大枣核苷提取物及其在制备辅助改善学习记忆功能药物及保健食品中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种植物提取物的提取技术及其应用，具体涉及精制大枣核苷提取物 的提取技术及其在制备辅助改善学习记忆功能药物或保健品中的应用。
【背景技术】
[0002] 学习和记忆是人类中枢神经系统的高级机能，是大脑最基本也是最重要的高级神 经功能之一，是衡量人类智能发育的重要指标。我国是世界上痴呆患者数量最多的国家，现 有痴呆患者700万，占全球近1/5,并以每年100万的速度递增。据推测，2040年我国痴呆患 者数量将等于全世界发达国家痴呆患者数量的总和。随着人口老龄化，痴呆已成为我国面 临的重大卫生和经济问题。而老年痴呆症，又称阿尔茨海默氏病（Alzheimerdisease,AD) 为痴呆的主要亚型，约占60%?80%。现代研宄显示，在AD患者发病前期多经历轻度认知 功能障碍历程。轻度认知功能障碍（mildcognitiveimpairment，MCI)是指介于正常衰 老和老年痴呆症之间的过渡状态，患者具有一定程度的认知损伤，属于可能罹患痴呆症的 高风险人群。相对于认知功能正常老年人每年1%?2. 5%的阿尔茨海默氏病（Alzheimer disease,AD)发病率，MCI每年约15%转归为AD，5?10年的痴呆转归率为60. 5%?100%。 最新系统评价研宄显示，我国60岁及以上老年人群MCI患病率为12. 7% (95%CI:9. 7%? 16. 5% ) 〇
[0003] 目前，AD病因学还不是很清楚，尚无有效的临床治疗方法，MCI如何发展成AD及其 他类型痴呆的机理也不清楚。AD患者的病情不可逆转，防治AD的关键在于早期预防、早期 干预。美国"Alzheimer，sAssociation"发表的《2009Alzheimer，sdiseasefactsand figures》明确指出：MCI是从认知健康状态向痴呆转化中重要环节，全面干预处于AD患病 高危状态MCI个体是达到预防AD终极目标的关键。因此，早期预防、早期干预轻度认知功 能障碍是预防AD发病的独特"机会之窗"。近年来，研发具有辅助改善学习记忆功能的药物 或保健食品，用于预防轻度认知功能障碍，进而预防AD的发病已成为研宄热点。
[0004] 大赛系鼠李科赛属植物赛（ZiziphusjujubaMill.)的干燥成熟果实，具补中益 气、养血安神之功效，主要用于治疗脾虚食少、乏力便溏、妇人脏躁等症。现代药理研宄和临 床应用证明，大枣具有提高机体免疫力、抗肿瘤、抗突变等多种生物活性。目前尚未见以大 枣为主要组成组分应用于辅助改善学习记忆功能的药品或保健食品的报道。
【发明内容】
[0005] 发明目的：本发明的目的是为了克服现有技术的不足，在大枣原有用途的基础上， 开发其新的临床用途，提供大枣在辅助改善学习记忆功能中的应用。实验结果表明，其具有 很好的辅助改善学习记忆功能的作用。本发明的另一个目的在于公开一种精制大枣核苷提 取物的制备方法。
[0006] 技术方案：为了实现以上目的，本发明采取的技术方案为：
[0007] -种精制大枣核苷提取物，它是通过以下步骤制备得到：
[0008] (1)取大枣拣选、洗净、干燥后放入提取罐中，加6?12倍量的水或0%?50%乙 醇，加热回流1?3次，过滤、合并提取液，浓缩，得大枣粗提物，备用；
