专利名称:一种灵芝和人参复合提取物及其制备方法和应用的制作方法
一种灵芝和人参复合提取物及其制备方法和应用技术领域：
[0001]本发明涉及食用药用真菌和草本植物的深加工领域，确切地说，是涉及一种对灵芝和人参的活性成分进行萃取的方法。
背景技术：
[0002]灵芝(Ganodermalucidum)是一种灵芝属真菌,也称为灵芝草、仙草、瑞草、神草等，是补益强壮，扶正固本的珍贵药材，具有多种生理活性和药理作用，是祖国传统中药宝库中的珍贵药材。从现代中医学的观点来看，灵芝具有无毒性、无副作用；能对全身器官有疗效；可以促使全部器官机能正常化等特点。灵芝中的有效成分主要有灵芝多糖、灵芝酸、核苷类、留醇类、生物碱类、氨基酸多肽类、无机元素和其它不饱和脂肪酸类。在我国，根据外观对灵芝进行划分有赤芝、紫芝、黄芝、白芝、黑芝、青芝等六种，主要分布在我国黑龙江、吉林、河北、山东、山西、内蒙古、安徽、江苏、浙江、江西、广东、广西、贵州、云南、湖南、福建及台湾等地。其中长白山灵芝是一种生长在我国东北长白山中的赤芝。[0003]灵芝油是存在于灵芝子实体和灵芝孢子中的脂溶性挥发成分，在常温下呈膏状，其主要成分为灵芝酸(主要为三萜类物质)、氨基酸多肽和脂肪酸。其中三萜类物质具有强烈的药理活性，有抑制肿瘤、止痛、镇静、抑制组织胺释放、解毒、保肝、毒杀肿瘤细胞等功效。目前已知的灵芝三萜成分有一百多种。一般地讲，灵芝生长期越长，其中的灵芝酸的含量就越高，而灵芝酸含量越高灵芝就越贵重。目前，灵芝油已被制成丸剂或片剂，也可以制成口服液用于抑制肿瘤，延长癌症患者的寿命。[0004]人参(Ginseng)是一种多年生草本植物，被人们称为“百草之王”。它是驰名中外、老幼皆知的名贵药材。目前已知人参中的药用成分主要有人参皂甙类、有机酸及酯类、维生素类、留醇、甙类以及多种酶。在人参油中主要含有皂甙和有机酸及酯，其中人参二醇和人参三醇均是三萜类化合物，有较强的药理活性。对久病、失血、脱液所致元气欲脱，神疲脉微；脾气不足之食少倦怠，呕吐泄泻；肺气虚弱之气短喘促，咳嗽无力；心气虚衰之失眠多梦，惊悸健忘，体虚多汗；津亏之口渴，消渴；血虚之萎黄，眩晕；肾虚阳萎，尿频，气虚外感等有着显著的疗效。[0005]目前，超临界二氧化碳萃取是将灵芝油从灵芝实体和灵芝孢子中高效率无成分破坏地提取出来的一种有效方法。在用超临界二氧化碳萃取灵芝油方面的发明创造中，中国专利申请号为200610033686， 公开号为CN1850124公开的一种超临界CO2萃取灵芝孢子油的方法，是选用破壁灵芝孢子粉为原料，混合一定量的粒状填料，CO2压力范围在10 35MPa，温度范围在35 55°C下萃取2_5小时；一级分离釜压力范围在8 lOMPa，温度范围在30 50°C，二级分离釜压力范围在4 6MPa，温度范围在30 50°C，进行分离，获得淡黄色灵芝孢子油。申请号为200410017468，公开号为CN1562334公开的全灵芝孢子中有效成分的超临界CO2萃取方法，是将粉碎为颗粒的灵芝子实体与灵芝孢子混合物置于萃取釜，CO2压力范围在12 40MPa，温度范围在32 48°C下萃取3_6小时；在分离釜减压降温后流出呈油、膏状态的全灵芝孢子提取物。申请号为200610000663，公开号为CN100998613公开的一种超临界技术生产灵芝有效成分的方法，是以小麦培养灵芝菌的成品为原料，采用超临界二氧化碳萃取技术获得灵芝油、灵芝三萜类成分、灵芝核苷成分、灵芝留醇和生物碱。