用于使受体交联的多价化合物及其应用的制作方法

专利名称：：用于使受体交联的多价化合物及其应用的制作方法
技术领域：
：本发明涉及低分子量的二价或多价交联化合物，该化合物能够在天然生成的受体之间诱导结合，特别是能诱导T细胞、造血细胞和抗原提呈细胞(诸如巨噬细胞、树状细胞或B细胞)上的表面受体之间的结合，例如均二价诱导的CD26-CD26的结合或杂二价诱导的CD26与上述表面受体的结合。本发明的
背景技术：
细胞表面受体通过两种基本的机理将在细胞外侧收到的信号传送到内部(1)配位体诱导的变构构象变化和(2)配位体诱导的结合。适合配位体诱导的变构构象变化的配位体通常是小分子，例如邻苯二酚胺或神经肽激素。配位体诱导的结合机理涉及在细胞表面上特殊蛋白质的结合，并且只是在最近才被发现(相对而言)但又早已经显示出具有与第一机理相同的广泛应用性和重要性。例如，被配位体诱导的二聚作用活化的受体包括那些适合细胞生长和分化因子的受体。作为这些受体的配位体起作用的因子通常是大分子多肽激素和细胞分裂素，例如促红细胞生成素、粒细胞群刺激因子(G-CSF)、或粒细胞巨噬群刺激因子(GM-CSF)、以及人的生长激素(hGH)。许多被二聚作用活化的受体具有包含蛋白质激酶域或对接位的胞质尾(cytoplasmictail)。这些受体的胞外域的受配位体诱导的二聚作用导致它们的胞质尾并置。然后，它们以反式彼此磷酸化，从而开启胞液信号路径。在某些情况下，被二聚作用激活的受体的胞质域没有激酶域，但在功能上又好象是有激酶域似的，因为它们借助对接位与蛋白质激酶结合。被齐聚作用或附聚作用激活的受体最常见于免疫系统中。例如，它们包括T细胞表面受体，如CD2、CD4、CD8、CD28、CD26、CD44、CD45，CD10和CD3/TCR(T细胞抗原受体)和B细胞表面受体，如CD40、B7.1和B7.2。这些细胞受体的配位体往往是细胞表面的蛋白质本身并且能够在同源细胞上找到。附聚作用激活的受体往往具有短小的胞质域，该胞质域在它们的胞外域附聚后与其他的细胞表面和/或胞液因子结合并进而对它们进行募集。数十年来，变构激活的受体类已成为药物的发现、设计和研制工作的主要目标。这些努力已得到许多药剂。原则上，可能有两种不同类型的制剂拮抗药和促效药。拮抗药在不引起受体的构象变化的条件下阻断天然配位体的结合，并借此阻断信号传导路径。促效药以模拟天然配位体的方式结合到受体上，这种模拟逼真到足以诱导出与天然配位相同的构象变化，并借此启动信号传导路径。参阅Seed等人关于怎样从拮抗药制作促效药的讨论[Seed，B.，“MakingAgonistsofAntagonists”，Chemistry&amp;Biology1125(1994)]以及Austin等人关于生物学中经调整的蛋白质二聚作用的讨论[Austin等人，Chemistry&amp;Biology，1131，(1994)]。若干种结合-活化的受体由于它们在各种细胞信号中所起的重要作用目前已成为揭示新药物工作的目标。采用对变构激活类所使用的方法已识别出阻断受体和它们的配位体的相互作用、并干扰信号的传导(即拮抗药)的低分子量的合成分子。这些低分子量的合成分子是潜在的药物。单体抑制剂阻止恢复抗原诱导的T细胞活化和增生[G.R.Flentke等人，“InhibitionofdipeptidylaminopeptidaseIV(DP-IV)byXaa-boroProdipeptidesanduseoftheseinhibitorstoexaminetheroleofDP-IVinT-cellfunction”，PNAS(USA)88，1556-1559(1991)]。许多anti-CD26mAbs在非交联条件下使用时具有相同的抑制活性[C.Morimoto等人，“IF7，anovelcellsurfacemolecule，involvedinhelperfunctionofCD4cell”，JournalofImmunology143，3430-3439(1989)andpublishederratumappearinJ.ofImmunology144(5)2027(Mar.1990)]。大多数anti-CD26mAbs在交联条件下使用时是刺激性的，而不是抑制性的[R.W.Barton等人，“BindingoftheTcellactivationmonoclonalantibodyTaltodipetidylpeptidaseIV”，JournalofLeukocyteBiology48，291-296(1990)；L.A.Bristol等人“ThymocytecostimulatingantigenisCD26(dipeptidyl-peptidaseIV).Co-stimulationofgranulocyte，macrophage，andTlineagecellProliferationviaCD26”，Journalofimmunology149，367-372(1992)；L.A.Bristol等人，“Characterizationofanovelratthymocytecostimulatingantigenbythemonoclonalantibody1.3”，JournalofImmunology148，332-338(1992)；B.Fleischer等人，“TiggeringofcytotoxicTlymphocytesandNKcellviatheTp103pathwayisdependentontheexpressionoftheTcellreceptor/CD3complex”，JournalofImmunology141，1103-11077(1988)；M.Hegen等人，“TheTcelltriggeringmoleculeTp103isassociatedwithdipeptidylaminopeptidaseIVactivity”，J.Immunol.144，2980-2914(1990)]。以前已研制出一类对CD26具有高亲合力的低分子量的合成单体分子，并描述了其特征[G.R.Flentke等人，“InhibitionofdipeptidylaminopeptidaseIV(DP-IV)byXaa-boroProdipeptidesanduseoftheseinhibitorstoexaminetheroleofDP-IVinT-cellfunction”，PNAS(USA)88，1556-1559(1991)；W.G.GutheilandW.W.Bachovchin，“SeparationofL-Pro-DL-boroProintoItsComponentDiastereomersandKineticAnalysisofTheirInhibitionofDipcptidylPeptidaseIV.ANewMethodfortheAnalysisofSlow，Tight-BindingInhibition”，Biochemistry32，8723-8731(1993)]。这些分子业已显示它们是抑制CD26结合DPIV蛋白酶活性的有效特异性合成抑制剂。DP-IV是具有适合从多肽的氨基端除去Xaa-Pro二肽的特异性的后脯氨酸裂解酶(其中Xaa代表任何氨基酸)。基于这些过渡态模拟物(Xaa-boroPro)的抑制剂的有代表性的单体结构是，诸如Pro-boroPro和Ala-boroPro。BoroPro指的是羧基(COOH)被二羟硼基[B(OH)2]取代的脯氨酸的模拟物。Pro-boroPro这种被了解的最彻底的抑制剂，具有16皮摩尔(pM)的Ki[W.G.GutheilandW.W.Bachovchin，“SeparationofL-Pro-DL-boroProintoItsComponentDiastereomersandKineticAnalysisofTheirInhibitionofDipcptidylPeptidaseIV.ANewMethodfortheAnalysisofSlow，Tight-BindingInhibition”，Biochemistry32，8723-8731(1993)]。Val-boroPro具有更高的亲合力，即Ki为1.6pM[W.G.GutheilandW.W.Bachovchin.Supra，R.J.Snow等人，“StudiesonProlineboronicAcidDipeptideInhibitorsofDipeptidylPeptidaseIVIdentificationofaCyclicSpeciesContainingaB-NBond”，J.Am.Chem.Soc.116，10860-10869(1994)]。因此，这些Xaa-boroPro抑制剂比已知的仅次于它的抑制剂强10+6倍。相比之下，抗体与其目标的亲合力通常介于10-8至10-9M之间。美国专利第4,935,493号(’493号专利)和第5,462,928号(’928号专利)，两者都揭示了蛋白酶抑制剂和过渡态模拟物(’493号专利)以及借助抑制IV型二肽肽酶(DP-IV)的可溶性氨基肽酶活性中的催化活性的抑制剂给药治疗移植排斥症、关节炎或系统狼疮红细胞增多症(SLE)的方法[G.R.Flentke等人，“InhibitionofdipeptidylaminopeptidaseIV(DP-IV)byXaa-boroProdipeptidesanduseoftheseinhibitorstoexaminetheroleofDP-IVinT-cellfunction”，PNAS(USA)88，1556-1559(1991)]。直到现在，大多数揭示和研制药物的工作都是针对变构的构象变化激活的一类受体的。再者，针对结合激活的一类的研究工作一直都集中在能够阻断天然配位体的结合并借此阻断被这些受体介导的信号传导的单体制剂。细胞毒性药物由于它们不加区别地杀死所有繁殖细胞，所以具有不利的作用。随着单克隆抗体的出现，增加这些治疗手段的特异性已经成为可能。抗众多T细胞的受体的抗体，如抗T-细胞受体的、抗CD4的和抗CD8共同受体的、和抗II类MHC分子的单克隆抗体，都已经就其在治疗自身免疫病的实验模型中各自的利弊进行了评估。采用单克隆抗体作为用于人体的治疗手段的主要障碍在于大多数单克隆抗体是在小鼠体内制作的，而人迅速地发展对鼠抗体的抗体反应，因此，这种抗体的潜力由于中和作用而受到限制，而且更糟的是产生过敏性反应，如复杂的免疫疫病。一旦发生这种情况，所有的鼠单克隆抗体在那个病人体内变成无用的。为了避免这个问题，目前是借助不同的方式制作不被人的免疫系统识别成外来者的抗体。一种方法是将人的V区克隆到噬菌体的显示库中并选择对人体细胞的结合。采用这种方法能够获得完全来源人的单克隆抗体。其次，可以用人造的酵母染色体使缺乏内源性免疫球蛋白基因的小鼠变成人的重链和轻链loci的转基因型。第三，可以将鼠单克隆抗体的抗原结合环接枝到人的免疫球蛋白分子的框架上(一种被称作人化的方法)。这些方法中的每一种都产生单克隆抗体，该抗体在人体中的致免疫性远远小于亲代鼠单克隆抗体，但是每种方法都带来许多附加的问题或障碍。例如，在接受单克隆抗体治疗的患者体内往往产生抗个体遗传的中和抗体。本发明的概述一般地说，二价的或多价的低分子量合成交联化合物已被设计并研制出来。这些合成的交联化合物可以作为促动剂或拮抗剂发挥作用并且在天然生成的受体之间诱导结合，例如诱导一种特殊的T细胞如CD26与a)其自己或b)另外的T细胞或抗原提呈细胞表面受体[如CD2、CD4、CD8、CD28、CD26、CD44、CD45、CD10、CD3/TCR(或TCR/CD3)]、CD40、B7.1和B7.2的结合。本发明的二价或多价的低分子量的合成交联化合物是足够小(小于大约30个氨基酸，更优选小于20个氨基酸)，小到足以排除与单克隆抗体相关的致免疫性。本发明的二价或多价的合成交联化合物可以在没有佐药共同给药的情况下(单独)提供给患者。反之，大多数其他的肽、蛋白质和糖类抗原在不提供佐药时通常是缺乏致免疫性的，或者全然没有致免疫性的。本发明的化合物对于在与免疫系统调节有关的相同的或不同的细胞上使分子交联是有用的。本发明的化合物在下式规定的属类之内(I)[P2(R2)m]n-L-P1R1]其中P1代表第一目标部分，优选能模拟蛋白酶如优选丝氨酸蛋白酶或半胱氨酸蛋白酶的底物结合位点的肽，该结合位点被表达在涉及免疫系统调节的细胞(如T细胞、B细胞、干细胞、骨髓细胞、包括抗原提呈细胞)的表面上；R1代表与蛋白酶活性中心的官能团反应的活性基团；P2代表第二目标部分，优选与第一目标部分相同的或不同的肽；R2代表与第一活性基团相同或不同的第二活性基团；m＝0或1；n是从1至10的一整数；以及L代表连接剂分子，它们(i)具有大约100道尔顿至大约2000道尔顿的分子量；(ii)具有大约20埃至大约300埃的长度；而且(iii)包含靠单键或双键连接的选自C、O、N、S和磷原子的原子。因此，P1在下面参照本发明的某些实施方案中可以是D1-A1-A2-A3-A4或D2-A5-A6-A7-A8。在本发明重要的实施方案中，P1是肽或是肽占主导地位的。在本发明的某些实施方案中，如果P2＝P1，那么R2可以缺省，可以与R1相同，也可以不同于R1。一般地说，n是1，而且本发明的化合物被称为均二聚物(即P2＝P1)或杂二聚物(即P2≠P1)。涉及免疫系统调节的细胞是血液细胞，包括T细胞、B细胞、干细胞、骨髓细胞、树状细胞和其他抗原提呈细胞。P1目标部分可以有包含1、2、3或4个氨基酸的羧基端部，该部分模拟蛋白酶的底物结合位点。被认为是在这种细胞表面上表达的并且由P1目标部分结合的蛋白酶的例子包括后脯氨酰裂解酶、胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶和弹性硬蛋白酶。在这些酶的天然底物中的具体的氨基酸是本领域所熟知的，并在以下给出。一般地说，本发明的化合物包含1至30个氨基酸残基(优选L异构体)，更优选包含1至20个氨基酸残基。在最优选的实施方案中P1目标部分包含1至10个氨基酸，最优选1至2个氨基酸。P1目标部分可以包含L氨基酸或D氨基酸；但优先的是至少模拟底物结合位点的氨基酸呈L构型。反之，在逆反构型中的氨基酸优先呈D构型(见实施例)。P1目标部分的组成不限于氨基酸，而且可以全部或部分地包括非氨基酸成分，只要这类成分不显著干扰蛋白酶对化合物的特异性位点识别，即不将化合物的Ki值降低到大约10-7M以下，而且非氨基酸化合物不干扰该化合物与蛋白酶形成复合物。在某些实施方案中，P1目标部分中与底物结合位点的发生结合的部分是由氨基酸构成的，P1目标部分的其余部分由非氨基酸成分构成。一般而言，P1目标部分中的任何部分都可以被修饰，例如与可被检测的制剂偶合，或借助连接剂被固定到表面上，只要这种修饰满足上述的抑制常数和复合体形成的要求即可。在授权给Bachovchin等人的美国专利第4,935,493号“ProteaseInhibitors”(Bachovchin’493)；授权给Bachovchin等人的美国专利第5,462,928号“InhibitorsofDipeptidyl-aminopeptidaseTypeIV”(Bachovchin’928)；授权给Powers等人的美国专利第5,543,396号“ProlinePhosphonateDerivatives”(Powers’396)；授权给Hanko等人的美国专利第5,296,604号“ProlineDerivativesandCompositionsforTheirUseasInhibitorsofHIVProtease”(Hanko’604)；BoehringerIngelheimPharmaceuticals公司申请的PCT/US92/09845即美国专利申请USSN07/796,148和07/936,198“MethodforMakingaProlineboronateEster”(Boehringer)；和FerringV.V申请的PCT/GB94/02615“DP-IV-SerineProteaseInhibitors”(Ferring)中介绍了一些肽，这些肽具有抑制后脯氨酰裂解酶的作用，而且如果与活性基团偶合，可以与后脯氨酰裂解酶的活性位点的官能团形成共价复合物。在重要的实施方案中，P1目标部分模拟后脯氨酰裂解酶DP-IV(文中也称之为“CD26”)的底物结合位点。DP-IV是后脯氨酰的裂解酶，它有从多肽底物的氨基端除去二肽Xaa-Pro的特性。基于过渡态模拟物的抑制剂Xaa-boroPro有代表性的结构包括Lys-BoroPro，Pro-BoroPro和Ala-BoroPro，其中“BoroPro指的是羧酸酯基(COOH)被二羟硼基(B(OH)2)取代的后脯氨酸的模拟物。本发明的另一些交联化合物具有类似的结构，其中二羟硼基被膦酸酯或氟烷基酮取代。本发明还包括模拟另一些后脯氨酰裂解酶的底物结合位点的化合物。例如，IgA1蛋白酶识别裂解位Ser-Thr-Pro-Pro-X(其中X是任何氨基酸)。因此，Ser-Thr-Pro-Pro-R1适合有选择的结合到IgA1蛋白酶的活性位点并与官能团形成复合物。在这个目标部份中的Ser-Thr可很容易被20种天然氨基酸中的任何氨基酸取代，最优先被没有庞大的侧基的那些氨基酸(如Ala的Gly)取代。也可以进行非天然氨基酸的取代，例如对Pro残基中的一种用2-氮杂环丁烷羧酸或2-哌啶酸(分别具有六环结构和四环结构)来取代。本领域的技术人员将知道的是其它的这样一些不显著地影响这些化合物的结合特征及复合物形成特征的改变都是可以进行的。在IgA2蛋白酶的情况下，天然底物中的裂解位点是Pro-Thr-Pro-X，其中水解发生在Pro和X之间。因此，适合与IgA2蛋白酶结合的优先的P1R1结合部分具有通式Pro-Thr-Pro-R1。Thr能够被任何天然氨基酸取代，特别是没有庞大侧基的那些，例如Ala、Gly或Ser。可以被本发明的目标部分作为靶标的后脯氨酰裂解酶的其它实例包括其它的IgA酶、脑髓降解酶、抗利尿激素降解酶和催产素降解酶。可以设计本发明的P1目标部分，以模拟可以在与免疫系统调节有关的细胞表面上表达的其它非脯氨酰裂解酶的底物结合位点。例如，这些酶包括半胱氨酸蛋白酶和丝氨酸蛋白酶，如胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶和弹性蛋白酶。这些酶的底物结合位点是已知的，而且在这些位点上结合的肽优势物(peptidomimetics)已有报导。例如，本发明中模拟胰蛋白酶的底物结合位点的P1目标部分将在其羧基端包括精氨酸(Arg)或赖氨酸(Lys)的残基，并且Arg或Lys的羧基基团偶合到适当的活性中心R1中，与胰蛋白酶活性位点的官能团形成共价键。在授权给Kettner等人的美国专利第5,187,157和5,242,904号“PeptideBoronicAcidInhibitorsofTrypsin-likeProteases”(Kettner’157和Kettner5,242,904)中、授权给Metternich的美国专利第5,288,707号“BorolysinePeptidomimetics”(Metternich)中介绍了可以用于形成本发明化合物的硼赖氨酸目标部分的示例。在美国专利第5,250,720“IntermediatesforPreparingPeptideBoronicAcidInhibitorsofTrypsin-like-Proteases”(Kettner’720)和U.S.5,384,410“RemovalofBoronicAcidProtectingGroupsbyTransesterification”(Kettner’410)中介绍了用于制备这些抑制剂的中间体和有关方法。也可以设计模拟胰凝乳蛋白酶的底物结合位点的P1目标部分。这样的目标部分包括选自苯丙氨酸(Phe)、色氨酸(Trp)和酪氨酸(Tyr)的羧基终端氨基酸的残基。优选的是，这些氨基酸的羧基基团通过共价键偶合到活性基团R1上形成结合部分，该结合部分有选择地结合到胰凝乳蛋白酶活性位点的官能团上并与其形成共价复合物。本发明还可以设计模拟弹性蛋白酶的底物结合位点的P1目标部分。例如，模拟弹性蛋白酶的底物结合位点的P1目标部分将包括氨基酸残基是丙氨酸(Ala)或甘氨酸(Gly)残基的羧基终端，其中这些氨基酸的羧基基团经共价键偶合到活性基团R1上。一般地说，常规的化学反应可以用于形成上述的P1R1结合部分。因此，可以设计和构建本发明的P1R1结合部分，来模拟基本上任何一种其天然底物是已知的或可以被鉴定的蛋白酶的底物结合位点。噬菌体陈列库和能够从中选择模拟蛋白酶底物结合位点的合成化合物的化学组合库的建立允许进一步鉴别可以通过共价键连接活性基团R1形成结合部分的P1目标部分，该结合部分模拟蛋白酶的底物结合位点并且与蛋白酶活性位点中的官能团形成复合物。借助在有和没有假定的噬菌体陈列库分子和组合库分子存在的条件下检验蛋白酶裂解活性并确定该分子是否抑制其天然底物的蛋白酶或底物类似物(例如，易于用分光光度分析检测的发色底物模拟物)的裂解可以对这些库进行筛选，以鉴别假定的非天然生成的目标部分。那些抑制蛋白酶的噬菌体库和/或组合库的分子能够与文中揭示的活性基团R1通过共价键偶合，并且经过试验来确定这些新的分子是否有选择地与蛋白酶结合(例如，借助重复上述的筛选试验)。以这种方式可以为鉴别本发明的非天然生成的目标部分提供一种简单的筛选方法。一般地说，本发明的第一目标部分借助在其端羧基氨基酸上的羧基基团通过共价键偶合到第一活性基团R1上。本文中的R1指的是与涉及免疫系统调节的细胞表面上表达的蛋白酶活性中心的官能团进行反应的活性基团。与目标蛋白酶的活性中心反应指的是R1与处在活性位点的官能团形成共价键。在本发明范围内的活性基团R1包括授权给Bachovchin等人的美国专利第4,935,493号“ProteaseInhibitors”中被表示为“T”基团的活性基团。这些基团包括硼酸酯基、膦酸酯基和氟烷基酮基团，硼酸酯基将在本发明的详细说明部分和实施例中介绍。