专利名称：使用lhrh拮抗剂检测致密乳腺组织中损害的方法
背景技术：
乳腺癌是妇女中最普遍流行的癌症之一并且是导致妇女因癌症死亡的主要原因之一。已经证实乳房X线摄影术(或乳腺组织的放射性显影成象术)是一种检测和诊断早期乳腺肿瘤的有效方法。然而，当前进行的乳房X线摄影术无法检测到所有的乳腺癌。乳房X线摄影术在妇女中检测早期肿瘤的能力是可变的，这取决于所检验乳腺组织的特征。用放射性方法检测妇女体内“致密”乳腺的乳腺损害是非常疑难的问题即在进行乳房X线摄影术时乳腺组织显示出致密的实质型。乳腺组织的放射性显影密度可以使得乳腺损害模糊不清，使得检测变得更为困难并增加了所述损害被忽略的可能性。这类假阴性乳房X线照片导致诊断和随后治疗乳腺癌的延误。
在放射性致密乳腺中检测损害的难题不完全是一个小问题。尽管致密乳腺的普遍性因年龄而下降(例如据Threat B.等在(1980)《癌症》(Cancer)452550-2556中报导在超过60岁的妇女中大约有6％)，但是据报导大约有25-50％的妇女在乳房X线摄影术时有致密实质型(参见Threat，B.等(1980)《癌症》(Cancer)452550-2556；Jackson，V.P.等(1993)《放射学》(Radiology)188297-301；Van Gils，C.H.等(1995)《英国放射学杂志》(Br.J.Radiol.)681133-1135)。已经在大量临床研究中报导了放射性乳腺密度和乳腺癌危害增加之间的相关性(参见例如Wolfe，J.N.(1976)《癌症》(Cancer)372486-2492；Krook，P.M.等(1978)《癌症》(Cancer)411093-1097；Threat，B.等，同上；Andersson，I.等(1981)《放射学》(Radiology)13859-62；Saftlas，A.F.和Szklo，M.(1987)《流行病学回顾》(Epidemiol.Rev.)9146-174；Warner，E.等(1992)《癌症的检测与预防》(Cancer Det.Prevent.)1667-72；Ma，L.等(1992)《国际癌症研究杂志》(J.Natl.Cancer Inst.)84781-785；Ciatto，S.和Zappa，M.(1993)《欧洲放射学杂志》(Eur.J.Radiol.)17122-125；Oza，A.M.和Boyd，N.F.(1993)《流行病学回顾》(Epidemiol.Rev.)15196-208；Jenks，S.(1994)《国际癌症研究杂志》(J.Natl.CancerInst.)86578-580；Boyd，N.F.等(1995)《国际癌症研究杂志》(J.Natl.Cancer Inst.)87670-675)。所观察到的与乳腺密度相关的增加的癌症危险性归因于1)属于乳腺肿瘤发展中实际危险因素的乳腺实质型与2)“掩盖”致密乳腺中早期肿瘤(参见例如Egan，R.I.和Mosteller，R.C.(1977)《癌症》(Cancer)402087-2090；Saftlas，A.F.和Szklo，M.，同上；Oza，A.M.和Boyd，N.F.，同上)。由于所报导的乳腺密度与癌症发生率的相关性，所以建议带有致密乳腺的妇女更为经常作乳房X线摄影术，它可给这些妇女带来与乳房X线摄影术自身相关的另外的危险性。
已经指出对使放射性致密乳腺成象的难题几乎没有解决方法。改善在致密乳腺中检测乳腺损害的手段已经集中到开发代替乳房X线摄影术的成象方式上诸如超声波扫描术、透射术、温度记录术(thermo-graphy)、电脑化X射线断层术、磁共振成象术、放射性核素成象术和数字化乳房X线摄影术，它们可以提供更好地确定致密乳腺中损害的方法(参见例如Jackson，V.P.等(1993)《放射学》(Radiology)188297-301；Braeuning，M.P.等(1995)《乳腺癌的研究与治疗》(Breast Cancer Res.Treat.)3531-38)。不过，使用另外的成象方法可能需要健康保健提供者用于新设备和全体人员培训的大量经费，这可以阻碍这种手段的广泛应用。仍然需要改进乳腺组织中损害检测的另外的策略，特别是与传统乳房X线摄影术共同使用的策略。
在一个实施方案中，本发明提供了一种用于降低受检测者乳腺密度中的方法。该方法包括在产生乳腺组织的影象前按照足以降低乳腺密度的量和时间期限对受检测者给予LHRH拮抗剂。
在另一个实施方案中，本发明提供了一种用于检测受检测者乳腺组织中损害的方法。该方法包括按照足以降低乳腺组织密度的量和时间期限对受检测者给予LHRH拮抗剂；和产生所述乳腺组织的影象以便检测到乳腺组织中的损害。
例如，所检测到的乳腺损害可以是恶性或良性乳腺肿瘤。例如，通过标准荧屏乳房X线摄影术或通过另一种可选择的用于使乳腺组织成象的方法诸如超声波扫描术、透射术、温度记录术、电脑化X射线断层术、磁共振成象术、放射性核素成象术或数字化乳房X线摄影术可以检测乳腺组织的影象。