申请号为200410005571，公开号为CN1560072公开的一种从灵芝中制备灵芝三萜酸和灵芝多糖的方法，是将灵芝子实体的颗粒物为原料，向提取罐内注入CO2和极性溶剂，提取压力为25 50MPa，极性溶剂注入量按体积百分比为10 20%，提取温度为35 80°C，提取时间2-4小时，得到灵芝三萜酸提取液。申请号为200810023834.9，公开号为CN101269095A的灵芝与灵芝孢子超临界复合式加工方法，是将灵芝子实体与破壁灵芝孢子粉混合制成复合粉，利用超临界CO2进行提取，同时渗入30% 5%夹带剂水、乙醇，以便得到灵芝孢子油。申请号为200310107892.7，公开号为CN1607001A的用灵芝菌丝体萃取灵芝油的方法，是将灵芝菌丝体粉碎后用超临界CO2萃取灵芝油。萃取釜内萃取压力为15 35MPa ;萃取温度为35 60°C ；C02流体流量为60 100kg/h ;萃取时间为0.5 4h。[0006]上述专利主要从萃取釜及分离釜中CO2的压力、温度及萃取时间等条件角度，在一定程度上解决了从相关灵芝子实体、灵芝孢子粉以及灵芝菌丝等原料中提取灵芝油问题。然而以一定重量比例的灵芝子实体和人参制成复合粉，用超临界CO2方法获取灵芝/人参复合油方面的技术还未见专利报道。从中医学来讲，灵芝油与人参油合理配伍能够提高药理活性，而从灵芝人参复合粉末中萃取得到的灵芝/人参复合油与简单同比例灵芝油和人参油相加得到的混合油相比，其前者的药理活性显著高于后者。因此，从灵芝人参复合粉中提取灵芝/人参复合油对于相关中医新药的发展具有重要的意义。
发明内容
[0007]本发明的目的之一是提供一种灵芝和人参的复合提取物，具有比分别提取的灵芝和人参提取物的混合物更显著的药理活性。[0008]本发明的另一个目的是提供所述灵芝和人参的复合提油取物的制备方法。[0009]本发明的再一个目的是提供所述灵芝和人参的复合提油取物在药物制备中的应用。[0010]本发明的上述目的是通过以下技术方案实现的:[0011]提供一种灵芝和人参的复合提取物，它是以1:5 5:1重量比的灵芝和人参为原料，混合制成复合粉末后，用超临界CO2流体萃取得到的灵芝/人参复合油。[0012]所述的灵芝优选灵芝子 实体；进一步优选长白山特产的赤灵芝子实体。所述的人参优选生晒参；进一步优选长白山特产的生晒参。[0013]所述的灵芝和人参的重量比优选1:5 5:1,更优选1:2 2:1 ;最优选1:1。[0014]所述的复合粉末，优选细度为20 40目。[0015]所述的超临界CO2流体萃取灵芝/人参复合油的方法，优选使所述的灵芝和人参复合粉末在由萃取釜、一级分离釜和二级分离釜构成的超临界CO2流体萃取系统中，经过装料、萃取、分离过程，得到灵芝/人参复合油。[0016]所述的装料优选将所述的灵芝和人参的复合粉末含水率控制在12 15%，然后均匀装填到超临界CO2流体萃取料罐中，装填密度控制在0.10 0.25g/cm3 ；[0017]所述的萃取优选将CO2在装填有所述的灵芝和人参复合粉末的萃取系统中循环，同时向萃取釜打入85%乙醇作夹带剂；按CO2流体体积和料罐横截面积计，控制CO2流量为0.3 0.6L/h.cm2 ;萃取釜内的压力保持在28 32MPa、温度保持在55 60°C ;夹带剂打入量按灵芝/人参复合粉末重量计为0.01 0.04mL/g ;萃取时间为2.5 24小时。