膦酸酯基和氟烷基酮基团将在下面介绍。一般地说，优先的是在目标部分的羧基终端与活性基团之间的连接呈L构型。活性基团与官能团在活性位点形成共价键是优选的，但是为了在结合部分与活性位点之间形成复合物，不一定要形成共价键。本发明的活性基团是膦酸酯基的时候，其通式如下其中G是H、F或包含1至大约20个碳原子的烷基以及选自N、S或O的非必选的杂原子。可以按照本发明的方法使用的包含全氟烷基、苯基或取代苯基的补充的示范性的脯氨酸的膦酸酯衍生物是在美国专利第5,543,396号(Powers’396)中介绍的那些衍生物。本发明的活性基团是全氟烷基活性基团的时候，其通式如下其中每个J独立地选自O-烷基、N-烷基或烷基(每个包含大约1至20个碳原子)，并且非必选的包含选自N、S或O的杂原子。其它的与蛋白酶(例如丝氨酸蛋白酶或半胱氨酸蛋白酶)的活性中心反应的有用的活性基团，如酮酰胺、酮酸和酮酯等在GeorgiaTechResearch公司申请的、要求1990年12月28日申请的U.S.635,287号优先权的PCT/US91/09801“Peptides，Ketoamides，KetoacidsandKetoesters”(GATech)中曾有介绍。在某些实施方案中活性基团选自具有如下通式的基团α-酮酰氨其中R可以是被取代或未被取代的烷基或芳基，或是α酮酯；以及α酮酸。本发明的活性基团还包括在PCT/GB94/02615，“DP-IV-SerineProteaseInhibitors”(Feering)中介绍的活性基团。它们包括上述的二羟硼基[B(OH)2]以及吡咯烷和下述的活性基团，其中任何一种都可以是取代的或未取代的，只要这种取代不对活性基团或与之相联的键结合部分(CN、C≡C、CHO和CH＝NPh，其中Ph是苯基)的功能活性有不利的影响。这些实例仅仅是说明性的，毫无限制本发明范围的倾向。正象在Feering中介绍的那样，包括这些有代表性的活性基团的化合物可以借助E.Schon等人在Biol.Chem.Hoppe-Seyler372305-311(1991)中和W.W.Bachovchin等人在J.Biol.Chem.2653738-3743(1990)中介绍的通用方法来制备(还可以参阅Bachovchin的上述美国专利)。第二目标部分P2结合到存在于细胞表面的分子上，该细胞可以与结合了第一目标部分的细胞相同或不同。优先的是第二目标部分结合到位于T细胞表面或B细胞表面的分子[例如，受体、主要组织相容复合物(MHC)分子]上。在某些实施方案中，第二目标部分具有模拟与免疫系统调节有关的细胞上提呈的蛋白酶底物结合位点的结构。因此，第二目标部分可以与第一目标部分相同，并且本发明的化合物对在相同或不同的细胞上的具有相同或类似的底物特异性的蛋白酶的交联是有用的。例如，本发明的化合物可以用于使在第一种细胞上的第一蛋白酶(例如后脯氨酰裂解酶)和在同一中细胞表面上或不同的第二种细胞表面上表达的不同的蛋白酶(例如胰凝乳蛋白酶、弹性硬蛋白酶或其它丝氨酸蛋白酶或半胱氨酸蛋白酶)交联。在某些优选的实施方案中，第一和第二目标部分是一致的(P2＝P1)，并且第二活性基团R2可以缺省(即m＝0)、与第一活性基团相同或不同(R1≠R2)。具有一致的P1和P2基团以及一致的R1和R2基团的化合物被称为“均二聚物”。在另一些实施方案中，第一和第二目标部分是不同的，这些化合物被称为杂二聚物。在另一些实施方案中，第二目标部分是特异性地与位于抗原提呈细胞表面上的MHC分子结合的抗原。本发明的这类实施方案作为疫苗是有用的，可用于诱导对该抗原的免疫系统反应。具体地说，这种化合物对于利用常规疫苗制剂呈现较低免疫性(immunogenicity)的抗原诱导免疫系统反应是有用的。因此本发明还提供用于诱导对抗原的免疫反应的改进的疫苗和相关的方法。抗原的实例是具有病原体、癌症抗原和过敏原特征的抗原。具有自体免疫疾病特征的抗原通常将来源于细胞表面、细胞质、细胞核、线粒体等哺乳类组织。实例包括眼色素层炎(例如S抗体)、糖尿病、多发性硬化症、全身红斑狼疮、Hashimoto氏甲状腺炎、重症肌无力、原发性粘液水肿、甲状腺毒症、类风湿关节炎、恶性贫血、阿狄森氏病、硬皮病、自身免疫的痿缩性胃炎、提前绝经(数例)、男性不育症(数例)、幼年糖尿病、Goodpasture氏综合症、寻常天疱疮、类天疱疮、交感性眼炎、致晶眼色素层炎、自身免疫的溶血性贫血、原发出血性紫斑、原发性白细胞减少、原发胆汁性肝硬变(数例)、溃疡性结肠炎、斯耶格伦氏综合症、Wegener氏肉芽肿、poly/dermatomyositis(多发性皮肤肌炎)和盘形红斑狼疮。另外的实例在下面提供。过敏原类抗原通常是蛋白质或糖蛋白，尽管过敏原可以是低分子量过敏原性半抗原，该半抗原在与蛋白质载体共价结合后将诱发应变性疾病(Remington氏药物学)。过敏原包括来源于花粉、粉尘、霉、孢子、皮屑、昆虫和食物的抗原。具体实例包括漆树类的漆粉(十五烷邻苯二酚或十七烷邻苯二酚)，诸如毒叶藤、栎叶漆树、美国毒漆树，和豚草属的类倍半萜烯内酯以及相关的植物。另外的实例在下面提供。带肿瘤抗原特征的抗原通常将来源于肿瘤组织细胞的细胞表面、细胞质、细胞核和小器官等。实例包括带肿瘤蛋白质特征的抗原，包括由突变的致癌基因编码的蛋白质、与肿瘤相关的病毒蛋白质、肿瘤粘蛋白和糖脂。肿瘤包括但不限于下述部位和类型的癌唇、鼻咽、咽和口腔、食管、胃、结肠、直肠、肝、胆囊、胆管树、胰腺、喉、肺和气管、皮肤的黑瘤、乳房、子宫颈、子宫、子宫、卵巢、膀胱、肾、脑和神经系统的其他部分、甲状腺、前裂腺、睾丸、Hodgkin氏病、非Hodgkin氏淋巴瘤、多发性骨髓瘤和白血病。与肿瘤相关的病毒蛋白质是来自上述各类病毒的。具有肿瘤特征的抗原可以是一般不被肿瘤的前体细胞表达的蛋白质，或者可以是通常由肿瘤前体细胞表达但具有肿瘤的突变特征的蛋白质。具有肿瘤特征的抗原可以是具有改变的活性或亚细胞分布的正常蛋白质的突变物。除了上述的那些之外，产生肿瘤抗原的基因突变体还可以是在基因的编码区、5’或3’非编码区或基因内含子中发生突变的，并且可以是点突变、移码、缺码、添码、重复、染色体的重排等的结果。本领域的技术人员都精通产生肿瘤抗原的对正常基因结构和表达的各种改变。肿瘤抗原的具体实例包括蛋白质、诸如B细胞淋巴瘤Ig-个体遗传型、黑素瘤的突变激酶4号、黑素瘤的Pmel-17(gp100)、黑素瘤的MART-1(Melan-A)、黑素瘤的p-15蛋白质、黑素瘤的酪氨酸酶、黑素瘤的MAGE1、2和3、髓状的甲状腺、小细胞肺癌、结肠和/或支气管淋状细胞癌、胆囊、黑瘤、乳房和淋状细胞癌的BAGE、黑素瘤的gp75、黑素瘤的早期肿瘤抗原；诸如乳房、胰腺和卵巢癌的粘蛋白之类的糖/脂、黑素瘤的GM2和GD2神经节苷；致癌基因诸如癌的突变p53、结肠癌的突变ras、乳腺癌的HER-2/neu原始致癌基因；病毒产物诸如子宫颈和食管的淋状细胞癌的人体乳头瘤病毒蛋白质。另外，蛋白性肿瘤抗原可以是作为全蛋白质衍生的特异性肽的HLA分子所提呈的。获取抗原肽的蛋白质的代谢过程在本领域中是已知的，例如参阅美国专利第5,342,774号(Boon等人)本发明优选的肿瘤抗原包括黑素瘤肿瘤抗原[例如MAGE族蛋白质(MAGE-1，MAGE-2，MAGE-3)；MART-1(肽27-35)和gp100]；以及结肠癌肿瘤抗原(例如突变的APC基因产物的肽)。特别优先的黑素瘤抗原序列是Slingluff等人在Curr.OpininImmunol.6733-740(1994)中报告的那些<已有报导说，MAGE族蛋白质与不止一种类型的癌相关MAGE-1(黑素瘤、甲状腺髓状癌和小细胞肺癌)、MAGE-2(黑素瘤、小细胞肺癌、结肠癌、支气管鳞状细胞癌和甲状腺骨髓部)以及MAGE-3(黑素瘤、小细胞肺癌、结肠癌、支气管鳞状细胞癌和甲状腺髓状癌)。对于附加的肿瘤抗原(例如PIA、Connexin37、MAGE-1、MAGE-3、MART1/Aa、gp100、酪氨酸酶)和/或关于选定的肿瘤抗原的组织分布的资料，参阅Morioka等人在J.Immunol.1535650(1994)中的文章提供“ADecapeptide(Gln-Asp-Leu-Thr-Met-Lys-Tyr-Gln-Ile-Phe)fromHumanMelanomaIsRecognizedbyCTLinMelanomaPatients”。特别优先的肿瘤抗原是由Towmsend等人在Nature371662(1994)中介绍的突变APC基因产物的蛋白质在另一些实施方案中，第二目标部分是配位体，该配位体有选择地与细胞表面上表达的受体结合(优选T细胞或B细胞)。具有能由本发明的第二目标部分模拟天然生成的配位体的受体的实例包括选自CD2、TCR/C3、CD4、CD8、CD10、CD26、CD28、CD40、CD44、CD45、B7.1和B7.2的受体。按照另一些实施方案，第二目标部分是抗体或抗体的碎片，它们有选择地与表达在细胞表面上的抗原决定基结合。抗原决定基可以是任何上述受体的一部分。不管第二目标部分(例如蛋白酶、受体、MHC配合物和抗原决定基)的性质如何，噬菌体陈列库和其它类型的组合库都可以以模拟上述方法的方式进行筛选，以鉴别在形成本发明的化合物中有用的非天然生成的目标部分。第二目标部分不一定要通过共价键与第二活性基团连接。例如，第二目标部分可以对它的结合对象(例如，MHC分子)具有足够的亲和力，以允许在相同或不同的细胞上使相同或不同的目标分子交联，且在第二目标部分和它的目标结合对象之间不形成共价配合物。第二活性基团也不一定要与第一活性基团相同。因此，例如，本发明的化合物包括这样的分子，该分子包括第一受体部分和第二受体部分，其中第一受体部分包含硼酸酯基第一活性基团R1，第二受体部分包含第二活性基团，它是硼酸酯基、膦酸酯基或三氟烷基酮基团。连接剂通过共价键偶合到第一和第二目标部分(P1和P2)上，其连接方式对这些部分与它们各自的目标受体的受体的结合不产生不利影响。在本发明的详细说明部分和实施例中介绍了连接剂的实例，包括介绍它们的组成、尺寸及连接剂与目标部分偶合的方法。一般地说，这类连接剂是市售的，并且通过本领域的技术人员所熟知的常规偶合方法与目标部分偶合。本发明的某些方面和用处是基于下述发现的，即某些均二聚体能够刺激T细胞并且这种刺激能力至少部分地取决于连接剂的长度。此外，本申请人业已发现在受体部分之间存在一长度(大约20埃)，低于这个长度，这种均二聚体不再能够刺激T细胞。从已发表的报告来看，任何使DPIV蛋白酶交联的均二聚体刺激T细胞的能力都是意外的，这些报告认为DPIV均二聚体呈现T细胞抑制能力(例如参阅Ferring，V.V.申请的PCT/GB94/02615“DP-IV-SerineProteaseInhibitors”和以该申请为优先权申请的美国专利申请)。Ferring介绍了某些包含两个活性位的对称均二聚体，借助其氨基酸残基的侧链形成抑制DP-IV链接的抑制剂。因此，本发明为Ferring揭示了均二聚体DP-IV抑制剂提供新用途，即将Ferring的均二聚体对需要这种治疗的患者进行刺激其体内T细胞的治疗。业已发现某些浓度的本发明的均二聚体对血液细胞有刺激作用。因此，本发明的化合物对治疗HIV+患者是特别有用的，例如，将来自HIV+患者的T细胞与有效治疗剂量的本发明的一种或多种化合物在激活血液细胞的条件下接触。这些化合物以刺激浓度对T细胞的刺激作用将在实施例中予以说明。这些细胞可以在体内或体外与交联化合物接触。本发明的均二聚体化合物的这些刺激性质是出乎意外的，并且不可能基于某些单体(例如在Bachovchin’493中揭示的化合物)和某些均二聚体(例如FerringV.V.申请的PCT/GB94/02615，“DP-IV-SerineProteaseInhibitors”(Ferring))对免疫系统的抑制作用进行预测。本发明的化合物可以用于抑制选择地与目标部分受体结合的蛋白酶的活性。因此，本发明的化合物对抑制后脯氨酰裂解酶和抑制其他的丝氨酸和半胱氨酸蛋白酶(如胰凝乳蛋白酶、胰蛋白酶和弹性硬蛋白酶)是有用的。按照本发明的另一方面，提供了调节免疫系统功能的方法。在需要调节免疫系统时将本发明的化合物以有效刺激免疫系统功能的剂量提供给患者。调节免疫系统功能包括但不限于提高免疫功能，诸如借助非特异性地刺激血液细胞的增生和特殊免疫功能，或特异性地刺激T细胞和/或B细胞和/或骨髓细胞、干细胞、早期谱系祖代细胞以对传染病、癌症等产生预防或治疗效果。特别包括的是本发明的化合物的使用，具体地说是使用均二聚体和/或杂二聚体治疗以体内T细胞减少为特征的疾病，如HIV和其他累及免疫系统的病症。调节免疫系统功能还包括但不限于降低免疫功能，例如通常借助遏制接受移植患者的免疫系统或专门遏制免疫系统来治疗自身免疫疾病、过敏症等。在一个重要的实施方案中，本发明的均二聚体和/或杂二聚体被用于刺激血液细胞增生，下面将详细介绍。可以按照本发明进行治疗的具体病症被认为是本发明的一个单独的方面，将用表格和实施例在下面详细介绍。按照本发明的另一方面，提供了刺激T细胞的方法。使本发明的交联化合物以有效刺激T细胞的剂量与需要这种治疗的患者的T细胞接触。对刺激T细胞特别有用的交联化合物是使上述的DPIV分子交联的那些化合物，包括优选的交联化合物。如上所述，优选的交联化合物包括连接剂L，该连接剂位于受体部分之间时导致在这些部分之间的最小距离大约为20埃。优选的是受体部分之间的距离从20埃至60埃，更优选的是从30埃至50埃。按照本发明又一方面，提供了药物制剂。这些药物制剂包含上述的交联化合物和非必选地包含药物学上可接受的载体。优选的是该药物组合物是无菌的。文中所用的术语“药物学上可接受的载体”指的是适合向人体或其他动物体内给药的一种或多种相容的固体或液体填料、稀释剂或胶囊材料。术语“载体”指的是天然或合成的、有机或无机的组分，活性组分与该组分结合以利于应用。该药物组合物的成分还能够与本发明的分子以某种方式共混，只要没有严重损害所需药效的相互影响即可。按照本发明的另一方面，提供具有图1A所示结构的杂二价化合物，其中所示结构的每个成分都是参照这张图在实施例2中定义的。这种化合物的一个实施方案是其示于图1U和图1V中的结构独立地代表结合部分，而R代表该分子的其余部分。按照定义，连接剂分子必须能够将在图1A左侧的受体部分的原子A1结合到位于图1A右侧的结合部分的原子A5上。这种化合物的其它实施方案包括有4个原子位于由D1和D2组成的基团与结合部分的B之间；受体部分呈L构象；Y1、Y2、Y3和Y4是羟基；结合在B上的A4是L-构象的，并且与B结合的A5是L-构象的；结合部分是一个与硼分子B共轭的L-氨基酸残基；结合部分选自L-Lys-L-boroPro和L-Lys-L-boroPro的衍生物。这种化合物的另一个实施方案是其中的连接剂分子包含选自羧酸酯基基团、氨基基团、硫氢基基团、咪唑基团、链烯基团(碳原子通过双键连接到另一个碳原子上)、酰基卤基团(例如酰基氯)、和CH2X，其中X代表卤素(例如在亲核基团取代来自CH2X连接剂分子的官能团时两个受体部分被连接起来)；其中连接剂分子进一步被定义为具有图1T所示结构并且[G]包含选自碳、氮、氧、氢和硫原子的原子；[J]选自CH2分子、碳原子链、氮原子链和氧原子链；m、p和q代表选自1至50的一整数；其中[G]优选选自L氨基酸残基和D氨基酸残基的R基团，其中L-氨基酸选自赖氨酸、半胱氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、组氨酸、精氨酸、谷氨酰胺和天冬酰胺，而D-氨基酸选自赖氨酸、半胱氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、组氨酸、精氨酸、谷氨酰胺和天冬酰胺；其中连接剂分子优先选自己二酸(肥酸)、EGS、1，4-二氨基丁烷、1，4-二硫代丁烷、二硫苏糖醇、赖氨酸、半胱氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、组氨酸、精氨酸、谷氨酸盐或酯和天冬酰胺；其中在受体部分包含谷氨酸残基时连接剂分子优选包含至少两个氨基基团；其中在受体部分包含天冬氨酸残基时连接剂分子优选包含至少两个氨基基团；在受体部分包含半胱氨酸残基时连接剂分子优选包含至少两个硫氢基基团；而且连接剂分子的长度在30埃至100埃范围内。本发明的另一方面是具有图1B所示结构的化合物。在这种化合物中，结合部分是一致的，即在两个结合部分都具有A1、A2、A3和A4，而且该结构的每个成分是参照这张图在实施例2中定义的。该化合物的一个只有A1、A2、A3和A4出现在两个受体部分中的实施方案是在图1U和图V所示的结构，各自独立代表结合部分，其中R代表该分子的其余部分。本发明的另一方面是一种具有图2A所示结构的化合物，其中所述结构的每种成分是参照这张图在实施例2中定义的。这种化合物一个实施方案包括图1U和图1V所示的结构，它们独立地表示结合部分，其中R代表该分子的其余部分。这种化合物的另一种实施方案包括有4个原子位于结合部分的D和B之间；结合部分呈L-构型；Y1和Y2是羟基；结合到B上的A4呈L-构型；结合部分是与硼分子B共轭的L-氨基酸残基；并且结合部分选自L-Lys-L-boroPro和L-Lys-L-boroPro的衍生物。这种化合物的补充实施方案是连接剂分子，该分子包括选自羧酸酯基基团、氨基基团、硫氢基基团、咪唑基团、链烯基团、酰基卤基团、和CH2X(其中X代表卤素)的官能团；该连接剂分子进一步被定义为具有图1T所示结构，其中[G]包含选自碳、氮、氧、氢和硫原子的原子、[J]选自CH2分子、碳原子链、氮原子链和氧原子链；m、p和q各自代表选自1至50的一整数；其中[G]优选选自L氨基酸残基和D氨基酸残基的R基团，其中L-氨基酸选自赖氨酸、半胱氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、组氨酸、精氨酸、谷氨酰胺和天冬酰胺，而D-氨基酸选自赖氨酸、半胱氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、组氨酸、精氨酸、谷氨酰胺和天冬酰胺；其中连接剂分子优先选自己二酸(肥酸)、EGS、1，4-二氨基丁烷、1，4-二硫代丁烷、二硫苏糖醇、赖氨酸、半胱氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、组氨酸、精氨酸、谷氨酸盐或酯和天冬酰胺；其中在受体部分包含谷氨酸残基时连接剂分子优选包含至少两个氨基基团；其中在受体部分包含天冬氨酸残基时连接剂分子优选包含至少两个氨基基团；在受体部分包含半胱氨酸残基时连接剂分子优选包含至少两个硫氢基基团；而且连接剂分子的长度在30埃至100埃范围内。这种化合物的另一个实施方案是7至25个氨基酸范围内的肽；其中示范性的肽包括(a)髓磷脂含蛋白脂质的蛋白质肽；(b)蛾细胞色素C肽；(c)破伤风毒素肽；(d)HIV-1GP120肽；(e)髓磷脂的碱性蛋白质肽；(f)肿瘤抗原肽；以及(g)传染物的抗原肽。优选的是髓磷脂含蛋白脂质的蛋白质肽包括人和鼠的肽，选自在85-159范围内的PLP肽，特别是在95-116范围内的，和PLP肽105-124、PLP肽139-151和PLP肽190-209；蛾细胞色素C肽是肽MCC94-103；髓磷脂的碱性蛋白质肽是MBP肽1-11；破伤风毒素肽选自破伤风疫苗肽和P2破伤风疫苗肽；以及肿瘤抗原肽和传染物抗原肽将在本申请的其他地方给予介绍。这种化合物的另一个实施方案是天然生成的受体是B细胞或T细胞表面受体的情况；并且细胞表面受体选自TCR/C3、CD2、CD4、CD8、CD10、CD26、CD28、CD44、CD45、CD40、B7.1和B7.2。本发明的另一方面是具有图1R所示结构的化合物，其中所述结构的每种成分都是参照这张图在实施例3中定义的。这种化合物的一个实施方案包括示于图1U和图1V的结构，它们独立地代表一种结合部分，其中R代表该分子的其余部分。示于图1R的化合物的另一种实施方案是其中(a)[G]m是赖氨酸、半胱氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、组氨酸、精氨酸、谷氨酰胺和天冬酰胺的D-或L-异构体的侧链；(b)E2是赖氨酸、半胱氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、组氨酸、精氨酸、谷氨酰胺和天冬酰胺的D-或L-异构体；(c)E1和E3选自氨基部分和羧酸部分；以及(d)E1和E3彼此是不同的。示于图1R的化合物的另一种实施方案是其中(a)[G]m是赖氨酸、半胱氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、组氨酸、精氨酸、谷氨酰胺和天冬酰胺的D-或L-异构体的侧链；(b)E2选自2-羧基丁基、2-羧基丙基、2-氨基丁基、2-氨基丙基、以及带氨基或羧基侧链的碳氢链；(c)[J]p和[I]q独立地代表碳氢链；(d)E1和E3选自氨基部分和羧酸部分；以及(e)E1和E3彼此是不同的。本发明的化合物，特别是均二聚体配合物，可以借助使淋巴细胞与足以诱导增生或活化的浓度的化合物接触来激活人体携带CD26的淋巴细胞或使之增生。本发明的方法优先涉及与药物学上可接受的载体(如无菌的生理盐水)掺混的化合物的体内给药。患者可以是任何患有以非正常淋巴细胞的活动或淋巴细胞浓度不适当为特征的疾病的患者。这类疾病的实例是HIV感染、肾衰竭、癌症(特别是接受了化疗使淋巴细胞减少的癌症)、以及导致患者体内淋巴细胞减少的骨髓病症。本发明的化合物优先通过口服提供给患者。这些化合物还可以用于体外刺激淋巴细胞的增生或活化，例如取出患者自身固有的淋巴细胞，通过刺激以增加淋巴细胞的活性和/或数量，然后再注入给患者。例如，这种方法可以用于增加对患者的肿瘤为特异性的溶胞T细胞的数量或增加感染HIV的患者体内的T细胞的数量。文中使用的术语“交联化合物”指的是上述的化合物以及它们的盐。本发明的这些方面和其它方面在下面将更详细地介绍。在这份专利申请中，引证的所有专利、专利申请、参考文献和其它文件都通过在此引述而完整地并入本文。