本发明进一步提供了一种在产生乳腺组织的影象前用于降低乳腺密度的包装制剂。该包装制剂包括LHRH拮抗剂和关于在产生受检测者乳腺组织的影象前使用该LHRH拮抗剂来降低受检测者乳腺密度的说明书。发明详述本发明提供了用于致密乳腺组织中损害的改进检测方法和组合物。本发明方法的一般特征在于在产生乳腺组织的影象前按照足以降低乳腺密度的量和时间期限对受检测者给予LHRH拮抗剂。LHRH是一种由下丘脑产生的与垂体中LHRH受体(LHRH-R)发生相互作用以刺激黄体生成素(LH)产生的天然激素。LHRH拮抗剂抑制LHRH受体，使得LH的释放被抑制，这最终导致性激素(例如妇女体内的雌激素)的循环水平下降。在本发明的一个实施方案中，性激素(例如妇女体内的雌激素)的循环水平下降到暂时失去生殖能力状态的水平(例如低于约20-30pg/ml)。在本发明的另一个实施方案中，性激素(例如妇女体内的雌激素)的循环水平下降到暂时失去生殖能力状态的水平(例如低于约20-30pg/ml)且然后在产生乳腺组织影象前使之升至中等水平(例如约30-50pg/ml)。尽管不受机理的限制，但是认为因LHRH拮抗剂治疗而导致的这些循环雌激素水平的下降会导致或至少有助于放射性乳腺密度下降。这种机理例如与绝经后妇女的乳腺密度比绝经前妇女的乳腺密度显著降低这一观察结果相一致。
为了更容易理解本发明，首先定义本文中所用的某些术语。
本文所用的术语“LHRH拮抗剂”指的是抑制促黄体素释放激素受体以使LH的释放被抑制的化合物。术语“LHRH拮抗剂”可以与术语“LHRH-R拮抗剂”交换使用以指可抑制LHRH-R而使LH释放被抑制的化合物。在本领域中已经描述了LHRH拮抗剂；参见例如Folkers等的美国专利5,470,947；Folkers等与Roeske等的美国专利5,843,901；Haviv的美国专利5,413,990；Haviv的美国专利5,300,492；Koerber等的美国专利5,371,070；Hoeger等的美国专利5,296,468；Janaky等的美国专利5,171,835；Coy等的美国专利5,003,011；Coy等的美国专利4,431,635；De等的美国专利4,992,421；Roeske等的美国专利4,851,385；Nestor，Jr.等的美国专利4,801,577；和Roeske等的美国专利4,689,396。
例如，可以用于本发明方法的优选的LHRH-R拮抗剂包括含有下列结构的肽类或其药物上可接受的盐A-B-C-D-E-F-G-H-I-J其中A是焦-Glu、Ac-D-Nal、Ac-D-Qal、Ac-Sar或Ac-D-PalB是Hi s或4-Cl-D-PheC是Trp、D-Pal、D-Nal、L-Nal-D-Pal(N-O)或D-TrpD是SerE是N-Me-Ala、Tyr、N-Me-Tyr、Ser、Lys(iPr)、4-Cl-Phe、His、Asn、Met、Ala、Arg或Ile；F是 其中R和X各自是H或烷基；且
Y含有偶极部分；G是Leu或TrpH是Lys(iPr)、Gln、Met或ArgI是Pro；且J是Gly-NH2或D-Ala-NH2。
在优选的实施方案中，Y选自内鎓盐、叔胺氧化物、腈氧化物、吡啶-N-氧化物和吡啶鎓两性离子。在特别优选的实施方案中，Y是内鎓盐、吡啶-N-氧化物和吡啶鎓两性离子。在优选的实施方案中，所述的肽包括下列结构Ac-D-Nal-4-Cl-Phe-D-Pal-Ser-Tyr-D-Pal(N-O)-Leu-Lys(iPr)-Pro-D-Ala-NH2；在另一个优选的实施方案中，所述的肽包括下列结构或其药物上可接受的盐Ac-D-Nal-4-Cl-D-Phe-D-Pal-Ser-Tyr-D-Pal(CH2COO-)-Leu-Lys(iPr)-Pro-Ala-NH2；在另一方面中，本发明方法中所用的LHRH-R拮抗剂包括含有下列结构的肽或其药物上可接受的盐A-B-C-D-E-F-G-H-I-J其中A是焦-Glu、Ac-D-Nal、Ac-D-Qal、Ac-Sar或Ac-D-PalB是His或4-Cl-D-PheC是Trp、D-Pal、D-Nal、L-Nal-D-Pal(N-O)或D-TrpD是SerE是N-Me-Ala、Tyr、N-Me-Tyr、Ser、Lys(iPr)、4-Cl-Phe、His、Asn、Met、Ala、Arg或Ile；
F是D-Arg、D-Lys(iPr)、D-Pal(iPr)、D-Cit或Q，其中Q具有下列结构 其中R和X各自是H或烷基；且Z含有阳离子部分，所述的阳离子部分选自阳离子型吡啶鎓部分和锍部分，条件是阳离子部分不是N-甲基吡啶鎓；G是Leu或TrpH是Lys(iPr)、Gln、Met、Arg或QI是Pro；且J是Gly-NH2或D-Ala-NH2，条件是F和H中至少一个是Q。
