专利名称：使用丙酮酸盐阻滞局部缺血肠中中性白细胞浸润和形态缺失的制作方法
背景技术：
发明领域-本发明涉及哺乳动物的阻滞局部缺血肠道疾病的治疗。肠局部缺血和再灌注常常伴随所产生的自由基的急剧增加，伴随中性白细胞的浸润，和伴随细胞的死亡或形态缺失，可造成哺乳动物死亡。局部缺血是指个别器官或肌肉血液流动的阻塞。再灌注是指受影响的器官或肌肉恢复血液流动。
根据本发明，肠局部缺血开始之前或开始期间向哺乳动物提供丙酮酸盐将明显地抑制中性白细胞渗入受影响的肠。在局部缺血肠的再灌注期间，肠内丙酮酸盐的存在将显著地阻止中性白细胞的渗入和绒毛的恶化。
现有技术叙述-丙酮酸盐在医疗处置中有大量应用。已公开丙酮酸盐用于阻止脂肪在肝内沉积(4158057)；用于糖尿病处置(4874790)；阻止体重增加(4812879,4548937,4351835)；在哺乳动物中增加体蛋白浓度(4415576)；用于处置心脏病人增大心脏输出而并不伴随增加心内所需要的氧(5294641)；用于扩增体育运动的耐久性(4315835)；阻止胆固醇增加(5134162)；抑制恶性肿瘤的生长和传播和阻止DNA断裂(系列申请号08/194857,1994.2.14．提交)；和用来抑制产生自由基(系列申请号08/286946,1994.8.8.提交)。已报导各种形式丙酮酸盐的经肠给药和不经肠给药。丙酮酸盐常常以盐的形式有售，例如丙酮酸钙和丙酮酸钠；氨基酸的丙酮酸同类物，例如丙酮酰基(pyruvyl)氨基酸类，诸如丙酮酰基甘氨酸，丙酮酰丙氨酸，丙酮酰亮氨酸，丙酮酰颉氨酸，丙酮酰异亮氨酸，丙酮酰苯基丙氨酸，丙酮酰脯氨酸，以及它们的酰胺。这些丙酮酰氨基酸类见US 5283260和US 5256697。
可向哺乳动物经肠或不经肠给药丙酮酸盐以便超过哺乳动物的生理水平。所给丙酮酸盐的量优选为哺乳动物纳入热量的1-20％。对经肠给药的配药，可将丙酮酸盐分散或溶于饮料制品或者包含在面包、甜食或其他食物中。也可将丙酮酸盐作为不经肠水溶液来引入。优选的给药程序是一种含水能量保持滴液，该滴液不仅包括糖类而且包括选择的一种或多种丙酮酸盐。见US专利系列申请号08/286946，1994.8.8.提交。不管给药程序如何，超生理丙酮酸盐在哺乳动物肠内或循环系统内的存在，将阻止哺乳动物肠中局部缺血事故期间和再灌注期间自由基的发展。
图1图示说明局部缺血和随后再灌注期间由于肠内自由基产生所得到的化学发光测量结果，其中将无效(对照)剂(PL)、丙酮酸盐(PY)处置和基线条件进行对比。
图2图示说明两种哺乳动物中性白细胞的计数，一种动物接受丙酮酸盐(PY)处置，而另一种动物接受无效剂(PL)处置。他们在局部缺血开始之前，都与基线条件进行对比。在肠局部缺血后再灌注30分钟时进行中性白细胞计数。
图3包括三个显微照片表明不同条件下的肠绒毛。
优选实施方案叙述局部缺血是这样一种情况，其中哺乳动物组织的特定区域血液流动被阻塞，例如肌肉或器官。在外科、机械事故和肠紊乱情况下经常遇到肠局部缺血。
