列进行潜在活性、毒性、亲水性、疏水性、电荷和溶解性的预测。

14、优选的，peptideranker(http://distilldeep.ucd.ie/peptide ranker/)用于预测肽的潜在活性；toxinpred(http://www.imtech.res.in/raghava/toxinpred/)用于预测肽的毒性、疏水性、亲水性、电荷；innovagen(http://www.innovagen.com/proteomics-tools)用于预测肽的溶解性。

15、优选的，s4中利用分子对接方法，筛选对氧化应激和乳腺癌相关靶点具有抑制潜力的活性肽，包括如下步骤：

16、(1)3d结构的获取：从rcsb(http://www.rcsb.org/pdb)数据库获得tp53，phgdh，caspase3，keap1的3d结构；

17、(2)构建活性肽结构：使用chemdraw和chem3d构建活性肽结构；

18、(3)分子对接：将步骤(1)中的tp53，phgdh，caspase3，keap1去除配体和水分子后，与s2获得的多肽序列一同添加非极性氢和高斯电荷，使用autodock 4.2软件分别进行多肽与tp53、多肽与phgdh、多肽与caspase3、多肽与keap1的半柔性分子对接；

19、(4)分子对接后，根据结合能结果筛选出对氧化应激和乳腺癌相关靶点表现出最佳结合的活性肽。

20、进一步优选的，所述tp53为肿瘤蛋白p53；phgdh为磷酸甘油酸脱氢酶；caspase3为胱天蛋白酶3；keap1为胞质接头蛋白。

21、优选的，对tp53表现出最强结合的活性肽为ypsppy、fpf、istany、iiv、ipqn、vcppl、ctair、vvpr、qpr、iipqn；

22、对phgdh表现出最强结合的活性肽为gienpw、iipqn、qgsevw、gqqer、vnapql、mphpck、ddgse、tpppgy、qivqr、tirpk；

23、对caspase3表现出最强结合的活性肽为gveew、ew、ey、ddgse、df、eea、nvgpe、eel、deeer、pdih。

24、进一步优选的，与tp53、phgdh、caspase3紧密结合的具备较强抗癌活性的活性肽为ypsppy、fpf、istany、iiv、gienpw、iipqn、qgsevw、gveew、ew、ey。

25、优选的，对keap1表现出最强结合的具备较强抗氧化性的活性肽为ypsppy、qivqr、qgsevw、vnapql、vqvvdn、iipqn、qgqndr、tpppgy、tpppgf、gienpw。

26、进一步优选的，具有较高抗癌活性又具有较高抗氧化活性的活性肽为ypsppy、qgsevw、vnapql、vqvvdn、iipqn、tpppgy、tpppgf、gienpw、istany、aqdpvr、vcppl。

27、优选的，s5中由上海科肽生物科技有限公司采用fmoc固相合成方法将步骤s4中筛选出的活性肽合成小分子肽。

28、优选的，合成的对tp53表现出最强结合的小分子肽为ypsppy、fpf、istany、iiv、ipqn、vcppl、ctair、vvpr、qpr、iipqn。

29、对phgdh表现出最强结合的小分子肽为gienpw、iipqn、qgsevw、gqqer、vnapql、mphpck、ddgse、tpppgy、qivqr、tirpk；

30、对caspase3表现出最强结合的小分子肽为gveew、ew、ey、ddgse、df、eea、nvgpe、eel、deeer、pdih。

31、进一步优选的，与tp53、phgdh、caspase3紧密结合的具备较强抗癌活性的小分子肽为ypsppy、fpf、istany、iiv、gienpw、iipqn、qgsevw、gveew、ew、ey。

32、优选的，对keap1表现出最强结合的具备较强抗氧化性的小分子肽为ypsppy、qivqr、qgsevw、vnapql、vqvvdn、iipqn、qgqndr、tpppgy、tpppgf、gienpw。

33、进一步优选的，具有较高抗癌活性又具有较高抗氧化活性的小分子肽为ypsppy、qgsevw、vnapql、vqvvdn、iipqn、tpppgy、tpppgf、gienpw、istany、aqdpvr、vcppl。

34、上述小分子肽结构式如下：

35、

36、

37、优选的，步骤s6是将s5合成的小分子肽中的一种或几种，与没食子儿茶素没食子酸酯、人参皂苷、芦丁、槲皮素、糊精混合。

38、本发明还提供了所述的制备方法制备所得南瓜籽蛋白源抗氧化抗癌小分子肽药片。

39、优选的，所述药剂剂型为片剂，该药剂通过将上述物质混合，置于料斗中，采用压片机对料斗中的混合料进行压片处理，将压片后的药片取出并进行包装。

40、优选的，所述药片重量为0.2-0.4g。

41、本发明公开了一种南瓜籽蛋白源抗氧化抗癌小分子肽药片，包括以下组分：ypsppy、fpf、iiv、qgsevw、gveew、ew、ey、qivqr、qgqndr、vnapql、vqvvdn、iipqn、tpppgy、tpppgf、gienpw、istany、aqdpvr、vcppl各0-1份，表没食子儿茶素没食子酸酯1-5份、人参皂苷1-5份、芦丁1-5份、槲皮素1-5份、糊精4-20份。

42、与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

43、1.本发明提供的一种南瓜籽蛋白源抗氧化抗癌小分子肽药片及其制备方法，该药片的高效性和针对性，增强了对小分子肽的深度开发和在医疗领域的应用，表现出明显的抗乳腺癌效果。

44、2.本发明的南瓜籽蛋白源抗乳腺癌小分子肽药片能根据患者的身体情况施用不同的配方，治疗中的患者可以施用抗癌效果更好的片剂，而癌症康复患者可以施用抗氧化效果更好的片剂。

45、3.本发明的南瓜籽蛋白源抗乳腺癌小分子肽药片具有较低的副作用和高安全性，使其成为乳腺癌辅助治疗的理想选择。这种药片不仅能够辅助主要治疗方案，提高治疗效果，还能有效缓解由乳腺癌引起的各种副作用，如炎症和氧化应激，从而改善患者的生活质量。此外，该药片的制备工艺简便，易于规模化生产，有利于其在医疗市场的广泛推广和应用。

46、下面通过附图和实施例，对本发明的技术方案做进一步的详细描述。