定义术语“氨基酸”意味着包括亚氨基酸。术语“boroPro”意味着脯氨酸的α氨基硼酸的类似物与氨基酸结合，形成以boroPro作为C-端残基的二肽。“boroPro”用于指定一种类似物，其脯氨酸的羧基基团被B(OH)2取代的，其中(OH)2代表两个羟基基团，B代表硼。术语“Xaa”指的是任何氨基酸残基，例如赖氨酸残基。对于本发明，“[Lysing-boroProline]2”和“KbP-S-KbP(其中S代表连接剂间隔基团)”可互换使用。“带己二酸作为间隔基团连接剂的二聚体KbP”，[di(L-Lysine-L-boroProline)己二酸]，和“KbP2-己二酸”可互换使用。二聚体的和二价的可互换使用。连接剂-间隔基团分子、交联剂、交联剂分子、连接剂分子和连接基团可互换使用。“促效药”指的是激活信号路径的分子或化合物。“拮抗药”指的是抑制发信号路径的分子或化合物。“CD26配位体”是任何与T细胞受体CD26结合并能够提供刺激或抑制信号的蛋白质、糖蛋白、脂蛋白或多肽。CD26、二肽的肽酶IV(DPIV)和二肽的氨基肽酶IV可互换使用。CD26是后脯氨酸裂解酶，它具有将Xaa-Pro二肽(其中Xaa代表任何氨基酸)从多肽的氨基端除去的特异性。“CD26特异性结合物”指的是与CD26结合的CD26特异性抗体、片段或小分子量化合物。“系留或偶合的α氨基酸”是其侧链的碳原子系留、连接或偶合在α氨基的氮原子上的α氨基酸。氨基酸的α-碳是与羧酸基团连接的碳原子。α氨基酸是氨基连在α-碳上的氨基酸。所有天然生成的氨基酸都是α氨基酸或α亚氨基酸。后者意味着氨基和羧酸基两者与同一碳原子连接。每个氨基酸都可以被看成是一个碳原子(α-碳C)，其上连接有一个羧基、一个氨基、一个侧链R和一个氢，如下式所示其中“R”是侧链；“NH2”是α氨基；带一个氢原子和基团R并与基团NH2连接的第一碳原子(C)是α碳原子；通过双键与氧连接的碳和一个羟基(OH)构成α羧基。NH2和COOH基团用于将氨基酸彼此连接。在两个氨基酸连到一起时，一个氨基酸的位于羧基端的羟基和位于N端的氢(H)被脱掉(H2O)。为了形成蛋白质，一个氨基酸的氨基与另一个氨基酸的羧基反应，脱掉一个水；由此获得的化学键被称为肽键。“肽”指的是小分子，通常包含不多于50个氨基酸残基，一般不具有明确定义的三维结构。“埃”指的是10-10M。在不同的肽中使用的键的相对尺寸如下N-H1.0埃；C-H1.1埃；碳与氧之间的双键为1.2埃；N-CO1.3埃；C-O1.4埃；C-C1.5埃；丙氨酸6埃；苯6埃；水4埃；苯丙氨酸7埃。药物制剂和给药模式是本文中介绍的。本发明的其它特征和优点依据下面的详细介绍和权利要求书将变得明朗起来。附图简要说明图1A至图1V说明几种优先的均二价和均多价化合物的结构；或这些结构所需的成份图1A是具有不同的结合部分的通用二价模板。图1B是通用均二价模板。图1C是采用二羰基连接剂的带氨基连接的通用二价模板。图1D是采用己二酰连接剂的带氨基连接的二价实例。图1E是采用己二酰连接剂[(Lysine-boroPro)2Adipate]的带氨基连接的均二价实例。图1F是另一个采用己二酰连接剂的带氨基连接的二价实例。图1G是采用二氨基连接剂的带羧基连接的通用二价模板。图1H是采用1，4-二氨基丁烷连接剂的带羧基连接的二价实例。图1I是采用1，4-二氨基丁烷连接剂[(Aspartyl-botoProline)21，4-Diaminobutane]的带羧基连接的二价实例。图1J是另一个采用1，4-二氨基丁烷连接剂的带羧基连接的二价实例。图1K是采用二硫酚连接剂的带二硫连接的通用二价模板。图1L是采用1，4-二硫代丁基连接剂的带二硫连接的二价实例。图1M是另一个采用1，4-二硫代丁基连接剂的带二硫连接的二价实例。图1N是另一个采用1，4-二硫苏糖醇连接剂[(Cysteine-boroProline)2dithiotheitol]的带二硫连接的二价实例。图1O是采用二羰基连接剂的带咪唑连接的通用二价模板。图1P是另一个采用二碳酰连接剂的带咪唑连接的二价实例。图1Q是采用己二酰连接剂[(Histidine-boroProline)2Adipate]的带咪唑连接的通用二价模板。图1R是均官能聚合物交联剂的通用模板。图1S是采用己二酰连接剂的均三聚物的实例。图1T是连接剂分子模板。图1U是包含A1、A2、A3和A4的结合部分。图1V是包含A5、A6、A7和A8的结合部分。图2A-2C表示几种优选的杂二价化合物的通式。图2A是通用杂二价模板。图2B是结合部分与MCC肽(94-103)偶合的杂二价实例。图2C是结合部分与PLP肽(139-151)偶合的杂二价实例。图3说明己二酰(Lys-boroPro)2和Lys-boroPro的均二价衍生物的合成。图4是用低浓度的KbP2-Adipate观察anti-CD3mAb刺激H9细胞时获得的剂量响应曲线。图5是用高浓度的KbP2-Adipate观察anti-CD3mAb刺激H9细胞时获得的剂量响应曲线。药物浓度为10XM。图6说明anti-1F7的剂量响应曲线。图7说明KbP2-Adipate在较高浓度下可能发生的分子间反应。图8说明Lys-boroPro与MyelinProteolipidProtein(PLP)Peptide139-151链接。图9是比较偶合的KbP-S-MCC和未偶合的MCC94-103对在2B4细胞中IL-2产生的影响。图10说明Xaa-boroProline抑制剂的开式结构与环化结构。图11A-11D说明包含链烯基的二价化合物的各种实例。图11D是Xaa-boroProline的含氟烯烃电子等排物。图12说明不同的浓度下(KbP)2-EGS对H9细胞产生IL-2的影响。图13说明在图12的实验中采用的均二聚体(KbP)2-EGS间隔连接剂分子EGS的结构。本发明的详细叙述设计并研制了一些具有促效活性的二价或多价的合成的低分子量交联化合物。为了具有促效活性，要求该分子能够以类似于其天然配位体的诱导方式诱导特定类别的受体的结合。所以，需要这些促效分子至少是二齿配位体。此外，为了发生所需的结合，各个结合单元必须适当地隔开。本发明的均二价(均二聚体)、均多价和杂二价(杂二聚体)化合物代表一类新的生物调节剂，这些调节剂可以用作治疗或/和诊断药物。T细胞表面受体T细胞表面受体及其天然生成的配位体在本文中作为实例用于说明合成的各种均二价、均多价、杂多价和杂二价的交联化合物是如何发挥作用的；所以这些实施例无意限制本发明。Xaa-boroPro分子对T细胞表面受体CD26具有高亲合力，所以它可以作为本文提出的均二价、杂多价、均多价或杂二价化合物的成分分子。T细胞表面受体CD26的生物化学CD26是高度糖化的双横跨膜的蛋白质。它以二聚体存在并具有分子量大约是110kDa的亚单位。给人、小鼠和大鼠的蛋白质编码的cDNAs业已被克隆并排序(参阅D.Darmoul等人的“DipeptidylpeptidaseIV(CD26)geneexpressioninenterocyte-likecoloncancercelllinesHT-29andCaco-2CloningofcompletehumancodingsequenceandchangeofdipeptidylpeptidaseIVmRNAlevelsduringcelldifferentiation”，J.Biol.Chem.267，4824-4833(1992)；D.Marquet等人的“cDNAcloningformousethymocyte-activatingmoleculeAmultifunctionalecto-dipeptidylpeptidaseIV(CD26)includedinasubgroupofserineprotease”，J.Biol.Chem.267，2200-2208(1992)；T.Tanaka等人的“CloningandfunctionalexpressionoftheTcellactivationantigenCD26”，J.Immunol.149，481-486(1992)；出版订正出现在J.Immunol.50(5)2090(Mar1993))。人的CD26cDNA给766个氨基酸的多肽(分子量88,300)编码，而鼠的CD26cDNA给760个氨基酸的多肽(分子量87,500)编码。小鼠、大鼠和人的CD26的序列共享上至98％的同系性。大多数CD26分子驻留在细胞的外侧，借助通过位于N端的22个氨基酸的疏水域锚定在细胞浆膜上，并且只有6个氨基酸的细小N端尾伸入细胞质中。在淋巴细胞中，业已发现CD26主要是在CD4+T细胞的表面上，据信，在那里它在T细胞的活化路径方面具有重要的作用(参阅下面的“CD26和T细胞的功能”)。此外，还在一小部分CD8+细胞上发现CD26。业已发现，CD26与被称为IV型二肽基肽酶氨基肽酶(DPIV，有时也缩写成DPPIV或DAPIV)的酶是一致的。CD26的酶学活性位点结构和抑制剂的设计因此，结合DPIV蛋白酶活性的CD26的催化活性涉及从多肽和蛋白质的自由氨基端将二肽单元酶切下来。DPIV对在脯氨酸残基后面(即从氨基端计算倒数第二个位置上的脯氨酸)裂解表现出强烈的优先性。自由氨基端似乎是必需的，但是酶对这个位置任何氨基酸度都显示很低的优先(参阅J.Heins等人的“Mechanismofproline-specificproteinases(I)SubstratespecificityofdipeptidylpeptidaseIVfrompigkidneyandproline-specificendopeptidasefromFlavobacteriummeningosepticum”，BiochimicaEtBiophysicaActa954，161-169(1988))。DPIV可以被看作是具有摘除N端的Xaa-Pro二肽特异性的后脯氨酸酶切氨基肽酶，其中Xaa可以是任何氨基酸。但是，DPIV还将摘除氨基端的Xaa-Ala二肽，尽管有效性小得多。但是，由于boroPro本身不是有效的抑制剂，酶要求某些氨基酸在N端接在脯氨酸上。P2残基或许只需要有相对待酶切的脯氨酸键按适当的几何排列出现的自由氨基基团，因为将一个诸如Ac、CBZ或Fmoc之类的基团加到P2N端上消除了抑制能力[参阅G.R.Flentke等人的“InhibitionofdipeptidylaminopeptidaseIV(DP-IV)byXaa-boroProdipeptidesanduseoftheseinhibitorstoexaminetheroleofDP-IVinT-cellfunction”，PNAS(USA)88，1556-1559(1991)]。这表明构成了活性位点，从而判别脯氨酸残基在P1而自由的氨基在P2。P2氨基酸侧链或许被指导离开酶，并在溶液中是游离的。P1指的是在固着键N端侧的残基。P2指的是在P1的N端侧的残基。CD26和T细胞的功能Schon等人的工作是属于首先确认DPIV对T细胞功能的重要性的[参阅E.Schon等人的“DipeptidylpeptidaseIVintheimmunesystem.EffectsofspecificenzymeinhibitorsonactivityofdipeptidylpeptidaseIVandproliferationofhumanlymphocyte”，BiologicalChemistryHoppeSeyler372，305-311(1991)；E.Schon等人的“ThedipeptidylpeptidaseIV，amembraneenzymeinvolvedintheproliferationofTlymphocytes”，BiomedicaBiochimicaActa44，(1985)；E.Schon等人在“DipeptidylpeptidaseIVinhumanTlymphocytes.Anapproachtotheroleofamembranepeptidaseintheimmunesystem，”BiomedicaBiochimicaActa45，1523-1528(1986)；E.Schon等人在“TheroleofdipeptidylpeptidaseIVinhumanTlymphocyteactivation.InhibitorsandantibodiesagainstdipeptidylpeptidaseIVsuppresslymphocyteproliferationandimmunoglobulinsynthesisinvitro”，EuropeanJournalofImmunology17，1821-1826(1987)；E.Schon等人在“DipeptidylpeptidaseIVinhumanTlymphocytes.Impairedinductionofinterleukin2andgammainterferonduetospecificinhibitionofdipeptidylpeptidaseIV”，ScandinavianJournaloflmmunology29，127-132(1989)]。这项工作报告了DPIV抑制剂和抗DPIV多克隆抗体遏制T细胞在培养物中的活性。业已证明Pro-boroPro和Ala-boroPro抑制小鼠体内的免疫反应，以致在抗原免疫性试验中抗体的生成随之减少；这直接证明了DPIV/CD26在体内免疫功能中的作用。此外，大多数涉及CD26/DPIV对正常T细胞功能和免疫系统调节之重要性的证据都来自关于各种anti-CD26mAbs对T细胞的功能的影响的研究。因为Abs是天然二价的，它们往往能在诱导受体结合时模拟天然的配位体，例如拮抗作用，这种作用可以是二聚作用或附聚作用。如果抗体没有正确地模拟天然配位体诱导的结合，那么它往往阻断与天然配位体的相互作用，并因此呈现抑制活性即拮抗活性。因此，迄今为止鉴定的anti-CD26mAbs对各种T细胞反应既可以具有激活作用，又可以是抑制作用，还可以两者兼顾。这些结果表明CD26是经结合激活的协同刺激T细胞的受体。CD26作为结合激活的有协同刺激作用的分子的作用最近已通过实验得到证实，在该实验中，CD26的基因被转染到JurkatT细胞系中[T.Tanaka等人的“CloningandfunctionalexpressionofTcellactivationantigenCD26”，J.Immunol.，149，481-486(1992)出版订正出现在J.Immunol.，150(5)2090(Mar1993)]。结果表明由mAbs介导的对在CD26+Jurkat细胞上CD26的交联导致增强的Ca2+流动并且在有佛波醇酯存在的情况下响应anti-CD3的次优刺激生产IL-2。未经转染的Jurkat细胞不表达CD26，也不在有佛波醇酯存在的情况下响应anti-CD26与anti-CD3的次优处理的协同刺激而生产大量IL-2。CD26介导信号传递的机理CD26只有6个氨基酸的细胞质短尾。这一点不同于通常的其他细胞表面受体的通过胞液域传导信号的情况。CD26可以通过下述两种假定的机理参与T细胞的信号传导(1)通过与膜内其他分子结合以及(2)通过其DPIV蛋白酶的活性。实施例引言在这份申请中用每个实施例和附图具体地阐明一些具体的实施方案。应当理解在文中揭示的任何活性基团都可以被附图所示的或在具体的实施例中介绍的活性基团(如boronyl基团)取代。实施例1均二价、均多价和多价交联化合物的一般合成二价或多价的化合物即在此提出的制剂涉及基本上非常类似的化学。这些二价和多价的化合物是这样设计的，以致它们诱导天然生成的受体之间的结合，例如在T细胞表面受体CD26与它本身的结合(均二价)、或在三个T细胞表面受体(CD26)之间结合(均多价，如均三价)、或CD26受体与T细胞受体之间结合(TCR/CD3)、或CD26受体与CD4受体结合(杂二价)。在很大程度上，使用直接的肽偶合化学。在本发明中使用的标准的肽偶合化学的方法和程序是容易获得的。书本中介绍的采用这些方法的实例包括但不限于下述的引证，它们都通过在此引述而合并于本文P.D.Bailey，AnIntroductiontoPeptideChemistry，Ed.JohnWiley&amp;Sons，1990；MiklosBodansky，PeptideChemistry，APracticalTextbook，Ed.Springer-Verlag，1988；MiklosBodansky，PrinciplesofPeptideSynthesis，“ReactivityandStructureConceptsinOrganicChemistry”Volume16，Ed.Springer-Verlag，1984；andMiklosBodansky，PrinciplesofPeptideSynthesis，“ReactivityandStructureConceptsinOrganicChemistry，”Volume21，Ed.Springer-Verlag，1984。1.均多价化合物一般结构本文中所述的均二价和均多价化合物可以从图1A所示有不同结合部分的二价模板的通图或图1B所示均二价模板的通图开始合成。因此，图1A和图1B所示的化学结构两侧是结合部分。图1C-图1T说明几种优选的二价和多价化合物的结构。关于图的说明在前面的附图简要说明中给出。2.杂二价化合物一般结构本文中所述的杂二价和杂多价化合物和制剂可以从下面图2A所示的通图即杂二价化合物的通式着手。图2A-2C说明几种优选的杂二价化合物的通式图2A是杂二价通用模板；图2B是利用相容的连接剂使结合部分与MCC肽(94-103)偶合的杂二价实例，例如连接剂为AAAAAA(SEQIDNO2I)连接剂基团，其中A是L-丙氨酸或D-丙氨酸；以及图2C是利用相容的连接剂使结合部分与PLP肽(139-151)偶合的杂二价实例，例如连接剂为AAAAAA连接剂基团，其中A是L-丙氨酸或D-丙氨酸。就本发明而言，肽、多肽或肽片段可以互换使用并且被定义成包括长度约3至50个残基的氨基酸链，优选的是长度约3至25个残基。更优选的是最佳尺寸，长度在10至18个氨基酸的数量级上。对下述自身免疫疾病、传染病、过敏性病或癌症的、包括在本文中其它的地方给出的癌症(非限定性的)的已知的抗原肽可以与二价模板(如Xaa-boroPro)偶合(见图2A)，以形成能够在本发明中用于治疗那些疾病的杂二价化合物(杂二聚体)分子。因此这些肽一旦与二价或多价模板(见图2A)偶合或连接，将形成不同的杂二价化合物，由于诱导两受体结合的二价的相互作用，这些化合物能够改变生物活性(增加或减少)。自身免疫疾病和已知的抗原肽<p>就本发明而言，肽、多肽或肽片段可以互换使用并且被定义成包括长度约3至50个残基的氨基酸链，优选的是长度约3至25个残基。更优选的是最佳尺寸，长度在10至18个氨基酸的数量级上。对下述自身免疫疾病、传染病、过敏性病或癌症的、包括在本文中其它的地方给出的癌症(非限定性的)的已知的抗原肽可以与二价模板(如Xaa-boroPro)偶合(见图2A)，以形成能够在本发明中用于治疗那些疾病的杂二价化合物(杂二聚体)分子。因此这些肽一旦与二价或多价模板(见图2A)偶合或连接，将形成不同的杂二价化合物，由于诱导两受体结合的二价的相互作用，这些化合物能够改变生物活性(增加或减少)。自身免疫疾病和已知的抗原肽Xaa-broPro偶合或者与图2A所示的另一种结合部分偶合，以形成不同的杂二价化合物，这些化合物呈现被改变了的生物活性(是提高或是降低则取决于对特异性受体的特异性结合的状况)。杂二价肽*TCRT细胞表面受体3.H-boroPro和Xaa/Lys-boroPro的合成均二价、均多价、杂二价和杂多价化合物可以如本文所述从合成H-boroPro和Lys-boroPro入手。使用H-boroPro和Lys-boroPro仅仅是为了示范的目的，无意限制本发明的范围。因此，Xaa/Lys-boroPro是一个可用于形成二价、均二价、均多价或杂二价化合物的结合部分的分子实例。在实施例开始的地方提供了有关本发明中使用的常规的肽偶合化学方法和程序的文献。具体地说，H-boroPro是借助以前研制和介绍的合成路径制备的(G.R.Flentke等人在“InhibitionofdipeptidylaminopeptidaseIV(DP-IV)byXaa-boroProdipeptidesanduseoftheseinhibitorstoexaminetheroleofDP-IVinT-cellfunction，”PNAS(U.S.A.)88，1556-1559(1991))；在美国专利第5,462,928号中也有介绍；此外，H-boroPro可以用新的方法生产(Kelly，T.A.等人，“Theefficientsynthesisandsimpleresolutionofaprolineboronateestersuitableforenzymeinhibitionstudies”，Tetrahedron49，1009-1016(1993))。这两种合成路径获得外消旋的H-boroPro蒎烷二醇。制备Z-Lys-boroPro的立体化学纯的L，L和L，D非对映体的方法如下首先将外消旋的H-boroPro通过与光学活性阻断保护基团[(1S，2S，3R，5S)-+-蒎烷二醇异构体]结晶来溶解，然后将同位素纯L-boroPro和D-boroPro与立体化学纯的赖氨酸的L-异构体(见美国专利第5,462,928号)偶合。另一种办法是制备高度光学纯的Lys-boroPro的L，L和L，D非对映体，其方法是将外消旋的H-boroPro与L-Lys偶合，然后将获得的非对映体Z-Lys-boroPro二酯分成它的L，D和L，L非对映体成份，此时使用的是如同以前所述的对非对映体Pro-boroPro所采用的反相HPLC方法[参阅W.G.GutheilandW.W.Bachovchin，“SeparationofL-Pro-DL-boroProintoItsComponentDiastereomersandKineticAnalysisofTheirInhibitionofDipeptidylPeptidaseIV.ANewMethodfortheAnalysisofSlow，Tight-BindingInhibition，”Biochemistry32，8723-8731(1993)]。