[0009] ⑵取步骤⑴得到的精制大枣核苷提取物，加乙醇至含醇量40%?90%，静置过 夜后取上清液，减压回收乙醇，得大枣水提醇沉物，备用；
[0010] (3)取步骤（2)得到的大枣水提醇沉物，加水稀释后，湿法上大孔吸附树脂柱，用 浓度为5%?50%的乙醇洗脱，收集5%?50%乙醇洗脱液、浓缩，得大枣大孔吸附树脂洗 脱物，备用；
[0011] (4)取步骤（3)得到的大枣大孔吸附树脂洗脱物湿法上离子交换树脂柱，先用水 洗脱，再用浓度为〇. 5%?5%的氨水洗脱，并收集0. 5%?5%的氨水洗脱液，浓缩，反复脱 氨后减压干燥得到精制大枣核苷提取物。经检测其核苷类成分总量可达5%以上。核苷类 成分包括环磷酸腺苷、环磷酸鸟苷和环磷酸尿苷。
[0012] 作为优选方案，以上所述的精制大枣核苷提取物，步骤（1)中提取条件为加10倍 量水，加热至沸后持续回流2小时。该方法可保证提取溶液和药材之间达到足够大的浓度 差，增加目标成分的溶出率。因为欲提取的目标活性成分为水溶性成分，选用水提取可使目 标成分充分溶出，而使极性较低的杂质不被提取出来。因此本发明根据活性成分的性质，确 定提取溶剂为水，得到的提取物目标成分溶出率高，活性更强。
[0013] 作为优选方案，以上所述的大枣叶提取物，步骤（3)中所述的大孔吸附树脂为非 极性大孔吸附树脂。作为更优选方案，其中步骤（3)中所述的非极性大孔吸附树脂为D101 型大孔吸附树脂，步骤（3)中收集浓度为10%乙醇洗脱液。
[0014] 作为优选方案，以上所述的精制大枣核苷提取物，步骤（4)中所述的离子交换树 脂为强酸性阳离子交换树脂，洗脱剂浓度为中收集浓度为1 %氨水，本发明通过大量实验筛 选出最佳体积浓度的氨水洗脱液，可以分离出纯度高的核苷类化合物。本发明以现代提取 分离手段和药理活性筛选相结合的方法确定大枣具有最佳改善学习记忆能力活性的提取 物，经大量实验研宄表明，通过非极性大孔吸附树脂柱色谱耦合强酸性阳离子交换树脂柱 色谱，分别采用不同浓度的乙醇洗脱和氨水洗脱，有利于大枣中的核苷类活性成分的富集， 除去糖类、鞣质、叶绿素、脂肪酸类等杂质，得到高活性成分比例及活性更强的改善学习记 忆能力活性提取物，经UPLC-TQMS检测该活性部位中核苷类成分含量可达5%。
[0015] 精制大枣核苷提取物在制备辅助改善学习记忆功能药物或保健品中的应用。
[0016] 本发明经过大量实验研宄表明，精制大枣核苷提取物可显著延长避暗实验中小鼠 进入暗室的潜伏期，降低小鼠进入暗室的错误次数，可显著缩短水迷宫实验中小鼠到达终 点的时间，表明精制大枣核苷提取物具有明显的改善小鼠学习记忆功能的功效，可应用于 制备具有辅助改善学习记功能的药品或保健食品。
[0017] 本发明所述的精制大枣核苷提取物在制备辅助改善学习记忆功能药物或保健品 中的应用，将精制大枣核苷提取物和药学上可接受的载体制成口服液、颗粒剂、胶囊剂、片 剂、丸剂、微丸、散剂、滴丸剂、汤剂、糖浆剂、合剂、煎膏剂或浸膏剂剂型的药物或保健食品。
[0018] 本发明提供的精制大枣核苷提取物制成口服液时把精制大枣核苷提取物加水和 矫味剂混合均匀，灌装，灭菌制成口服液。
[0019] 本发明提供的精制大枣核苷提取物制成颗粒剂时，把精制大枣核苷提取物和稀释 剂乳糖或玉米淀粉混合均匀，整粒，干燥，制成颗粒剂。
[0020] 本发明提供的精制大枣核苷提取物制成胶囊剂时把精制大枣核苷提取物和载体 乳糖或玉米淀粉混合均匀，整粒，然后装胶囊制成胶囊剂。