在优选的实施方案中，F是Q且Z是阳离子型吡啶鎓部分。在优选的实施方案中，Z是N-苄基吡啶鎓部分。在其它优选实施方案中，F是Q且Z是锍部分。在其它优选的实施方案中，H是Q且Z是锍部分。在特别优选的实施方案中，所述的肽包括下列结构或其药物上可接受的盐Ac-Sar-4-Cl-D-Phe-D-Nal-Ser-Tyr-D-Pal(Bzl)-Leu-Lys(iPr)-Pro-Ala-NH2；在另一个特别优选的实施方案中，所述的肽包括下列结构或其药物上可接受的盐Ac-D-Nal-4-Cl-D-Phe-D-Trp-Ser-Tyr-D-Met(S+Me)-Leu-Arg-Pro-Ala-NH2；
在特别优选的实施方案中，所述的肽包括下列结构或其药物上可接受的盐Ac-D-Nal-4-Cl-D-Phe-D-Pal-Ser-Tyr-D-Arg-Leu-Met(S+Me)-Pro-Ala-NH2；在另一方面中，本发明方法中所用的LHRH-R拮抗剂包括含有下列结构的肽或其药物上可接受的盐A-B-C-D-E-F-G-H-I-J其中A是p-Glu、Ac-D-Nal、Ac-D-Qal、Ac-Sar或Ac-D-PalB是His或4-Cl-D-PheC是Trp、D-Pal、D-Nal、L-Nal-D-Pal(N-O)或D-TrpD是SerE是N-Me-Ala、Tyr、N-Me-Tyr、Ser、Lys(iPr)、4-Cl-Phe、His、Asn、Met、Ala、Arg或Ile；F是下列结构 其中R和X各自是H或烷基；且T含有修饰受体部分；G是Leu或TrpH是Lys(iPr)、Gln、Met或ArgI是Pro；且J是Gly-NH2或D-Ala-NH2。
在优选的实施方案中，T选自内鎓盐、锍部分、α-卤代羰基、硫酸盐、磺酸盐、烷基卤化物和苄基卤化物。在特别优选的实施方案中，T是α-卤代羰基。
在另一个实施方案中，本发明方法中所用的LHRH-R拮抗剂包括含有下列结构的肽或其药物上可接受的盐A-B-C-D-E-F-G-H-I-J其中A是pyro-Glu、Ac-D-Nal、Ac-D-Qal、Ac-Sar或Ac-D-PalB是His或4-Cl-D-PheC是Trp、D-Pal、D-Nal、L-Nal-D-Pal(N-O)或D-TrpD是SerE是N-Me-Ala、Tyr、N-Me-Tyr、Ser、Lys(iPr)、4-Cl-Phe、His、Asn、Met、Ala、Arg或Ile；F是下列结构 其中R和X各自是H或烷基；且T含有N-酰基亲水部分；G是Leu或TrpH是Lys(iPr)、Gln、Met或ArgI是Pro；且J是Gly-NH2或D-Ala-NH2。
在另一方面中，本发明方法中所用的LHRH-R拮抗剂包括含有下列结构的肽或其药物上可接受的盐
A-B-C-D-E-F-G-H-I-J其中A是焦-Glu、Ac-D-Nal、Ac-D-Qal、Ac-Sar或Ac-D-PalB是His或4-Cl-D-PheC是Trp、D-Pal、D-Nal、L-Nal-D-Pal(N-O)或D-TrpD是SerE是N-Me-Ala、Tyr、N-Me-Tyr、Ser、Lys(iPr)、4-Cl-Phe、His、Asn、Met、Ala、Arg或Ile；F是下列结构 其中R和X各自是H或烷基；且L含有小的极性部分；G是Leu或TrpH是Lys(iPr)、Gln、Met或ArgI是Pro；且J是Gly-NH2或D-Ala-NH2。
在优选的实施方案中，L选自D-Cit、D-Asn、D-Gln和D-Thr。
优选的LHRH拮抗剂是那些具有低释放组胺活性(例如在标准体外组胺释放检测试验中的组胺释放ED50至少是3μg/ml、更优选至少5μg/ml、且更优选至少10μg/ml)并表现出水溶性的LHRH拮抗剂。具有低释放组胺活性和水溶性的优选的LHRH拮抗剂包括美国专利申请顺序号08/480,494和相应的PCT申请WO96/40757中所公开的化合物，特别将这两篇文献的全部内容引入本文作为参考。特别优选的LHRH拮抗剂包括下列结构Ac-D-Nal1、4-Cl-D-Phe2、D-Pal3、N-Me-Tyr5、D-Asn6、Lys(iPr)8、D-Ala10-LHRH(本文称作PPI-149且在WO96/40757中有进一步的描述)。通过Roeske的美国专利4,851,385中所述的方法可以检测LHRH拮抗剂的释放组胺活性。例如，在诸如Corbin和Beattie在《内分泌研究通讯》(Endocrine Res.Commun.)21(1975)中所述的动物模型中可以检测候选LHRH拮抗剂在抑制LH释放中的功效。在该检测试验中，通过测定化合物在大鼠中的抑制排卵活性(AOA)来检测候选化合物的LHRH拮抗剂活性。