因此有几条路径，通过这些路径可以获得Lys-boroPro的四种可能的立体异构体中的任何一种。但是只有抑制性DPIV的L，L异构体和非抑制性DPIV的L，D异构体在正常情况下可以制备成在免疫生物试验中的对照物。一般地说，在此制备的衍生物是采用光学纯的非对应体制备的，所以只能获得Lys-boroPro的L，D或L，L非对映体。一旦完成制备，这些Xaa-boroPro化合物与其它的Xaa-boroPro化合物偶合，例如，它们自身偶合，以形成均二价(均二聚体的)或多价化合物，或者与非Xaa-boroPro肽偶合，借此形成杂二价(杂二聚体)或多价化合物。实施例2均二价和杂二价化合物的合成和功能活性的评估在这个实施例中提供能够诱导两个CD26受体结合的低分子量的均二价化合物。合成的均二价交联化合物具在正常情况下与抗体结合的性质，即具有高亲合力、对CD26的特异性和诱导交联的能力。因此，用抗-CD26的单克隆抗体进行的任何试验都可以用一种或多种均二价化合物来完成，例如，免疫沉淀。但是，这些合成的配位体具有某些使它们与anti-CD26mAb互补的性质。这些包括(i)它们的结合的抗原决定基是DPIV的活性位点；(ii)它们呈现跨类的特异性和；以及(iii)它们在调整结合位点之间的距离和嵌合结构或杂二齿结构方面提供灵活性。I.均二价Xaa-boroPro衍生物和杂二价化合物的合成为了生产能够诱导一个细胞表面的CD26与另一个细胞表面的CD26结合并保持DPIV抑制活性的分子，采用常规的肽偶合方法将Lys-boroPro的一系列不同的均二价衍生物借助它们的ε-氨基通过包含两个羧酸基团的连接间隔剂分子(例如六个碳的间隔剂或连接剂基团)连接起来(见图3)。图3说明一种Lys-boroPro的均二价衍生物[即adipoyl(Lys-botoPro)2]的合成。这种连接方法包括使苄氧碳基赖氨酸-boroPro-二酯(Z-lys-boroPro-diester)与连接剂分子[例如己二酸(HOOC(CH2)4COOH)]偶合，这种在硼基部分上的二酯保护基团可以是四甲基乙二醇或蒎烷二醇。这种均二价(均二聚体)化合物的通用结构如图1B所示其中D1独立地选自NH和NH2，其中N表示氮的任何同位素，H表示氢的任何同位素；“-”独立地选自单键和双键；B独立地表示硼的任何同位素；A1独立地选自C、CS和N，其中C表示碳的任何同位素，X表示任何能够与C形成单键的其它原子；A2、A3和A4每个都独立地选自CX、CXZ、CZ、NX和O，其中X和Z都独立地选自任何能够与C或N形成单键的原子和任何能够与C或N形成双键的原子，O表示氧的任何同位素；Y1、Y2、Y3和Y4中每个都是独立地选自任何羟基部分和任何能在生理条件下转变成羟基的活性部分；以及L表示连接分子，该分子(i)分子量分布在大约100道尔顿至2000道尔顿范围内、(ii)跨距分布在大约20埃至大约300埃范围内、并且(iii)包含选自一组以不违背化学规律的方式靠单键或双键连接的由C、O、N、S和Ph原子组成的原子链，其中S表示硫的任何同位素，且Ph表示磷的任何同位素。上述结构不需要是一致的，其中可以包括图A所示的通用结构其中D1和D2独立地选自NH和NH2，其中N表示氮的任何同位素，H表示氢的任何同位素；“-”独立地选自单键和双键；B独立地表示硼的任何同位素；A1和A5独立地选自C、CX和N，其中C表示碳的任何同位素，X表示任何能够与C形成单键的其它原子；A2、A3、A4、A6、A7和A8每个都独立地选自CX、CXZ、CZ、NX和O，其中X和Z都独立地选自任何能够与C或N形成单键的原子和任何能够与C或N形成双键的原子，O表示氧的任何同位素；Y1、Y2、Y3和Y4中每个都是独立地选自任何羟基部分和任何能在生理条件下转变成羟基的活性部分；以及L表示连接分子，该分子(i)分子量分布在大约100道尔顿至2000道尔顿范围内、(ii)跨距分布在大约20埃至大约300埃范围内、并且(iii)包含选自一组以不违背化学规律的方式靠单键或双键连接的由C、O、N、S和Ph原子组成的原子链，其中S表示硫的任何同位素，且Ph表示磷的任何同位素。可以借助几种常规的偶合方法中的任何一种来完成偶合反应。例如，Lys-boroPro的均二价(均二聚体)衍生物可以在无水的THF中将被保护的Lys-boroPro与己二酸的酸性氯化物(即己二酰二氯)反应来制备，后者是市售的(Aldrch公司)。偶合之后在N端的保护基团Z可以借助催化加氢除去。去除硼基的保护可以借助采用苯基硼酸的酯基转移作用完成，并且采用两相的低pH值水溶液/有机溶剂进行萃取。II确定最佳的化学间隔连接剂为了确定适合引导一个细胞表面上的CD26与另一个细胞表面的CD26结合的最佳的间隔连接剂链段即连接剂分子，制备了一系列间隔剂链段长度不同的二价的Lys-boroPro的二聚体衍生物(见下面关于连接剂分子的讨论)。各种各样的二羧酸间隔连接剂分子可以在市场上买到。这包括内部具有各种杂原子和除端羧基之外还有其它官能团(如乙二醇二琥珀酸酯基，即图13所示的“EGS”)的连接剂分子。例如，在己二酸的位置上采用EGS将提供一种化合物，其间隔剂大约是己二酰长度的两倍。此外，内部的杂原子在类似长度的碳氢直链上提供改进的水溶性。图13给出EGS的结构，它被用作连接剂分子将两个KbP单体结合形成(KbP)2EGS。这种二聚体的合成可以采用适当的调整以模拟在此介绍的(KbP)2adipate的方式完成。EGS可以从许多化学品供应商那里买到。(KbP)2adipate和(KbP)2EGS都用于T细胞系H9的实验，以确定它们对活化(借助生成Il-2测量)和/或增生的影响。这些实验中有一些使用均二聚体分子作为已知的其他T细胞刺激因子的协同刺激因子，例如单克隆抗体OKT3。这些实验的结果示于图5和图12。III.实验方法为了确定(KbP)2adipate对anti-mAb刺激H9细胞的(例如遏制IL-2产生的刺激)的影响，采用下述程序进行。在一式四份的小孔中，将H9细胞与(KbP)2adipate一起预培养0、30、60或150分钟。在预培养之后，将这些细胞接种到96孔的平底培养盘上，在该平底培养盘上预先涂有稀释了1,000、5,000、10,000、20,000、50,000或100,000倍的anti-CD3单克隆抗体OKT3原液。24小时之后，借助在4℃下冷冻使细胞溶胞。采用IL-2依赖的细胞系HT2用生物法检定溶胞的H9细胞中的IL-2浓度，参阅Watson，J.D.“ContinuousproliferationofmurineantigenspecifichelperTlymphocytesinculture”，1979，JournalofExperimentalMedicine，1501510。HT2增生是借助3H-胸腺嘧啶核苷吸收计数测量的。用(KbP)2-EGS和协同刺激抗体OKT3进行类似的试验，实验结果示于图12。IV.结果图4和图5说明在anti-CD3mAb刺激H9细胞时观察到的剂量曲线随KbP2-Adipate浓度的变化，它是借助生成IL-2来显示的。本发明人认为用较高浓度的KbP2-Adipate观察到的刺激作用是由于在两个不同的二价的二聚体分子之间发生分子间反应的结果。这意味着可能借助B-N键将一个二价分子的氨基结合到另一个二价分子的硼原子上形成两个不同的二价的二聚体分子之间的分子间反应。这个过程可以连续的进行以至形成各种长度的聚合物。在聚合后的平衡点，形成新的二价化合物，该化合物的连接剂跨矩比一个二聚体化合物的连接剂跨矩的尺寸大两倍。例如，最后得到的新二价化合物(如图7所示)已经从每个二聚体上失去结合部分，但是现在具有的连接剂跨矩比原来的连接剂尺寸大两倍。图7说明可能在较高的KbP2-Adipate浓度下发生的分子间的反应。图12说明用KbP2-EGS进行实验获得的结果，其中两个KbP单体靠EGS间隔剂链接起来，该间隔剂的长度是制作均二聚体KbP2-Adipate所用己二酸间隔剂长度的两倍。用KbP2-EGS的实验结果呈现与KbP2-Adipate的结果类似的图形，如图12所示。例如，与激活T细胞的抗体OKT3有协同刺激作用。此外，在KbP2-EGS处于低浓度(介于10-6M至10-12M之间)下观察到最大的刺激效果，并且在(单独或与OKT3一起获得)峰值刺激效果之后浓度增加(10-5M)观察到的激活作用反而减小。实施例3为引导细胞表面受体之间的结合作用设计的均多价聚合物化合物在这个实施例中，介绍各种各样的均多价化合物实例。上述常规的肽合成法可以用于制备这些化合物。多价的通用模板具有图1R所示结构其中D独立地选自NH和NH2，其中N表示氮的任何同位素，H表示氢的任何同位素；“-”独立地选自单键和双键；B独立地表示硼的任何同位素；A1独立地选自C、CX和N，其中C表示碳的任何同位素，X表示任何能够与C形成单键的原子；A2、A3和A4每个都独立地选自CX、CXZ、CZ、NX和O，其中X和Z独立地选自任何能够与C或N形成单键的原子和任何能够与C或N形成双键的原子，O表示氧的任何同位素；Y1和Y2每个都是独立地选自任何羟基部分和任何在生理条件下能转变成羟基部分的活性部分；n排他地表示1和200之间的一整数；E1和E3是性质不同的活性基团，其中(a)R和R’是分子中与这个反应无关的其余部分；(b)E1借助共价键连接到R’上，用E1-R’或R’-E1一并表示；(c)E3借助共价键连接到R上，用E3-R或R-E3一并表示；(d)R’表示E1-R中不经受化学反应的部分；(e)R表示R-E3中不经受化学反应的部分；(f)E1经历同E3的化学反应，形成产物E1’-E3’和副产物F，其中F选自2H+和2e-、H2O和任何其它副产物；(g)其中H+是氢的任何同位素的阳离子、e-是电子；(h)其中H表示氢的任何同位素，O表示氧的任何同位素；(i)其中E1’和E3借助共价键结合；(j)E1不经历与另一个E1的化学反应；(k)E3不经历与另一个E3的化学反应；以及(l)E1和E3选自羧酸酯基、氨基、咪唑啉基、硫氢基、醛、酯以及其它活性物质；其中[J]p、E2、[I]q和[G]m都是连接剂部分，而且[G]m、[J]p和[I]q独立地代表连接剂分子，该分子(i)分子量分布在大约100道尔顿至2000道尔顿范围内、(ii)跨距分布在大约20埃至大约300埃范围内、并且(iii)包含选自一组以不违背化学规律的方式靠单键或双键连接的由C、O、N、S和Ph原子组成的原子链，其中S表示硫的任何同位素且Ph表示磷的任何同位素；m、p和q独立地表示选自1至50的整数；以及E2选自CX、CH、N、PhYZ、PhU和任何能与[J]p、[I]q和[G]m形成共价键的其他部分，并且其中(a)C是碳的任何同位素；(b)X是任何能与碳形成单键的原子的同位素；(c)H是氢的任何同位素；(d)N是氮的任何同位素；(e)Ph是磷的任何同位素；(f)Y是能与磷形成单键的任何原子的任何同位素；(g)Z是能与磷形成单键的任何原子的任何同位素；以及(h)U是能与磷形成双键的任何原子的任何同位素。此外，下图表示结合部分，R表示在这种聚合化合物中分子的其余部分及本发明的多价化合物可以是二聚体(即n等于1)至大约50聚体(即n等于49)。当结合部分重复2次(二聚体)以上时，该化合物必然是具有有限个重复结合部分的“聚合的”化合物。实施例4为诱导CD26受体与T细胞表面受体(TCR/CD3)结合而设计的杂二价化合物的合成构成杂二价(也称为杂二齿或杂二聚体)化合物或制剂将得到能够在CD26与不同的细胞表面受体之间诱导结合的制剂。这种杂双官能团的分子具备有意义的生物活性并且可作为药物使用。本发明的杂二价化合物的通用结构如图2A所示其中D独立地选自NH和NH2，其中N表示氮的任何同位素，H表示氢的任何同位素；“-”独立地选自单键和双键；B独立地表示硼的任何同位素；A1独立地选自C、CX和N，其中C表示碳的任何同位素，X表示任何能够与C形成单键的原子；A2、A3和A4每个都独立地选自CX、CXZ、CZ、NX和O，其中X和Z独立地选自任何能够与C或N形成单键的原子和任何能够与C或N形成双键的原子，O表示氧的任何同位素；Y1和Y2每个都是独立地选自羟基部分和任何在生理条件下能转变成羟基的活性部分；L表示连接剂分子，该分子(i)分子量分布在大约100道尔顿至大约200道尔顿范围内、(ii)跨距分布在大约20埃至大约300埃范围内、并且(iii)包含选自一组以不违背化学规律的方式靠单键或双键连接的由C、O、N、S和Ph原子组成的原子链，其中S表示硫的任何同位素且Ph表示磷的任何同位素；以及P表示分布在3至30个氨基酸范围内的肽，其顺序同系足以与天然生成的受体结合。P可以是选择地与CD26结合的肽，但是不与位于CD26活性中心的氨基酸形成共价键或复合物。这种化合物被认为是杂二价化合物，因为只存在一个活性基团。已经构成Lys-boroPro的两种不同的杂二价化合物，并且进行了试验。这两种化合物仅仅是作为实例提出的，决无限制本发明的倾向。在一种杂二价化合物中，Lys-boroPro被连接到致脑炎的髓磷脂蛋白脂质蛋白质的C端羧酸酯上(PLP139-151；图2C；见下面的讨论)。在第二种杂二价化合物中，Lys-boroPro被链接到蛾细胞色素C的抗原肽上(MCC，图2B，见下面的讨论)。两种化合物是这样设计的，以至将诱导CD26与另一个T细胞受体(TCR/CD3)之间的结合。下面提交的数据证明这两种杂二齿分子的刺激性比单独使用肽要强得多。I.为诱导CD26与T细胞表面受体(TCR/CD3)之间的结合而与髓磷脂蛋白脂质蛋白质(PLP)连接的Lys-boroPro的合成蛋白脂质蛋白质(PLP)是中枢神经系统髓磷脂的主要蛋白质。Kuchroo和他的同事们已经证明接受对应于PLP的139-151残基的肽[HSLGKWLGHPDKF(SEQ.ID.NO.22)(PLP139-151)]的免疫的小鼠发展了实验的急性自身免疫脑脊髓炎。[Kuchroo，V.K.等人，“Inductionofexperimentalallergicencephalomyelitisbymyelinproteolipid-proteinspecificTcellclonesandsyntheticpeptides”，Pathobiology59，305-312(1991)；Kuchroo，V.K.等人，“T-cellreceptoralphachainplaysacriticalroleinantigen-specificsuppressorcellfunction”，PNAS(U.S.A.)88，8700-8704(1991)；Kuchroo，V.K.等人，“ExperimentalallergicencephalomyelitismediatedbyclonedTcellsspecificforasyntheticpeptideofmyelinproteolipid-protein.FinespecificityandTcellreceptorVbetausage”，J.Immunol.148，3776-3782(1992)；Kuchroo，V.K.等人，“Cytokinesandadhesionmoleculescontributetotheabilityofmyelinproteolipidprotein-specificTcellclonestomediateexperimentalallergicencephalomyelitis”，J.Immunol.151，4371-4382(1993)；Kuchroo，V.K.等人，Tcellreceptor(TCR)usagedeterminesdiseasesusceptibilityinexperimentalautoimmuneencephalomyelitisstudieswithTCRVbeta8.2transgenicmice，JournalofExperimentalMedicine179，1659-1664(1994)；和Kuchroo，V.K.，等人，AsingleTCRantagonistpeptideinhibitsexperimentalallergicencephalomyelitismediatebyadiverseTcellrepertoire，J.Immunol.153，3326-3336(1994)]。PLP139-151还在培养基中诱导T细胞的增殖。机理涉及T细胞受体(TCT)的识别和在II类主要组织相容性复合物(MHC)内的这种肽的结合。MHC是一簇给MHC细胞编码的在人染色体6或鼠染色体17上的基因。I类MHC分子或蛋白质是在胞质体中产生的对CD8T细胞的提呈肽。II类MHC分子或蛋白质是在细胞囊中降解的对CD4T细胞的提呈肽。MHC是迄今在人类染色体组中已知的最多形的基因蔟，该染色体组在几个不同部位具有大量的等位基因。由于这种多形核白细胞通常是利用抗体或特异性T细胞检测的，MHC蛋白质往往被称为“主要组织相容性抗原”。这样就容易操纵抗原肽以将它从促效药转换成拮抗药[Jorgensen，J.L.等人在MolecularcomponentsofT-cellrecognition，Annu.Rev.Immunol.10，835-873(1992)]。取代氨基酸的系统研究已经证明Trp144和His147对于TCR结合是必要的，在序列中以黑体表示，而Leu145和Pro148对MHC的结合是必要的，在序列中以下划线表示。关于II类MHC受体的晶体结构数据表明在与抗原肽结合的分子顶部的裂缝向两侧张开，这就可以提呈较长的肽，只要简单地让它们向远离MHC受体的方向伸展即可。反之，I类MHC受体只适应9至12个氨基酸的短肽，而且抗原肽的末端不是自由的。所以上述事实意味着与PLP139-151连接的Lys-boroPro的二价杂二聚体可以被构成，而且它在抗原提呈细胞上同时与T细胞表面受体(TCR)、CD26(见图8)以及MHCII结合。图8表示与髓膦脂蛋白脂质蛋白质(PLP)肽139-151连接的Lys-boroPro。在PLP情况下，被制备的杂二聚体的形式是HSLGKWLGHPDKFAAAAAA-∈KbP(SEQ.ID.NO.23-∈KbP)，其中HSLGKWLGHPDKF(SEQ.ID.NO.22)是PLP139-151，而AAAAAA(SEQ.ID.NO.21)是由6个丙氨酸组成的连接剂，∈KbP是Lysline-boroProline，其中赖氨酸的∈氨基通过共价键链接在HSLGKWLGHPDKFAAAAAA(SEQ.ID.NO.23)的-COOH端。第一个合成步骤是为从合成肽实验室购买定做的肽。利用长期以来建立的程序从以固定在树脂上的丙氨酸为起点的C端开始形成肽，然后用受保护的氨基酸按顺序添加AAAAAFKPHGLWKGLSH(SEQ.ID.NO.25)。然后从树脂上取下肽，以赋予自由的-COOH端，该端能经过反应形成肽键。由于有保护基团，其它残基HSLGKWLGHPDKFAAAAA(SEQ.ID.NO.24)是无活性的。Lysine-boroProline与肽偶合，其中赖氨酸的α-NH2受到保护，boroProline的B(OH)2用蒎烷二醇保护，而赖氨酸的ε-NH2是自由的。偶合是用常规的肽化学技术形成的肽键(-(C＝O)-NH-)。然后，去掉保护得到最终的产物。选择由6个连贯的Ala残基组成的间隔连接剂以提供允许交联的跨距(约等于30埃)。检验PLP-S-KbP对几种识别PLP-139-151的不同的T细胞克隆的增殖作用。识别无关的抗原决定基的细胞克隆被用作阴性参照物。所用的程序在Kuchroo，V.K.等人的报告“B7-1andB7-2CostimulatoryMoleculesActivateDifferentlytheTh1/Th2DevelopmentalPathwaysApplicationtoAutoimmuneDiseaseTherapy”(Cell80，707-718(1995))中已有介绍，在此通过引述将其合并于本文。增殖是借助胸腺嘧啶苷的吸收确定的。下述表1比较了PLP-S-KbP、PLP139-151抗原肽以及PLP103-116非抗原肽对5种不同的PLP139-151族T细胞克隆的增殖的影响。结果表明，PLP-S-KbP有力的提高了对5种139-151特异性克隆的PLP139-151的增殖反应。就产生给定反应所需的浓度而论，提高的范围从100倍到1000倍以上。例如，对于列出的第一种T细胞克隆(5B8.G8.E6.H12)，0.1μM的PLP-S-KbP诱导的反应是以100倍浓度的PLP139-151所诱导的反应的约二倍，相当于提高了几乎200倍。类似地，由于0.1μM的PLP-S-KbP产生的反应几乎是1000倍浓度的PLP139-151所诱导的反应的二倍，所以在4E3.B11.D9.H10.H6细胞中诱导的反应几乎提高2000倍。这些结果表明，为CD26与TCR交联而设计的低分子量的合成分子PLP-S-KbP有力地提高了对被T细胞受体识别的抗原的T细胞反应。表1PLP-S-KBP在对几种PLP131-151为特异性的T细胞克隆的增殖中的作用剂量(μM)</tables>*3H计数II.为诱导CD26受体与T细胞表面受体(TCR/CD3)之间的结合而与蛾细胞色素C肽(MCC)94-103连接的Lys-boroPro的合成蛾细胞色素C(MCC)94-103肽是在本发明中使用的另一种肽。MCC在添加到鼠2B4T细胞杂交瘤培养物时强烈地诱导IL-2的生成和T细胞的增殖。对与TCR结合和与II类MHC结合为至关重要的残基是已知的[Jorgensen，J.L.等人，“MolecularcomponentsofT-cellrecognition”，AnnuRev.Immunol.10，835-873(1992)]。