专利名称：测定和调理促乳素日节律的改进方法
本申请是1991年6月24日递交，申请号为719745的美国专利申请的共同待批的部分续申请，而该申请又是1990年1月10日递交的序号为463327的部分续申请，这个463327号申请又是1988年5月10日是递交的序号为192332的部分续申请，所有这些申请的申请人都是AnthonyH.Cincotta和AlbertH.Meier。
本发明涉及减少脊椎动物或人体这类对象的体脂肪贮存的方法，和减少一种胰岛素抵制、胰岛素过高血、高脂血和高血糖以及其他代谢疾病，特别是与Ⅱ型糖尿病相关的疾病的方法。特别是本发明涉及的是(i)使人或脊椎动物的促乳素日分泌循环正常化的方法;(ii)诊断人或脊椎动物异常的促乳素日分泌循环的方法;(iii)确定使得这种异常的促乳素分泌循环常化而必要的合适的调整的方法。这种调整包括相当短期地向对象在每日的予定时间(如果给一种药)或每日不同的予定时间(如果给两种药)给促乳素兴奋剂和/或促乳素抑制剂中的至少一种。这种相对短期限疗法会导致对异常或非正常促乳素分泌循环的长期调理，结果使它们与正常的促乳素分泌循环相一致或相似。随之，这种调节导致缩短及控制一种或多种代谢失调或其它的(全部或部分地)取决于至少一种昼夜中枢神经摆动的相(它以日促乳素分泌节律表达)的失调的一段延长的时间。
糖尿病，最容易在不知不觉中加剧的主要疾病之一，它会突然发作或者多年处于未确诊状态(lieundagnosed)而侵害血管和神经。糖尿病人作为一个类，常受失明，心脏病，中风，肾病，失聪，坏疽和阳萎的折磨，远比非糖尿病的人口多。在这个国家三分之一的看医生的人是由这种病及其并发症造成的，而且糖尿病及其并发症正在造成死亡。
糖尿病反过来却影响人体使用糖和淀粉的方式，在人体消化期间糖和淀粉是被转化成葡萄糖的。胰岛素，一种由胰腺产生激素，可使葡萄糖为人体细胞获得以提供能量。在肌肉，脂肪和结缔组织中，胰岛素通过对细胞膜的作用促使葡萄进入细胞。摄入的葡萄糖正常地在肝脏转成CO2和H2O(50%)转成糖原(5%)和脂肪(30-40%)，脂肪贮在脂肪库中。脂肪酸被循环，返到肝脏并被代谢成硐体供组织利用。脂肪酸也可被其他器官，例如肌肉来代谢。胰岛素的纯粹作用是促进糖类，蛋白和脂肪的贮存和使用。男人中缺少胰岛素是常见并且是严重的病理状态。在Ⅰ型糖尿病中，胰腺产生很少或根本不产生胰岛素，必须天天向糖尿病存活者注射胰岛素。在Ⅱ型糖尿病中，胰腺产生一些胰岛素，但其数量是不足的，或者由于细胞的阻碍其作用比全功效少或两者皆有。在两种形式中普遍存在异常性，但对其可被描绘的异常性的基本损害是(1)减少葡萄糖进入各种“外周的”组织，和(2)增大来自肝脏的葡萄糖释放入循环(增大肝的葡萄生成作用)。因此，就有了细胞外葡糖过量和细胞内葡糖缺乏，这被叫作“中央丰富中的饥饿”。还有是降低氨基酸进入肌肉和增大脂肪分解作用。因此，由于糖尿病症状的结果，升高了的葡萄糖在血液中的含量，以及长期的高血糖就成了血管和神经损伤的征兆。据信，肥胖或者脂肪过量积存可由于细胞对胰岛素的抑制而引起糖尿病的发作。糖尿病发作前，肥胖患者的胰腺负担加重以产生额外的胰岛素;但到最后，也许经几年，胰岛素的产生率下降并导至糖尿病。体脂肪的减少可以改进胰岛素产生，并被认为避免了细胞对胰岛素的不敏感性。
长期减少体脂肪贮存，或者减少对家养动物的恒定(摄入)基准显然对人有可观经济的利益，这尤其是由于动物供应了人的食物的主要部分;由于脂肪在人体中的再积累动物脂肪可以不用了，因为体脂肪积存对健康起反作用。人体内减少体脂肪贮存同样具有显著的美容和生理好处。的确，肥胖和胰岛素抵制，后者通常伴随胰岛素过高血或高血糖或者两者皆有，这是Ⅱ型糖尿病的明证。虽然控制饮食和锻练身体可在对减少体脂肪贮存方面产生适度效果，但还未找到控制胰岛素过高血或胰岛素抵制的有效治疗方法。胰岛素过高血是胰岛素在血液中的量高于正常水平。胰岛素抵制可限定为这样一种状态，中其中，正常量的胰岛素产生异常的生理响应。在胰岛素治疗的糖尿病人中，只要治疗用的胰岛素剂是超正常人的胰岛素分泌速度就认为有胰岛素抵制。胰岛素抵制也可定义为胰岛素量高于正常水平，即胰岛素过高血当其存在时伴随正常或提高了的血液葡萄糖水平。尽管对这些严重的健康问题研究了十几年，肥胖症和胰岛素抵制的病原学仍未知晓。
生物学时间测量的主要单位，昼夜节律或日节律存在于所有的组织层次。对包括肾上腺类同醇在内的许多激素，例如糖皮质激素类固醇，特别是皮质醇和促乳素，一种垂体分泌的激素等都被报导过有日节律。在早期的讨论那个时期该领域的情况的文章中报道了“虽然在激素节律和其他节律之间找出了相互关系，但几乎没有激素的日存在或峰值时间有重要的生理关系的”直接的证据。见“TemporalSynergismofProlactinandAdrenalSteroids”byAlberfH.Meier,GeneralandComparativeEndocrinologySnpperlement3,1972Copyright1972byAcademicPressInc.该文报道促乳素的峰值浓度在每天的不同时间在瘦的和肥的动物中出现。该文随后叙述了几天中对每日给予注入促乳素的鸟类生理学响应。这些响应包括取决于日间注入的时间的体脂肪贮存的增加和降低。而且在瘦鸟中注入促乳素促进体脂肪减少的日间时间与它分泌促乳素最多的日间时间相一致。此外，在肥鸟中注入促乳素促进体脂肪增加的日时辰与它分泌促乳素最多的日时辰相符合。因之发现，只有在一定的日时辰注入时促乳素才刺激增肥，并发现对促乳素的响应时间在瘦动物和肥动物之间是不同的。