[0021] 将本发明提供的精制大枣核苷提取物制成片剂时，把精制大枣核苷提取物和乳糖 或玉米淀粉，需要时加入润滑剂硬脂酸镁或硅胶粉，混合均匀，然后压片制成片剂。
[0022] 本发明提供的精制大枣核苷提取物制成其它剂型时，可按药学常规方法制备得 到。
[0023] 有益效果：本发明在大枣原有应用的基础上进行新的用途开发，同时制备其活性 提取物，和现有技术相比具有以下优点：
[0024] (1)本发明主要以生产大枣过程中产生的等外枣、低等级枣为原料，制备其活性提 取物，开发其新用途，提升了枣产品的利用价值，具有很好的经济效应。
[0025] (2)本发明提供的大枣辅助改善学习记忆能力活性提取物，实验结果表明精制大 枣核苷提取物可显著延长避暗实验中小鼠进入暗室的潜伏期，降低小鼠进入暗室的错误次 数，可显著缩短水迷宫实验中小鼠到达终点的时间，表明精制大枣核苷提取物具有明显的 改善小鼠学习记忆功能的功效，可应用于制备具有辅助改善学习记功能的药品或保健食 品，同时也为大枣的产品升级及产业化发展提供了途径。
[0026] (3)本发明提供的制备方法可操作性强，尤其是在分离过程中本发明首次采用非 极性大孔吸附树脂柱色谱与强酸性阳离子交换树脂柱色谱的方法用于大枣活性提取物的 富集纯化，提取分离效率高，分离得到的精制大枣核苷提取物活性成分含量高，改善学习记 忆能力活性更强，不良反应更低，并且制备工艺中能量消耗少，生产成本低，对环境无污染。
【具体实施方式】
[0027] 下面结合具体实施例进一步阐明本发明，应理解这些实施例仅用于说明本发明而 不用于限制本发明的范围，在阅读了本发明之后，本领域技术人员对本发明的各种等价形 式的修改均落于本申请所附权利要求所限定的范围。
[0028] 实施例1
[0029]大枣辅助改善学习记忆能力活性提取物，其通过以下方法制备得到：
[0030] (1)取大枣拣选、洗净、干燥后称取l〇kg，放入提取罐中，加10倍量的水，加热回流 2次，每次2h，过滤、合并提取液，浓缩，得大枣粗提取物（20L)，备用；
[0031] (2)取步骤（1)得到的大枣粗提物，加乙醇至含醇量80%，静置过夜后取上清液， 减压回收乙醇，得大枣水提醇沉物（10L)，备用；
[0032] (3)取步骤（2)得到的大枣水提醇沉物，加水稀释至20L，混匀后湿法上经活化的 直径为50厘米，高1. 5米的D101大孔吸附树脂层析柱中，预吸附12小时后，用浓度为10% 的乙醇以lBV/h的速度洗脱，洗脱体积为50L，收集10 %乙醇洗脱液，浓缩，得大枣大孔吸附 树脂洗脱部位（20L)，备用；
[0033] (4)取步骤（3)得到的大枣大孔吸附树脂洗脱部位湿法上经转型的直径为20厘 米，高1. 5米的732型强酸型阳离子交换树脂柱，用浓度为1 %氨水洗脱，洗脱体积为50L， 收集1 %氨水洗脱液，浓缩，反复脱氨后减压干燥得到精制大枣核苷提取物（180g)。
[0034] 实施例2
[0035] 大枣辅助改善学习记忆能力活性提取物，其通过以下方法制备得到：
[0036] (1)取大枣拣选、洗净、干燥后称取10kg，放入提取罐中，加8倍量的水，加热回流 3次，每次2h，过滤、合并提取液，浓缩，得大枣粗提取物（23L)，备用；
[0037] (2)取步骤（1)得到的大枣粗提物，加乙醇至含醇量70%，静置过夜后取上清液， 减压回收乙醇，得大枣水提醇沉物（12L)，备用；
[0038] (3)取步骤（2)得到的大枣水提醇沉物，加水