由于对与MHC和TCR结合为至关重要的残基位于C端附近，所以Lys-boroPro借助间隔连接剂与这种肽的N端偶合，其中间隔连接剂的长度与将Lys-boroPro连接到PLP肽上时所用的连接剂大体相同。这种分子被指定为KbP-S-MCC，以表明与N端偶合。图9比较二价的二聚体分子KbP-S-MCC与MCC94-103本身对2B4T细胞中IL-2生成的影响。2B4T细胞杂交瘤的增殖随蛾细胞色素C肽94-103而异。肽2B4系统对于这些研究是理想的，因为在MCC94-103与TCR之间的竞争点已被确定[Jorgensen，J.L.等人，“MolecularcomponentsofT-cellrecognition”，Annu.Rev.Immunol.10，835-873(1992)]。2B4细胞是以10+5/well的数量用H-2k和不同浓度的KbP-S-MCC或MCC本身培养的。在24小时之后，收获上层清液，并且以与上述的化验PLP肽相同的方式利用HT-2指示剂细胞通过生物检验确定IL-2的含量。结果表明Lys-boroPro偶合到MCC上有力地增强对MCC抗原肽的反应。甚至在KbP-S-MCC的最低浓度进行试验(例如0.4μMKbP-S-MCC)，KbP-S-MCC诱导的反应至少是单独用MCC肽以高10倍的浓度获得的最大反应的2倍(见图9)。这些结果表明为使CD26和TCR交联而设计的低分子量的合成分子(如KbP-S-MCC)有力地增强对被T细胞受体识别的抗原的T细胞反应。III.为诱导CD26受体与T细胞表面受体(TCR/CD3)之间的结合而与其他肽连接的Lys-boroPro的合成这个实施例介绍对某些肽(例如PLP肽、MCC肽)优选的结合部分-活性基团(Lys-boroPro)的合成。预计该程序也可以用于合成其中Lys-boroPro(或其替代物)与肿瘤的抗原肽或传染病的抗原肽偶合的化合物。我们将制备一些包括以前曾表现为拮抗药的PLP肽或MCC肽的各种衍生物的其他杂二聚体，并且将进行各种研究，以确定将这些肽与Lys-boroPro连接是否增强它们的拮抗活性，或者将它们转变成促效药分子。破伤风类毒素肽P2也是有意义的，因为它提供了一种涉及人体外周血液单核细胞(PBMC)的试验系统设计[Wyse-Coray，T.等人，“Useofantibody/peptidesconstructsofdirectantigenicpeptidestoTcellsevidenceforTcellprocessingandpresentation”，CellularImmunology，139(1)268-73，(1992)]。业已发现，破伤风类毒素肽的P2肽在迄今所有受试HLA单模标本中诱导反应[Panina-Bordignon，P.等人，“UniversallyimmunogenicTcellepitopesPromiscuousbindingtohumanMHCclassIIandpromiscuousrecognitionbyTcells”，Eur.J.Immunol.19，2237-2242(1989)]。因此，将制备与破伤风类毒素肽P2肽偶合(连接)的Lys-boroPro的二价二聚体。将对各种尺寸的不同的连接剂进行试验，以确定对这种肽的最佳长度。生产与破伤风类毒素肽P2肽连接的Lys-boroPro的二价二聚体所需的偶合化学与前面的介绍相同。此外，其他能够诱导CD26和T细胞表面受体(如TCR/CD3)结合的分子可以通过将Lys-boroPro或其他结合部分与就II类MHC受体而论已知能与T细胞受体结合的各种肽的C端或N端的活性基团偶合来制备。可以使用类似于制备[PLP139-151]-KbP-S-MCC和KbP-S-MCC时所用的程序。实施例5为诱导CD26受体与CD4T细胞表面受体结合而设计的杂二价化合物的合成还可以制备为诱导CD26受体与CD4受体结合而设计的包含Xaa-boroPro的杂二价化合物。已知与CD4结合的分子(如来源于HIV-1GP120蛋白质的肽)将与Xaa-boroPro偶合[Ebenbichler，C.等人，“Structure-functionrelationshipsoftheHIV-1envelopeV3looptropismdeterminantevidencefortwodistinctconformations”，Aids7，639-46(1993)；Linsley，P.S.等人，“Effectsofanti-gp120monoclonalantibodiesonCD4receptorbindingbytheenvproteinofhumanimmunodeficiencyvirustype1”，JrournalofVirology62，3695-702(1988)；Rini，J.M.等人，“Crystalstructureofahumanimmunodeficiencyvirustype1neutralizingantibody，50.1，incomplexwithitsV3looppeptideantigen”，PNAS(U.S.A.)90，6325-9(1993)]。Xaa-boroPro分子(如Lys-boroPro)将采用针对Lys-boroPro与PLP肽的偶合介绍的那种偶合技术与来源于HIV-1GP120蛋白质的一种肽偶合。当然，本文中介绍的任何非硼基的其它活性基团也可以在硼基基团的位置上使用，以便获得另一种实施方案。可以通过评估各种尺寸不同的间隔连接剂，以确定诱导CD26和CD4结合的最佳长度。实施例6为诱导CD26与其它T细胞表面受体结合而设计的杂二价化合物可以制备为诱导CD26受体与其它T细胞表面受体(例如粒细胞菌落刺激因子)结合而设计的包含Xaa-boroPro的杂二价化合物。例如，细胞因子粒细胞菌落刺激因子(G-CSF或粒细胞巨噬细胞菌落刺激因子，GM-CSF)是借助T细胞和巨噬细胞与在T细胞表面上的它们自己的受体(粒细胞菌落刺激因子的受体)的结合而产生的。粒细胞菌落刺激因子的二价二聚体形式能够借助在骨髓单核细胞谱系的细胞中刺激增长或分化或两者来增强粒细胞菌落刺激因子的效能。这种化合物可以通过采用标准的偶合技术使粒细胞菌落刺激因子与Lys-boroPro偶合来制备。可以通过评估各种尺寸不同的间隔连接剂，以确定其诱导CD26和菌落刺激因子的受体结合的最佳长度。干细胞因子(c-kit配位体)在干细胞发育中是基本的并且结合到位于T细胞上的干细胞受体上。在B细胞的发育中CD44的结合也许没有发送信号的功能，而是代之以促进被称为c-kit的受体的结合。淋巴样祖代细胞和早期pro-B细胞经CD44与基质细胞上的透明质酸结合，促进其表面c-kit酪氨酸激酶与基质细胞表面上的干细胞因子(SCF)的结合，使激酶活化并诱导增生。干细胞因子的二价杂二聚体形式(例如借助与Lys-boroPro偶合)将增强SCF的效能。杂二聚体化合物Lys-boroPro-SCF可以采用类似于上述方法的方法制备。各种不同尺寸的间隔连接剂将经过试验，以确定其适合诱导CD26受体与干细胞因子的受体结合的最佳长度。实施例7与全D-氨基酸肽连接的二价化合物的合成，其中氨基酸肽是为预防蛋白水解反向合成的这个实施例是为合成与不同的肽连接的二价化合物设计的，其中的肽是耐天然蛋白水解的，例如与“被保护的”PLP偶合的Xaa-boroPro。在这个实施例中，“被保护的”意味着肽已经按反方向合成出来并且空间螺旋特征也有变化。逆反异构体进化过程已经保证在天然生成的蛋白质中几乎排他地生成L-氨基酸。所以，所有的蛋白酶实际上都是酶切毗邻L氨基酸的肽键；因此由D-氨基酸组成的人造蛋白质或肽是相当耐蛋白质水解的。这种耐受力对药物设计者是有吸引力的，但是适合L-氨基酸组成的蛋白质的生物系统的排他性意味着这种蛋白质不能与由对映体的蛋白质形成的镜面映象表面相互作用。因此，所有的D-氨基酸通常没有生物效应或活性。线性的改进的反向肽的结构已经被研究了很长时间[Goodman，M.等人，“OntheConceptofLinearModifiedRetro-PeptideStructures”，AccountsofChemicalResearch，12(1)，1-7(January，1979)]，而且术语“反向异构体”包括与母体肽序列方向相反的异构体。术语“逆反异构体”意味着一种线性肽的异构体，其中序列的方向是相反的而且每个氨基酸残基的空间螺旋特征被倒转，因此，可能没有端基互补。最近，Jameson等人报告了借助这两种性质(反向合成与空间螺旋特征变化)设计制作CD4受体的发夹环的类似物[Jameson等人，“ArationallydesignedCD4analogueinhibitsexperimentalallergicencephalomyelitis”，Nature，368，744-746(1994)和Brady，L.等人，“ReflectionsonaPeptide”，Nature，368，692-693(1994)]。将D-对映异构体与反向合成结合的总效果是在每个酰胺键中羧基和氨基的位置交换，而每个α碳侧链基团的位置却得到保留。Jameson等人的报告表明对于他们的反向D-肽生物活性有所增加，这与其所有常规的L-对映异构体(由于对蛋白质水解敏感)在体内的有限活性形成鲜明对照。已有报告说将部分改进的逆反假肽作为I类人体组织相容性分子HLA-A2的非天然的配位体的使用[Guichard等人，“PartiallyModifiedRetro-InversoPseudopeptidesasaNon-NaturalLigandsfortheHumanClassIHistocompatibilityMoleculeHLA-A2”，J.Med.Chem.39，2030-2039(1996)]。这些作者报告说这种非天然的配位体具有提高的稳定性和与MHC高度结合的能力。适合并入本发明化合物中的逆反肽(例如在本发明概述中式I所示的化合物中的P2肽)是以下述方式针对已知顺序的肽制备的。选择具有已知顺序的肽(例如肿瘤抗原肽)作为用于设计和合成逆反肽类似物的模型肽。采用D-氨基酸合成该类似物，在肽链中的氨基酸的连接使在逆反肽类似物中的氨基酸顺序精确地与选定作为模型的肽相反。为了说明，如果肽模型是肿瘤抗原，如由L-氨基酸构成的MAGE-1肽A1，其顺序为ADPTGHSY，那么这种肿瘤抗原的逆反肽类似物(由D-氨基酸构成)将具有顺序YSHGTPDA。合成D-氨基酸链以形成逆反肽的程序在本
技术领域：
是已知的，而且在上述文献已有说明。由于天然肽固有的问题是被天然蛋白酶降解，所以将制备本发明的杂二价或杂多价化合物，以便包括所需肽的“逆反异构体”。所以，要保护肽免遭天然的蛋白质水解，就应当提高这些杂二价化合物或杂多价化合物的有效性。可以使用在实施例4第1节中给出的用于合成PLP139-151-KbP的程序来合成上述杂二价逆反化合物，在需要时可对该程序进行改进。主要的改进是(1)反向合成肽和(2)用D-氨基酸作原料。与逆反PLP139-151连接的逆反杂二聚体-Lys-boroPro的生物活性可以与杂二聚体参照物相比较，即与常规的PLP139-151连接的Lys-boroPro相比较。T细胞的活性可以象在实施例4第1节中介绍的那样监测。与非逆反模拟物相比，由于逆反杂二聚体阻止天然蛋白酶的降解作用，所以，预计它将有较高的生物活性。实施例8最佳连接剂分子的确定为了确定能够诱导一个细胞表面CD26受体与另一个细胞表面CD26受体或其它受体结合的最佳连接剂分子链段，制备了一系列二价的具有不同长度间隔链段(连接剂分子)的二聚体化合物。各种各样的二羧酸间隔连接剂分子是市售的(见下面的讨论)。这包括内部具有各种杂原子和除终端羧基之外还有其它官能团(如乙二醇双琥珀酸亚乙酯)的连接剂分子。单克隆抗体的结合位点之间的距离由于各自的特点而不同，但通常介于大约30埃至大约100埃。因此，为构建本发明的均二价和杂二价化合物而设计的大多数连接剂分子通常在大约20埃至大约300埃范围内；更具体地说，从大约30埃到大约100埃。例如，所以选中由6个连续的Ala残基组成的间隔连接剂是因为它的间隔长度最小(大约30埃)且足以实现交联。使用连接剂乙二醇双琥珀酸亚乙酯(代替己二酸)提供了一种二价化合物，其间隔连接剂长度大约二倍于己二酰部分。此外，内部的杂原子可以改进长度相似的碳氢直链的水溶性。A.可应用的连接剂分子的技术背景化学交联剂是供科学家使用的工具，并且在许多的书本和产品样本(例如PierceCatalogandHandbook，Rockford，Ill.)中进行了讨论。这些试剂用于帮助确定蛋白质中的近邻关系、蛋白质的三维结构、酶-底物的取向、固相的固定化、半抗原-载体蛋白质的共轭、以及在细胞膜中的分子结合。它们对于制备抗体-酶共轭物、免疫毒素和其它带标记的蛋白质试剂也是有用的。对两种以上成份组成的共轭物的分析是困难的，并且缺乏有关蛋白质亚单位空间排列的资料。组成成份的数目应当保持少或最小。像许多应用一样，保持蛋白质复合体的天然结构是必要的，所以交联剂往往包含与肽的氨基酸侧链偶合的官能团。双官能团的试剂的分类基于下述原则1.官能团及其化学特性；2.交联桥的长度；3.交联基团是否相似(均双官能团)或不同(杂双官能团)；4.该基团究竟是参与化学反应还是参与光化学反应；5.该试剂是否是可裂解的；6.该试剂是否可被放射标记或被其它的标记物标记。能用作交联剂靶标的活性基团包括伯胺、巯基、羰基、碳水化合物和羧酸(将在下面讨论)。此外，任何活性基团都能用诸如有光活性的叠氮基苯之类的交联剂不加选择的偶合。具有不同长度的间隔臂或桥的交联剂是可以购买的。这些桥连接两个活性端。桥的最明显的特征是它处理待连接部分空间补偿的能力。由于空间作用限定可能发生交联反应的部位之间的距离，所以对于不同的相互作用，需要不同长度的桥。在正常情况下，使用短间隔臂(4-8埃)的交联剂并确定关联程度。如果不成功，采用较长间隔臂的交联剂。较短的间隔臂往往用于分子内的交联研究。对分子间的交联采用间隔臂较长的交联剂则比较有利。为了确定交联剂与蛋白质的最佳摩尔比，必须考虑许多因素。根据应用，共轭程度是重要因素。例如，在制备免疫原共轭物时，通常需要高度共轭以增加抗原的免疫原性。而且，在与抗体或酶共轭时，低到中等程度的共轭对于保证蛋白质的生物活性可能是最佳的。考虑位于蛋白质表面的活性基团数也是重要的。如果有许多目标基团，采用较低的交联剂与蛋白质比。对于有限数量的潜在目标，需要较高的交联剂与蛋白质比。换言之，对于每克小分子量的蛋白质需要较多的交联剂。与具体的相互作用相关的蛋白质的构象变化可以通过在相互作用发生前或后进行交联研究来分析判断。通过采用不同臂长的交联剂并且分析成功的共轭来进行比较。在蛋白质的构象变化以至受阻的氨基酸可能用于交联时，采用具有不同反应基团和/或间隔臂的交联剂可能是符合需要的。共轭试剂至少包含两种活性基团。均双官能团的交联剂可以包含至少两个一致的活性基团，而杂双官能团的试剂包含两个或多个不同的活性基团。通过胺、巯偶合或无特异性反应的均双官能团交联剂可以从许多商业来源获得。B.均双官能团交联剂均双官能团交联剂至少有两个一致的活性基团，而且往往用于一个步骤的反应程序中，在该反应程序中各种待偶合的化合物被混合，交联剂被添加到溶液中。这种交联方法可能导致自共轭、分子内交联和/或聚合。1.伯胺活性基团有两种主要类型的均双官能团亚氨酸酯和均双官能团的N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)酯。市售的均双官能团亚氨酸酯尺寸范围从大约8埃至大约11.9埃。市售的均双官能团的N-羟基琥珀酰亚胺酯尺寸范围从大约6.2埃至大约16.1埃。因为通常在蛋白质中能发现伯胺，所以双官能团的NHS酯交联剂是最通用的共轭试剂。两者均得到稳定的衍生物。2.巯基活性基团马来酰胺、烷基卤和芳基卤、α-卤代酰基和吡啶基二硫化物都是硫醇活性基团。这些试剂与巯基反应迅速，使它们成为硫醇选择性的。马来酰胺、烷基卤和芳基卤、α-卤代酰基以及与巯反应形成两种硫醇键。吡啶基二硫化物与巯反应产生混合的二硫化物。吡啶基二硫化物的产物是可裂解的。3.非选择性的基团非选择性的均双官能团对于官能团共轭是有用的，例如羟基，对它没有可用的特异性交联剂。非选择性均双官能团交联剂的实例是BASED(Pierce公司的产品#21564)。这种交联剂具有长间隔臂和两个芳环，这使它在含水体系中具有有限的溶解度和非常好的亲水性。这种交联剂还具有相当强的扩散能力，在共轭开始前将透过细胞膜。C.杂双官能团的交联剂杂双官能团交联剂拥有两个或多个不同的活性基团，这样可以同蛋白质的特异性基团进行顺序的共轭，以使不符合需要的聚合和自共轭降低到最小程度。当难以修饰胺时，往往使用杂双官能团的试剂。有时可能发现胺在大分子的活性部位，并且修饰它们可能导致失去活性。而另外的部分(如巯基、羧基、酚和碳水化合物)可能是更适当的目标。两步走的策略可以使蛋白质偶合，它允许将其中的胺变动到带其他易接受基团的蛋白质上。从市场上可以买到各种杂双官能团交联剂，每一种都将适合成功共轭的不同属性结合起来。市售的主要的杂双官能团交联剂包含可与胺反应的官能团。一端可与胺反应的、另一端可与巯反应的交联剂是相当常见的。市售的杂双官能团交联剂的尺寸范围从大约0埃(EDC，Pierce公司)至大约15.6埃。在使用杂双官能团试剂时，最不稳定的基团应当首先反应，以保证有效的交联和避免不需要的聚合。大多数杂双官能团交联剂是可与巯基反应的NHS酯。可与巯基反应的基团通常是马来酰胺、吡啶基二硫化物和α-卤代酰基。碳化二亚胺是可与羧基和胺反应的。活性能够控制并且包含一个天生是非活性的基团的杂双官能团交联剂具有独特的优点。这可供首先连接不稳定基团使用，然后第二个反应可以在适当的时候开始。包含至少一个光亲合基团的杂双官能团试剂可以在市场上选购。这种选择包括可碘化的和可裂解的试剂，这类试剂非特异性地以叠氮基团与胺、巯基、碳酸酯和羰基反应。可光活化的双官能团交联剂比双官能团的化学交联剂更适合形成共价键交联。光化学试剂的高活性为形成基团特异性试剂所不可能实现的共轭创造条件。但是，采用光敏交联剂得率低，低于10％的得率应当被看作是可接受的。D.不同的化学基团的活性1.亚氨基酯交联剂亚氨基酯均双官能团交联剂是第一批被用于将蛋白质固定到固相载体上的试剂。它们广泛用于研究蛋白质结构和膜内分子结合。虽然这些交联剂仍然在蛋白质亚单位研究和固相固定化中使用，但是它们已经逐步地被更稳定、更有效的均双官能团NHS-酯交联剂取代。均双官能团亚氨基酯在交联之后保留蛋白质上的净电荷。间隔臂长度范围从大约8.6埃至大约11.9埃。亚氨基酯交联剂在碱性pH值条件下与胺反应迅速，但它们的半衰期短。亚氨基酯对于蛋白质-蛋白质之间的交联也是非常有用的。这些交联剂渗过细胞膜并且使蛋白质在膜内交联，以便研究膜的组成、结构、以及蛋白质-蛋白质和蛋白质-脂的相互作用。亚氨基酯对于形成低聚体也是有用的。例如，使蛋白质交联形成低聚体可以揭示究竟是二聚体还是三聚体的二价形式蛋白质对活性负责。2.N-羟基琥珀酰亚胺-酯(NHS-酯)NHS-酯在与伯胺或叔胺反应时得到稳定的产物。在生理pH值条件下偶合是有效的，在溶液中NHS-酯交联剂也是比它们的亚氨基酯对应物更稳定。均双官能团NHS-酯共轭通常在一步或两步反应中用于使包含胺的蛋白质交联。伯胺是NHS-酯的主要目标。存在于蛋白质N端可达的α-胺与NHS-酯反应并形成酰胺。但是，因为蛋白质上的α-胺并非总是可以利用的，与氨基酸的侧链反应变得重要起来。尽管在它们的侧链中5个氨基酸都有氮，但是只有ε-胺与NHS-酯反应。在NHS-酯交联剂与伯胺反应时，释放N-羟基琥珀酰亚胺，并形成酰胺共价键。3.通过巯基偶合通过巯基偶合是有优点的，因为它可以是部位定向的、能够得到可裂解的产物并允许进行顺序偶合。在复合物的混合物中，如果该蛋白质是唯一在其表面有自由巯基的蛋白质，那么它可以被特异性标记。a.马来酰胺当反应混合物的pH值保持在pH6.5至pH7.5之间时马来酰胺对于巯基是特异性的。在pH值为7时，马来酰胺与巯基反应比与胺的反应快1000倍。马来酰胺不与酪氨酸、组氨酸或蛋氨酸反应。b.卤代乙酰最通用的α-卤代乙酰在生理pH值下与巯基反应。碘代乙酰与巯基反应是借助碘的亲核取代进行的，硫醇生成稳定的硫醚键。对巯基的选择性是靠在pH8.3下采用数量仅仅略微超过巯基基团数的碘代乙酰基团来保证的。在缺乏游离巯基时，或如果碘代乙酰基团数严重超过巯基基团数，碘代乙酰可能与其他氨基酸反应。c.吡啶基二硫化物吡啶基二硫化物与巯基反应，形成二硫键。作为这个反应的副产物释放出吡啶2-硫酮，这些试剂可以用作交联剂并将巯基引入蛋白质。4.通过羧基偶合碳化二亚胺碳化二亚胺使羧基与伯胺偶合或肼偶合，导致形成酰胺键或腙键。碳化二亚胺不同于其它的共轭反应，其中在被偶合的分子之间不形成交联桥。蛋白质的羧基端以及谷氨酸和天冬氨酸的侧链可以作为目标。在有过量的交联剂存在的情况下由于蛋白质包含羧基和胺，所以可能发生聚合。由于没有形成交联桥而且酰胺键与肽键相同，所以不破坏蛋白质就不可能使交联逆转。EDC(Pierce公司)与碳环酸基团反应并激活羧基，允许它与反应混合物中的氨基基团(R4NH2)偶合。5.非选择性标记芳基叠氮化物光亲合试剂是一种化学惰性的但暴露在紫外或可见光下能变成活性的化合物。芳基叠氮化物是暴露在波长介于250-460纳米之间的光波下时光致裂解，并形成活性的芳基氮烯的光亲合试剂。芳基氮烯不加选择地参与形成共价键的反应。必须谨慎地使用还原剂，因为它们可能还原叠氮基。6.非选择性标记a.精氨酸特异性交联剂乙二醛对于把精氨酸残基的胍基部分作为目标是有用的化合物。乙二醛在中度碱性pH值下将把精氨酸作为目标。对赖氨酸有一定的交联活性(pH值越高，活性越大)。b.羰基特异性交联剂羰基(醛和酮)在pH5-7下与胺和肼反应。与肼反应比与胺反应快，这使它可用于位点特异性的交联。羰基不易在蛋白质中存在；但是采用偏高碘酸钠适度的氧化糖的部分将使邻位的羟基转变成醛或酮。7.使用交联剂的应用a.细胞表面交联为了保证细胞表面的特异性交联，以便识别表面受体或它们的配位体，最好采用不穿透膜的交联剂。