术语“乳腺密度”用来指通过乳房X线摄影术反映出的乳腺实质外观。乳腺组织的放射摄影外观随乳腺内相应脂肪、结缔组织和上皮组织的相对量而改变。在放射性条件下，脂肪看起来是透明的(即较暗的外观)；而结缔组织和上皮组织看起来是致密的(即较明亮的外观)。用于将乳腺密度分类的常规系统是Wolfe的系统(《癌症》(Cancer)(1976)372486-2492)，Wolfe定义了4种乳腺实质型。根据Wolfe所述，N1表示几乎完全由可能具有少量纤维性结缔组织而没有明显导管的脂肪组成的基本上正常的乳腺；P1表示包括最低程度显著导管轮廓的乳腺、一般主要由乳晕下区域(或通常几乎不会在乳腺的腋上四分之一或其它部分)的脂肪组成，在乳晕下区域可以观察到表示突出导管的珠状线性轮廓(高达乳腺的四分之一体积)，在通常情况中这些导管的直径可以在约1mm至最高达3或4mm之间改变；P2表示包含中度至重度突出导管轮廓的乳腺(大于乳腺的四分之一体积)，其中导管通常在乳腺的中心部分有三角形沉积且包含的程度可以在实质的二分之一体积至接近实质的全部体积且结缔组织增生足以在某些区域中产生导管的融合；且DY表示极其致密的实质，它通常指的是结缔组织增生。一般将具有使用Wolfe系统的P2或DY实质型的乳腺组织看作“致密乳腺”。
可以将另一种分类系统用于评估乳腺密度。例如Threat等(《癌症》(Cancer)452550-2556)进一步改进了Wolfe分类系统。除维持N1、P1和P2类别外，Threat等还定义了如下的另外的细分类DY1充满不超过乳腺二分之一的均匀密度；DY2充满超过乳腺二分之一的均匀密度；DY混合脂肪和在乳腺致密区域内具有明显突出导管的致密乳腺，密度量在乳腺内含物的二分之一至大于二分之一中改变且在各密度内突出导管是明显的；和QDY非常组织化的缠绕型乳腺组织的特定型，它具有几乎与密度不相关的透明组织化弯曲(QDY1)或大于50％乳腺的均匀密度的组织化弯曲(QDY2)。将分类为DY1、DY2、DY或QDY2的乳腺看作“致密乳腺”，将分类为P2的乳腺看作“中等密度”并将分类为N1、P1或QDY1的乳腺看作是“透明的”。还可以将计算机辅助的测定方法用于评估和分类乳腺密度(例如正如Boyd，N.F.等在(1995)《国际癌症研究杂志》(J.Natl.Cancer Inst)87670-675中所述)。
“用来使乳腺密度下降”或“用于降低乳腺密度”的本发明的方法和组合物指的是相对于不使用本发明方法或组合物治疗的受检测者的乳腺实质型而言可导致受检测者的乳腺实质型改变至更为透明(即几乎不致密)外观的方法和组合物。
本文所用的术语“受检测者”指的是恒温动物、优选哺乳动物、更优选人且最优选女性。尽管本文在上下文中均以女性乳腺组织为例(它是最优选的实施方案)描述了本发明，但是本发明的组合物和方法在检测男性乳腺组织中罕有损害中的应用也在关注之列。
术语“产生乳腺组织影象”指的是本领域公知的不同技术之一在观测乳腺结构中的应用。这类技术的实例包括但不限于荧屏乳房X线摄影术(即标准乳房X线摄影术)、超声波扫描术、透射术、温度记录术、电脑化X射线断层术、磁共振成象术、放射性核素成象术和数字化乳房X线摄影术。通过本领域众所周知的程序来进行标准荧屏乳房X线摄影术。作为用于观测乳腺结构的上述其它成象技术在Jackson，V.P.等(1993)《放射学》(Radiology)188297-301和Braeuning，M.P.等(1995)《乳腺癌的研究与治疗》(Breast CancerRes.Treat.)3531-38中有描述。
术语“乳腺损害”或单纯的“损害”指的是可以通过产生乳腺组织影象而检测到的乳腺组织中任何异常情况。这类损害的实例包括但不限于恶性乳腺肿瘤、良性恶性肿瘤和囊肿。
本发明的一个方面涉及在产生受检测者乳腺组织的影象前降低受检测者乳腺密度的方法。该方法包括在产生受检测者乳腺组织的影象前按照足以降低乳腺密度的量和时间期限对受检测者给予LHRH拮抗剂。
LHRH拮抗剂的给药时间期限可以随诸如所涉及的特定受检测者、治疗前乳腺组织的密度、所用的特定LHRH拮抗剂和所需的结果(例如所需乳腺组织的透明程度)这类因素而改变。然而，在不同的优选实施方案中，将所述的LHRH拮抗剂在产生乳腺组织的影象前大约一个月给药、在产生乳腺组织的影象前大约一周给药、在产生乳腺组织的影象前大约1-3天给药或在产生乳腺组织的影象前大约6-24小时给药。
LHRH拮抗剂的给药量可以随诸如所涉及的特定受检测者、治疗前乳腺组织的密度、所用的特定LHRH拮抗剂和所需的结果这类因素而改变。足以降低受检测者乳腺密度的LHRH拮抗剂的用量的非限制性范围在0.01μg/kg-10mg/kg。在不同的优选实施方案中，LHRH拮抗剂的给药剂量为约5-1000μg/kg/天、约10-500μg/kg/天或约10-100μg/kg/天。优选的剂量包括30μg/kg/天、50μg/kg/天和100μg/kg/天。
治疗方式也可以随如所涉及的特定受检测者、治疗前乳腺组织的密度、所用的特定LHRH拮抗剂和所需的结果这类因素而改变。例如，可以按单次剂量形式诸如单次注射(例如单次皮下注射或静脉注射)来给予LHRH拮抗剂。另一方面，可以在一段时间内按多重剂量形式诸如多次注射(例如多次皮下注射或静脉注射)给予LHRH拮抗剂。本文所用的术语“多重剂量”和“多次注射”分别指的是一次以上的剂量或一次以上的注射。例如，可以通过将多次注射分成几小时至几天的间隔来给予LHRH拮抗剂，诸如将2-10次注射分成3、4、5、6、7、8、9、10、12、24、36或48小时的间隔来给予LHRH拮抗剂。