在一篇题为“CircadianandSeasonalVariationofPlasmaInsulinandCortisolConcentrationsintheSyrianHamster，MesocricetusAuratus”byChristopherJ.deSouzaandAlbertH.Meier,ChronobiogyIternational,Vol.4,No.2,P141-151,1987，的文章中报道对按短和长的日照时间供养的暗敏感的和暗耐受的(scotosensitiveandscolorefractory)叙利亚仓鼠的血浆胰岛素和皮质醇浓度的昼夜的变化的研究，以测定它们的日节律方面的可能的季节性的改变。已发现按短日照时间暗敏感性仓鼠中胰岛素基线浓度在雌性中的大于在雄性中的。所报导的这些差别可解释在按短日照时间喂养的雌性大鼠中所观察的大量脂肪积存的原因。对多组试验动物来说，皮质醇和胰岛素两者的血浆浓度在一整天期间是变化的，而不是等值的。胰岛素和皮质醇的昼夜变化随着性别，季节条件和白日长度而显著不同。既不是日喂食模式也不是葡萄糖浓度明显地随着季节条件或日照而改变。还报导，未显出白日时间或者季节影响葡萄糖含量的浓度。假定皮质醇和胰岛素的日节律受不同神经起博系统调节，还假定昼夜节律体系的相关系变化部分地是体脂肪积存的季度变化的原因。虽然在调节体脂肪、组织和总的动物的新陈代谢的综合等方面的日的和季节的变化作用尚远未清楚，但却因此感觉到促乳素和糖皮质激素类固醇激素，例如皮质醇的昼视节律是很重要的。见CircadianHormoneRhythmsinLipidRegulatidn(AlbertH.MeierandJohnT.Burns，Amer.Zool.16649-659(1976))。
在我们先前的共同待批专利申请192332中，我们已公开并要求保护调节脂类代谢失调的方法，该方法是按日基准置定时地，并于一段足以改变和调整促乳素日节律的神经相摆动的时间将促乳素(或促乳素和糖皮质激素类固醇(“GC”)两者)向动物或人体血流内给药，然后该法是增加胰岛素敏感性的。促乳素的注入(或促乳素和糖皮质激素类固醇两者)是定时的，结果在患者的促乳素(或促乳素和糖皮质激素类固醇两者)日分泌图中产生一个峰值，该峰值在时间上与消瘦的胰岛素敏感型人的促乳素分泌峰值相符，因而增加胰岛素敏感性和减少了体脂肪贮存。如果需要，按肥胖患者的促乳素峰值分泌时间注入相同药剂则得到脂肪增生。
在我们先前的共同待批申请463327中，我们公开并要求保护一种改变及调整脑神经相摆动的方法，该方法通过在予定的日时辰给予多巴胺兴奋剂来控制肥胖动物(或人)中促乳素和GC两者，从而使得肥胖动物(或人)的促乳素和/或GC峰值产生相飘移，而发生的时间即是它发生(它们发生)在消瘦动物(或人)中的时间，从而导至体脂肪贮存、体重、胰岛素过高血或高血糖中的至少一种将减少和/或增大胰岛素敏感性。
在我们先前的共同待批申请719745中，我们公开了和要求保护改变和调整脑神经相摆动的增强方法，该法控制促乳素分泌水平，这包括(a)就在正常促乳素图峰之后向患者给以多巴胺兴奋剂，以使促乳素水平降到低“日间”水平，(b)就在正常对象(人或动物)促乳素水平峰之前向该对象给以促乳素刺激剂，目的是使患者的促乳素分泌图在形状和时间方面未遭受前述一种或多种代谢失调的消瘦人的该分泌图相一致。
719745(申请系列号)还公开并要求保护向患者给另一种药，甲状腺激素，这些患者是正用多巴胺兴奋剂和促乳素刺激处置的，尤其是那些慢性或季节性甲状腺机能减退患者。
本发明的各种方面在前述的申请中未被要求保护。此外，给药方案的改进及有益的细化以及其确定已完成，这都增加了治疗的有效性。
本发明的一个方面涉及一种方法，该法使需要这样的治疗的第一脊椎动物实验对象的促乳素日释放节律或释放图正常化，该方法步骤包括将此第一脊椎动物实验对象的促乳素释放图与其他具有正常促乳素释放图的脊椎动物的促乳素释放图进行比较;以及调节此第一脊椎动物对象的促乳素释放图，使得所说第一对象的此图与所说第二对象的促乳素释放图大致相同(或相似)。
本发明的另一方面涉及评估人类对象的促乳素日分泌图的方法，该法包括步骤如下(a)将所说对象的促乳素释放图，该图是经24小时连续测定的，与予先确定的健康人的标准促乳素释放图比较;以及(b)以查证方式确定所说人体对象是否有异常的促乳素日释放节律，所说查证是查明(i)在清醒时刻该对象的促乳素分泌水平是否高于健康对象平均促乳素分泌水平(标准促乳素峰值分泌水平或标准促乳素图)达1个标准平均误差以上(StandardErrorofMean)(SEM);和/或查明(ii)在睡眠时刻该对象的促乳素水平是否低于正常(健康)个体的平均促乳素图至少为1SEM。
本发明还有个方面涉及确定是否需要调整的方法，即确定是否要进行调整而使异常的促乳素图“正常化”或使之大致与标准的(或健康的)促乳素图一致的方法，该法包括(a)在连续期中收集对象的多个血样，且所说血样的收集是按予定的时间隔进行;(b)分析每个所说血样的促乳素含量;(c)按在所说的连续时期收集所说样品的时刻间将所说每说样品的促乳素含量标出，从而产生多个数据点(亦即将促乳素含量与采样时间产生连系)，(d)通过所说数据点联结成曲线而产生促乳素图;以及(e)将该促乳素图与予定的正常的促乳素图进行比较。步骤(c)和(d)一起构成了按时间的函数表达促乳素含量的步骤从而产生该对象的促乳素图。