对局部缺血组织而言，恢复血液流动叫作再灌注。肠再灌注开始时自由基的急剧增加已被确认。再灌注开始之后哺乳动物自由基的产生保持较高，可持续一定时间，例如1-2小时。高水平的自由基对受影响的组织通常造成不可逆的损害。肠内提高的自由基产生使细胞坏死(细胞死亡)、形态减少和哺乳动物死亡。见“组织损伤中的氧自由基”，梅瑞尔．陶等人(Merrill Tarr)在1933年波士顿(BirkhauserBoston)的文章。形态是哺乳动物的形式和结构。
用丙酮酸盐在肠局部缺血开始之前处置病人将不显示产生自由基的升高，而代之以产生的自由基保持在一定水平，该水平在局部缺血和随后的再灌注自始至终是正常的或低于基线水平。则阻滞了中性白细胞渗入并保持了形态。
实施例1
将六只实验室大鼠的小肠打结封闭。从肠封闭处的下游在处理之前和处理期间直接接受10分钟，两种处置无效剂(PL)含有多聚葡萄糖水的液体饮食制剂；或丙酮酸盐(PY) 含多聚葡萄糖水的液体饮食制剂，其中多聚葡萄糖的10％能量(热量)由构成液体饮食10％能量(即10％热量吸收)的丙酮酸钠和丙酮酸钙的混和物代替。
将六只实验室大鼠的向肠供血的上中肠动脉咬合造成肠局部缺血。维持局部缺血45分钟，在此时间后中肠动脉解除封闭并使受影响的肠开始再灌注。
将每个实验室大鼠的部分肠去除(A)局部缺血后立即进行；(B)再灌注30分钟后进行；(C)再灌注60分钟后进行。
用化学发光(以强度/mg蛋白进行测量)分析每个肠部分的自由基，并用光学显微镜察看。化学发光测量按照西蒙等人在“胃肠病学”所述方法进行(Simmonds,N.J.,GASTROENTERGOLOGY,1992,103卷，186-196页)。
试验前得到大鼠化学发光的基线值是684000±68200化学发光单位，与自由基的总数直接相关。无效剂(PL)和丙酮酸盐(PY)处置的值列于表1，并图示于图1。
表1实验室大鼠在肠局部缺血后肠内自由基含量无效剂处置 丙酮酸盐处置局部缺血后(立即)409000±7620059700±10400再灌注(30分钟) 933000±298000 69800±20400再灌注(60分钟) 543000±309000 62200±15900图1说明丙酮酸盐(PY)处置得到自由基明显减少(化学发光测量)，图中代表丙酮酸盐处置(PY)的纵向阴影区域比代表无效剂处置(PL)的横向阴影区域明显低。在局部缺血末期和所观察的再灌注全过程中该减少是明显的。
再灌注后用无效剂的肠段去色并显现坏死情况。所有无效剂肠段都显示瘀点(小出血斑点)而丙酮酸盐肠段都不显示瘀点。
在另一个试验中，肠局部缺血30分钟后再灌注30分钟，实验室大鼠喂养如实施例1所述。无效剂大鼠用所述标准饮食。丙酮酸盐大鼠用丙酮酸盐改良的标准饮食(A)局部缺血之前和其间；或(B)仅在局部缺血开始之后。
测量肠的中性白细胞渗入，图2图示测量结果。图2的基线情况表示任何评估之前肠内中性白细胞的总数。两标识条表示局部缺血30分钟后再灌注30分钟末期中性白细胞的总数。
(A)局部缺血开始之前将丙酮酸盐(PY)引入大鼠的情况，白细胞渗入(PY)降低到基线情况以下，而无效剂(PL)的情况表现出中性白细胞渗入加大。
(B)局部缺血开始后立即进行丙酮酸盐饮食的情况，观察到类似的结果。
从图2看出，在两种情况下丙酮酸盐对阻滞中性白细胞渗入方面都是有益的，亦即在局部缺血之前和其间供给以及仅在局部缺血开始后或仅在再灌注开始后供给丙酮酸盐。