另一方面，可以以使LHRH拮抗剂在一段时间内持续释放入受检测者的形式诸如通过连续输注(例如经商购于Alzet的皮下渗透泵)或以缓释制剂形式给予LHRH拮抗剂。本文所用的术语“缓释制剂”指的是包括在一段时间期限内、优选几天到1-4周至1-3个月将LHRH拮抗剂连续输送给受检测者的制剂。一般经皮下或肌内给予这类制剂并使预定量的药物在一段时间内连续稳定地释放在受检测者体内。
在一个优选的实施方案中，将LHRH拮抗剂配制成如美国申请顺序号08/762,747和相应PCT申请PCT/US97/22881中所述的缓释制剂，特别将这两篇文献的内容引入本文作为参考。简单地说，将LHRH拮抗剂配制成含有LHRH拮抗剂和载体大分子复合物的药物组合物，所述的载体大分子可在给予所述复合物时在体内持续输送所述的LHRH拮抗剂。通过将LHRH拮抗剂与载体大分子在使得形成基本上不溶于水的复合物的条件下混合而制成这种复合物，例如将LHRH拮抗剂的水溶液与载体大分子混合至所述复合物沉淀为止。所述的复合物可以是固体形式(例如膏、颗粒、粉或冻干物)或可以将粉状形式的所述复合物精细粉碎成足以形成稳定的液体混悬液或半固体分散体。在体内给药前，该复合物适合于灭菌诸如通过γ射线照射或电子束照射。用于所述复合物的优选载体大分子是阴离子型聚合物(诸如阴离子聚醇衍生物)或其片段及其盐(例如钠盐)。可用来将聚醇衍生化的阴离子部分包括例如羧酸酯、磷酸酯或硫酸酯基团。特别优选的阴离子型聚合物是阴离子多糖衍生物或其片段及其盐(例如钠盐)。载体大分子可以包括单一分子种类(例如单一类型的聚合物)或两种或多种不同的分子种类(例如两种类型聚合物的混合物)。特殊阴离子型聚合物的实例包括羧甲基纤维素、藻胶、藻酸盐、阴离子型乙酸酯聚合物、阴离子型丙烯酸聚合物、黄原胶(xantham gum)、乙醇酸淀粉钠及其片段、衍生物及其药物上可接受的盐；以及阴离子型交叉菜胶衍生物、阴离子型聚半乳糖醛酸衍生物和硫酸化和磺酸化的聚苯乙烯衍生物。优选的阴离子型聚合物是羧甲基纤维素钠盐。在某些实施方案中，所述的载体大分子(优选羧甲基纤维素钠)和LHRH拮抗剂(优选PPI-149)的混合比例为载体大分子∶肽类化合物＝0.2∶1(w/w)。在各种其它的实施方案中，载体大分子与肽类化合物的混合比例(w/w)例如是0.5∶1、0.4∶1、0.3∶1、0.25∶1、0.15∶1或0.1∶1。在其它的优选实施方案中，LHRH拮抗剂与载体大分子的固体离子型复合物中的肽含量按重量计为57％、60％、65％、70％、75％、79％或更高。在其它优选的实施方案中，LHRH拮抗剂与载体大分子的固体离子型复合物中的肽含量按重量计为57-79％。
另一方面，例如，LHRH拮抗剂的缓释制剂可以是含有聚合物的制剂，所述的聚合物选自聚丙交酯聚合物、聚乙交酯聚合物和聚丙交酯/聚乙交酯共聚物(例如，所述的药物被包裹在含有所述聚合物或共聚物的微囊中)。这类适合于储药注射的 缓释制剂在本领域中是公知用于给予LHRH兴奋剂诸如亮丙瑞林(参见例如美国专利4,677,191和4,728,721；还在下面进一步描述合适的制剂)的。可以配制缓释制剂以便在预定时间期限内输送药物。
为了实现持续治疗延长的时间期限，有必要重新给予缓释制剂。例如，可以以每月为基础重新给予输送一个月期限LHRH拮抗剂的缓释制剂以便实现持续几个月的治疗(例如6个月)。类似地，可以以每周为基础重新给予输送一周期限LHRH拮抗剂的缓释制剂以便实现持续几周的治疗。本文提供的缓释制剂(参见实施例2)可以输送LHRH拮抗剂至少约一个月的期限且由此可以以每月为基础重新给予缓释制剂以便实现延长的治疗。
本发明的方法可以与本领域中公知的具有LHRH拮抗剂活性的任意不同化合物共同使用，所述化合物的非限制性实例包括Nal-Glu(具有下列结构Ac-D-Nal(2)1、4-Cl-D-Phe2、D-Pal3、Arg5、D-Glu6(AA)、D-Ala10-LHRH)和SB-75(也称作CetrorelixTM)(具有下列结构Ac-D-Nal1、4-Cl-D-Phe2、D-Pal3、D-Cit6、D-Ala10-LHRH)。LHRH拮抗剂通常是LHRH十肽的类似物。可以用于本发明方法的另一个LHRH拮抗剂实例具有下列结构Ac-D-Nal1、4-Cl-D-Phe2、D-Pal3、N-Me-Tyr5、D-Lys(N-g-烟酰基)6、Lys(iPr)8、D-Ala10-LHRH(在欧洲专利EP400 065B中进一步有描述)。
用于本发明方法的特别优选的LHRH拮抗剂具有下列结构Ac-D-Nal1、4-Cl-D-Phe2、D-Pal3、N-Me-Tyr5、D-Asn6、Lys(iPr)8、D-Ala10-LHRH(本文称作PPI-149)。