本发明另一方面涉及确定调整的一种方法，所说调整将使病人的异常的促乳素日释放节律与正常个体的促乳素日释放节律一致，该方法包括(a)将该病人的促乳素释放图与予先测定的健康(正常)对象的促乳素释放图进行比较;(b)确定(i)所说病人清醒期间的促乳素量超过正常(健康)个体相应的清醒的促乳素量至少1个平均标准的误差(SEM)，和/或测定(ii)所说病人睡眠期间促乳素量低于正常健康个体相应的睡眠时间促乳素量至少一个SEM;(c)确定向所说对象给药的时刻，所给的药选自促乳素抑制剂和促乳素刺激剂中的至少一种;以及(d)选择所说促乳素刺激剂和/或抑制剂的量，以调节该对象的异常的促乳素量结果使该量超过正常健康个体清醒时间的促乳素分泌图不大于1SEM，并且低于正常健康个体睡眠时间的促乳素分泌图不小于1SEM。
本发明结合附图被进一步说明，其中
图1是男性病员的异常的基础(治疗前)促乳素图(细黑线)和过渡的(治疗中)改进了的促乳素图(细灰线)，和标准正常的促乳素图(粗灰线)的重叠，所有这些皆以图形式出现。(单位是毫微克/ml)图2是另个男性病员的与图1类型相同的重叠。
图3是个女性病员的与图1类型相同的重叠。
图4是另个女病员的与图1类型相同的重叠，所不同的是图4包括这个病员的第二个过渡的(治疗中)促乳素图(处置八周后测量的，以虚线绘制)。
图5以字母(a)到(d)的方式标出各种类型的典型的人体异常促乳素图的重叠的图示说明。
本文所援引的所有专利，专利申请和参考文献经参考其全文而已合于本文中，就如同它们的公开内容存在于本说明之中。然而在矛值的情况下，以本公开为准。最近发现，前述代谢失调与促乳素日分泌水平(和波动)的异常模式有关。健康(正常)对象，亦即未遭受代谢异常的物种中的消瘦成员，具有高度予知的促乳素日释放图，在人类中该图的特征是;在清醒时(日间)低而且恒定的促乳素含量，随之在睡眠时(夜间)急剧升高到峰值，然后逐渐降低到早晨清醒时的水平。
在上下文中“消瘦”意指不肥胖而且也并非异常的体重不够标准。肥胖人定义为超过指定种族的理想体重的百分之二十的人(R.H.Williams，TextbookofEndocrinology，1974，p904-916)。异常体重不足的人是至少比他/她的理想体重低10%的任何人。理想体重(IBW)可用MetropolitanLifeJnsuranceCompanyStandardage/height/WeightCharts来确定。
实验对象的中乳素释放图可以通过在连续24小时周期内以定时间隔(优选3小时间隔)从该对象中采取血样，分析每个血样的促乳素含量，将采血样的时间按每个样品中促乳素的量标出则产生每个样品的数据点，连接这些线数据点则形成促乳素释放图的方法得到。
虽然雌性比雄性有较高的促乳素含量和较陡的峰，两种性别的正常促乳素图的形状定性地说是类似的，而且在同一物种内正常个体与正常个体(同性别)之间无明显的不同。
反之，患有一种或多种代谢失调的个体则有异常(经常是高度异常)的促乳素日分泌图。这些促乳素图不仅基本上有别于标准，而且彼此之间也不同。
至少有一种前述代谢失调的大部分病员(至少约80%)具有异常的促乳素日释放图，该图一般落入图5中以图示所代表的四种模式之一(a)平坦的(无峰值)高水平(在本文中“高”指的是高于“白天”或清醒时的促乳素水平);
(b)平坦的(无峰值)低水平(在本文中“低”意指的是象“白天”或清醒时的促乳素水平一样低或较之更低);
(c)在“白天”有峰值而且在“夜间”是低水平(在本文中方面，“低”意指和0100-0400间的正常睡眠时平均促乳素值相比是低的;
(d)在“白天”有峰值而在“夜间”有个第二峰值。
“清醒时”或“白天”意指正常(健康)人(夜间不轮班工作或替班工作)中促乳素水平相对不变而且是低的时间(大约0.7∶00和22∶00之间)。
本文所用术语“睡眠时”或“夜间”意指的时间周期是正常人中促乳素水平升到峰值(1∶00和4∶00之间)。然后逐渐减小的时间。
对男性1∶00和4∶00之间正常的平均促乳素含量是8.0-14.0毫微克/ml之间，而女性则是在14.0-26.0毫微克/ml之间。见图1-4。
“催乳激素抑制剂”包括那些直接或间接抑制实验对象(脊椎动物或人)的促乳素分泌的物质。促乳素激素抑制剂的非限制性例子包括多巴胺兴奋剂，如多巴胺和某些与麦角有关的抑制促乳素的化合物。
多巴胺兴奋剂的，非限定性的实例是2-溴-α-麦角隐亭(ergoriptine);6-甲基-8β-苯酯基-氨乙基-10-α麦角灵，8-酰氨基麦角灵，是6-甲基-8-α-(N-酰)氨基-9-麦角灵和6-甲基-8-α-(N-苯酰)氨基-9-麦角灵;9，10-二氢麦角考宁;以及D-2-卤-6-烷基-8-取代的麦角灵，例如D-2-溴-6-甲基-8-氰甲麦角灵。此外由药学可接受的酸形成与麦角有关催乳激素抑制化合物的无毒盐也可用在本发明实践中。溴麦角隐亭(Bromocriptine)或2-溴-α-麦角隐亭在本发明实践中发现特别有用。
“促乳素刺激剂包括直接或间接刺激促乳激素分泌的物质。促乳素刺激剂的非限制性例子包括多巴胺拮抗剂，诸如灭吐灵(metoclopramide)，氟哌啶醇，哌咪清，吩噻嗪，哌双咪酮，止呕灵，氯吩噻嗪和5-羟色胺兴奋剂，即MAO抑制剂如优降宁，合成吗啡兴奋剂，美散痛，止吐剂如灭吐灵，抗精神病药如雌激素以及其他的如色氨酸和5-羟色氨酸。此外由药学可接受的酸形成前述促乳素刺激化合物的无毒盐也可用于本发明实践。灭吐灵在本发明实践中发现特别有用。
“促乳素调整剂”指的是促乳激素抑制剂，促乳激素刺激剂，或者是指两者。
