专利名称：改善皮肤状况的方法
技术领域：
本发明与顺势医学有关，特别是与使用一种生理上可接受的、含有信息能的基质进行美容和医疗有关。
背景技术：
顺势医学被认为是复制信息，将天然物质如中草药，抗体或花粉分子结构中的信息或模式，如不同频率的振荡模式或组合复制到某一基质上。这种已携带信息或已结合模式的基质可产生所期望的效果，例如，采用顺势疗法，这种所期望的效果可减少枯草热患者的过敏反应。
K.E.Werner Kropp的美国专利5,138,172提供了一种通过将基质暴露于磁矢量势场中给予某种基质(如盐溶液、油)信息能的方法。K.E.Werner Kropp中的美国专利5,012,110提供了一种通过将基质放在对应的磁极组之间以产生合成顺势基质的方法。
于1990年1月26日公开的法国专利申请(公开号2,634,381)和1991年7月25日公开的JJC Morez(WO9110450)提供了一种产生大量顺势医药的方法，即通过收发机的形式给某种物质(如水)有关顺势治疗药物的电磁信息。
本发明的目的之一是提供一种新的应用生理上可接受的含有信息能的基质以用于美容，即改善皮肤状况的方法。
本发明的另一目的是提供一种新的方法，即使用含有信息能的生理上可接受的基质用于顺势医学。
发明概述本发明与可暴露于信息能(如发现于天然草药中的振荡模式)的某种基质(如盐的水溶液、按摩油或其它药用载体)的应用有关。一般地，这种基质可以是气态、液态、固态或液晶态。盐的水溶液可含有氯化钠、氯化钾及可溶性铁离子和钙离子。
通过在皮肤表面施用这种含有信息能的基质可改善皮肤状况。我们所指的皮肤状况，并无限制，包括干性皮肤、Zerosis、鱼鳞癣、头皮屑、黄褐斑、角质物、黑斑、色斑、老年斑、肝斑、妊娠斑、皱纹、皮肤疵点、皮纹、油性皮肤、痤疮、雀斑、湿疹、皮肤瘙痒、银屑病、炎性皮肤病、角化紊乱、与年龄有关的皮肤变化、需清洁、护理及治疗的皮肤或指甲、需清洗或柔顺的头发或头皮。
此发明提供了一种特殊的方法，它是通过用含有信息能的生理上可接受的基质接触细胞以提高人表皮成纤维细胞对脯氨酸的摄入量来实现的。
增加脯氨酸的摄入量是这些细胞胶原合成的指征，其美容作用是改善皮肤状况的途径之一。位于真皮的成纤维细胞具有很多功能，如合成胶原、弹性蛋白、氨基葡聚糖(GAGS)。脯氨酸是构成胶原成分的一种氨基酸。通过增加脯氨酸的总摄入量，可保证胶原合成的总量增加。胶原和弹性蛋白是两种使皮肤结实和富有弹性的蛋白质。年轻的、健康的皮肤富含这两种蛋白质。随着机体的老化，这类蛋白质的合成能力下降，所以，老年人、健康欠佳者皮肤内胶原/弹性蛋白的总量下降。此发明可通过增加真皮内胶原/弹性蛋白的含量来改善皮肤状况。
本发明还进一步提供了一种特殊的、制备生理上可接受的含有信息能基质的方法。该方法在K.E.Werner Kropp的美国专利5,012,110和5,138,172中有所描述，方法是对放置于磁场中特殊结构(称为磁矢量势场(magnetic vector potential field))内的基质给予所要求频率的信息能，给基质信息能的装置由两部分组成a)两组磁性相反的磁体，每组磁体靠在一起，按N极和S极交错排列，而当基质置于对应的磁体中时，则暴露于磁矢量势场中。b)当基质在磁矢量势场中给予基质信息能的装置。
可将基质暴露在具有下列特点的Wekroma棒中使基质具有信息能1200.7抗氧化剂BHT,N-乙酰胱氨酸，β胡萝卜素622 Cellulite232 激活胶原合成，平衡棒7509 中和自由基326 抑制细菌生长329 抑制细菌生长Fibro1刺激成纤维细胞生长Fibro2刺激成纤维细胞生长优选地，当用Wekroma Bio-Transer装置使基质暴露于上述Wekroma棒中时，该基质至少通过该仪器一次。基质可单独或一起暴露于棒中。
