专利名称：单表位重复或多联单表位重复－表位疫苗的制备方法
技术领域：
本发明属于生物工程技术领域，特别涉及表位疫苗的制备和生产。
常规疫苗制备技术通常采用以下方法(1)利用减毒或灭活的病原体(如脊髓灰质炎病毒)；(2)利用病原体的天然的或基因重组的相关组分，如细菌类毒素、病毒包膜蛋白等制备的亚单位疫苗；(3)利用病毒的核酸制备疫苗。
现有的这些疫苗制备技术在预防由变异频度很高的某些病原体(如爱滋病病毒和流感病毒)引发的传染病时，存在着很大的困难；此外，现有的疫苗不能直接诱导预先确定的表位特异性的免疫应答。
本发明的目的是为克服已有技术的不足之处，设计出的一种单表位重复或多联单表位重复-表位疫苗的制备方法，使其具有不需要减毒或灭活的病原体或病原体的天然蛋白或基因重组蛋白抗原以及病原体的核酸；能够直接诱导预先确定的表位特异性的免疫应答；能够对付因病原体变异而导致的疫苗失效；能够制备出预防不同病原体的多联疫苗等突出的优势。
本发明提出的单表位重复或多联单表位重复-表位疫苗的制备方法，其特征在于包括以下步骤(1)人工合成带有病原体天然蛋白或基因重组蛋白上的特定表位的表位多肽；(2)所说的表位是以重复的形式出现在人工合成的表位多肽上；(3)所说的表位多肽耦联到载体蛋白或载体多肽上形成耦联物或者直接合成为树枝状多肽分子(MAP，Multiple Antigen Peptide)；(4)所说的耦联物或树枝状多肽分子配以适合的佐剂制备成单表位重复的表位疫苗或者是制备成多联单表位重复-表位疫苗。
本发明根据由本发明人最先提出的表位疫苗的全新理论(Immunology Today，20588-589，1999年12月)设计出的表位疫苗的制备方法具有如下效果第一、能诱导很强的针对特定表位的免疫应答，与相应的亚单位疫苗相比，能显著提高针对特定表位的抗体水平(10-20倍)；第二、某些天然蛋白上的特定表位在机体内不能诱导出较强的具有防护作用的免疫应答，利用本发明制备的疫苗能够诱导出高滴度的表位特异性的抗体(表位特异性的抗体量为10-240微克每毫升血清)，能够起到有效的免疫防护作用；第三、应用本发明制备的多联单表位-表位疫苗能够在机体内同时诱导出针对多个特定表位的抗体应答。
实施例一制备HIV-1单表位重复的表位疫苗步骤1.人工合成以下三种重复表位的表位多肽C(ELDKWA)G(ELDKWA)G(ELDKWA)G(ELDKWA)C(GPGRAFY)(GPGRAFY)(GPGRAFY)(GPGRAFY)C(RILVERYLKD)GG(RILVERYLKD)步骤2.利用MBS(m-maleimidobenzoyl-N-hydroxy suocinimide ester)分别将三种表位多肽与载体蛋白BSA耦联；步骤3.将三种耦联物分别和铝佐剂混合制备成三种单表位重复的表位疫苗。
实施例二制备HIV-1多联单表位重复的表位疫苗方法1步骤1、2、3与实施例一相同；步骤4.将上述制备的三种单表位重复的表位疫苗混合免疫；方法2步骤1与实施例一相同；步骤2将上述制备的三种单表位重复的表位多肽混合，利用MBS(m-maleimidobenzoyl-N-hydroxy suocinimide ester)将三种表位多肽与载体蛋白BSA同时耦联；步骤3将耦联物分别和铝佐剂混合制备成三种单表位重复的表位疫苗。
权利要求
1.一种单表位重复或多联单表位重复-表位疫苗的制备方法，其特征在于包括以下步骤1)人工合成带有病原体天然蛋白或基因重组蛋白上的特定表位的表位多肽；2)所说的表位是以重复的形式出现在人工合成的表位多肽上；3)所说的表位多肽耦联到载体蛋白或载体多肽上形成耦联物；4)所说的耦联物配以适合的佐剂制备成单表位重复的表位疫苗或者是制备成多联单表位重复-表位疫苗。
3.如权利要求1或2所述的表位疫苗的制备方法，其特征在于还包括将所说的制备的几种单表位重复的表位疫苗混合免疫制备成多联单表位重复-表位疫苗。
2.一种单表位重复或多联单表位重复-表位疫苗的制备方法，其特征在于包括以下步骤1)人工合成带有病原体天然蛋白或基因重组蛋白上的特定表位的表位多肽；2)所说的表位是以重复的形式出现在人工合成的表位多肽上；3)所说的表位多肽直接合成为树枝状多肽分子；4)所说的树枝状多肽分子配以适合的佐剂制备成单表位重复的表位疫苗或者是制备成多联单表位重复-表位疫苗。
3.如权利要求1或2所述的表位疫苗的制备方法，其特征在于还包括将所说的制备的几种单表位重复的表位疫苗混合免疫制备成多联单表位重复-表位疫苗。
4.一种单表位重复或多联单表位重复-表位疫苗的制备方法，其特征在于包括以下步骤1)人工合成带有病原体天然蛋白或基因重组蛋白上的几种特定表位的表位多肽；2)将所说的几种种单表位重复的表位多肽混合，利用MBS将几种种表位多肽与载体蛋白BSA同时耦联；3)将耦联物分别和佐剂混合制备成多联单表位重复的表位疫苗。
全文摘要
本发明属生物工程技术领域,本发明首先人工合成带有病原体天然蛋白或基因重组蛋白上的特定表位的表位多肽;其表位是以重复的形式出现在人工合成的表位多肽上;其表位多肽耦联到载体蛋白或载体多肽上形成耦联物或者直接合成为树枝状多肽分子;其耦联物或树枝状多肽分子配以适当佐剂制备成单表位重复或多联单表位重复－表位疫苗。本发明可诱导表位特异性的免疫应答;可对付因病原体变异而导致的疫苗失效;可制备出多联疫苗。
文档编号A61K39/44GK1256150SQ9912380
公开日2000年6月14日 申请日期1999年11月12日 优先权日1999年11月12日
发明者陈应华, 肖翌, 于天维, 陆韵, 丁健 申请人:清华大学