“正常”促乳素分泌图的演变健康而年轻(20-35岁)人的统计学上有意义的数目按如下方式选择全部实验对象都是健康的，而且按正常的昼夜循环节律工作/休息方案生活(无夜间守卫或其它的夜间倒班工人)。然后按性别将他们分成不同的组，全部实验对象必须在约23∶00至约07∶00间正常睡眠。每一个体在这样的意义上是健康的他们无生理学上的失调或病理学的病态。特别是，他们(按标准的年龄/身高/体重表)不肥胖;已知有正常的血浆胰岛素含量;是甲状腺机能正常的，即有正常的血浆甲状腺素、三碘甲腺原氨酸、游离甲状腺素及TSH含量。
统计学上有意义的数至少应为3，对于这最小的采样数而言各种统计公式才有一般任何含义。然而，至少为6的采样数通常为好(至少为10则更好)，因为这采样量通常减少促乳素测定的标准误差(SE)。
在24小时期内，每隔3小时从每个实验对象收集一次血样，并且对每个实验对象，如对24小时期间，以适宜的时间间隔(如每隔3小时)所取的血作总的三碘甲腺原氨酸(T3)、总的甲状腺素(T4)、游离T4和甲状腺积累激素(TSH)测量，所说的血样采集一般从上午10∶00开始于次晨7∶00止。
适宜的采样方法及分析程序是本领域中普通技术人员公知的，并可从公开的程序如Linkowski，P.etdl.，J.ClinEndocrinolMetab.61∶429-438，1985;VanCauterandCopinshi，“CircadianandEpisodicVariations”，MartinusNyhoff，TheHagneNetherlands，pp.1-25，1981，中选择。
在采样期间所有实验对象都必须吃同样的饮食及保持同样的睡眠时间模式。
按日时间和正常促乳素图曲线标出每个血样的激素数据和值得注意的促乳素发生的演变，其中包括SEM。
(如果需要，可将数学表达加以改变以描绘该曲线围出的面积。)约30岁的男性的这种正常图形演变的结果以细灰线描绘而示于图1和2中。约30岁女性的这类结果在图3和4中以细灰线画出。醒时的男性SEM(对图1-4中的促乳素而言)为1.0-2.0纤克/ml，而睡眠时则为约3.0纤克/ml。女性醒时的SEM(对图1-4中的促乳素而言)为1.0-3.0纤克/ml，而睡时则为3.0-6.0纤克/ml。
“受影响的”实验对象的日激素图的确定上述程序可用演变成一种在临床评估本发明疗法时的个体的促乳素图。预期有不正常的日促乳素图的个体包括被诊断为下列至少一种症状所折磨的个体肥胖(即按年龄、身高及性别特征，用一种诸如MetropolitanLifeInsuranceCompany的对身高和年龄的标准体重表确定超重20%)、胰岛素障碍、高血糖、胰岛素过多或患有Ⅱ型糖尿病。然而这种评估不限于这类实验对象。
为疗法所考虑的这类实验对象必须是甲状腺机能正常的，即总T3量在约90和约180ng/ml间，总T4量在约4.5和约12μg/ml间而游离T4在约0.7和约1.8μg/dl之间。若不如此，须要在施用促乳素调节剂之前或与此同时施用T4和/或T3，而最好是在早晨的时间施用。换言之，如果一个体的T4和/或T3量低，则不可能调整其促乳素释放图。因而，在通过施用促乳素的刺激剂、抑制剂或其二者调节实验对象的促乳素图之前则必须确定该对象至少有正常的T3和/或T4(最好还有游离T4)血浆量。如果一实验对象中的胰岛素激素量低于正常值(参比上述正常值确定的)，则先向该对象施用T3和/或T4直到这些激素的血浆量处于或高于正常值，然后开始促乳素刺激或抑制处理。施用量是使人处于甲状腺机能正常状态的剂量;一般每个病人每日用约25-约150mcg。如果需要在整个促乳素刺激剂和/或抑制剂给药期间保持足够量的T3/T4，则T3/T4和该促乳素调节治疗剂一起连续施用。
一旦个体的促乳素量图已形成，则将之与“正常的”图，如前一段中所述过程中产生的一个图进行比较。然后按以下规范用药。
1.自约1000时-约2200时，即在“正常”促乳素图的平坦和低量段，在该对象的促乳素图指定点上该促乳素值不得高于上述含义的一个SEM。这个规则用来排除全部个体催乳激素图“正常”的结论，即表示在日间正常健康促乳素图平值之上至少一个SEM或者在睡眠时的之下低于一个SEM，以及经24小时周期按照一个SEM标准所有个体促乳素图基本上均匀地过高或过低。
2.自约2200时直至0700时，即正常日促乳素图急剧改变(及睡眠时间峰值)时，个体的促乳素首先在上述大约相同时间或比睡眠开始后2-6小时内必有一个作为在相同期间的(一般为0100时)实验对象的“正常”促乳素峰的一个峰值，而且还必须在正常的健康促乳素图的一个SEM内。
为确定一对象是否有异常的促乳素分泌图，则与该对象的促乳素释放图相关的卧床时间应与正常对象的该图的相关时间一致。这是通过将该对象的此图与正常个体的这种图相叠，然后想办法移动一个或另一个从而使欲测对象的睡眠开始时间与正常健康个体的睡眠开始时间相符而完成的。
对受影响的实验对象处置的确定上述所产生的信息(促乳素分泌图)被用于(a)鉴定需要调节其促乳素分泌图的病人，及(b)确定所需的调节类型及调节程度。一般说来，这些肥胖的、胰岛素过多的、高脂血的、赖氨酸过多血的或患糖尿病的个体与健康的个体相比显示出异常的促乳素分泌图。简言之，通过将实验对象的促乳素释放图与标准的促乳素释放图相比较可能鉴别出为上述异常症状所困扰的个体。通过在白天的适合的时间及以适合的剂量(量)调节这类个体的促乳素分泌图(或通过施用促乳剂抑制剂或促乳剂刺激剂，或其二者)可能将这类个体的促乳素图调整到与正常释放图相一致。这类药剂的给药以及给药时间可按含在上述促乳素释放图中的信息确定。