[0018]所述的分离优选一级分离釜的压力保持在6 8MPa、温度保持在60 65°C;二级分离釜的压力保持在4 6MPa、温度保持在35 40°C。[0019]本发明还提供所述的灵芝和人参的复合提取物的制备方法，包括以下步骤:[0020]I)将灵芝和人参分别初步粉碎后，按照所述1: 5 5:1的重量比混合均匀，再进一步将灵芝和人参的混合物粉碎至20 40目；[0021]2)将步骤I)得到的灵芝和人参的复合粉末含水率控制在12 15%，然后均匀装填到超临界CO2流体萃取料罐中，装填密度控制在0.10 0.25g/cm3 ；[0022]3)将CO2在由萃取釜、一级分离釜和二级分离釜构成的超临界CO2流体萃取系统中循环，同时向萃取釜打入85%乙醇作夹带剂；按CO2流体体积和料罐横截面积计，控制CO2流量为0.3 0.6L/h.cm2 ;萃取釜内的压力保持在28 32MPa、温度保持在55 60°C ;夹带剂打入量按灵芝/人参复合粉末重量计为0.01 0.04mL/g ;萃取时间为2.5 24小时；所述的一级分离釜的压力保持在6 8MPa、温度保持在60 65°C;上述的二级分离釜的压力保持在4 6MPa、温度保持在35 40°C，最终得到本发明所述的灵芝和人参的复合提取物。[0023]本发明所述的制备方法中， 步骤2)所述的控制灵芝和人参的复合粉末含水率，可以通过现有的多种方法完成，例如可以通过以下方法实现:[0024]首先测定灵芝子实体和生晒参的含水率。方法是将一个批次的灵芝子实体和生晒参分别取样破碎成粒度为8 12_的块体，称其重量(Wtl)后放置到真空干燥箱中，其真空度为小于50Pa，在60°C下恒温干燥2小时，自然冷却至室温后取出称重(W)，其含水率为U = (W0-W) /X。再对同一批次的将灵芝子实体和生晒参块体称重，分别为Wa2和WA#，按一定重量比例货灵芝/货人参=1:5 5:1混合均匀并继续破碎到20 40目粉末。根据所测定的含水率，U U入#对同一批次的灵芝子实体和生晒参复合粉用水进行加湿或干燥处理，使复合粉的含水率保持在12 15%。[0025]本发明所述的制备方法中，步骤3)所述的CO2流体的流量Q (单位是立升/小时(L/h))与复合粉的装填密度及料罐的横截面积S (单位是平方厘米(cm2))有关，定义比流量q=Q/S ;所述的夹带剂的打入量V与复合粉的重量W有关。[0026]步骤3)上述的萃取中，在所述工艺条件下萃取24小时后已基本没有萃取物，可以认为经24小时萃取已将复合粉末中的灵芝/人参复合油完全萃取出来。定义萃取率n=x小时复合油提取重量(Wx) /24小时复合油提取重量(W24X所述的X小时复合油提取重量是指在上述工艺参量下，经X小时萃取后在一级分离釜和二级分离釜得到的复合油重量之和；所述的24小时复合油提取重量是指在同样工艺参量下，经24小时萃取后在一级分离釜和二级分离釜得到的复合油重量之和。[0027]在本发明所述的工艺参量下，经4小时萃取，其萃取率n高于95%。经色谱分析表明，其三萜类物质含量高于22%。[0028]本发明还提供所述的灵芝和人参的复合提取物在制备抗肿瘤药物中的应用。[0029]所述的抗肿瘤药物优选抗口腔粘膜癌的药物。[0030]与现有技术相比，本发明先将灵芝和人参混合制粉后，再经超临界CO2流体萃取，得到的灵芝和人参复合提取物，不仅在灵芝和人参活性成分提取率方面取得了显著提高，而且本发明人经过试验发现，经本发明方法获得的灵芝/人参复合油，比分别提取的灵芝油和人参油以同比例简单混合得到的混合油的药理活性显著提高，有以下对比试验为证:[0031]1.