硝酸异山梨酯在制备治疗急性心肌梗死的药物中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及药物的新用途，特别涉及硝酸异山梨酯在制备治疗急性心肌梗死的药 物中的应用。
【背景技术】
[0002] 临床上，硝酸酯主要应用于急性冠脉综合征、慢性稳定性心绞痛、无症状性心肌缺 血、急慢性心力衰竭、高血压危象和围手术期高血压。
[0003] 尽管硝酸酯是百年老药，但随着心血管医学领域的不断发展，其新的作用机制正 在不断发现，新的适应症范围不断扩大。急性心肌梗死发生后，早期再灌注可以挽救濒死心 肌，改善患者预后。虽然缺血预处理被认为是最强及最有效的内源性心肌保护机制，但在实 际工作中很难预测急性缺血性事件的发生，使得缺血预处理在临床上的应用受到限制。
[0004] 实验证明缺血后处理的心肌保护效应与缺血预处理相似，后处理比预处理具有 更广泛的临床应用范围和实用价值，在临床应用前景上具有预处理无法比拟的优势。目 前除了冠脉成形术中将血管成形球囊通过给球囊充气与放气，实现再灌注和再缺血的后 处理模式之外，药物后处理模式具有研究意义。再灌注期间或再灌注前不久用药物代替 手术缺血来模拟缺血后处理对缺血/再灌注心肌的保护效应，即药物后处理。药物后处 理是在心肌缺血后处理的基础上发展起来的，通过药物激发或模拟机体自身的内源性保 护物质或直接激活相关信号通路而呈现的心肌保护作用，它以药物替代缺血刺激，可避免 气囊反复充、放气可能引起冠状动脉斑块破裂，以致发生再狭窄或血栓栓塞事件等手术的 弊端，为心脏手术和介入治疗提供更为简单、可行的心脏保护，为急性心肌梗死心肌保护 开创了广阔的前景。而GISSI-3和ISIS-4两项大规模临床研究结果显示，在溶栓的基 础上，加用口服硝酸酯没有进一步显著降低急性心肌梗死的病死率（GISSI-3 :effects of lisinopril and transdermal glyceryl trinitrate singly and together on 6-week mortality and ventricular function after acute myocardial infarction. Gruppo Italiano per Io Studio della Sopravvivenza nell'infarto Miocardico. La ncet.,1994.343(8906):p. 1115-22. ISIS-4:a randomised factorial trial assessing early oral captopril，oral mononitrate, and intravenous magnesium sulphate in 58,050 patients with suspected acute myocardial infarction. ISIS-4(Fourth International Study of Infarct Survival)Collaborative Group. Lancet. , 1995. 345 (8951) :p. 669-85.)在一项双盲、安慰剂对照临床实验中，心肌梗死急性期静脉使用硝酸 异山梨酯、亚急性期给予口服硝酸异山梨酯都未见临床获益（Nitrates in myocardial infarction:influence on infarct size,reperfusion, and ventricular remodelling. Br Heart J.，1995. 73(4) :p. 310-9.)。大部分有关硝酸异山梨酯心肌保护作用的研究结果 都不理想，主要原因可能与其使用方法不当有关。此外，目前临床上尚未见硝酸异山梨酯在 模拟缺血后处理对心肌保护作用的报道。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的在于提供硝酸异山梨酯在制备治疗急性心肌梗死的药物中的应用， 所述的在制备治疗急性心肌梗死的药物中的应用是在制备使用介入手段治疗急性心肌梗 死时，在梗死血管开通时静脉所给药物中的应用。