处置决定有三个方面(a)选药(即选促乳素刺激剂或促乳素抑制剂，或其二者);(b)(每次)给药时间;(c)欲用的药剂量(每次)。比如，如果病人被初步诊断为需要促乳素抑制剂，那么开始时他可以接受单剂的0.8-1.6mg/日的溴麦角环肽。该药剂可在处置后约4周调整，如，如果该病人仍有高促乳素分泌量，则它将在白天的适当时间接受增量的促乳素抑制剂。给药时间也可调整(根据病人的当时的促乳素图)，如，溴麦角环肽的用药时间可以改变。
个体促乳素量图与正常的促乳素图对比按下述确定(a)和(b)如果“白天”促乳素分泌量过高(无论其是否有峰值)，则需要施用促乳素抑制剂。
如果“夜间”促乳素无峰值或其峰不够明显，则需用促乳素刺激剂。
通常，若施用促乳素调节剂，应在需要它之前施用，从而使之在最需它时对促乳素日节律产生最大效果。然而，作为一种特殊情况，对促乳素调节剂给药时间有某些宽容度。此外应避免在睡眠时施用促乳素调节剂。刺激剂给药时间应预先确定，以使该最大效果与夜间促乳素峰值相重合。
优选的促乳素抑制剂是溴麦角环肽，而优选的促乳素刺激剂是灭吐灵(mefoclopremide)。溴麦角环肽发挥其最大促乳素抑制效果的平均时间是在用药后约3-约4小时之间。灭吐灵发挥其最大刺激促乳素效果的平均时间是自用药始的约2小时。
遵循下列准则以确定溴麦环肽或其它促乳素抑制剂的用药时间如果促乳素峰在07∶00-10∶00间，则在07∶00施用溴麦角环肽;
如果促乳素峰在10∶01-16∶00间，则在08∶00施用溴麦角环肽;
如果促乳素峰在16∶01-19∶00间，则在09∶00施用溴麦角环肽;
如果促乳素峰在19∶00-22∶00间，则在10∶00施用溴麦角环肽;
如果在0.1∶0.1-07∶00间有促乳素峰则不施用溴麦角环肽;
如果促乳素无峰但在整个醒时过高则在07∶00施用溴麦角环肽;
如果在01∶00-04∶00间的平均促乳素分泌小于或等于8.0ng/ml(男人)或14.0ng/ml(女人)则将施用促乳素刺激剂。
给定于上的时间旨在作为溴麦角环肽的用药指导，而本领域的普通技术人员可根据欲治病人的实际促乳素图调整精确的溴麦角环肽用药时间。
将抑制剂或刺激剂施用于某病人的时间可通过确定该药的给药时间与该药剂发挥其最大生物学效果(即刺激或抑制)时间之间的时间来确定。刺激有其最大刺激效果的时间，(或抑制剂有其最大抑制效果时)可通过按已知的促乳素分泌图向某病人施用刺激或抑制药，然后计算施用此药和发挥其对该病人的(已知的)促乳素分泌图的反应(抑制或刺激)的最大效果之消耗的时间来确定。此后，调整向病人施用刺激或抑制剂的时间以使该药在某点前充分提前时用于此病人，在所说的这点上，此病人的促乳素曲线有与正常图的最大偏离，从而它将在该点(时间)上将提供最大效果，在这点上病人的图与正常图有最大偏离。在仔细调整实验对象的给药方案时应考虑回弹效应，即白天施用促乳素抑制剂可能按睡眠时的该对象的促乳素量施用。反之也应考虑按该对象醒时可能有的促乳素量施用促乳素刺激剂的回弹效应。以这种方式可按常规实验程序确定特定的抑制剂或刺激剂的施用时间。
将取得治疗指定病人时的效果方面的最有效结果的精确调节剂用药时间取决于特定调节剂的活性、药物动力学、生物利用率、该病人的症状(包括年龄、疾病类型的阶段、生理状况、对给药剂及调节剂的响应)，给药途径与因素。然而，上述指导可被用作确定最佳给药时间的基础。
上述指导可用来制定开始的治疗规范。一般来说，一个病人每天接受约3-约100mg溴隐亭/kg体重，优选的是每天约10-40mg体重。为达到促乳素分泌调节意义上的最佳效果所需的促乳素抑制剂(或促乳素刺激剂)的精确剂量必需按每个病人的药物敏感性(如对药的响应)、年龄、病状和阶段及生理状况进行调整。通过在24小时期间内的预定时间间隔测量促乳素量定期对病人进行评估，第一次这种再评估一般在开始治疗后的4周末进行，后续的再评估在治疗期间的每4-8周进行，然后在此后的每3个月进行。
促乳素刺激剂通常在回复到病人正常睡眠前约1小时内施用。
对施用的药剂的量以及可能地对施用时间的调整可按上述方式以这些再评估为基础进行。
通常，如果治疗期的睡眠时的促乳素峰值比正常的高，只要该峰值在正当的时候产生，而且该峰的斜率很陡(与正常峰的每边的正常值相比)则无需考虑调整时间及药剂量。
需要在此时对特定病人发挥最大抑制或刺激效果的时间(因而也是适宜的给药时间)及为达到所需调整程度相合适的量(剂量范围)可通过将该病人异常的(或再评估的)促乳素释放图与标准的图比较而确定。
在医治脊椎动物时，促乳素抑制剂(溴麦角环肽)和/或刺激剂(灭吐灵)剂量通常为一天每人分别给一次，而且通常在约10天-约180天的期间内给药。优选的促乳素抑制剂(溴麦角环肽)每天以约3mg-100mg，最好以约10mg-约40mg/kg体重的剂量范围给药，而促乳素刺激剂(灭吐灵)则以每天以约20mg-约200mg，更好是约40mg-约100mg/kg体重的剂量范围给药以改变或调整促乳素分泌图，而且持续一段足以重新调整昼夜血浆促乳素节律的时间。