试验制剂及动物饲养:[0032]取本发明实施例1制备的复合油10克，用0.5%羧甲基纤维素钠溶液配制成浓度为10g/L的灵芝/人参复合油羧甲基纤维素钠溶液，简称A溶液。[0033]再取单独用灵芝经超临界CO2流体萃取的灵芝油5克、单独用人参经超临界CO2流体萃取的人参油5克,混合在一起,用0.5%羧甲基纤维素钠溶液配制成浓度为10g/L的灵芝/人参混合油羧甲基纤维素钠溶液，简称B溶液。[0034]再取单独用灵芝经超临界CO2流体萃取的灵芝油10克，用0.5%羧甲基纤维素钠溶液配制成浓度为10g/L的灵芝油羧甲基纤维素钠溶液,简称C溶液。[0035]取0.5%羧甲基纤维素钠溶液为D溶液。[0036]6 7周龄健康的金黄地鼠240只，体重80 100g，雌雄各半。随机分为A、B、C和D四组，在干燥、空气流通、24小时光暗循环条件下雌雄分笼饲养，饲以金黄地鼠专用饲料，饮用水为普通自来水。[0037]用分析纯丙酮将二甲基苯丙蒽(9，10-dimethyl-l,2-benzanthracene, DMBA,购自Sigma公司)配置成0.5% (5g/L)的DMBA丙酮液。用于诱导金黄地鼠颊囊癌变。[0038]2.试验方案:[0039](I)A组60只，常规饲养2周后，每日上午禁食4小时，按100mg/kg剂量将A溶液Iml经口直接喂入。每周一、三、五对金黄地鼠双侧颊囊圆周式涂布2次DMBA丙酮液，涂药前后吹干颊囊粘 膜，涂药后禁水禁食2小时。涂布期间分6，9，12周(周日)各处死20只，得到双侧颊囊标本。[0040](2)B组60只，常规饲养2周后，按100mg/kg剂量灌胃喂服B溶液lml。其余同A组。[0041](3)C组60只，常规饲养2周后，按100mg/kg剂量灌胃喂服C溶液lml。其余同A组。[0042](4) D组60只，常规饲养2周后，灌胃喂服D溶液lml。其余同A组。[0043]各组处死后取动物颊囊粘膜病变组织进行常规脱水、包埋、切片并作HE染色。根据WHO 口腔癌前病变协作中心12项诊断标准进行分级诊断，比较各组病损的组织学严重程度。并结合肉眼观察。得到结果表I和表2所示:[0044]表中“正常”为正常黏膜:复层角化鳞状上皮，细胞排列整齐，无钉突或钉突不明显。棘细胞层较人之正常黏膜薄，基底层细胞明显，类似人之正常黏膜。[0045]表中“单纯增生”为上皮单纯增生黏膜:上皮多数呈过度角化，少数错角化。棘层增厚。基底膜仍整齐，固有层下有淋巴细胞、浆细胞浸润。[0046]表中“异常增生”为上皮异常增生黏膜:多数基底细胞极性消失，上皮钉突呈钉状、乳头状。上皮层次紊乱，胞核浓染，并有核仁增大，有丝分裂相增加。棘细胞层中单个或成团细胞角化。基底膜仍完整，未侵入黏膜下层。根据异型性程度和累及范围分为轻、中、重三级。轻度和中度非典型增生，累及上皮层下部的1/3 2/3处，病因消除后可恢复正常。重度非典型增生累及上皮2/3以上尚为达到全层且很难逆转，常转变为癌。[0047]表中鳞癌:细胞异形性明显，上皮增殖并突入结缔组织内，呈团块状或条索状排列，部分可见明显的角化珠，核分裂象增加，细胞与胞核呈多形性。B、C组所诱导的癌均为疣状癌，D组多为浸润性鳞癌。[0048]表I动物颊囊粘膜组织病理观察结果(例)[0049]
权利要求
1.一种灵芝和人参的复合提取物，其特征在于:它是以1:5 5:1重量比的灵芝和人参为原料，混合制成复合粉末后，用超临界CO2流体萃取得到的灵芝/人参复合油。