本发明还提供了改善皮肤状况的方法，包括A)将生理上可接受的基质暴露于磁矢量势场中；B)给皮肤施用这种基质。这样，暴露于磁矢量势场中基质(如同上述没有给予信息能的磁体)可有效地获得一种改善皮肤状况的能力。用磁场处理基质的优选方法是将基质通过Wekroma.Bio-Transer装置至少一次，并在仪器中不放置任何Wekroma棒。
附图简述
图1显示了由Wekroma-Vertrieb Schweiz出产的Bio-Transer装置。
图2描述了当经Wekroma Bio-Transer装置处理的Body Booster矿泉水浓度增加时，人表皮成纤维细胞中脯氨酸含量增加的情形。
优选实施方案的详细描述基质暴露于信息能的方式已在K.E.Werner Kropp的美国专利5,138,172、K.E.Werner Kropp的美国专利5,012,110、J.J.C.MOREZ的法国专利申请(出版号2,634,381)、J.J.C.MOREZ的WO91,10450中有所描述，该基质一般为气态、液态、固态或液晶态。
一种将水溶液暴露于信息能的方法是使用Wekroma Bio-Transer设备(购自Wekroma-Vertrieb Schweiz,BEAT,Lang 6313,Mengingen,联邦德国)，由Wekroma提供的232号棒放在Wekroma Bio-Transer设备见图1。含水溶液的试管经打开的通道通过Wekroma Bio-Transer设备。溶液在Bio-Transer设备中的滞留时间并没有标准，从不足一秒到数秒，检测试管通过Wekroma Bio-Transer设备的速率为自由落下的速度。滞留时间和通过速率可由以固定速率通过Bio-Transer设备的液泵控制。
实施例1下面实验证明了经Wekroma Bio-Transer设备处理的盐水溶液是如何刺激人皮肤成纤维细胞摄入脯氨酸的。
1．在99.2克无菌蒸馏水中加入0.4克氯化钠和0.4克氯化镁，室温下摇动至溶解，得到澄清溶液。
2．将步骤1所得溶液分成5等份，并保存在无菌试管中。
3．第1份样品不作处理，作为对照与其它处理过的样品进行对比。
4．将Wekroma提供的232-1号棒置于Wekroma Bio-Transer设备中(见附图1)。
5．按图中所示将含有无菌盐水的检测管通过Wekroma Bio-Transer设备(见图)，该步骤重复两次，然后将该样品放置一旁。
6．再将232-1号棒从Wekroma Bio-Transer设备中移出，将232-2号棒放入，将另一支含无菌盐水的检测管通过Bio-Transer设备，如步骤5。
7．重复上述步骤直到剩余检测管处理完毕。样品4用232-3号棒处理，样品5用232-4号棒处理，232-1,2,3,4号棒彼此相同，可替换。
8．所有样品均进行脯氨酸摄入量的检测。
全部结果表明，所有样品脯氨酸摄入量均高于溶剂对照样品，经Wekroma Bio-Transer设备处理的盐溶液(样品2和样品5)要显著高于样品1(未经Wekroma Bio-Transer设备处理的盐溶液)，并具有统计学意义。
检测脯氨酸摄入量的方案如下用样品溶液处理2块汇合的24孔板，加入浓度为1,5,10％的未处理对照溶液，同一溶液通过232号棒，在相同浓度下进行分析作为对照。每份样品一式三份，每份样品加入1μCi/ml3H脯氨酸进行标记(1μl/ml孔)。反应板孵育5天以上，其间重复处理步骤，处理完毕后，对该板进行蛋白质总摄入量分析，每板用1ml冷的PBS清洗，再用1ml冷的TCA洗10分钟。TCA重复洗两遍，每次5分钟。每板再用1ml MeOH清洗，晾干。蛋白质溶于0.3M氢氧化钠中，轻摇半小时，收集上清液，加至闪烁剂中，用液态闪烁器检测。