在治疗人类时，促乳素抑制剂(溴麦角环肽)的日剂量范围一般量约3mg-约100mg，更好是约10mg-约40mg/kg体重。促乳素刺激剂灭吐灵的日剂量范围是约20mg-约200mg，更好是约40mg-约100mg/kg体重。这类治疗一般持续约10天-通常约180天，结果使该病人的脂质和葡萄糖代谢被改变和调整到瘦的(即正常的)健康人的水平。对于某些病人(如生理状况特别不好的，或年龄较小的病人)而言，则不可能在上述期限内调整其促乳素分泌图，而是要考虑这些病人可能需要更长的，甚至是持续地用促乳素刺激剂和/或抑制剂进行治疗。关于溴麦角环肽和灭吐灵的上述剂量和指标要改变而且不得不用本文所公开的剂量和时间准则对其它药剂的这类指标进行改变。
在实施本发明时，最好以口服或以皮下、静脉内或肌肉内注射将促乳素-抑制化合物和促乳素刺激剂给药于实验对象。经皮的输送系统，如皮肤膏药以及栓剂以及其它的施用药剂的已知系统也可采用。
胖人的体脂肪存积，包括脂肪、动脉壁及血浆脂肪的存积将减少，消除并一般保持(在本发明的治疗中断后)在正常人(瘦人)水平上达一个长的时间阶段。显示出胰岛素抵制效应，高脂血或胰岛素过多血和/或赖氨酸过多血，或胰岛抵制和胰岛素过多血和/或赖氨酸过多血二者皆有的对象，用上述促乳素抑制剂和/或促乳素刺激剂在白天的适宜时间治疗的实验对象变得对胰岛素较为敏感(即胰岛素抵制较低)而且胰岛素过多血和/或赖氨酸过多血的效应以及相关的异常的代谢值将在一个长期的基础上下降。对人的治疗一般长至约10天-180天。以这种方式施用促乳素抑制剂和/或促乳素兴奋剂将因而调整此两种神经摆动的相关系及其各种昼夜节律表达以便长期地(如数年)，如果不是永久地，改变代谢作用。换言之，该促乳素抑制剂和/或促乳素刺激剂的定时剂量结果将是一个长期的，一般与Ⅱ型糖尿病发展相关的主要病理的逆转过程。用本发明的方法，通过这类治疗使体脂肪储存、血浆胰岛素浓度、胰岛素抵制、赖氨酸过多血或这些病态的全部症状的水平将在一个长期的基础上减少;或者经处置，使常常在肥胖的、胰岛素过多血的、高脂知和/或赖氨酸过多血的人身上发现的高水平降低很多，接近或相符于有正常胰岛素水平正常人身上发现更合乎要求的水平。
以下是根据本发明的论断、规范确定和治疗的非限定的工作实施例症状研讨1(E-04-M)对象男、73岁、186磅，5英尺5寸。
病状(a)肥胖度124%IBM(根据标准表，如MetropolianLifeInsuranceCo.NY,NY的标准表，可从该公司获得);体脂肪26.48%(用卡规夹持法测的)。
(b)Ⅱ型糖尿病禁食血浆葡萄糖237mg;糖基化血红蛋白百分比18.1%(用亲合色谱法测得);第一次诊断时的年龄，62。正常的早晨禁食血浆葡萄糖在80和120mg%之间。
实验对象的24小时基础(预治疗)促乳素图用黑线图示于图1。它是一幅两峰图，并带有过低的夜间峰，而且该峰出现得很晚。该对象于每日08∶00给予溴麦角环肽(3.2mg)而且在每天23∶00给予灭吐灵(5mg)共持续二周。4周后产生该对象的(再评估)促乳素图，并将之用细灰线图示于图1。
在这病人身上看到的进展是(a)白日峰消失;(b)夜间峰及总的量明显增高。白日促乳素有点低而夜间峰的出现仍晚。对此病人治疗的临床优点包括糖基化血红蛋白在开始治疗2个月内由开始时的18.1%降至14.2%。在2个月的期间后，病人的体脂肪百分数由26.48%降至21.78%;血浆胆固醇自160mg%降至140mg%;甘油三酯自92mg%降至79mg%;禁食葡萄糖自237mg%降至191mg%;口服葡萄糖耐性实验结果改善。
在全部病况(图1-4)中，调查2是在药物治疗前一周。调查5是在药物治疗后4周而调查7是在药物治疗后8周。
病况研究2(E-10-M)对象男、73岁、157磅、5英尺4寸。
病情(a)肥胖度114%IBM;体脂肪23.72%;
(b)Ⅱ型糖尿病禁食血浆葡萄糖269mg%，糖基化血红蛋白14.7%;第一次诊断时的年龄69。
根据开始时的评估，该对象的促乳素图用细灰线示于图2。白日促乳素量低于标准的1SEM，而夜间峰低(低于SEM)。该对象于每日接受5mg灭吐灵，而开始治疗后的4周后产生另一促乳素图(以细灰线示于图2)。
第二图现示出白天和夜间促乳素水平有明显改善。夜间峰显得过高这一事实被认为是可以接受的，因为，曲线很陡，而且该峰是于正常时间出现的。未对此病人的状况作调整。
对此病人治疗的临床优点包括在开始治疗2个月后糖基化血红蛋白自开始时的14.7%降至13.8%。该病人的体脂肪百分数自23.72%降至21.52%;血浆胆固醇自274mg降至21.52mg%;甘油三脂自638mg%降至583mg%;禁食葡萄糖从269mg%降至218mg%，所有这一切均在2个月的期间内发生。
病况研究3(E-09-F)对象女、60岁、182磅;5英尺6寸。
病情(a)肥胖度132%TBM;体脂肪42.48%;
(b)Ⅱ型糖尿病禁食血浆葡萄糖359mg;
糖基化血红蛋白17.9%，初次诊断时年龄45岁。
根据初始评估，对象的促乳素图以细黑线示于图3。白天和夜间促乳素水平很低而且事实上无促乳素峰。自每日于23∶00给药5mg灭吐灵后4周，对此对象作评估(图3，细灰线)。“夜”促乳素图的进步明显。白天的水平仍低。
对此病人治疗的临床优点包括在开始治疗的2个月内糖基化血红蛋白自开始的17.9%降至15.8%病人的体脂肪百分数自42.48%降至41.29%;血浆胆固醇自252mg%降至218mg%;甘油三酯自599mg%降至259mg%;禁食葡萄糖自359mg%降至327mg%;口服葡萄糖耐受实验结果改善，所有这一切均在2个月的期间内发生。
病况研究4(E-05-F)对象女、49岁、211磅，5英尺4英寸。
病情(a)肥胖度146%IBM;体脂肪46.81%;
(b)Ⅱ型糖尿病禁食血浆葡萄糖325mg;糖基化血红蛋白12.7;初诊时年龄39。