[0006] 为此，本发明提供了一种药物的新用途，所述的应用是减少心肌梗死面积，所述的 应用是增强心功能，所述的应用是改善患者预后的心肌保护效果。
[0007] 本发明的优点在于：
[0008] 1、本发明提供了硝酸异山梨酯新的医疗用途，开拓了新的应用领域；
[0009] 2、硝酸异山梨酯对急性心肌梗死的作用明显，主要表现为：硝酸异山梨酯可以减 少心肌梗死面积；增强心功能；改善患者预后的心肌保护效果；降低MDA及cTnl的水平、 增加 SOD水平。
[0010] 3、硝酸异山梨酯在制备急性心肌梗死的药物中的应用，是在制备使用介入手段治 疗急性心肌梗死时，在梗死血管开通时静脉所给药物中的应用。
【附图说明】
[0011] 图1为本发明硝酸异山梨酯再灌注结束后的采集标本。
【具体实施方式】
[0012] 以下通过实施例进一步说明本发明，但不用来限制本发明。
[0013] 实施例1
[0014] 1.实验动物
[0015] 清洁级wistar大鼠，雄性，32只，体质量（300±10)g,合格证号：SCXK鲁 20130001，购自山东鲁抗医药股份有限公司实验动物室。实验室室温20-22°C，相对湿度 40%-60%，换气扇通气，自然光源12h/日，笼养，每笼5只，每三日清扫笼舍一次。
[0016] 2.主要药品和试剂
[0017] Evans blue 美国 sigma 公司 2,3，5-氯化三苯基四氮唑(TTC) 美国sigma公司 硝酸异山梨酯（异舒吉） 珠海许瓦兹制药有限公司 eTnl试剂盒 南京建成生物工程研究所 SOD试剂盒 南京建成生物工程研究所 MDA试刻盒 南京建戚生物工糧耕究所 PBS缓冲液 南京建成生物工程研究所 10%水合氯醛. 青岛大学附属医院 无水乙醇 济南三恩化工有限公司 冰乙酸 上海亨达精细化学品有限公司
[0018] 3.主要仪器
[0019] 小动物呼吸机HX-300 成都泰盟科技有限公司 高速离心机 上海手术器械厂
[0020] 恒温水浴箱 北京靖卫科学仪器厂 超低温冰箱（-20°C) 海尔BCD-172HDA 电子天平 上海志荣电子科技有限公司 超净工作台 济南市空气净化消毒设备厂 可见光分光光度计722N 上海精密科学仪器有限公司 24G静脉留置针 隹康医用器材（:青岛）有限公司
[0021] 4.缺血再灌注模型的建立
[0022] 水合氯醛0.3ml/100g腹腔注射麻醉大鼠，仰卧位固定于手术台，连接心电图，记 录II导联，心电图异常者弃去。颈部及左胸部剃毛，暴露气管，采用头皮针软管自制大鼠 插管行气管插管，连接动物呼吸机辅助呼吸，设置潮气量l〇-15ml/kg，呼吸频率55-60次/ 分，呼吸比2:1，呼气末正压5-15cmH20。右侧颈动脉插管，留置24G的静脉留置针。左胸 部平行胸骨剪开皮肤，钝性分离肌肉，显露心脏暗影，剪断第3肋骨，撑开肋间隙，破除心包 膜，用棉签轻推开肺脏和胸腺，轻轻将心脏挤出胸腔，从左心耳下方2_左右处进针，肺动 脉圆锥下出针，以6-0缝合线结扎左前降支。结扎时，结扎线与心脏表面放置一根粗棉线， 以结扎远端呈现紫绀且心电图示ST段抬高为结扎成功的标志。随后立刻将心脏送回胸腔。 轻轻挤压胸壁，排出气体，迅速关闭胸腔。
[0023] 5.实验分组及给药：
[0024] 1.假手术组（sham组）：只开胸，左前降支下穿线，但不结扎，旷置220min ;
[0025] 2.缺血再灌注组（I/R组）：开胸结扎左前降支，造成缺血40min，松开结扎线再灌 注 180min ;
[0026] 3.缺血后处理组（IPostC组）：缺血40min后，在恢复再灌注的Imin内给予3个 循环的30s/30s的缺血/再灌注，随后完全松开结扎线，持续再灌注ISOmin ;