实施例2下述实验说明用Wekroma Bio-Transer设备处理的特殊矿泉水如何刺激人皮肤成纤维细胞摄入脯氨酸。
Body Booster矿泉水的组成见表1，将其用232号棒在WekromaBio-Transer设备中处理，详见实施例1。
三块汇合24孔板在加矿泉水之前，用1μCi/ml3H脯氨酸进行标记。用经Wekroma Bio-Transer设备处理的Body Booster矿泉水进行实验，以未处理的矿泉水作为对照。
每份样品一式三份，浓度分别为0.1％,0.5％,1％，反应板在检测总蛋白量之前孵育一周，同时每板用1ml冷的PBS清洗，再用1ml冷的TCA清洗10分钟，每板用TCA洗2遍，每次5分钟。每板再用1mlMeOH清洗，晾干。蛋白质用0.3M氢氧化钠(含1％SDS)溶解，轻摇半小时，收集上清液，加至闪烁剂中，用液态闪烁器检测。
可观察到经Wekroma处理的Body Booster矿泉水中蛋白质含量增加，在0.5％,0.1％,1％浓度组，蛋白质剂量依赖性增加，分别增加3％,17％和27％，见表2和图2。5％和0.1％剂量组的结果有统计学意义，P值分别为0.02,0.03实施例3下述实验证明Body Booster矿泉水可促进蛋白质摄入。将采用232号棒(见实施实施例1)经Wekroma转换仪处理的矿泉水与对照相比，可增加脯氨酸的摄入，但用1200.7号棒则不能使脯氨酸的摄入超过对照组。
两块24孔汇合板经如下处理用含有Wekroma 232和1200.7号棒的Body Booster矿泉水进行不同处理，将Body Booster矿泉水对照物加至1％,5％和10％的浓度，相同样品通过232和1200.7号棒，并在相同浓度下检测。每份样品一式三份。样品加入1μCi/ml3H(1μl/ml孔)脯氨酸进行标记，反应板孵育5天以上，其间重复处理步骤，孵育后对该板进行蛋白质总摄入量分析，每板用1ml冷的PBS清洗，再用1ml冷的TCA洗10分钟。TCA重复洗两遍，每次5分钟。每板再用1ml MeOH清洗，晾干。蛋白质溶于0.3M氢氧化钠中，轻摇半小时，收集上清液，加至闪烁剂中，用液态闪烁器检测。
经232号棒处理，Body Booster矿泉水可增加52％的摄入量，而对未处理组只增加12％，与未处理组相比，1200.7号棒处理组的结果相似。Student′s检验的结果表明，所有数据具有统计学意义，见表3。
实施例4我们对显示Body Booster矿泉水可促进脯氨酸摄入的早期实验进行重复。未转入信息的Body Booster矿泉水可分别提高脯氨酸的摄入44％,38％和33％。见表4。实验中，用1200.7号棒转换的信息能可使浓度为10％的矿泉水剂量组脯氨酸摄入量增加16％，并具有统计学意义。
两块24孔汇合板用经Wekroma 1200.7号棒的Body Booster矿泉水处理，将Body Booster矿泉水对照物加至1％,5％和10％的浓度，相同溶液通过232号棒，并在同一浓度下检测。TGFβ(10ng/ml)作为阳性对照，每份样品一式三份。样品加入1μCi/ml3H(1μl/ml孔)脯氨酸进行标记，反应板孵育5天以上，其间重复处理步骤，孵育后对该板进行蛋白质总摄入量分析，每板用1ml冷的TCA洗10分钟，TCA重复洗两遍，每次5分钟。每板再用1ml MeOH清洗，晾干。蛋白质溶于0.3M氢氧化钠中，轻摇半小时，收集上清液，加至闪烁剂中，用液态闪烁器检测。