根据开始时的评估，该对象的促乳素图以细黑线示于图4。白天促乳素水平尚可接受但夜间峰过低而且出现过迟。开始每日于23∶00给5mg灭吐灵后4周，该图以细灰线呈现于图4中。促乳素峰很高但白日水平明显下降。
对此病人治疗的临床好处包括糖基化血红蛋白在开始医治的2个月内从开始时的12.7%降至12.1%此病人的体脂肪百分比自45.81%降至44.82%，血浆胆固醇从215mg%降至190mg%;甘油三酯从280mg%降至170mg%;禁食葡萄糖从325mg%降至267mg%;而且口服葡萄糖耐受实验结果改善，所有这一切均在2个月期间发生的。
在后续实施例中，术语“LD”指的是亮/暗循环，在LD后的第一个数字表示在该循环中的亮的时间，第二个则指暗的时间。因此LD14∶10指的是一个亮14小时暗10小时的循环，而且一天的期间按24∶00小时表示。字母n指的是一组中的动物数，“BW”指体重，g代表克，ug代表微克，在继续评估时，开业医生应记住促乳素刺激剂或抑制剂的回弹效应。如，异常的白天时促乳素的促乳素抑制常有回弹效应，其中低的睡时促乳素增加(即使无促乳素刺激)。还有，不正常的低睡时峰的促乳素刺激常导致异常高的白天时促乳素水平的下降(即使无促乳素抑制)。
实施例16头成年母猪在一段时间内接受溴麦角环肽埋入物(10mg/猪/天)同时经受亮和暗(12∶12)日时制在该动物的活性期开始时大量埋入材料进入血流。6头猪的对照组作同样的亮和暗治疗，但未对此对照组的猪施用溴麦角环肽。暗期从1800-0600，亮期从0600-1800。以4小时的间隔、14天的时期用该猪的血进行检验以确定二组的血浆皮质醇(ug/dl)和血浆促乳素量(ug/ml)。对每组所作的系列检验的平均值列于下
血浆皮质醇量(ug/dl)时间被治的猪对照08001.94.812001.53.416003.21.620002.81.924003.52.704003.25.5血浆促乳素量(ug/ml)时间被治的猪对照08001.80.512002.33.316002.81.320002.41.224002.31.704001.50.1溴麦环肽埋入物对脂肪积累及血浆中甘油三酯、葡萄糖及胰岛素浓度的影响如下处理背部脂肪%甘油三酯葡萄糖胰岛素对照mg/dlmg/dlUv/ml对照10052±899±510.8±1.8溴麦角环肽 86327±3386±338.8±0.3
注背部脂肪厚度被用作确定脂肪积累的指数。这些数据是在处理这些动物后28天得到的。
血浆样品于处理2周后于1600、2000、2400时采集。处理组织及对照组中的每头猪均被取样。
这些数据清楚地表明了溴麦角环肽埋入物改变了血浆类固醇和促乳素浓度的昼夜节律并产生了有益于糖尿病人的变化。这些数据表明，接近傍晚，当猪身中脂肪形成为正常的最大值时，溴麦角环肽将血浆甘油三酯降低了48%。由于脂肪产于肝并在血液中传输到脂肪组织，所以甘油三酯的下降进一步证明了溴麦角环肽对脂肪合成及沉积有抑制作用。另外，尽管血浆中胰岛素的下降不是令人满意地明显，但溴麦角环肽在暗时的前期(2000-2400)使血浆葡萄糖下降了13%。不增高血胰岛浓度而使血糖下降可解释为降低了胰岛素抗性(较大的对胰岛素的低血糖响应)。在28天的治疗期内溴麦角环肽将体脂肪储存减少了14%。
对人作了进一步研究，这表明非依赖胰岛素型或Ⅱ型糖尿病的症状可通过用溴麦角环肽治疗而减少。实施例如下实施例250岁有糖尿病症状的妇女每天于刚醒时口服给药溴麦角环肽片(1.25-2.50mg/日)。治疗开始时常规检测表明血糖接近250mg/dl。开始治疗后的数周中该病人葡萄糖含量的下降至180mg/dl，155mg/dl，135mg/dl，97mg/dl，101mg/dl。禁食水平低于120mg/dl被认为是正常的。体重和体脂肪指数经治疗约下降12%。
实施例3
一名45岁妇女是用降血糖剂(甲糖宁酶dibenase)治疗的，该药于一年治疗期后将病人的血糖从250mg/dl降至约180mg/dl。接着日口服溴麦环肽(甲磺酸溴麦角环肽，1.25-2.50mg/日)，2周后血糖戏剧性地降到80mg/dl。在以后的2个月中去掉降血糖剂使血糖升高保持在接近100mg/dl的水平(正常水平)。经溴麦角环肽治疗体重和脂肪约下降10%。
实施例4一名55岁体重近300磅男子已知有糖尿病但一直抵制所有的先前的治疗劝诫。开始口服溴麦角环肽治疗时(甲磺酸溴麦角环肽2.5mg/日)其血糖浓度平均接近350mg/dl。在2.5月的溴麦角环肽治疗期间体重及血糖浓度逐步地但连续下降。体重已下降22磅而且血糖下降到160mg/dl。
这些数据表明通过昼夜神经内分泌节律的相互作用使代谢状态至少部分地有规律了。这一假设提出了皮质醇促乳素的日节律是两种不同昼夜节律系统的各自的表答，而且每日注射这些激素可调整此二系统的相关系。因此在一仓鼠模式中已发现0-时关系将昼夜节律摆动调整成保持在瘦体的胰岛素敏感状况的模式，而12小时关系使保持胖体的胰岛素抵制状况的模式得以维持。本研究的另外的重要附加部分是按时注射多巴胺兴奋剂，或促乳素抑制化合物的效果是长期延续的。很明显，一旦调整后，此二昼夜节律摆动的相关系趋于保持其已被改变了的模式。