PPI-149表现出低组胺释放活性和高溶解性。此外，在给药时，PPI-149可快速使性激素水平下降到失去生殖能力的水平。例如，当以300或1000μg/kg的剂量对雄性大鼠给予单次剂量的PPI-149时，截止到给药后6小时血浆睾酮水平下降到接近无法检测到的水平。截止到给药300μg/kg剂量后24小时，睾酮水平恢复到正常水平；而在给药1000μg/kg剂量后，直到72小时时睾酮水平才恢复到正常水平。当将1、10或100μg/kg的PPI-149以8次静脉剂量、每3小时给予一次(分别相当于8、80或800μg/kg/天)给药时，在每3小时给予一次10μg/kg的剂量时睾酮达到失去生殖能力水平。低到1μg/kg的剂量(相当于8μg/kg/天)可诱发血浆睾酮水平的显著下降。使用300或1000μg/kg/天的剂量(“高剂量”)经渗透泵连续皮下输注PPI-149两周、随后另外用5、15或50μg/kg/天(“低剂量”)连续输注两周这一治疗过程可在使用两种最初高剂量之一的第一个7天内(且可能在第一个24小时内)产生睾酮的去生殖能力水平，且通过另外给予随后的所有三个低剂量21天来维持这种去生殖能力水平。在撤去渗透泵后，睾酮水平的恢复在两周内完全。
本发明的另一个方面涉及用于检测受检测者乳腺组织中损害的方法。该方法包括下列按照足以降低受检测者乳腺组织密度的量和时间期限对受检测者给予LHRH拮抗剂；和产生所述乳腺组织的影象以便检测到乳腺组织中的损害。
优选的情况是，通过该方法检测的损害是肿瘤诸如恶性或良性肿瘤。通过本领域中公知的用于使乳腺结构显影的各种技术中的任意一种可以生成所述乳腺组织的影象，所述的技术的实例包括但不限于荧屏乳房X线摄影术(即标准乳房X线摄影术)、超声波扫描术、透射术、温度记录术、电脑化X射线断层术、磁共振成象术、放射性核素成象术和数字化乳房X线摄影术。在一个优选的实施方案中，通过标准荧屏乳房X线摄影术来产生所述乳腺组织的影象。
正如上述降低乳腺密度的方法中所述，在检测乳腺组织中损害的本发明方法中，给予LHRH拮抗剂的时间期限可以根据许多不同因素(如上所述)而改变，而在不同的实施方案中，将所述的LHRH拮抗剂在产生乳腺组织的影象前对受检测者给药大约一个月、在产生乳腺组织的影象前给药大约一周、在产生乳腺组织的影象前给药大约1-3天或在产生乳腺组织的影象前给药大约6-24小时。
正如上述降低乳腺密度的方法中所述，在检测乳腺组织中损害的本发明方法中，给予LHRH拮抗剂的量可以根据许多不同因素(如上所述)而改变，而在不同的实施方案中，LHRH的给药剂量在约5-1000μg/kg/天、约10-500μg/kg/天或约10-100μg/kg/天的范围。足以降低受检测者乳腺密度的LHRH拮抗剂的用量的非限制性范围是0.01μg/kg-10mg/kg。优选的剂量包括30μg/kg/天、50μg/kg/天和100μg/kg/天。
正如上述降低乳腺密度的方法中所述，在检测乳腺组织中损害的本发明方法中，LHRH拮抗剂给药的治疗方式可以根据许多不同因素(如上所述)而改变，而在不同的实施方案中，按照单次注射形式、通过多次注射、通过连续输注或以缓释制剂形式给予LHRH拮抗剂。
本发明的另一个方面涉及一种在产生受检测者乳腺组织的影象前降低乳腺密度的包装制剂。该包装制剂包括LHRH拮抗剂和关于在产生受检测者乳腺组织的影象前使用该LHRH拮抗剂来降低乳腺密度的说明书。在一个实施方案中，所述包装制剂内的LHRH拮抗剂是适合于皮下或静脉注射的剂型。在另一个实施方案中，所述包装制剂内的LHRH拮抗剂是适合于连续输注的剂型。在另一个实施方案中，所述包装制剂内的LHRH拮抗剂是缓释制剂形式。
可以将适用于本发明方法和包装制剂的LHRH拮抗剂制成适合于对受检测者给药的药物组合物。优选的情况是，所述的药物组合物包括LHRH拮抗剂和药物上可接受的载体。本文所用的“药物上可接受的载体”包括生理可相容的任何溶剂、分散介质、包衣材料、抗菌剂和抗真菌剂、等渗剂和延缓吸收剂等。优选的情况是，所述的载体适合于静脉、肌内、皮下或非肠道给药(例如通过注射)。根据给药途径的不同，可以将所述的活性化合物包衣以便防止所述化合物受到酸类作用和其它可使化合物失活的自然条件的影响。
通过本领域中公知的各种方法可以给予LHRH拮抗剂。在一个实施方案中，以一种按时间释放的制剂形式(也称作缓释制剂)例如以一种包含缓慢释放聚合物的组合物形式或适合于储存注射的组合物形式来给予所述的LHRH拮抗剂。可以将活性化合物与防止所述化合物快速释放的载体一起进行制备，诸如包括植入物、经皮药贴和微囊化输送系统在内的控释制剂。特别优选的缓释制剂包括与如上进一步所述的阴离子型聚合物(优选羧甲基纤维素)复合的LHRH拮抗剂(优选PPI-149)。可以使用生物可降解、生物可相容聚合物，诸如乙烯乙酸乙烯酯、聚酐类、聚乙醇酸、胶原蛋白、聚原酸酯类、聚乳酸和聚乳酸聚乙醇酸共聚物(PLG)。用于制备这类制剂的许多方法已经被申请专利或是本领域技术人员所一般公知的。参见例如《缓释和控释药物输送系统》(Sustained snd Controlled Release DrugDelivery Systems)J.R.Robinson编辑，Marcel Dekker，Inc.，New York，1978。制剂包括控释组合物诸如本领域公知用于给予亮丙瑞林(商品名Lupron)的组合物，例如微囊剂(美国专利4,652,441和4,91 7,893)、注射剂(美国专利4,849,228)、用于制备微囊剂或注射剂的乳酸-乙醇酸共聚物(美国专利4,677,191和4,728,721)；和用于水溶性多肽类的缓释组合物(美国专利4,675,189)。