TGFβ使脯氨酸摄入量增加了63％和87％(P＜0.003)。BodyBooster矿泉水作为对照，当浓度为1％,5％和10％时，使脯氨酸摄入量增加了44％,38％和33％。与Body Booster矿泉水对照组相比，用1200.7号棒(抗氧化剂)处理的Body Booster矿泉水的5％和10％剂量组分别增加了6％和16％。Student′s t-检验显示，与未处理的对照组比，所有数据具有统计学意义。统计学分析表明，与Body Booster矿泉水对照组相比，P值远远高于0.05，包括用1200.7号棒处理的10％浓度组。
实施例5下述实验证明，与未经Wekroma 232号棒处理的盐浓度相同的对照水溶液相比，用Wekroma 232号棒处理的氯化钠和氯化镁水溶液可使健康人表皮成纤维细胞(“NHDF”)的胶原产量显著提高。经处理的水溶液当贮存至少6个月时，其提高胶原产量的能力仍保持。
在去离子水中制取0.4％氯化钠和0.4％氯化镁的5种溶液。其一(3249/1)不用Wekroma 232号棒处理，作为对照。其余4种溶液(3249/2～3249/5)分别用Wekroma 232-1,232-2,232-4和232-4号棒处理。所有Wekroma棒彼此相同。所有5种溶液均检测3种不同浓度(1％,5％和10％)，看其是否能提高NHDF细胞的胶原合成。
与对照溶剂相比，所有样品均可提高NHDF细胞的胶原产量，但程度不同(参见表5中％变化一栏)。与3249/1相比，Wekroma处理的溶液3249/2和3249/5可显著提高NHDF细胞合成胶原的数量，该结果具有统计学意义。而3249/1作为未处理溶液，与对照溶剂相比，可提高胶原产量。
将用Wekroma 232号棒处理的盐溶液密封，在室温条件下贮存6个月，再重新检测其提高NHDF合成胶原的能力。这种“保存溶液”也与重新用Wekroma 232号棒处理的贮存溶液(标记为“重制溶液”)比较。
对对照盐溶液、保存溶液和重制溶液的检测结果见表6。
10％对照盐溶液(氯化钠和氯化镁溶于去离子水中)不会提高胶原含量。含10％重制溶液的溶剂用#232-4号棒处理后可使胶原水平提高36％，使DNA含量减少6％，可使对照盐溶液中胶原/DNA总量增加43％。原来用#232-4号棒处理的保存溶液当浓度为10％时，可使胶原净含量提高14％，DNA下降24％，使胶原/DNA总量增加50％。相反，含羞草(Mimosa Pudica)作为阳性对照，可使胶原净含量增加20％，DNA减少65％，胶原/DNA总量增加238％。
在所检测的样品中，只有那些用#232-4号棒处理的重制溶液和用#232-4号棒处理的保存溶液可使胶原含量确实增加。与对照盐溶液相比，这些样品可分别使胶原增加43％和50％。在检测中，阳性对照(含羞草50μg/ml)与溶剂对照相比，使胶原增加238％。
下面概括了上述用来确定胶原和DNA含量的两种方法。
在用Wekroma样品(n=3)处理前，NHDF细胞种殖在96孔板上，并生长至细胞汇合，加入含羞草(50μg/ml)作为阳性对照，以溶剂作为阴性对照。反应板在收集上清液之前于37℃、5％CO2下孵育4天，然后于-70℃保存在硅化试管中直至ELISA反应完成。
用适宜量的人1型胶原包被96孔酶免疫测定级微量滴定板，于4℃过夜。在单独的反应板(蛋白结合量低)上，等体积的一抗(兔抗人1型胶原)或与标准胶原混合或与未知和允许于4℃反应过夜的胶原混合(抑制步骤)。标准胶原或未知胶原将与一抗结合，去掉部分未结合的一抗。
将包被反应板的胶原用含0.05％吐温-20的磷酸盐缓冲液充分洗去，干燥后，用含3％小牛血清的PBS于37℃封闭1.5小时。被封闭的溶液从孔中移出，将反应板干燥，孔中所含有一抗/标准或未知溶液转移至封闭的胶原包被板，将该板在室温下孵育30分钟，让所有未与自由胶原结合的一抗与包被板的胶原结合。孵育30分钟后，弃去溶液。溶液中所弃去的是与自由胶原(来自标准胶原或未知胶原)结合的一抗。任何未与胶原结合的一抗在抑制反应步骤时与包被反应孔的胶原结合，如果有许多胶原在标准或未知溶液中，则多数一抗将耗尽，来不及与包被反应孔的胶原结合。