两种昼夜神经内分泌摆动的相关系的改变以其昼夜节律表答的相关系的改变证明。由于遵循血浆葡萄糖类固醇及促乳素的节律使这一期望得以实现。在一些被查的物种中，瘦的和肥的动物中的此二种激素节律的相关系不同。血浆胰岛素浓度的昼夜节律和对胰岛素的成脂肪反应性的此节律间的相关系被显示为在瘦和肥的动物中是不同的。尽管成脂肪反应性的日周期仍保持近白昼发作，而胰岛素节律明变。胰岛素的峰值浓度，例如在近白昼产生的，只在维持短日照时间的肥胖母仓鼠中发作。这就是说，成脂肪刺激(即胰岛素)的日峰值及对胰岛素的成脂肪响应与肥动物中的一致而与瘦动物中的则不一致。
很明显在不违背本发明的精神和范围的前提下可作出各种改进和变化。
权利要求
1.一种确定脊椎动物实验对象的促乳素日释放节律异常的方法，它包括的步骤为(a)在一连续时期确定该对象的促乳素释放图；(b)将所说的促乳素释放图与予先确定的健康对象的标准促乳素释放图进行比较；(c)确定所说对象是否这样的促乳素日释放节律在其中(i)清醒时促乳激素含量高于健康对象的正常促乳激素图达1SEM以上，或者(ii)该促乳素量在睡眠时低于健康正常促乳素图达1SEM以下。
2.一种确定第一人类对象促乳素日释放节律异常的方法，它包括的步骤为(a)以一连续时期确定该对象的促乳素释放图;(b)将此促乳素释放图与予确定的其他健康对象的标准促乳素释放图进行比较;(c)确定所说第一对象是否有异常的日促乳素释放节律，确定的基准是按是否(i)清醒时该第一对象的促乳素量高于所说健康对象正常促乳素图达1SEM以上;或(ii)睡眠时该第一对象促乳素量低于健康正常促乳素图达1SEM之下。
3.根据权利要求1的方法，其中所说予先确定的标准要由以作为实验对象的同性个体的统计学上明显的个数所产生。
4.一种探测第一人体对象的促乳素日释放节律异常的方法，它包括步骤为(a)将所说第一对象以予先确定时期所搜集的促乳素释放图与健康对将的予先确定的标准促乳素释放图进行比较;和(b)确定所说第一人体对象是否有异常促乳素日释放节律，确定的方式是查明(i)在清醒时的任意点该第一人体对象的促乳素量是否高于所说健康对象的正常促乳素图达1SEM之上;和/或(ii)在睡眠时任何点所说第一人体对象的促乳素量是否低于所说健康对象正常促乳素图达1SEM之下。
5.一种探测人体对象促乳素日释放节律异常的方法，它包括步骤为(a)将所说对象的业经一段时期确定的促乳素释放图与健康对象的予先确定的标准促乳素释放图进行比较;和(b)确定所说的对人是否有异常的日促乳素释放节律，确定的基准是(i)清醒时该的促乳素量是否高于健康对象正常促乳素图达1SEM以上;或(ii)睡眠时该对象的促乳素量是否低于健康对象正常促乳素图达1SEM之下。
6.一种使实验对象促乳素日分泌节律正常化的方法，它包括步骤为将所说对象的促乳素释放图与正常对象的促乳素释放图进行比较;和将所说对象的促乳素释放调节到与所说正常对象的促乳素释放图大致相符。
7.根据权利要求6的方法，其中所说调节步骤至少包括下列之一在所说对象的促乳素释放图期间内某一点之前的第一予定时间向所述对象给予第一予定量的促乳素抑制剂，在对象该点上所说对象的此图比所述正常对象的促乳素释放图高一个多SEM，以及在所说对象的促乳素释放图期间内某一点之前的第二予定时间向所述对象给予第二预定量的促乳素刺激剂，在该点上所说对象的此图比所说正常对象的促乳素释放图至少低1SEM。
8.一种确定将使病员的异常促乳素日释放节律与正常对象的促乳素日释放节律一致的调节的方法，该方法包括(a)将所说对象的促乳纱释放图与正常对象的预定的标准促乳素释放图进行比较;(b)当清醒时该对象的促乳素量超过正常对象清醒时的促乳素量达1SEM以上时，确定应向所述对象给予一种促乳素抑制剂;(c)选择所说促乳素抑制剂的给药时间，该时间不迟于这样的时间，在此时所说对象清醒时的促乳素量达最高的清醒时量;和(d)选择欲向所说对象给予的所说促乳素抑制剂的量，以使所说对象清醒时的促乳素量在所说正常对象的促乳素之上，但不大于1SEM。
9.一种确定使实验对象的异常促乳素日释放节律与健康对象的促乳素日释放节律相符的调节的方法，该方法包括(a)将所说对象促乳素释放图和健康对象的予先确定的标准促乳素释放图相比较;(b)通过探查所说对象睡眠时促乳素量低于所说健康对象睡眠正常促乳素量至少1SEM来确定所说对象是需要促乳素兴奋剂的;(c)在某时间之前的向所说对象给所说药的时间，在所述的时刻睡眠时促乳素量达到健康对象的峰值;和(d)选择向所说对象给予的所说促乳素刺激剂的量，以使得所说对象睡眠时促乳素量低于所说健康对象睡眠时促乳素量，而且不小于1SEM。
10.一种确定人体对象促乳素日释放节律异常的方法，它包括(a)自所说人体对象经连续时期采集多个血样，该血样采集以予先确定的时间间隔分隔开，(b)测定每个所述样品的促乳素含量;(c)使每个所说样品的促乳素含量按所说连续时期内采集所说样品的时间标示而产生数据点;(d)将每个所说数据点与直接紧随相邻近的数据点相连产生促乳素图;(e)将所说连续促乳素释放图与健康对象的予先确定的标准促乳素释放图进行比较;(f)确定所说人体对象是否有异常的促乳素释放节律，其依据是所说对象的促乳素量是否高于健康对象清醒正常促乳素图上大于1SEM，或者低于健康睡眠时正常促乳素图且小于1SEM。
全文摘要
本发明涉及减少脊椎动物或人体这类对象的脂肪贮存的方法，和减少一种胰岛素耐药，胰岛素过高血、高脂血和高血糖以及其它代谢疾病，特别是与Ⅱ型糖尿病相关的疾病的方法。
文档编号A61K31/445GK1103315SQ9312163
公开日1995年6月7日 申请日期1993年12月22日 优先权日1992年12月22日
发明者A·H·梅尔, A·H·辛库塔 申请人:路易斯安那州州立大学及农业机械学院管理委员会, 艾谷科学股份有限公司