过去研究者使用不溶于水的交联剂并且小心地控制交联剂的量和交联持续时间。这样就防止了交联剂以及交联持续时间而造成的对膜的穿透。这样业防止了交联剂和后续的与膜蛋白质反应而造成的对膜的穿透。许多参考文献都谈到了将穿透膜的交联剂用于细胞表面交联。b.亚单位交联和蛋白质结构研究交联剂可以用于研究生物样品中的蛋白质结构和组成。某些蛋白质难于研究，因为它们在不同的pH值或盐条件下，以不同的结构存在。一种避免构象变化的方法是使亚单位交联起来。使用与胺、羧基或巯基反应的试剂以识别特殊的氨基酸或确定蛋白质中亚单位的数目、位置和尺寸。在进行分子内交联时，选择短至中等长度间隔臂的交联剂。如果间隔臂太长，可能发生分子间的交联。导致无间隔臂的碳化二亚胺以及与短距离共轭的试剂在市场上可以买到。c.亚单位交联剂和蛋白质结构研究交联剂广泛用于识别近邻蛋白质关系、配位体--受体识别和相互作用，以及酶-底物的定向。为这些应用选定的交联剂通常比用于亚单位交联的交联剂长。对于这些方法，与胺反应的均双官能团NHS-酯或亚胺酯(immadates)和与胺反应的杂双官能团的光敏苯基叠氮化物是最通用的交联剂。有时，如果已知两种蛋白质(或分子)之一包含巯基，那么可以使用与巯基和胺反应的交联剂。通常使用可裂解的或不可裂解的交联剂。由于在两个分子之间的距离并非总是已知的，交联剂的间隔臂的最佳长度可以借助采用具有不同长度的类似的交联剂来确定。HNS-酯、苯基叠氮化合物对于这种类型的交联是非常有用的，因为它们总能至少导致部分有效的交联。交联剂可以用于确定具体的蛋白质是否位于表面或与膜成一整体。这些研究是可能的，因为溶于水的交联剂不能穿透膜，而不溶于水的交联剂是能穿透膜的。d.细胞膜结构研究细胞膜结构研究需要疏水性不同的试剂以便确定在细胞双脂膜内的定位和环境。荧光标记用于确定膜的内侧和外侧的蛋白质、类酯体或其它分子的位置。具有不同间隔臂长的各种交联剂可以用于蛋白质与膜内的结合分子交联，以确定分子间的距离。用较短的交联剂成功地交联有力地表明两个分子以某种方式相互作用。用较短的交联剂没有获得交联而采用较长的试剂获得共轭则通常表明分子位于膜的同一部分但没有相互作用。均双官能团的NHS-酯、亚胺酯或杂双官能团的NHS-酯、光敏的苯基叠氮化合物通常用于这些程序。8.免疫毒素特异性抗体可以通过共价键连接到毒性分子上，然后用于瞄准细胞上的抗原。这些抗体对于与肿瘤相关的抗原往往是特异性的。表面抗原将免疫毒素带进细胞，并且一旦内在化后，它们借助核糖体失活或其他途径开始杀死细胞。用于制造免疫毒素的交联剂的类型能够影响其定位和杀死适当细胞的能力。为了使免疫毒素有效，共轭物在体内必须是稳定的。此外，一旦免疫毒素到达其目标，重要的是抗体能够与毒素分离，以允许毒素杀死细胞。包含二硫化物的硫裂解的共轭物业已表明它对肿瘤细胞的毒性比蓖麻毒蛋白A免疫毒素的共轭物更大。细胞能够使交联剂中的二硫键断裂，以允许在目标细胞内释放毒素。9.用作免疫原的载体蛋白质-半抗原/肽/多肽共轭物一些公司(如Pierce公司)提供免疫学研究领域中使用的产品。便于使用的试剂盒可采用几种不同的化学方法偶合配位体。有许多交联剂可用于生产这些共轭物，而且最佳的选择取决于半抗原上存在的活性基团和半抗原-载体共轭物在注射后成功地作为免疫抗原发挥作用的能力。碳化二亚胺是生产肽载体共轭物的良好选择，因为蛋白质和肽二者都包含若干羧基和伯胺。其它杂双官能团交联剂也可以用于制作免疫原共轭物。通常，合成的肽具有终端半胱氨酸，以使它们通过分子上对活性和识别无关紧要的部分附着到支撑物或载体蛋白质上。与巯基反应的杂双官能团交联剂可以通过它们的其它官能团与载体蛋白质偶合，然后再通过终端半胱氨酸与肽连接。这种方法可能是非常有效的并且得到在注射时能诱发良好反应的免疫原。10.固相固定蛋白质、肽和其它分子可以固定在用作亲合力支撑或用于样品分析的固相基质上。基质可以是琼脂糖、珠串状的聚合物、聚苯乙烯片或粒料、多孔玻璃或玻璃片、硝化纤维素或其它膜材。一些支撑可以被活化以便与配位体偶合。另一些支撑是用亲核试剂或其它能利用交联剂与蛋白质或其它配位体连接的其它官能团制成的。在固体支撑上固定本发明的化合物可以采用例行偶合化学来完成。一般地说，本发明的化合物可以借助下述方法固定即在该化合物中包括易接近的第一官能团(如醇基)，将该化合物与包含带含有互补的第二官能团(如羧基)的固体支撑相接触，在足以允许第一和第二官能团彼此反应的条件和时间周期内形成共价键(如酯键)。术语“易接近的”就官能团而言指的是该官能团处于活性形式并在空间上不阻碍与固体支撑的反应。适合将本发明的化合物固定到固体支撑上的官能团可以被引入这些化合物的肽结合部分或连接剂部分。例如，在侧链中包含官能团的氨基酸(如天冬氨酸、谷氨酸、半胱氨酸的残基)，在合成期间可以并入肽结合部分并在与目标蛋白质结合的活性基团保持足够距离的位置上定位，以便避免固体支撑在该化合物与其目标蛋白质反应中造成的不希望的空间位阻。此外，本发明的化合物可以借助连接剂分子中的官能团固定到固体支撑上。例如，用在本发明这方面的连接剂除了包括用于与第一和第二肽结合部分的第一和第二连接剂活性基团之外，还可以进一步包括与固体支撑结合的官能团。这种类型的三官能团分子在实施例11中予以说明。为了防止副反应，优选的是，连接剂分子与肽结合部分偶合的连接剂活性基团不同于用于连接剂与固定支撑偶合的活性基团。在连接剂分子合成期间或之后的任何时候可以将这些官能团引入连接剂分子。因此，一般地说可以将相同类型的官能团、保护反应及试剂/解除保护反应及试剂，以及在使用连接剂分子使蛋白质或肽彼此偶合或与固体支撑偶合的技术中建立的反应条件用于将本发明的化合物固定到固体支撑上。11.蛋白质-蛋白质共轭物连接剂最广泛的应用之一是生产蛋白质-蛋白质共轭物。生物化验需要检测方法，最通用的量化结果的方法之一是使酶、荧光团或其它分子与对被研究的生物系统中一种成分有亲合力的蛋白质共轭。抗体-酶共轭物(原生或次生抗体)是最通用的蛋白质-蛋白质共轭物。次生抗体是比较便宜的并且能够在市场上买到。下面列出有代表性的市售交联剂(例如来源于PierceCatalogandHandbook，Rockford，III)。该表还指出该连接剂对那哪种基团(如巯基、羧基)是活性的。市售交联剂的反应活性实施例9通过设计含烯基化合物阻止环化在本实施例中，将制备含烯基如氟烯基的Xaa-boroPro类化合物以抑制环化，增加生物活性。这种含烯基化合物的生物活性将用前述实施例2中的第III部分介绍的方法，即比较使用含烯基和不含烯基化合物制备IL-2的产率来检测。1.明确活性开链单体化合物和惰性环状单体化合物与可溶CD26(DPIV)抑制活性之间的关系本发明人已经在前面证明了合成的非对映单体化合物，如L-Ala-D，L-boroPro，L-Pro-DL-botoPro对可溶性DPIV(CD26)的催化活性具有很强的抑制性。它们还遇到了其它的问题，因为在pH值为中性的水溶液中，这些单体抑制剂会很快失去一定的抑制活性。例如，Ala-brooPro使DPIV失去抑制活性的半衰期约为5分钟，而Pro-boro约为1小时。已证明在pH值为中性和更高的水溶液中，这些抑制剂没有发生降解，而是发生了环化反应。在所有pH值水溶液中，这些抑制剂分为具有抑制作用的开链结构即所谓活性化合物和不具抑制作用的环状结构即所谓惰性化合物，这两种结构之间处于缓慢平衡状态。Xaa-boroPro抑制剂的开链和环状构型的结构(即Xaa-boroProline抑制剂构象平衡)如图10所示。在pH值较低的水溶液中，具有抑制作用的活性开链结构为主，而在pH值较高的溶液中环状结构为主。平衡反应在是完全可逆的在pH值较低的条件下开链结构处于主导地位。开链结构向环状结构的转化反应涉及脯氨酸由反式结构向顺式结构转变的异构化和新的N-B键的生成。这种环状结构是二酮哌嗪的硼化类似物，它们是肽化学中常见的产物。环化反应会释放出一当量的H+，这就是为何环化反应需在碱性环境下进行，而开环反应需在酸性环境中进行的原因。在pH值较高的水溶液中，环状结构是相当稳定的。对于所研究的任何Xaa-boroPro化合物，在pH值较高的条件下，延长诱导期也不会导致DPIV抑制活性的完全消失。这一发现首次证实了活性抑制剂与非抑制化合物处于构型平衡状态而没有发生不可逆的失活反应。由环状结构重排成开链化合物的半衰期是非常低的。因此，在水溶液中抑制活性的失去是由受pH值影响的构型平衡引起的而非降解反应所造成。对任何Xaa-boroPro抑制剂，即使延长诱导期，抑制活性也不会变为零，以及存在可逆反应即环状结构向开链结构的转化是缓慢的，这些事实都表明，通过测定平衡状态的表观Ki值并将其与真实Ki值相比较，应该可以测出构型平衡的平衡常数。业已证明对于Pro-boroPro，pH值为中性时，环状构型与开链构型之比为156∶1，而对于Val-boroPro该比值为1130∶1[W.G.GutheilandW.W.Bachovchin，SeparationofL-Pro-DL-boroProintoItsComponentDiastereomersandKineticAnalysisofTheirInhibitionofDepetidylPeptidaseIV.ANewMethodfortheAnalysisofSlow，Tight-BindingInhibition，Biochemistry32，8723-8731(1993)]。这意味着在pH值为7.0条件下，处于平衡状态时，不到1％的Pro-boroPro和不到0.1％的Val-boroPro以具有抑制作用的开链结构存在。不过，在这些条件下，抑制剂的Ki值也分别达到了2.5nm和1.8nm，这种所谓完全失活化合物的表观Ki值仍然要大大高于(约1000倍)迄今所报导的DPIV的其它抑制剂。2.有关含烯基化合物的背景资料在以前，氟烯肽等排物(isosteres)一直被用于控制肽的构型[Boros，L.G.等人，FluotoolefinPeptideIsosteres-ToolsforControllingPeptideConformations，TetrahedronLetters，35(33)，6033-6036(1994)]。且业已证明含氟烯基的二肽等排物是二肽基肽酶IV(CD26)的有效抑制剂[Welch，J.T.等人，FluoroolefinContainingDipeptideIsosteresasInhibitorsofDipeptidylPeptidaseIV(CD26)，Tetrahedron，52(1)，291-304(1995)]。3.抑制环化以提高二价或多价化合物的生物活性本发明人预言本发明中所研究的化合物的生物利用率即生物学功能可以通过抑制肽构型转变如分子间的环化而得到显著提高，提高幅度约100-1000倍，例如通过构造含有一个烯基(两个碳原子间以双键受体，详见图11D)如氟烯基的二价或多价化合物来阻止分子间的环化。图11A-11D是含烯基二价化合物各种实例的图解。但这些图解并不对本发明的范围进行任何的限制。图11D是Xaa-boroProline的氟烯等排物。氟烯模拟肽键，但能阻止顺——反异构化，因而可以阻止环化。因此，本发明人预言，如果环化能被阻止，那么本发明中所研究的化合物的生物利用率可以提高大约100-1000倍。下面介绍了用来合成氟烯烃的方法。另外一些可以用于制备本发明中化合物的方法可参见文献LiviaG.Boros等人的“Fluoroolefinpeptideisosteres-toolsforcontrollingpeptideconformations”(TetrahedronLetters，Vol.35，No.33，pp.6033and6036，1994)以及JohnT.WelchandJianLin的“FluoroolefincontainingdipeptideisosteresasinhibitorsofdipeptidylpeptidesIV(CD26)”，(Tetrahedron，Vol.52，No.1，pp.291-304，1996)。本发明提供了特别优选的氟烃化合物的制备方法。不过，本发明还包括的是，这些方法可以设计和构造本发明中的任何化合物，使之带有烯基。因此，可以认为这些方法可以用来制备本发明中的含烯基硼基化合物。在这类化合物中烯基可以是未被取代的，也可以被氟基以外的其它卤代基所取代。此外，尽管只举例说明了带反应性硼基的化合物，但应该理解的是，使用(a)类化合物可以制备带非硼基的其它反应性基团的化合物，其中，在(a)类化合物中，BCl3可以被替代的反应性基团所取代。依据Ferring发表的PCT申请，使用上述确定的方法可以制备带非硼基替代基团的含烯基化合物。合成方案包括三步反应。第一步反应利用文献[Welch，J.等人的Tetrahedron532291-304(1996)]中给出的反应条件将化合物(a)转化为化合物(b)。第二步反应采用文献[Tilley，J.W.等人的J.Med.Chem.341125-1136(1991)]中给出的反应条件将化合物(b)转化为化合物(c)。第三步反应利用文献[Lipshultz，B.H.等人的J.Org.Chem.544975(1989)]中给出的反应条件将化合物(c)转化为氟烯基衍生物。通过测定CD26蛋白酶活性的抑制能力，将对Xaa-boroPro的氟烯基类似物与Xaa-boroPros作出比较。这些含氟烯基类似物的免疫调节效应将通过在动物模型体内的实验和体外细胞培养实验来评价。细胞培养实验可检测淋巴起源的细胞的细胞因子的产生或/和它们的繁殖情况。实施例10LYS-BOROPRO荧光标记单体衍生物的合成可以制备Lys-boroPro的荧光标记单体衍生物。这种衍生物可用来测定单Lys-boroPro是否促使CD26进入细胞内部。用荧光显微镜可监测CD26在分子间的运动。标记方法之一是直接使Z-Lys-boroPro-二元酸酯侧链上的氨基与荧光分子上的官能团如荧光异硫氰酸盐(FITC)上的异硫氰酸酯偶联。Lys-boroPro既可直接地连接到FITC分子上，也可以通过间隔连接分子间接地连接到FITC分子上去。另一种标记方法是将Lys-boroPro上的侧链氨基连接到生物素上，同样既可直接连接，也可通过间隔基团连接，然后使用抗生物素蛋白、链霉抗生物素蛋白生物素体系来检测。抗生物素蛋白是一种糖蛋白，它是在鸟类、爬行动物和两栖类的蛋清和组织中发现的。这种蛋白质上含有四个性质完全相同的亚单位，其总分子为67,000-68,000道尔顿。每一亚单位连接有一个生物素分子。研究表明与生物素相连的连接位点上带有色氨酸和赖氨酸。对亚单位的序列测定表明其含有128个氨基酸。抗生物素蛋白的等电点为10-10.5，它在水和盐溶液中的溶解度很大。在很宽的pH值和温度范围内，抗生物素蛋白是稳定的。相当程度的化学改性对其活性几乎没有什么影响，因而，它可用于蛋白质的检测和提纯。链霉抗生物素蛋白是另一种生物素的结合蛋白质。它是从链霉抗生物素菌(Streptomycesavidinii)中分离出来的。其分子量约为60,000。与抗生物素蛋白不同，链霉抗生物素蛋白不含糖，且其酸性等电点为5，相对于抗生物素蛋白，链霉抗生素在水中的溶解度要小得多。它可以从水中或505异丙醇中结晶出来。这种方法相对于上述第一种方法有下述三个优点(1)相对于许多其它体系，生物素——抗生物素蛋白体系发展得更完善，描述得更清楚，并且已成功地用于本发明中这一类研究中；(2)由于大量的在该体系中应用的试剂都是市售的，因而大大提高了其选择的灵活性；(3)具有改善了的灵敏度，因为这一体系能保证来自于生物素基化部分(如生物素基化Lys-boroPro可通过与共轭了荧色物如FITC或酶如辣根过氧化物酶的抗生素物蛋白或链霉抗生物素蛋白发生反应而带有荧光)的信号放大。抗生物素蛋白-FITC共轭物中，对每一个抗生物素蛋白都对应有多个FITC基团，而上述第一种方法中每一个抗生物素蛋白分子仅具有一个FITC基团。因此，由于对每一个抗生物素蛋白分子都有众多的底物分子被转变为可检测产物，所以，抗生物素蛋白质——酶共轭物途径可使信号显著放大。N-羟基琥珀酰亚胺生物素(NHS-生物素，由Pierce提供)可容易地与游离伯胺反应生成由肽键连接的生物素共轭物。首先，NHS-生物素和NHS-LC-生物素(生物素与其共轭分子上氨基之间的间隔为22.4埃)连接到Lys-boroPro上赖氨酸的侧链氨基上。这类分子的特点是能够抑制DPIV，并且采用抗生物素蛋白检测体系时，能充当检测Lys-boroPro-蛋白质复合物这类分子的工具。利用HPLC可将按上述方法制备的每一种化合物纯化成均一物质。如果认为有必要的话，其均一性可以用NMR，氨基酸组成或者质谱来证实。实施例11Lys-boroPro荧光标记二价和多价衍生物的合成可以制备含优选的P1R1单体如Lys-boroPro的荧光标记二价和三价衍生物，并且可用它们来检测诸如Lys-boro的二价和多价衍生物是否能够诱发细胞表面的CD26聚集并进入细胞内部。可用多种方法合成这类分子。方法之一是使用下面图例中介绍的三官能团分子。采用合适的化学方法，可把羧基偶联到Lys-boroPro上，而氨基可以偶联到FITC分子上，或者通过适当长度的间隔基将其偶合到荧光团上，优选偶合到生物素分子上。下述三官能团分子可以采购到，也可以很容易地合成出来直接扩广使用上述合成二价衍生物的方法可以制备出Lys-boroPro的三聚体。另一种方法是利用了生物素——抗生物素蛋白体系的多聚特性。抗生物素蛋白上有四个亚底物。每一个亚底物都有一个可结合生物素的连接位点。如果需要荧光三聚抑制剂，通过合适长度的间隔基团(对NHS-LC-生物素其合适的间隔基的长度为22.4埃)，可以将生物素偶联到Lys-boroPro分子上。不同含量的抗生物素蛋白对T型细胞活化以及对细胞表面CD26聚集的影响，可以使用FITC-抗生物素蛋白共轭物来检测。这种方法合成的化合物很可能是一种由二价、三价和四价抑制剂组成的混合物。上述方法制备的化合物可以用HPLC来提纯，如有必要，其结构可由NMR、氨基酸组成或质谱来确证。实施例12与不溶性支持物连接的Lys-boroPro的合成与不溶性支持物相连的Lys-boroPro可以用于三个方面。应用之一是通过与用固相固定化的抗-CD26mAbs进行的类似实验相比较来研究固相固定化的Lys-boroPro对T细胞繁殖的影响。固相固定化的Lys-boroPro衍生物可能诱发细胞表面CD26的聚集，这与可溶性多聚抑制剂不同，可溶性多聚抑制剂会阻止CD26进入细胞内部，至少会阻止与抑制相结合的CD26进入细胞内部。应用之二是确定是否Lys-boroPro大量地接合到了蛋白质分子上而非CD26分子上。应用之三是生产从各种来源中制备纯化CD26的亲和交换柱。本发明中的二价和多价化合物以及P1R1单体如Lys-boroPro可用多种方法固定化在固相载体上，每一种方法都有其优点。由于这类方法具有很大的灵活性，一开始可以试验固相固定化的抗生素及生物素基化的Lys-boroPro。固相定位抗生物素蛋白(如结合到琼脂糖上的抗生物素蛋白)及抗生物素蛋白可从Pierce化学公司大量购买到，且可以是多聚和单聚体的形式的。设计成单聚体形式是为便于生物素化蛋白质从树脂上分离和回收，从而对于上述第二和第三种用途是优选的。不过，还有其它一些方法可保证生物素化Lys-boroPro蛋白质共轭物的分离和回收。例如(i)高浓度的生物素会与生物素化Lys-boroPro竞争并把它从固相固定化的抗生物素蛋白上置换下来；(ii)游离Lys-boroPro可以把生物素化抑制剂从蛋白质上置换下来；(iii)在间隔臂上带有可分解基团的生物素衍生物可用来制备生物素化Lys-boroPro；(iv)降低pH值至-4.0，可大大降低Lys-boroPro对DPIV活性点的亲和力，因而可使蛋白质从树脂上洗脱下来，并将结合在抗生物素蛋白上的生物素化Lys-boroPro留下[G.R.Flentke等人的InhibitionofdipeptidylaminopeptidaseIV(DP-IV)byXaa-boroProdipeptidesanduseoftheseinhibitorstoexammetheroleofDP-IVinT-cellfunction，PNAS(USA)88，1556-1559(1991)；Bachovchin，W.W.等人的InhibitionofIgAlproteinasesfromNeisseriagonorrhoeaandHemophilusinfluenzaebypeptideprolylboronicacids，J.ofBiol.Chem.265，3738-43(1990)]。二醇如蒎烷二醇或颇哪醇可加入洗脱缓冲液中与羟基结合并将羟基与硼基连接。依照上述方法制备的每种化合物都可用HPLC提纯成均一体。如有必要，其成分可通过NMR、氨基酸组成或质谱证实。实施例13CD26(DPIV)亲和性研究由于CD26的提纯仍存在很大问题，那么采用下述的亲和交换柱可能非常有利于CD26的提纯。低浓度的如10-10M的连接的均二价二聚分子KbP2-己二酸酯是有效的抑制剂[详见上文实施例1中的I.B(1)]这一事实表明固定化的本发明的化合物可用于CD26的亲和提纯。在Lys-boroPro上衍生出ε-氨基，而不牺牲亲和力，会有助于生成亲和交换柱，专用于从各种来源的CD26的提纯，如从被CD26(DPIV)基因转染的细胞株中提纯出CD26。实施例14测定标准的CD26(DPIV)活性可以通过试验测定CD26(DPIV)的活性，实验中既可采用均二价化合物，如偶联到其它同种分子上的Lys-boroPro，也可采用杂二价化合物如偶联到对T细胞表面受体为特异性的肽分子上的Lys-boroPro，如蛾细胞色素C肽。目前已经研究出了定量测定小分子拟肽抑制剂与CD26或DPIV以及CD26与大分子配体如HIVTat蛋白质之间的相互作用的方法[W.G.GutheilandW.W.Bachovchin.SeparationofL-Pro-DL-boroProintoItsComponentDiastereomersandKineticAnalysisofTheirInhibitionofDipeptidylPeptidaseIV.ANewMethodfortheAnalysisofSlow，Tight-BindingInhibition，Biochemistry32，8723-8731(1993)；Gutheil，W.G.andW.