对与包被孔结合的一抗的检测是这样进行的先加入羊抗兔Ig碱性磷酸酶结合抗体，再在室温下孵育1.5小时，然后用PBST充分清洗。检测孔中碱性磷酸酶时，以对硝基苯基磷酸为底物，用分子微板检测仪测出405nm处的光密度，并得出标准曲线，由曲线即可得知未知胶原浓度。
DNA检测方法如下DNA含量可由水中细胞的冻融裂解情况及加入Hoechst 33258(一种与DNA结合并发荧光的染料)测得。反应板经分光光度计检测后，DNA含量可由标准曲线计算得出。
实施例6不给予信息能仅用磁矢量势场处理来制得一种基质是可能的。例如，将一种溶液通过不放入任何棒的Wekroma Bio-Transer设备即可。用这种经处理的基质施用于皮肤可改善皮肤状况。
表1机体强化矿质水的组成
表2
表3
表4
表5 暴露于样品溶液时NHDF细胞的胶元合成量
表6 暴露于保存溶液和重制溶液时NHDF细胞的胶原合成量
<p>对本领域的普通技术人员来说显而易见的是，其它没有具体公开的实施方案仍落在本发明的范围和精神实质之中。所以，除非在下述权利要求中已涉及，则本说明书不应作为限制该发明的依据。
上述所有引用文献特此在参考文献中著录。
权利要求
1．一种改善皮肤状况的方法，包括a)将一种生理上可接受的基质暴露于一种磁矢量势场中；b)给皮肤施用该暴露后的基质。
2．一种改善皮肤状况的方法，包括a)将一种生理上可接受的基质暴露于一种磁矢量势场中并直接给该基质信息能，而该基质被暴露于磁矢量势场中以产生含信息能的基质；b)给皮肤施用这种含有信息能的基质。
3．一种通过给皮肤施用生理上可接受的基质从而改善皮肤状况的方法，其中此类基质是通过将生理上可接受的基质暴露于磁矢量势场而制备的。
4．一种通过给皮肤施用含信息能的生理上可接受的基质从而改善皮肤状况的方法，其中此类基质是将生理上可接受的基质暴露于磁矢量势场中而制备的并且在所述基质暴露于磁矢量势场中时直接将信息能作用于该基质上。
5．权利要求1,2,3或4的方法，其中所说的改善是皮肤胶原含量增加。
6．权利要求1,2,3或4的方法，其中该基质为气态，液态，固态或液晶态。
7．权利要求6的方法，其中该基质是液态或液晶态的。
8．权利要求7的方法，其中该基质是液态的。
9．权利要求7的方法，其中的液态包括水。
10．权利要求9的方法，其中的液态包括氯化钠和氯化镁。
11．权利要求9的方法，其中液态包括铁离子和钙离子。
12．权利要求1,2,3或4的方法，其中该磁矢量势场是由两组磁性相反的磁体构成的，所说的每组磁体包括多个并排的磁体，N和S极交错排列，其中当将该基质放在相对磁体组之间时该基质即暴露于磁矢量势场中。
13．权利要求12的方法，其中所述基质至少一次通过WekromaBio-Transer设备。
14．权利要求2或4的方法，其中至少一个选自1200.7,622,232,7509,326,329,Fibro1和Fibro2的Wekroma棒被用于直接将信息能作用于该基质。
15．权利要求14的方法，其中至少一个232号Wekroma棒被用于直接将信息能作用于该基质。
16．权利要求15的方法，其中所述基质至少一次通过WekromaBio-Transer设备，其中Wekroma Bio-Transer设备产生磁矢量势场并含有至少一个232号Wekroma棒。
全文摘要
通过给皮肤施用生理上可接受的基质从而改善皮肤状况的方法,其中所述基质被暴露于磁矢量势场中并含有信息能。
文档编号A61K8/19GK1226338SQ97196632
公开日1999年8月18日 申请日期1997年5月13日 优先权日1996年5月21日
发明者J·古伯尼克, G·思奥卡 申请人:E-L管理公司