一种利用小切口非体外循环（微创）建立冠状动脉旁路移植术大动物模型的方法
【技术领域】
[0001] 本发明具体涉及一种利用小切口非体外循环(微创）建立冠状动脉旁路移植术大 动物模型的方法。
【背景技术】
[0002] 心血管疾病是目前世界上主要致死性疾病之一，血管病总死亡率有逐年上升的 趋势，主要是由于缺血性心脏病死亡上升所致。冠脉搭桥术（coronary artery bypass grafting，CABG)是治疗冠心病多支血管病变的主要的、有效治疗方法之一，临床上广泛 应用。一般来说，冠状动脉粥样硬化及其扩散程度越大，左心功能水平较为低下情况下， 越趋向于选择冠脉搭桥术进行手术治疗。然而，冠脉搭桥术后因自体静脉血管桥经受缺 血、损伤、炎症反应和承受动脉血的高压等因素，早期可出现栓塞、痉挛，随后发生移植静脉 内膜增生和粥样硬化，偶见血管瘤，这些现象统称为冠脉静脉旁路移植病（Bypass graft disease)，其最终结果是导致静脉血管桥的堵塞，临床表现为冠心病的复发等症状。建立稳 定的动物CABG模型对评估手术效果，远期通畅率及探究冠脉静脉旁路移植病的发生过程 等有重要的参考价值。但传统正中切开胸骨暴露心脏的方法建立CABG模型存在对动物创 伤大，动物死亡率高以及术后护理困难等风险。
【发明内容】
[0003] 本发明的目的在于提供一种利用微创术建立动物CABG模型的方法。
[0004] 本发明所采取的技术方案是： 一种利用微创术建立动物CABG模型的方法，包括下列步骤： (1) 麻醉动物； (2) 连接心电监护； (3) 左侧小切口侧开胸，剪断部分第三肋骨，暴露乳内静脉与心脏； (4) 分离结扎乳内静脉两端，离断取出乳内静脉； (5) 缺血预处理右侧冠脉主干； (6) 吻合血管桥； (7) 测量静脉桥流量； (8) 止血关胸； (9) 术后护理。
[0005] 优选的，步骤（1)所述动物为食蟹猴、比格犬、小型猪的至少一种。
[0006] 优选的，步骤（4)中乳内静脉取出后可用药物处理、携带CGRP表达基因的病毒原 液浸泡、含肝素液的生理盐水浸泡、肝素血浸泡中的至少一种方法处理血管，以探究远期对 静脉旁路病变的作用效果。
[0007] 优选的，步骤（5)中所述缺血预处理为3次，每次阻断2min，间隔5min。
[0008] 优选的，步骤（9)的术后护理步骤为术后禁食12h，正常饲养，并加入适量阿司匹 林，适时注射青霉素。
[0009] 优选的，步骤（9)中所加入的阿司匹林为每次200mg，3次/日，拌饲料中口服。 [0010] 优选的，步骤（9)中青霉素为640万单位肌注，1次/日，连续肌注3~7天。 [0011] 本发明的有益效果是： 本发明公开的一种利用微创术建立动物CABG模型的方法。该方法简单、安全、动物存 活率高、可广泛推广，并能真实模拟冠脉静脉旁路移植病的发生过程，是过程可控度高、模 型稳定的CABG动物模型方法。该方法对于评估手术效果，远期通畅率及探究冠脉静脉旁路 移植病的发生过程具有重要参考意义，可作为探究冠脉静脉旁路移植病的防治较为理想的 动物模型。
[0012] 本发明应用于小型猪等大型实验动物，因其冠脉特点与人高度相似，对于评估手 术效果，远期通畅率及探究冠脉静脉旁路移植病的发生过程具有重要参考意义，可作为探 究冠脉静脉旁路移植病的防治较为理想的动物模型。
【附图说明】
[0013] 图1为建模示意图：静脉桥近端位于升主动脉左前侧，远端与右侧冠脉主干相连， 静脉桥建立后将右侧冠脉主干近端结扎，以防止竞争血流； 图2为靶血管预处理，其中A :将预处理血管的试剂注满血管后银夹夹闭血管远端，B : 将血管浸泡于预处理试剂中，C :将预处理血管移至冰盒中； 图3为预缺血处理期间心电图变化情况，其中A为预缺血前心电图情况，B为预缺血中 心电图情况； 图4为多普勒彩色超声可探及静脉血管桥搏动性血流。
【具体实施方式】
[0014] 以下结合具体实验对本发明作进一步的说明，但并不局限于此。
[0015] 实施例1小型猪CABG模型的建立 小型猪为例，其冠脉特点与人高度相似，建立一种小切口（微创）非体外循环冠状动脉 旁路移植术大动物模型的方法。其建模示意图见图1。
[0016] 具体步骤如下： (1)麻醉动物：肌肉注射氯胺酮6mg/kg、安定0. 2mg/kg、阿托品0. 02mg/kg基础麻醉， 耳缘静脉穿刺留置静脉套管（20g)并固定，抬猪至手术台，俯卧位，以特制长直喉镜暴露 会厌及声门，插入7. 0-7. 5Fr气管插管，连接麻醉剂呼吸回路，呼吸频率16-20bpm、潮气量 10mg/kg，静脉注射哌库溴铵0. lmg/kg松弛肌肉，吸入2%七氟醚维持麻醉，手术结束缝合皮 肤时停止吸入麻醉，猪清醒后拔出气管插管。
[0017] (2)连接心电监护：使用BeneViewT5心电监护系统及EDAN H100监护仪监测动物 基本生命体征：心率、心律、血氧饱和度和体温。对动物进行口腔气管插管，连接呼吸机，呼 吸比为1:2,频率12次/分钟，潮气量约为12ml/kg，以异氟烷维持麻醉。
[0018] (3)取仰卧位，左侧第三肋间隙沿肋间水平位置开口，逐层分离皮下组织，暴露第 三肋骨胸骨端，用骨剪横断部分第三肋骨，用胸骨牵开器固定，暴露乳内静脉与心脏。
[0019] 优选的，取左侧第三肋间隙7-l〇Cm横切口，逐层分离皮下组织，暴露第三肋骨胸 骨关节，用骨剪切除5-6cm第三肋骨，用胸骨牵开器固定，暴露乳内静脉与心脏。
[0020] (4)分离结扎乳内静脉两端，离断取出乳内静脉；用胸骨牵开器固定，暴露乳内静 脉并游离，结扎静脉两端，标记并取出静脉备用。可用药物处理、携带CGRP表达基因的病毒 原液浸泡、含肝素液的生理盐水浸泡、肝素血浸泡等不同方法处理血管，以探究远期对静脉 旁路病变的作用效果。
[0021] 乳内静脉处理具体步骤如下：取上述步骤（4)获得的乳内静脉进行处理。在静脉 预处理过程中，经生理盐水冲洗血管后，用银夹夹闭静脉近心端，将乳内静脉放入2ml的管 中，用注射器在乳内静脉中注入0. 6-0. 8ml rAAV 2/9-CGRP-EGFP病毒原液（5E+10 vg/ ml);或在血管内注入0. 6-0. 8ml rAAV 2/9-EGFP空壳病毒原液（5E+10 vg/ml);或注