，B.W.Kinlsq，AMatlabProgramforFittingKineticsDatawithNumericallyIntegratedRateEquationsandItsApplicationtotheAnalysisofSlow，TightBindingData，AnalyticalBiochemistry223，13-20(1994)；Gutheil，W.G.等人的HIV-1TatBindstoDPIV(CD26)ApossibleMechanismforTat’sImmunosuppressiveActivity，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.91，6594-6598(1994)]。这些方法中使用了产色基质Ala-Pro-P-硝基酰替苯胺(APPNA)和荧光基质Ala-Pro-7-氨基-4-三氟甲基香豆素(AP-AFC)。APPNA和AP-AFC在市场上可以购到(如CA、Dublin的酶系产品)。实施例15均二价和杂二价化合物的免疫学研究1.T细胞功能的检测针对诱发细胞表面CD26聚集而设计的二价Lys-boroPro分子的能力可通过前述的抗原特异T细胞响应来检测[G.R.Flentke等人的“InhibitionofdipeptidylaminopeptidaseIV(DP-IV)byXaa-boroProdipeptidesanduseoftheseinhibitorstoexaminetheroleofDP-IVinT-cellfunction”，PNAS(USA)88，1556-1559(1991)；M.Subramanyam等人的“MechanismofHIV-1Tatinducedinhibitionofantigen-specificTcellresponsiveness”，J.Immunol.150，2544-2553(1993)]。简而言之，在人系统中，外周血液单核细胞(PBMC)可在有或没有CD26结合剂的情况下用次佳剂量抗-CD3mAbs来培养。此外，在加有或不加CD26结合剂的情况下，可以检测出对于次佳浓度破伤风类毒素培养或假丝母菌抗原的抗原二次响应[M.Subramanyam等人的“MechansimofHIV-1TatInducedinhibitionofantigen-specificTcellresponsiveness”J.Immunol.150，2544-2553(1993)]。在鼠系统中，细胞色素C系统可用来测定2B4T细胞杂种瘤中的抗原响应[G.R.Flentke等人的“InhibitionofdipeptidylaminopeptidaseIV(DP-IV)byXaa-boroProdipeptidesanduseoftheseinhibitorstoexaminetheroleofDP-IVinT-cellfunction”，PNAS(USA)88，1556-1559(1991)]。细胞活性可通过T细胞杂种瘤生成的IL-2来检测。所产生的IL-2的量可使用HT-2指示细胞用生物学试验定性分析。2.CD26的内在化/药剂传送因为抗体介导的CD26交联会诱发CD26内在化，因而Lys-boroPro均二价化合物可能也有这样的生物活性。受体的内在化可采用FITC标记的二价Lys-boroPro和进行流式细胞光度分析来测定[N.H.Dang，Y.Torimoto，K.Sugita，J.F.Daley，P.Schow，C.Prado，S.F.Schlossman，andC.Morimoto.CellsurfacemodulationofCD26byann-1F7monoclonalantibodyAnalysisofsurfaceexpressionandhumanTcellactivation，JournalofImmunology145，3963-3971(1990))。为比较细胞膜与细胞质的染色，对细胞的分析包括(i)细胞膜的完整，只允许细胞表面被染色；(ii)在皂苷渗透细胞膜后进行比较，此时，尽管细胞膜结构仍是完整，但抗体是可以通过细胞膜的[deCaestecker，M.P.，Telfer，B.A.HutchinsonI.V.，andBallardie，F.W.“Thedetectionofintercytoplasmicinterleukinlα，inteleukinlβandtumournecrosisfactorαexpressioninhumanmonocytesusingtwocolourimmunofluorescenceflowcytometry”，J.Immunol.Methods154，11-20(1992)]。一旦证实用Lys-boroPro的二价或多价衍生物培养后CD26分子已经被内在化，就让更大的分子与二价分子偶合，这种大分子最好采用易于检测到的酶，如荧光素酶、碱性磷酸酯或β半乳糖苷酶。采用细胞提取法可测定这些蛋白质的表达。用于这种测试的试剂盒在市场上可以购置到(如NovacasatraLaboratoriesLtd.，NewcastleuponTyne，UK)。此外，用于这些酶的mAbs在市场也可购买到(如SouthernBiotech，BirminghamAlabama)，因此，通过流式细胞光度计可以检测出单个细胞中蛋白质的表达。如上所述，采用皂苷可使细胞具有渗透性，使mAbs进入细胞内。这种方法非常灵敏，并可同时分析其它细胞表面蛋白或细胞质蛋白质。用途与优点如本文所述，本发明中的化合物用途广泛，优点突出。本发明中所合成的低分子量二价或多价化合物可用来诱发结合活化受体的结合，因此，提供了对生物系统进行调节的可观的潜力。因此，这类新型生物活性化合物及其组合物可用来诱发结合活化受体在人体T细胞上的结合，并且可用来治愈动物的多种T-细胞介导的疾病，例如自身免疫性疾病。一般来说，这些二价或多价的均或杂化合物或它们的组合物可用在免疫响应调节治疗来(1)治疗以免疫抑制为特征的疾病，如AIDS或与AIDS有关的病症，以及其它由病毒或环境引发的和某些先天性的免疫缺乏症；(2)增加由于使用免疫抑制药物而被损害的免疫功能；(3)治疗全身红班狼疮、风湿性关节炎和多发性硬化等。例如，本发明中的化合物可用于传送超抗原来激发T细胞。超抗原包括一类与II级MHC分子连接和刺激大量T细胞的、与疾病相关的免疫刺激分子[Jardetzky，T.S.等人的“ThreeDimensionalStructureofaHumanClassIIHistocompatiblityMoleculeComplexdwithSuperantigen”，Nature368，711-718(April，1994)]。超抗原家族中的成员包括来自于S.aureus和其它细菌的毒素，以及老鼠乳房肿瘤病毒中的病毒性超抗原。人们认为细菌型超抗原的毒性受到其有效的T细胞激发作用的调节，导致淋巴激活素的释放，引起呼吸窘迫乃至休克。在狂犬病、风湿性关节炎及老鼠和人类AIDS中也带有超抗原。这些二价或多价的、均或杂化合物或其组合物都可以用来激发培养基内的生血细胞的生长。这样的细胞可以移植入动物体内如人体内，以增加生血细胞或/和增强免疫系统。这些化合物也可用来治疗象患AIDS这样的生血细胞缺乏的病人、接受化学治疗和/或放射治疗以治愈血癌或其它癌症的病人、以及接受骨髓移植的病人等。当施用于哺育动物如人时，本发明的这些化合物可以增强免疫系统的功能，使得受免疫抑制的细胞如CD4和T细胞再生。因此，本发明中二价化合物可以单独以有效量给药，或与医药级载体、腻形剂或稀释剂一起以单位剂量用于哺育动物如人类。可以使用常规药理实践把这些化合物制备成适合用于免疫抑制病人或免疫缺乏病人或有AIDS先兆的病人的制剂和组合物。可以采用任何一种适宜的给药方法，如采用非肠道、静脉、皮下、肌肉、囊内、脊推、脑池、腹膜内、鼻内用药以及气溶胶吸入疗法或口服等。治疗配方可以做成液体溶液型或、悬浮液型。口服用药配方可以制成片型或胶囊形，鼻内用药配方可制成粉剂、滴鼻剂或气溶胶等。“Remington医药科学”上可以找到人们熟知的配制药方的工艺方法。例如非肠道用药配方可含有赋形剂、无菌水或盐水、聚亚烷基二醇如聚乙二醇、植物油或氢化环烷烃。生物相容性生物降解丙交酯聚合物，丙交酯/乙交酯共聚物或聚氧化乙烯聚氧化丙烯共聚物等都可用来控制这些化合物的释放。这些二价化合物的其它可用的肠外运载系统包括乙烯乙酸酯共聚物颗粒，渗透泵、可植入的渗透系统或脂质体。吸入配方可包含赋形剂，如乳糖，或可以是含多氧乙撑-9-月桂醚、甘胆酸盐和脱氧胆酸盐的水溶液，或可以是以鼻滴剂形式用药的油溶液，或以凝胶形式用药。这些均或杂二价化合物及其组合物可以用来控制T细胞活化过程，因而可以用来阻止不需要的免疫响应。设计用来诱发一个CD26T细胞受体与另一个CD26T细胞受体结合的均二价化体物可以用来激发CD4+细胞的繁殖。因而，这些化合物有可能帮助恢复免疫抑制病人如AIDS病人体内CD4+细胞的数量，并由此扭转免疫功能下降的趋势。本发明中的这些均二价化合物或其组合物(一个CD26T细胞受体结合另一个CD26T细胞受体)可以用来增强二次抗原特异性免疫响应。大多数HIV感染个体中的淋巴细胞对二次抗原的响应能力表面了在一定程度上的不足[A.S.Fauci.Thehumanimmunodeficiencyvirusinfectivityandmechanismsofpathogenesis.Science239，617-722(1988)]。这种能力的不足在被感染后不久就表现出来，大大早于CD4+T细胞数目的减少。因此，可认为这些化合物将可用于治疗AIDS。于是，通过改善受感染后不久就显示出来的二次抗原响应不良和通过增加CD4+T细胞数目，这些激发作用可以增强HIV感染个体内淋巴细胞的功能。由于本发明中这些化合物，特别是权利要求1中的化合物具有对CD26的高亲和力以及特异性，它们可用来有选择地运送其它的治疗药剂到CD4+T细胞表面或进入其内部。因而，本发明中的化合物可以用来运送那些通常不能穿透CD4+细胞的药剂进入其内部。例如，已经研制出的对HIV蛋白酶有极高抑制能力的抑制剂，尽管它们对HIV蛋白酶有较高的亲和力，但由于它们不能进入CD4+细胞内部，因而它们仅在人体内封闭HIV。这些HIV蛋白酶抑制剂可以连接到二价CD26配体的间隔基团臂上，并被运送进CD26+淋巴细胞内，这些淋巴细胞是病毒首先进攻的细胞。即使药物易于进入CD4+细胞，但本发明中的化合物也能用来把它们集中于CD26细胞内，因此可把所希望的药效增加至最大而把所不希望的对其它细胞的毒副作用降低至最小。因此，通过增加AZT在CD4+细胞中的浓度并降低其在它处的浓度，这种运送载体提供了一种避免受阻于AZT或降低AZT阻力的方法。因此，本文中所公开的化合物的使CD26内在化的活性，可用来提供把其它治疗药剂运送到或集中于CD4+T细胞内的载体。为诱发一个CD26T细胞受体与另一个不同T细胞受体如T细胞受体TCR/CD3结合而设计的杂二价化合物，可用于激发细胞介导的对特异性抗原的免疫响应。杂二价化合物或其含有CD26抑制剂和抗原肽的组合物，不同于抗体介导的免疫响应，它们可以激发对抗原肽的细胞免疫响应。这种对细胞介导的特异性抗原的响应的激发，可用于AIDS患者，因为这些病人有较高浓度的抗-HIV抗体。因而CD26-TCR的结合诱发活性，可用于激发细胞介导的对特异性抗原的免疫响应。可证明这样的生物活性特别适用于AIDS的疫苗的培育，因为对HIV-1而言，细胞或TH1免疫响应是一种恰当的响应，而AIDS病人明显缺乏这种响应。这些杂二价化合物可用于培育和制造肽基疫苗及用来治疗过敏性病和自身免疫性疾病的治疗药剂。因为激发的响应是细胞介导的，且对选择的抗原有专一性，所以二官能团制剂可用于培养调节细胞介导的免疫响应的疫苗，特别是用来培育治疗AIDS的疫苗。设计用来诱发一个CD26T细胞受体与另一个不同T细胞受体如CD4结合的杂二价化合物可用于激活T细胞的功能。因此这些杂二价化合物或其组合物可用来有选择地运送药剂进入CD4+、CD26+细胞，或可用它们来阻断HIV进入CD4+内。杂二价化合物或其组合物，例如权利要求17中给出的化合物，可用来运送毒素如蓖麻蛋白A免疫毒素或AZT进入CD26+T细胞内。所选毒素可以偶联到对CD26T细胞表面受体有较高亲和力的二聚化合物上。毒素也可偶联到对特定T细胞受体具有特异性的肽上。不管怎么说，一旦二聚化合物结合到CD26T细胞表面受体上，毒素就在T细胞中内化，由此就把毒素传送到T细胞内。化合物或其组合物可单独施用，或相互混和着用，或与其它治疗药剂一同使用。如治疗免疫紊乱时，可以将某二价化合物的治疗与传统的疗法结合起来进行。给药时，本发明的药用制剂能以药理学可接受的剂量给药，和在药理学可接受的组合物中给药。这类制剂一般含有盐、缓冲剂、防腐剂、相容性载体以及含有或不含有其它的治疗药剂。当用作内服药时，盐类应是医药级的，但非医药级盐类通常可用来制备相应的医药级盐，非医药级盐类并不被排除在本发明的范围之外。这类医药级盐包括由下述多种酸制备的盐，但并不局限于这些酸，它们包括盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸、与来酸、乙酸、水扬酸、柠檬酸、甲酸、丙二酸、琥珀酸等。医药级盐也可以制成碱金属或碱土金属盐如钠、钾和钙盐。这些药用组合物也可含有或不含有适合的防腐剂如苄烷铵、氯丁醇、Parabens和水扬乙汞。适于非肠道给药的组合物可包括交联化合物的无菌水液，优选与患者的血液等渗的无菌水液。这种水液可以根据已知的方法制备，使用合适的分散剂或润湿剂和悬浮剂。无菌注射制剂也可使用无毒、非肠道可接受的稀释剂或溶剂，如以1，3-丁二醇为溶剂制成无菌注射液或悬浮体。在可接受载体和溶剂中，可用的有水、Ringer溶液和等渗氯化钠溶液。此外，无菌固定油常用作溶剂或悬浮介质。就此而言，可以采用任何刺激性小的固定油，包括合成的单或二甘油酯。此外，脂肪酸如油酸可用来配制注射液。适于口服、皮下注射、静脉注射及肌肉注射等的载体配方可见于Remington’sPharmaceuticalSciences，MackPublishingCo.，Easton，PA。有多种给药方法可用于治疗患者。当然，所选的具体用药方式将取决于所选的具体的交联化合物，治疗对象病情的严重程度以及为达到疗效所需的剂量等。一般说来，在实践本发明的方法时，可以采用任何医学上可接受的给药方式，即能显示出活性化合物的疗效水平又不产生临床上不可接受的副作用的给药方式。这样的给药方式包括口服、直肠、皮肤表面、鼻孔、真皮内或其它非肠道用药方式。这种给药方式也包括如下方法，即从病人体内提取T细胞或骨髓细胞、干细胞或早期谱系祖先细胞等，在体外用本发明中的交联化合物把这些分离出来的细胞连接在一起，随后把处理过的细胞重新引入患者体内，经处理后的细胞可以目前所知的任何活细胞的给药方式重新引入患者体内来进行治疗。本发明中所使用的术语“非肠道”包括皮下、静脉、肌肉或渗透等。静脉或肌肉注射方式不适于长期治疗和预防。坏过，这两种方法特别适于急症。口服治疗将特别适于预防和其它治疗。因为这种方法既方便了患者又能方便确定剂量表。药用组合物可以方便地以单位剂量的形式提供，它可用制药工业种熟知的工艺方法制备。制备方法包括把本发明中的交联化合物结合到含有一个或多个辅助组份的载体上这样一个步骤。一般，组合物可以通过把交联化合物均匀又紧密地结合到液体载体或/和精细固体载体上，如有必要，然后可以加工成型。适于口服的组合物可按分散单元提供，如制成胶囊、片型、菱形等，其中的每个都含有预定量的本发明中的交联化合物。其它类型的组合物包括水溶液或非水溶液的悬浮体如糖浆、配剂或乳液。其它的药物输送体系包括定时释放、延迟释放或持久释放体系。这类体系可以避免上述交联剂的重复给药。这给患者和医生带来更大方便。很多类型的药物释放体系都是本领域的技术人员所熟知的。这些体系包括聚合物基体系如聚(丙交酯-乙交酯)、共聚乙二酸酯、聚羟基己内酯、聚酰胺酯、聚乙酯、多羟基丁酸和多酸酐等。例如，美国专利第5,075,109号介绍了含有其中所述的药物的聚合物的微胶囊。药物输送体系也包括非聚合物基体系如脂类，包括胆固醇、胆固醇酯等甾醇类和脂肪酸或单、二或三甘油酯等中性油脂；水凝胶释放体系；Sylastic体系；肽基体系、蜡包覆体系；使用常用粘合剂和赋形剂压制成的药片；部分融合植入等体系。具体实例包括但不局限于(a)蚀化体系，其中交联剂以一定形式处于基体内，这种体系在美国专利第4,452,775号，第4,667,014号，第4,748,034号和第5,239,660号中有介绍；以及(b)渗滤体系，其中活性组份以一定速度从聚合物内渗漏出来，美国专利第3,832,253号和第3,854,480号介绍了这种体系。此外，也可采用泵基硬件输送体系，其中的一些适宜植入法。长期持续释放植入体系可能特别适合于治疗慢性病。本发明中所谓“长期释放”意思是制备并安装好植入物，使之至少在10天内最好是60天内持续输送出有活性成分。长期持续释放植入物是本领域的技术人员所熟知的方法，包括上述若干种释放体系。本发明中介绍的交联剂是以有效量施用的。所谓有效量是指足够带来理想疗效的交联化合物的剂量。有效量会因施治对象的具体病情、年纪和身体状况、病情严重程度、治疗周期、协同疗法的特点(如果有的话)，具体的给药方法以及医生的知识和水平等因素不同而变化。例如，激活T细胞的有效量应足以使T细胞活性被提高到统计学上为显著的程度，这可通过细胞增生或T细胞活力的提高来量度。激励理想免疫响应的有效量也可通过细胞增生或T细胞活力的提高来量度。激励理想免疫响应的有效量也可通过测定实验对象免疫功能的变化来确定(如B细胞响应增强，细胞毒性T细胞响应增强，促进骨髓细胞的繁殖，或减缓、停止、预防感染或癌症扩散的能力)。治疗自身免疫性紊乱或过敏性紊乱的有效剂量应该是足以减缓、抑制与紊乱相关的免疫或过敏响应，并从而使疾病的发展或进程被减慢或停止的剂量。因此，应该理解的是，本发明的交联化合物可以用来预防性地治疗有产生免疫响应危险的对象(如接受移植前的受体)的自身免疫性紊乱(如移植排斥)。本文中使用的“抑制”包含上述各种情况。同样，治疗免疫系统紊乱的有效量应能减缓或消除所有与免疫系统紊乱有关的征候，以便阻止紊乱，减缓其进程，或停止免疫系统紊乱的发展。一般说来，最好使用最大剂量，即依据合理的医学判断所提出的最高安全剂量。活性化合物剂量一般从每天约0.001mg/kg到1000mg/kg不等。预计剂量范围从0.01到100mg/kg将是合适的，最好口服，每天一次或几次用药.其它用药形式如静脉注射可用较低剂量的给药。在初始剂量给药后，受药对象响应不充分的情况下可以采用较高剂量(或通过不同的更为集中的送药方式有效地提高剂量)，用量可高到患者能容忍为止。每天多次用药是要获得化合物的适宜的全身水平。其它实施方案在权力要求书规定的范围之内。序列表(1)通用资料(i)申请人TrusteesofTuftsCollege(ii)发明题目MULTIVALENTCOMPOUNDSFORCROSSLINKINGRECEPTORSANDUSESTHEREOF(iii)序列号27(iv)通信地址(A)地址Wolf，Greenfield&amp;Sacks，P.C.(B)街名600AtlanticAvenue(C)城市Boston(D)州MA(E)国家U.S.A.