2.权利要求
1所述的灵芝和人参的复合提取物，其特征在于:所述的灵芝为灵芝子实体；所述的人参为生晒参。
3.权利要求
1所述的灵芝和人参的复合提取物，其特征在于:所述的灵芝和人参的重量比为1:5 5:1,优选1:1。
4.权利要求
1所述的灵芝和人参的复合提取物，其特征在于:所述的复合粉末细度为20 40目。
5.权利要求
1所述的灵芝和人参的复合提取物，其特征在于:所述的超临界CCV流体萃取灵芝/人参复合油的方法，是所述的灵芝和人参复合粉末在由萃取釜、一级分离釜和二级分离釜构成的超临界CO2流体萃取系统中，经过装料、萃取、分离过程，得到灵芝/人参复口彻O
6.权利要求
5所述的灵芝和人参的复合提取物，其特征在于:所述的装料是将所述的灵芝和人参的复合粉末含水率控制在12 15%，然后均匀装填到超临界CO2流体萃取料罐中，装填密度控制在0.10 0.25g/cm3。
7.权利要求
5所述的灵芝和人参的复合提取物，其特征在于:所述的萃取是将CO2在装填有所述的灵芝和人参复合粉末的萃取系统中循环，同时向萃取釜打入85%乙醇作夹带剂；按CO2流体体积和料罐横截面积计，控制CO2流量为0.3 0.6L/h.cm2 ;萃取釜内的压力保持在28 32MPa、温度保持在55 60°C;夹带剂打入量按灵芝/人参复合粉末重量计为0.01 0.04mL/g ;萃取时间为2.5 24小时。
8.权利要求
5所述的灵芝和人参的复合提取物，其特征在于:所述的分离是将一级分离釜的压力保持在6 8MPa、温度保持在60 65°C ;二级分离釜的压力保持在4 6MPa、温度保持在35 40°C。
9.制备权利要求
1所述的灵芝和人参的复合提取物的方法，包括以下步骤: 1)将灵芝和人参分别初步粉碎后，按照所述1:5 5:1的重量比混合均匀，再进一步将灵芝和人参的混合物粉碎至20 40目； 2)将步骤I)得到的灵芝和人参的复合粉末含水率控制在12 15%，然后均匀装填到超临界CO2流体萃取料罐中，装填密度控制在0.10 0.25g/cm3 ； 3)将CO2在由萃取釜、一级分离釜和二级分离釜构成的超临界CO2流体萃取系统中循环，同时向萃取釜打入85%乙醇作夹带剂；按CO2流体体积和料罐横截面积计，控制CO2流量为0.3 0.6L/h.cm2 ;萃取釜内的压力保持在28 32MPa、温度保持在55 60°C ;夹带剂打入量按灵芝/人参复合粉末重量计为0.01 0.04mL/g ;萃取时间为2.5 24小时；所述的一级分离釜的压力保持在6 8MPa、温度保持在60 65°C;上述的二级分离釜的压力保持在4 6MPa、温度保持在35 40°C，最终得到所述的灵芝和人参的复合提取物。
10.权利要求
1所述的 灵芝和人参的复合提取物在制备抗肿瘤药物中的应用。
专利摘要
本发明提供一种灵芝和人参的复合提取物，它是以1:5～5:1重量比的灵芝和人参为原料，混合制成复合粉末后，用超临界CO2流体萃取得到的灵芝/人参复合油。本发明所述的灵芝和人参复合提取物，比分别提取的灵芝油和人参油以同比例简单混合得到的混合油的药理活性有显著提高。本发明还提供所述复合提取物的制备方法，及其在制备抗肿瘤药物中的应用。
文档编号A61K36/258GKCN103191164SQ201310127859
公开日2013年7月10日 申请日期2013年4月12日
发明者杨海滨 申请人:吉林大学导出引文BiBTeX, EndNote, RefMan