当适当配制时，可以将LHRH拮抗剂例如与惰性稀释剂或可吸收可食用的载体一起进行口服给药。将LHRH拮抗剂(和其它也可以包裹在硬或软壳胶囊内的组分)压制成片剂或直接混入受检测者的食物中。对于口服疗法的给药来说，可以将LHRH拮抗剂与赋形剂混合并以可食用的片剂、含片、锭剂、胶囊剂、酏剂、混悬剂、糖浆剂、糯米纸囊剂等的剂型使用。当然，LHRH拮抗剂在所述组合物和制剂中的百分比可以改变。
为了经不是非肠道的途径给予LHRH拮抗剂，有必要用一种物质对所述化合物包衣以便防止其失活或将所述的化合物与防止其失活的物质共同给药。例如，可以将LHRH拮抗剂在一种合适的载体例如脂质体或一种稀释剂中对受检测者进行给药。药物上可接受的稀释剂包括盐水和含水缓冲溶液。脂质体包括水包油包水CGF乳剂以及常用的脂质体(Strejan等(1984)《神经免疫学杂志》(J.Neuroimmunol.)727)。药物上可接受的载体包括无菌水溶液或分散体和用于无菌注射溶液或分散体临时配制的无菌粉末。用于药物活性物质的这类介质和试剂的应用是本领域众所周知的。除任意与活性化合物相容的常用介质或试剂以外，所关注的是它们在本发明药物组合物中的应用。还可以将辅助活性化合物混入所述的组合物中。
LHRH拮抗剂组合物在制备和储存条件下一般必须是无菌而稳定的。可以将该组合物配制成溶液、微乳液、脂质体或适合于高药物浓度的其它有序结构。所述的载体可以是溶剂或含有例如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇和液体聚乙二醇等)的分散介质及其适当混合物。例如，通过使用包衣材料诸如卵磷脂、通过在分散体的情况中维持所需的颗粒大小并通过使用表面活性剂可以维持合适的流动性。在许多情况中，优选在组合物中包括等渗剂例如糖类、诸如甘露糖醇、山梨醇这样的聚醇类或氯化钠。通过在组合物中包括延缓吸收的试剂例如单硬脂酸盐和明胶可以产生注射用组合物的延长吸收。
通过将以所需量溶于合适溶剂的活性化合物(例如LHRH拮抗剂)根据需要与一种上述列举的组分之一或组分的混合物混合、随后过滤灭菌可以制备无菌注射用溶液。一般来说，通过将活性化合物混入含有碱性分散介质和来自上述列举的所需其它组分的无菌载体中来制备分散体。就用于制备无菌注射用溶液的粉末而言，优选的制备方法是可产生来自预先无菌过滤溶液的活性组分和任意另外所需组分的真空干燥和冷冻干燥。在体内给药前，例如通过γ射线照射或电子束照射也可以对含有LHRH拮抗剂与载体大分子复合物(诸如上述PPI-149/羧甲基纤维素复合物)的缓释制剂进行灭菌。
通过下列实施例来进一步解释本发明，这些实施例不应用来限制本发明。将贯穿于本申请中所引用的所有参考文献、专利和公开专利申请的内容引入本文作为参考。实施例1将LHRH拮抗剂诸如Ac-D-Nal1、4-Cl-D-Phe2、D-Pal3、N-Me-Tyr5、D-Asn6、Lys(iPr)8、D-Ala10-LHRH(PPI-149)按约5-1000μg/kg、更优选10-100μg/kg的剂量经足以降低乳腺组织密度的途径和时间期限对女性受检测者进行给药。随后，例如通过标准荧屏乳房X线摄影术来获得所述乳腺组织的影象。实施例2为了制备缓释LHRH拮抗剂制剂，通过将6.25mg/ml的PPI-149溶于水来制备100ml LHRH拮抗剂PPI-149溶液。制备0.125％w/v的USP羧甲基纤维素钠(CMC)(低粘度级，Hercules Chemical Co.)的等份样品(最低100ml)并混合至溶解为止。将等份的PPI-149和CMC溶液混合(使得CMC∶肽之比为0.2∶1(w/w))并获得固体物质。将该固体物质搅拌过夜且然后通过用0.45微米的尼龙滤膜过滤来收集它们。对溶液滤液的HPLC评估显示至少有95％的PPI-149化合物转化成了所述的固体复合物。将其从溶液中取出。将回收的白色膏状物用水冲洗两次且然后转入小瓶并在真空中干燥。在干燥72小时时，获得633mg的白色粉末。接着用研杵将固体物质研粉。元素分析表明所述复合物中有57％的肽。
相同技术方案本领域技术人员会认识到或仅仅使用常规实验进行的能够确定与本文所述的本发明特定实施方案相同的许多技术方案。这类相同的技术方案被包括在下列权利要求中。
权利要求
1.一种用于在产生受检测者的乳腺组织的影象前降低受检测者乳腺密度的方法，该方法包括在产生受检测者乳腺组织的影象前按照足以降低受检测者乳腺组织密度的量和时间期限对受检测者给予LHRH拮抗剂。