(F)邮编02210(v)计算机数据形式(A)媒体类型软盘(B)计算机IBM兼容机(C)操作系统DOS(D)软件FastSEQforWindows(vi)当前申请数据(A)申请号(B)申请日期1997年6月28日(C)类别(vii)前期申请数据(A)申请号08/671,756(B)申请日期1996年6月28日(A)申请号08/837,305(B)申请日期1997年4月11日(viii)律师/代理人资料(A)名称Plumer，ElizabethR(B)注册号36,637(C)文献/摘要号I0254/7007(ix)通讯资料(A)电话617-720-3500(B)电传617-720-2441(2)SEQIDNO1的资料(i)序列特征(A)长度9个氨基酸(B)类型氨基酸(C)股数单股(D)拓扑结构线性(ii)分子类型肽(xi)顺序说明SEQIDNO1GluAlaAspProThrGlyHisSerTyr15(2)SEQIDNO2的资料(i)序列特征(A)长度9个氨基酸(B)类型氨基酸(C)股数单股(D)拓扑结构线性(ii)分子类型肽(xi)顺序说明SEQIDNO2SerAlaTyrGlyGluProArgLysLeu15(2)SEQIDNO3的资料(i)顺序特征(A)长度9个氨基酸(B)类型氨基酸(C)股数单股(D)拓扑结构线性(ii)分子类型肽(xi)顺序说明SEQIDNO3GluValAspProIleGlyRisLeuTyr15(2)SEQIDNO4的资料(i)顺序特征(A)长度9个氨基酸(B)类型氨基酸(C)股数单股(D)拓扑结构线性(ii)分子类型肽(xi)顺序说明SEQIDNO4MetLeuLeuAlaValLeuTyrCysLeu15(2)SEQIDNO5的资料(i)顺序特征(A)长度9个氨基酸(B)类型氨基酸(C)股数单股(D)拓扑结构线性(ii)分子类型肽(xi)顺序说明SEQIDNO5TyrMetAsnGlyThrMetSerGlnVal15(2)SEQIDNO6的资料(i)顺序特征(A)长度9个氨基酸(B)类型氨基酸(C)股数单股(D)拓扑结构线性(ii)分子类型肽(xi)顺序说明SEQIDNO6TyrLeuGluProGlyProValThrAla15(2)SEQIDNO7的资料(i)顺序特征(A)长度10个氨基酸(B)类型氨基酸(C)股数单股(D)拓扑结构线性(ii)分子类型肽(xi)顺序说明SEQIDNO7LeuLeuApsGlyThrAlaThrLeuArgLeu1510(2)SEQIDNO8的资料(i)顺序特征(A)长度9个氨基酸(B)类型氨基酸(C)股数单股(D)拓扑结构线性(ii)分子类型肽(xi)顺序说明SEQIDNO8AlaAlaGlyIleGlyIleLeuThrVal15(2)SEQIDNO9的资料(i)顺序特征(A)长度31个氨基酸(B)类型氨基酸(C)股数单股(D)拓扑结构线性(ii)分子类型肽(xi)顺序说明SEQIDNO9SerSerSerThrLeuCysThrSerLysAlaAspLysSerSerGlyAsn151015GlnGlyGlyAsnGlyValPheIleValValAsnAlaTrpTyrSer202530(2)SEQIDNO10的资料(i)顺序特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)股数单股(D)拓扑结构线性(ii)分子类型肽(xi)顺序说明SEQIDNO10SerGluAspLeuThrAlaGlyTyrCysLysCysPheGluGluPheVal151015LeuAlaSerArgCysLys20(2)SEQIDNO11的资料(i)顺序特征(A)长度60个氨基酸(B)类型氨基酸(C)股数单股(D)拓扑结构线性(ii)分子类型肽(xi)顺序说明SEQIDNO11GluGlnArgGlnGlyIleLysValGlnLeuIleLeuPheIleLeuArg151015AlaLeuMetIleAsnThrSerSerSerAsnHisIleLeuAspSerArg202530AsnValPheLeuHisThrGlyHisGlyGluProMetValGlnLysGln354045IleGluTrpValLeuIleMetGluLeuIleLysMet505560(2)SEQIDNO12的资料(i)顺序特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)股数单股(D)拓扑结构线性(ii)分子类型肽(xi)顺序说明SEQIDNO12HisLysAlaValPheArgSerGluIleSerLeuGlnLysTrpCysSer151015AspThrGlnLysSerThr20(2)SEQIDNO13的资料(i)顺序特征(A)长度20个氨基酸(B)类型氨基酸(C)股数单股(D)拓扑结构线性(ii)分子类型肽(xi)顺序说明SEQIDNO13AspSerPheGluSerValArgLeuProAlaProPheArgValAsnHis151015AlaValGluTrp20(2)SEQIDNO14的资料(i)顺序特征(A)长度55个氨基酸(B)类型氨基酸(C)股数单股(D)拓扑结构线性(ii)分子类型肽(xi)顺序说明SEQIDNO14IleIleSerProValIlePheGlnIleAlaLeuAspLysProCysHis151015GlnAlaGluValLysHisLeuHisHisLeuLeuLysGlnLeuLysPro202530SerGluLysTyrLeuLysIleLysHisLeuLeuLeuLysArgGluArg354045ValAspLeuSerLysLeuGln5055(2)SEQIDNO15的资料(i)顺序特征(A)长度37个氨基酸(B)类型氨基酸(C)股数单股(D)拓扑结构线性(ii)分子类型肽(xi)顺序说明SEQIDNO15ArgSerLysThrLeuHisHisLeuLeuLysGlnLeuLysProSerGlu151015LysTyrLeuLysIleLysHisLeuLeuLeuLysArgGluArgValAsp202530LeuSerLysLeuGln35(2)SEQIDNO16的资料(i)顺序特征(A)长度27个氨基酸(B)类型氨基酸(C)股数单股(D)拓扑结构线性(ii)分子类型肽(xi)顺序说明SEQIDNO16ProProGlnThrGlyGluLysTyrLeuLysIleLysHisLeuLeuLeu151015LysArgGluArgValAspLeuSerLysLeuGln2025(2)SEQIDNO17的资料(i)顺序特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)股数单股(D)拓扑结构线性(ii)分子类型肽(xi)顺序说明SEQIDNO17AspAlaAspThrTyrTyrIleLeuProArgLysValLeuGlnMetAsp151015PheLeuValHisProAla20(2)SEQIDNO18的资料(i)顺序特征(A)长度20个氨基酸(B)类型氨基酸(C)股数单股(D)拓扑结构线性(ii)分子类型肽(xi)顺序说明SEQIDNO18AspThrLeuLeuLeuLeuProArgLysValLeuGlnMetAspPheLeu151015ValHisProAla20(2)SEQIDNO19的资料(i)顺序特征(A)长度20个氨基酸(B)类型氨基酸(C)股数单股(D)拓扑结构线性(ii)分子类型肽(xi)顺序说明SEQIDNO19LeuHisPheAlaSerArgTrpIlePheLeuPheIleGluProGluCys151015SerGluProArg20(2)SEQIDNO20的资料(i)顺序特征(A)长度10个氨基酸(B)类型氨基酸(C)股数单股(D)拓扑结构线性(ii)分子类型肽(xi)顺序说明SEQIDNO20GlnAspLeuThrMetLysTyrGlnIlePhe1510(2)SEQIDNO21的资料(i)顺序特征(A)长度6个氨基酸(B)类型氨基酸(C)股数单股(D)拓扑结构线性(ii)分子类型肽(xi)顺序说明SEQIDNO21AlaAlaAlaAlaAlaAla15(2)SEQIDNO22的资料(i)顺序特征(A)长度13个氨基酸(B)类型氨基酸(C)股数单股(D)拓扑结构线性(ii)分子类型肽(xi)顺序说明SEQIDNO22HisSerLeuGlyLysTrpLeuGlyHisProAspLysPhe1510(2)SEQIDNO23的资料(i)顺序特征(A)长度19个氨基酸(B)类型氨基酸(C)股数单股(D)拓扑结构线性(ii)分子类型肽(xi)顺序说明SEQIDNO23HisSerLeuGlyLysTrpLeuGlyHisProAspLysPheAlaAlaAla151015AlaAlaAla(2)SEQIDNO24的资料(i)顺序特征(A)长度19个氨基酸(B)类型氨基酸(C)股数单股(D)拓扑结构线性(ii)分子类型肽(xi)顺序说明SEQIDNO24HisSerLeuGlyLysTrpLeuGlyHisProAspLysPheAlaAlaAla151015AlaAla(2)SEQIDNO25的资料(i)顺序特征(A)长度18个氨基酸(B)类型氨基酸(C)股数单股(D)拓扑结构线性(ii)分子类型肽(xi)顺序说明SEQIDNO25AlaAlaAlaAlaAlaPheLysAspProHisGlyLeuTrpLysGlyLeu151015SerHis(2)SEQIDNO26的资料(i)顺序特征(A)长度8个氨基酸(B)类型氨基酸(C)股数单股(D)拓扑结构线性(ii)分子类型肽(xi)顺序说明SEQIDNO26AlaAspProThrGlyHisSerTyr15(2)SEQIDNO27的资料(i)顺序特征(A)长度8个氨基酸(B)类型氨基酸(C)股数单股(D)拓扑结构线性(ii)分子类型肽(xi)顺序说明SEQIDNO27TyrSerHisGlyThrProAspAla1权利要求1.一种具有如下结构的化合物其中D1和D2独立地选自NH和NH2，其中N表示氮的任何同位素，H表示氢的任何同位素；“-”独立地选自单键和双键；B独立地表示硼的任何同位素；A1和A5独立地选自C、CX和N，其中C表示碳的任何同位素，X表示任何能够与C形成单键的其它原子；A2、A3、A4、A6、A7和A8每个都独立地选自CX、CXZ、CZ、NX和O，其中X和Z都独立地选自任何能够与C或N形成单键的原子和任何能够与C或N形成双键的原子，O表示氧的任何同位素；Y1、Y2、Y3和Y4中每个都是独立地选自任何羟基部分和任何能在生理条件下转变成羟基的活性部分；以及L表示连接分子，该分子(i)分子量分布在大约100道尔顿至2,000道尔顿范围内、(ii)跨距分布在大约20埃至大约300埃范围内、并且(iii)包含选自一组以不违背化学规律的方式靠单键或双键连接的由C、O、N、S和Ph原子组成的原子链，其中S表示硫的任何同位素且Ph表示磷的任何同位素。2.根据权利要求1的化合物，其中结构以及独立地表示结合部分，式中R表示分子的其余部分。3.根据权利要求2的化合物，其中在由D1和D2组成的基团与结合部分的B之间有4个原子。4.根据权利要求2的化合物，其中结合部分呈L构型。5.根据权利要求2的化合物，其中Y1、Y2、Y3和Y4是羟基基团。6.根据权利要求1的化合物，其中与B结合的A4呈L构型，与B结合的A5呈L构型。7.根据权利要求2的化合物，其中结合部分是与B(硼分子)共轭的L-氨基酸的残基。8.根据权利要求2的化合物，其中结合部分选自L-Lys-L-boroPro和L-Lys-L-boroPro的衍生物。9.根据权利要求1的化合物，其中连接剂分子包含选自羧酸酯基、氨基、硫氢基、咪唑啉基、链烯基、卤化酰基和CH2X(其中X是卤素)的官能团。10.根据权利要求1化合物，其中连接剂分子被进一步定义为具有下述结构其中[G]包含选自碳、氮、氧、和硫原子的原子；[J]选自CH2分子、碳原子链、氮原子链、氧原子链；m、p和q表示选自1至50的整数。11.根据权利要求10化合物，其中[G]是选自L-氨基酸残基和D-氨基酸残基的基团R，其中L氨基酸选自赖氨酸、半胱氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、组氨酸、精氨酸、谷氨酸盐(或酯)和天冬酰胺；D-氨基酸选自赖氨酸、半胱氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、组氨酸、精氨酸、谷氨酸盐(或酯)和天冬酰胺。12.根据权利要求1的化合物，其中所述的连接剂分子选自己二酸(肥酸)、EGS、1，4-二氨基丁烷、1，4-二硫代丁烷、二硫苏糖醇、赖氨酸、半胱氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、组氨酸、精氨酸、谷氨酸盐或酯和天冬酰胺。13.根据权利要求1的化合物，其中连接剂分子在结合部分包含谷氨酸残基时至少包含两个氨基。14.根据权利要求1的化合物，其中连接剂分子在结合部分包含天冬氨酸残基时至少包含两个氨基。15.根据权利要求1的化合物，其中连接剂分子在结合部分包含半胱氨酸残基时至少包含两个巯基。16.根据权利要求1的化合物，其中连接剂的跨距分布在大约30埃至大约100埃范围内。17.一种具有如下结构的化合物其中D独立地选自NH和NH2，其中N表示氮的任何同位素，H表示氢的任何同位素；“-”独立地选自单键和双键；B独立地表示硼的任何同位素；A1独立地选自C、CX和N，其中C表示碳的任何同位素，X表示任何能够与C形成单键的原子；A2、A3和A4每个都独立地选自CX、CXZ、CZ、NX和O，其中X和Z独立地选自任何能够与C或N形成单键的原子和任何能够与C或N形成双键的原子，O表示氧的任何同位素；Y1和Y2每个都是独立地选自羟基和任何在生理条件下能转变成羟基的活性部分；L表示连接剂分子，该分子(i)分子量分布在大约100道尔顿至2,000道尔顿范围内、(ii)跨距分布在大约20埃至大约300埃范围内、并且(iii)包含选自一组以不违背化学规律的方式靠单键或双键连接的由C、O、N、S和Ph原子组成的原子链，其中S表示硫的任何同位素且Ph表示磷的任何同位素；以及P表示分布在3至30个氨基酸范围内的肽，其顺序同系足以与天然生成的受体结合。18.根据权利要求17的化合物，其中结构以及独立地表示结合部分，式中R表示分子的其余部分。19.根据权利要求18的化合物，其中在D与结合部分的B之间有4个原子。20.根据权利要求18的化合物，其中结合部分呈L构型。21.根据权利要求17的化合物，其中Y1和Y2是羟基基团。22.根据权利要求17的化合物，其中与B结合的A4呈L构型。23.根据权利要求18的化合物，其中结合部分是与B(硼分子)共轭的L-氨基酸的残基。24.根据权利要求18的化合物，其中结合部分选自L-Lys-L-boroPro和L-Lys-L-boroPro的衍生物。25.根据权利要求17的化合物，其中连接剂分子包含选自羧酸酯基、氨基、硫氢基、咪唑啉基、链烯基、卤化酰基和CH2X(其中X是卤素)的官能团。26.根据权利要求17的化合物，其中的连接剂分子进一步定义具有下述结构其中[G]包含选自碳、氮、氧、氢和硫原子的原子；[J]选自CH2分子、碳原子链、氮原子链、氧原子链；m、p和q表示选自1至50的整数。27.根据权利要求26的化合物，其中[G]是选自L-氨基酸残基和D-氨基酸残基的基团R，其中L氨基酸选自赖氨酸、半胱氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、组氨酸、精氨酸、谷氨酸盐(或酯)和天冬酰胺；D-氨基酸选自赖氨酸、半胱氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、组氨酸、精氨酸、谷氨酸盐(或酯)和天冬酰胺。28.根据权利要求17的化合物，其中连接剂分子选自肥酸、2至15个连续的氨基酸残基、1，4-二氨基丁烷、1，4-二硫代丁烷、和二硫苏糖醇。29.根据权利要求17的化合物，其中连接剂的跨距分布在大约30埃至大约100埃范围内。30.根据权利要求17的化合物，其中肽在大约7至25个氨基酸范围内。31.根据权利要求17的化合物，其中的肽选自(a)来源于人体髓磷脂蛋白质的肽；(b)蛾细胞色素C肽；(c)破伤风毒素；(d)HIV-1GP120肽；(e)髓磷脂的碱性蛋白质肽；(f)肿瘤抗原肽；以及(g)传染物的抗原肽。32.根据权利要求31的化合物，其中人体髓磷脂蛋白质肽选自髓磷脂碱性蛋白质、髓磷脂蛋白脂质蛋白质和与髓磷脂有关的糖蛋白，其中髓磷脂蛋白脂质蛋白质选自PLP肽139-151和PLP肽190-209；蛾细胞色素C肽选自肽MCC94-103；髓磷脂的碱性蛋白质肽选自MBP肽1-11；以及破伤风毒素肽选自破伤风类毒素肽和P2破伤风类毒素肽。33.根据权利要求17的化合物，其中天然生成的受体是T细胞表面受体和B细胞表面受体。34.根据权利要求33的化合物，其中的细胞表面受体选自TCR/CD3、CD2、CD4、CD8、CD10、CD26、CD28、CD40、CD45、B7.1和B7.2。35.一种具有下述结构的化合物其中D独立地选自NH和NH2，其中N表示氮的任何同位素，H表示氢的任何同位素；“-”独立地选自单键和双键；B独立地表示硼的任何同位素；A1独立地选自C、CX和N，其中C表示碳的任何同位素，X表示任何能够与C形成单键的原子；A2、A3和A4每个都独立地选自CX、CXZ、CZ、NX和O，其中X和Z独立地选自任何能够与C或N形成单键的原子和任何能够与C或N形成双键的原子，O表示氧的任何同位素；Y1和Y2每个都是独立地选自羟基和任何在生理条件下能转变成羟基的活性部分；n表示1和200之间的整数；E1和E3是性质不同的活性基团，其中(a)R和R’包括分子中与这个反应无关的其余部分；(b)E1借助共价键连接到R’上，用E1-R’或R’-E1一并表示；(c)E3借助共价键连接到R上，用E3-R或R-E3一并表示；(d)R’表示E1-R中不经受化学反应的部分；(e)R表示R-E3中不经受化学反应的部分；(f)E1经历同E3的化学反应形成产物E1’-E3’和副产物F，其中F选自2H+和2e-、H2O和任何其它副产物；(g)其中H+是氢的任何同位素的阳离子、e-是电子；(h)其中H表示氢的任何同位素，O表示氧的任何同位素；(i)其中E1’和E3借助共价键结合；(j)E1不经历与另一个E1的化学反应；(k)E3不经历与另一个E3的化学反应；以及(1)E1和E3选自羧酸酯基、氨基、咪唑啉基、硫氢基、醛、酯以及其它活性物质；其中[J]p、E2、[I]q和[G]m一起包括连接剂部分，而且[G]m、[J]p和[I]q独立地代表连接剂分子，该分子(i)分子量分布在大约100道尔顿至2,000道尔顿范围内、(ii)跨距分布在大约20埃至大约300埃范围内、并且(iii)包含选自一组以不违背化学规律的方式靠单键或双键连接的由C、O、N、S和Ph原子组成的原子链，其中S表示硫的任何同位素且Ph表示磷的任何同位素；m、p和q独立地表示选自1至50的整数；以及其中E2选自CX、CH、N、PhYZ、PhU和任何能与[J]p、[I]q和[G]m形成共价键的其他部分并且其中(a)C是碳的任何同位素；(b)x是任何能与碳形成单键的原子的同位素；(c)H是氢的任何同位素；(d)N是氮的任何同位素；(e)Ph是磷的任何同位素；(f)Y是能与磷形成单键的任何原子的任何同位素；(g)Z是能与磷形成单键的任何原子的任何同位素；以及(h)U是能与磷形成双键的任何原子的任何同位素。36.根据权利要求17的化合物，其中结构以及独立地表示结合部分，式中R表示分子的其余部分。37.根据权利要求35的化合物，其中(a)[G]m是赖氨酸、半胱氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、组氨酸、精氨酸、谷氨酸酯或盐以及天冬酰胺的D-或L-异构体的侧链；(b)E2是赖氨酸、半胱氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、组氨酸、精氨酸、谷氨酸酯或盐以及天冬酰胺的D-或L-异构体；(c)E1和E3选自氨基部分和羧酸部分；以及(d)E1和E3彼此是全然不同的。38.根据权利要求35的化合物，其中(a)[G]m是赖氨酸、半胱氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、组氨酸、精氨酸、谷氨酸酯或盐以及天冬酰胺的D-或L-异构体的侧链；(b)E2选自2-羧基丁基、2-羧基丙基、2-氨基丁基、2-氨基丙基、和带氨基或羧基侧链的碳氢链；(c)[J]p和[I]q独立地表示碳氢链；(d)E1和E3选自氨基部分和羧酸部分；以及(e)E1和E3彼此是全然不同的。39.一种对人体携带CD26的淋巴细胞和携带CD26的造血细胞的繁殖进行刺激活化的方法，所述方法包括使所述淋巴细胞或造血细胞与浓度足以诱导繁殖或活化作用的根据权利要求1、17、35或49中任何一项的化合物接触。40.根据权利要求39的方法，其中所述接触是通过向遭受以淋巴细胞激活或浓度不正常为特征的疾病折磨的患者提供所述化合物。41.根据权利要求40的方法，其中所述的疾病是由HIV感染引起的。42.根据权利要求40的方法，其中所述化合物是与能刺激所述淋巴细胞活化或繁殖的第二种不同的制剂结合给药的。43.根据权利要求40的方法，其中所述化合物是借助选自口服、肌肉注射、皮下注射和静脉注射的途径给药的。44.根据权利要求39的方法，其中所述的使淋巴细胞与所述化合物接触是在活体外完成的。45.根据权利要求40的方法，其中所述疾病状态是肿瘤，而且所述的携带CD26的淋巴细胞是溶胞性T细胞或辅助T细胞。46.根据权利要求40的方法，其中所述患者正在遭受化疗或放疗的副作用的折磨，所述副作用之一是免疫系统的细胞耗损的结果，其中免疫系统的细胞选自来源于淋巴谱系、红血球谱系和骨髓谱系的细胞。47.根据权利要求40的方法，其中所述患者遭受导致免疫系统的细胞耗损的肾功能障碍的折磨。48.根据权利要求40的方法，其中所述患者遭受导致免疫功能缺乏的骨髓病的折磨。49.具有式I的化合物[P2(R2)m]n-L-P1R1I其中P1代表第一目标部分，该部分模拟在调整免疫系统时涉及的细胞表面上表达的蛋白酶的底物结合位点；R1代表反应基团，该基团与蛋白酶的活性中心中的官能团反应；P2代表第二目标部分，该部分可以与第一目标部分相同，也可以不同；R2代表第二活性基团，该基团可以与第一活性基团相同，也可以不同；m＝0或1；n为选自1至10的整数；以及L代表连接剂分子。50.根据权利要求49的化合物，其中P2＝P1，并且R2不存在或不同于R1。51.根据权利要求49的化合物，其中P1选择性地与第一细胞上的DPIV结合，P2选择性地与抗原提呈细胞上主要的组织相容性分子结合。52.一种疫苗，包括根据权利要求49的化合物。53.一种药物组合物，包括根据权利要求1、17、35或49的化合物和药理学上可接受的载体。54.一种制造药物组合物的方法，包括将根据权利要求1、17、35或49的化合物放到药理学可接受的载体中。55.根据权利要求39的方法，其中所述的给药包括从对象获得T细胞、骨髓细胞、干细胞或祖代早期谱系细胞，在活体外使被分离的细胞与有效刺激细胞量的化合物接触，以及将细胞再次导入对象。56.一种治疗自身免疫症的方法，该方法包括将根据权利要求1、17、35或49的化合物在需要这种治疗时以有效的抑制对象体内自身免疫症的量提供给对象。57.根据权利要求40的方法，其中所述的患者患有源于免疫系统细胞耗损的免疫缺乏病。58.根据权利要求49的化合物，其中P2是逆反肽(retroinversopeptide)。59.根据权利要求49的化合物，其中P2是肿瘤抗原肽。全文摘要已设计并研制了合成的均二价和杂二价交联化合物。这些化合物分子量低、具有对抗或拮抗活性、并且诱导两个一致的或类似的天然受体(均二价化合物)之间的结合或诱导两个不同的天然受体(杂二价化合物)之间的结合。文档编号A61P37/04GK1229414SQ97195969公开日1999年9月22日申请日期1997年6月27日优先权日1996年6月28日发明者威廉姆·W·巴科夫庆申请人:图福大学理事会