为了观察局部缺血对肠的作用的证据，评估两个实验室大鼠。一个大鼠接受所述标准饮食PL，另一个大鼠接受所述丙酮酸盐PY改良的标准饮食。阻断两个大鼠的上中肠动脉使肠局部缺血60分钟。
在再灌注60分钟末期，宰杀大鼠并得到小肠截面的显微照片，其中有小绒毛覆盖，绒毛从肌肉壁伸展进入肠内。这些显微照片在图3中产生，包括图3a-表明没有局部缺血的正常大鼠小肠切片放大200倍截面图，显示正常的健康绒毛。
图3b-表明无效剂(PL)大鼠肠的放大100倍的截面图，显示从肌肉壁伸展的严重受损害绒毛。形态严重减少。
图3c-表明丙酮酸盐(PY)处置大鼠肠的放大100倍的截面图，说明健康的绒毛。这些绒毛保持了形态。
因此，显而易见，丙酮酸盐处置的动物在肠局部缺血期间保持健康的绒毛并保持形态，而在类似情况下未处置动物中局部缺血使肠绒毛毁坏且形态减小。
处置-经受肠局部缺血或大致经受肠局部缺血的病人应通过从病人鼻到胃伸展的滴液管接受超生理学剂量丙酮酸盐药剂，或者通过含有丙酮酸盐的饮料或食物方式，或者不经肠的静脉滴注。所有这些输送系统都可在病人体内建立丙酮酸盐的所需超生理学水平。
权利要求
1．在经受局部缺血肠的哺乳动物的局部缺血肠内阻滞中性白细胞浸润并阻滞形态缺失的方法，包括在所述肠局部缺血期间或再灌注期间将治疗量的丙酮酸盐经肠或不经肠地引入哺乳动物。
2．在经受出现肠局部缺血的哺乳动物的局部缺血肠内阻滞中性白细胞浸润并阻滞形态缺失的一种方法，包括在所述肠局部缺血之前和其间和再灌注期间将治疗量的丙酮酸盐经肠或不经肠地引入哺乳动物。
3．根据权利要求1的方法，其中所述丙酮酸盐是一种或多种丙酮酸盐或酯。
4．根据权利要求1的方法，其中所述丙酮酸盐是一种氨基酸的有机酯。
5．根据权利要求1的方法，其中所述丙酮酸盐是丙酮酰(pyruvyl)丙氨酸。
6．根据权利要求1的方法，其中所述治疗量是哺乳动物纳入热质的1％-20％重量。
7．在经受局部缺血肠的哺乳动物的局部缺血肠内阻滞中性白细胞浸润的一种方法，包括在所述局部缺血肠期间或再灌注期间将治疗量的丙酮酸盐经肠或不经肠地引入哺乳动物。
8．在经受局部缺血肠的哺乳动物的肠内阻带形态缺失的一种方法，包括在所述肠局部缺血之前和其间和再灌注期间将治疗量的丙酮酸盐经肠或不经肠地引入哺乳动物。
9．在经受局部缺血肠的哺乳动物的肠内阻滞形态缺失的一种方法，包括在所述肠局部缺血期间和再灌注期间将治疗量的丙酮酸盐经肠或不经肠地引入哺乳动物。
10．在经受局部缺血肠的哺乳动物的肠内阻滞中性白细胞浸润的一种方法，包括在所述肠局部缺血期间或再灌注期间将治疗量的丙酮酸盐经肠或不经肠地引入哺乳动物。
全文摘要
用治疗量的丙酮酸盐在肠局部缺血期间和以后的期间经肠或不经肠地处置具有局部缺血肠的哺乳动物将阻滞中性白细胞浸润并保持形态。在肠局部缺血期间或继之肠再灌注期间并且优选肠局部缺血之前经肠或不经肠地将丙酮酸盐引入病人。丙酮酸盐剂量以病人纳入热质的重量计是1%－20%。
文档编号A61P9/10GK1211181SQ96196714
公开日1999年3月17日 申请日期1996年7月12日 优先权日1995年7月13日
发明者罗纳德T·斯坦科, R·H·米勒尔, M·A·麦卡米斯 申请人:罗纳德T·斯坦科