2.权利要求1的方法，其中在产生受检测者乳腺组织的影象前大约一个月对受检测者给予所述的LHRH拮抗剂。
3.权利要求1的方法，其中在产生受检测者乳腺组织的影象前大约一周对受检测者给予所述的LHRH拮抗剂。
4.权利要求1的方法，其中在产生受检测者乳腺组织的影象前大约1-3天对受检测者给予所述的LHRH拮抗剂。
5.权利要求1的方法，其中在产生受检测者乳腺组织的影象前大约6-24小时对受检测者给予所述的LHRH拮抗剂。
6.权利要求1的方法，其中LHRH拮抗剂的给药剂量在约5-1000μg/kg/天的范围。
7.权利要求1的方法，其中LHRH拮抗剂的给药剂量在约10-500μg/kg/天的范围。
8.权利要求1的方法，其中LHRH拮抗剂的给药剂量在约10-100μg/kg/天的范围。
9.权利要求1的方法，其中将LHRH拮抗剂的按照单次注射方式给药。
10.权利要求1的方法，其中将LHRH拮抗剂的按照多次注射方式给药。
11.权利要求1的方法，其中将LHRH拮抗剂的以缓释制剂形式给药。
12.权利要求1的方法，其中LHRH拮抗剂具有下列结构Ac-D-Nal1、4-Cl-D-Phe2、D-Pal3、N-Me-Tyr5、D-Asn6、Lys(iPr)8、D-Ala10-LHRH。
13.权利要求1的方法，其中还包括产生乳腺组织影象。
14.权利要求13的方法，其中所述的乳腺组织的影象通过荧屏乳房X线摄影术来产生。
15.权利要求13的方法，其中所述的乳腺组织的影象通过选自下列方法的方法产生的超声波扫描术、透射术、温度记录术、电脑化X射线断层术、磁共振成象术、放射性核素成象术和数字化乳房X线摄影术。
16.权利要求13的方法，其中在产生受检测者乳腺组织的影象前大约一个月对受检测者给予所述的LHRH拮抗剂。
17.权利要求13的方法，其中在产生受检测者乳腺组织的影象前大约一周对受检测者给予所述的LHRH拮抗剂。
18.权利要求13的方法，其中在产生受检测者乳腺组织的影象前大约1-3天对受检测者给予所述的LHRH拮抗剂。
19.权利要求13的方法，其中在产生受检测者乳腺组织的影象前大约6-24小时对受检测者给予所述的LHRH拮抗剂。
20.权利要求13的方法，其中LHRH拮抗剂的给药剂量在约5-1000μg/kg/天的范围。
21.权利要求13的方法，其中LHRH拮抗剂的给药剂量在约10-500μg/kg/天的范围。
22.权利要求13的方法，其中LHRH拮抗剂的给药剂量在约10-100μg/kg/天的范围。
23.权利要求13的方法，其中将LHRH拮抗剂的按照单次注射方式给药。
24.权利要求13的方法，其中将LHRH拮抗剂的按照多次注射方式给药。
25.权利要求13的方法，其中将LHRH拮抗剂的以缓释制剂形式给药。
26.权利要求13的方法，其中LHRH拮抗剂具有下列结构Ac-D-Nal1、4-Cl-D-Phe2、D-Pal3、N-Me-Tyr5、D-Asn6、Lys(iPr)8、D-Ala10-LHRH。
27.权利要求13的方法，其中LHRH拮抗剂具有下列结构Ac-D-Nal1、4-Cl-D-Phe2、D-Pal3、Tyr5、D-Asn6、Lys(iPr)8、D-Ala10-LHRH。
28.一种用于在产生受检测者乳腺组织的影象前降低受检测者乳腺密度的包装制剂，它包括LHRH拮抗剂和关于在产生受检测者乳腺组织的影象前使用该LHRH拮抗剂来降低受检测者乳腺密度的说明书。
29.权利要求28的包装制剂，其中LHRH拮抗剂是适合于皮下或静脉注射的剂型。
30.权利要求28的包装制剂，其中LHRH拮抗剂是适合于连续输注的剂型。
31.权利要求28的包装制剂，其中LHRH拮抗剂是缓释制剂。
32.权利要求28的包装制剂，其中所述的LHRH拮抗剂具有下列结构Ac-D-Nal1、4-Cl-D-Phe2、D-Pal3、N-Me-Tyr5、D-Asn6、Lys(iPr)8、D-Ala10-LHRH。
33.权利要求28的包装制剂，其中所述的LHRH拮抗剂具有下列结构Ac-D-Nal1、4-Cl-D-Phe2、D-Pal3、Tyr5、D-Asn6、Lys(iPr)8、D-Ala10-LHRH。
全文摘要
本发明公开了用于检测致密乳腺组织中损害的改进方法。本发明方法的一般特征在于在例如通过乳房X线摄影术产生乳腺组织的影象前按照足以降低乳腺组织密度的量和时间期限对受检测者给予LHRH拮抗剂以便检测乳腺组织中的损害。本发明还公开了在产生受检测者的乳腺组织的影象前降低受检测者乳腺密度的包装制剂,它包括LHRH拮抗剂和关于在产生乳腺组织的影象前使用该LHRH拮抗剂来降低受检测者乳腺密度的说明书。
文档编号A61K49/00GK1307488SQ99807943
公开日2001年8月8日 申请日期1999年4月27日 优先权日1998年4月27日
发明者M·B·加尼克 申请人:普雷西斯药品公司