[0027] 4.异舒吉后处理组（PPostC组）：再灌注前5min开始，经颈动脉给予异舒吉4ug/ kg/h，共持续给药lOmin，再灌注180min。
[0028] 再灌注结束后，采集标本。（图1)
[0029] 6·血清 MDA、SOD、cTnl 检测
[0030] 再灌注结束后，各组大鼠从右心耳取血2ml，室温下静置30min后，3000r/h离心 lOmin，取上清液，置于-20°C冰箱保存，严格按照试剂盒说明书分别以TBA法、WST法、ELISA 法进行MDA、SOD、cTnl定量检测。
[0031] 7.心肌梗死面积测量
[0032] 取血后，原位结扎左前降支，从右颈动脉注入2ml 2%的Evans blue，待鼠唇蓝染 后，取下心脏，生理盐水冲洗。正常心肌染成蓝色，缺血心肌呈红色。剔除血管及左右心房、 右心室，将左室以滤纸吸干后置于-20°C冰箱冷冻30min，沿心室长轴切成2_左右的薄片， 置于1%TTC磷酸缓冲液中（pH7. 4)37°C避光孵育15-20min，此时，梗死区（infarct size， IS)心肌呈灰白色，危险区（area at risk，AAR)呈深红色。染色后，将心脏薄片置入10% 福尔马林溶液固定24小时。分离梗死区和危险区，滤纸吸干，置于电子天平上称重。梗死 区面积以梗死区重量/危险区重量％表示，缺血区面积以危险区重量/左室重量％表示。
[0033] 8.统计学方法
[0034] 所有数据以均数土标准差表示，采用SPSS17. 0统计软件进行分析。多组均数及 组间两两比较分别采用单因素方差分析和最小显著差异法（LSD法）。P < 0. 05为差异有 统计学意义。
[0035] 9.结果
[0036] 1.不同处理方式对心肌梗死面积的影响
[0037]
[0038] 与 I/R 组相比，*ρ〈0· 05
[0039] 2.不同处理方式对大鼠血清学指标的影响
[0040]
[0041] Λ与假手术组相比，ρ〈0· 01 与I/R组相比，ρ〈0· 05
[0042] 实验结果显示硝酸异山梨酯后处理能够显著减少心肌梗死面积，并且显著降低 MDA及cTnl的水平、增加 SOD水平。说明硝酸异山梨酯后处理具有心肌保护性，其机制除了 与直接扩张血管外，可能与减少自由基的生成、增强心肌细胞抗氧化能力有关，并且可能通 过补充NO从而参与缺血后处理的心肌保护通路。
[0043] 虽然，上文中已经通过一般性说明、具体实施方案以及活性实验等对本发明作了 详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是 显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要 求保护的范围。
【主权项】
1. 硝酸异山梨酯在制备治疗急性心肌梗死的药物中的应用。2. 权利要求1的应用，其特征在于：所述的制备治疗急性心肌梗死的药物中应用是在 制备使用介入手段治疗急性心肌梗死时，在梗死血管开通时静脉所给药物中的应用。3.权利要求1的应用，其特征在于：所述的应用是减少心肌梗死面积。4.权利要求1的应用，其特征在于：所述的应用是增强心功能。5.权利要求1的应用，其特征在于：所述的应用是改善患者预后的心肌保护效果。6. 权利要求1的应用，其特征在于：所述的应用是降低MDA及cTnl的水平、增加SOD水 平。
【专利摘要】本发明提供了硝酸异山梨酯在制备急性心肌梗死的药物中的应用，是在制备使用介入手段治疗急性心肌梗死时，在梗死血管开通时静脉所给药物中的应用。本发明经药理试验验证，硝酸异山梨酯硝酸异山梨酯后处理能够显著减少心肌梗死面积，并且显著降低MDA及cTnI的水平、增加SOD水平。
【IPC分类】A61K31/34, A61P9/10
【公开号】CN105012287
【申请号】CN201510337588
【发明人】宋达琳, 胡孟芬, 梅少平, 沈红帅, 陈效安
【申请人】青岛市市立医院
【公开日】2015年11月4日
【申请日】2015年6月17日