一种治疗血瘀的裕民贝母提取物及其医药用图
【技术领域】
[0001] 本发明涉及中药提取物领域，具体涉及一种治疗血瘀的裕民贝母提取物及其制备 方法，该提取物可以应用于制备治疗血瘀疾病的药物。
【背景技术】
[0002] 裕民贝母为百合科植物裕民贝母FritillariayuminensisX.Z.Duan的鳞莖。又 名蓝花贝母。
[0003] 植物原形态为多年生草本，高约30cm。鳞茎扁圆球形，直径约1. 5cm。茎直立，无 毛，绿色，基部紫色。基部叶2枚对生，中部的轮生，上部的对生或互生，条状披针形，长5~ 6. 5cm，先端卷曲，基部2枚先端急尖，不卷，宽2. 5~15mm。花1~6朵。苞片3枚，叶状， 先端卷曲，花粉红色或暗蓝色；花被片6,外轮3枚矩圆形，长2~2. 2cm，宽7~8_，内轮3 枚倒卵状矩圆形，蜜腺窝在花被片背面凸出，雄蕊长约为花被片的一半，花药基着；雌蕊稍 短于雄蕊，花柱向上部具微毛，柱头几不分裂。蒴果长1. 3cm，宽约2cm，具3~4mm宽翅。花 期4~5月，果期5~6月。生于海拔2200~2800m山中。主产新疆、以及苏联。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于提供一种裕民贝母提取物，其制备方法和液相分析方法，含有 该提取物的药物制剂及利用该提取物制备治疗血瘀疾病的药物的用途。
[0005] 本发明的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：
[0006] -种裕民贝母提取物，该提取物由以下方法制备：(a)以重量计，每100份药材包 含干燥的裕民贝母80~90份和干燥的甘草10~20份，混合粉碎，用乙醇溶液热回流提取， 合并提取液，浓缩至无醇味得到乙醇提取浓缩液；(b)将步骤（a)所得乙醇提取浓缩液用水 稀释，依次用石油醚、乙酸乙酯和水饱和的正丁醇萃取，减压浓缩，分别得到石油醚萃取物、 乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（c)正丁醇萃取物用水溶解，过滤，用大孔树脂富集活性 成分，先用5~15 %乙醇冲洗7~9个柱体积除去大极性成分，再用65~75 %乙醇洗脱 11~13个柱体积，收集65~75%洗脱液，减压浓缩即得。
[0007] 进一步地，步骤（a)所述用乙醇溶液热回流提取中乙醇溶液浓度为55~65%。
[0008] 进一步地，步骤（a)所述用乙醇溶液热回流提取中乙醇溶液浓度为60%。
[0009] 进一步地，步骤（C)中所述大孔树脂为AB-8型大孔树脂。
[0010] 进一步地，步骤（c)为：正丁醇萃取物用水溶解，过滤，用AB-8型大孔树脂富集活 性成分，先用10%乙醇冲洗8个柱体积除去大极性成分，再用70 %乙醇洗脱12个柱体积， 收集70%洗脱液，减压浓缩即得。
[0011] 为了能够通过建立HPLC指纹图谱的方法控制不同批次制备的提取物的批间差 异，所述提取物的液相分析方法为：
[0012] 色谱柱：AgilentZorbaxExtent_C18 柱（4. 6mmX250mm，5μm);
[0013] 流动相：A为乙腈，B为0. 5%磷酸溶液；
[0014] 梯度洗脱程序：0· 01 ~5min，A10%- 15% ;5 ~lOmin，A15%-48% ;10 ~ 25min，A48%- 78% ;25 ~30min，A78%- 10%;
[0015] 流动相流速：1.OmL·minS
[0016] 检测波长：278nm;
[0017] 柱温：35°C;
[0018] 进样量：10μL。
[0019] 药物制剂，含有治疗有效量的所述提取物和药学上可接受的载体。
[0020] 所述的提取物在制备治疗血瘀疾病的药物中的应用。
[0021] 所述的药物制剂在制备治疗血瘀疾病的药物中的应用。
[0022] 本发明提取物用作药物时，可以直接使用，或者以药物制剂的形式使用。
[0023] 所述药物制剂含有治疗有效量的本发明裕民贝母提取物，其余为药物学上可接受 的、对人和动物无毒和惰性的可药用载体和/或赋形剂。
[0024] 所述的可药用载体或赋形剂是一种或多种选自固体、半固体和液体稀释剂、填料 以及药物制品辅剂。将本发明的药物制剂以单位体重服用量的形式使用。本发明提取物可 通过口服或注射的形式施用于需要治疗的患者。用于口服时，可将其制成片剂、缓释片、控 释片、胶囊、滴丸、微丸、混悬剂、乳剂、散剂或颗粒剂、口服液等；用于注射时，可制成灭菌的 水性或油性溶液、无菌粉针、脂质体或乳剂等。
[0025] 本发明的优点：本发明通过对干燥的裕民贝母和甘草进行提取、除杂、富集处理， 能得到具有治疗血瘀疾病的提取物；本发明提供的液相分析方法可以用于建立该提取物的 指纹图谱，用于控制不同批次制备的提取物的批间差异。
【附图说明】
[0026] 图1为裕民贝母提取物HPLC液相图谱。
【具体实施方式】
[0027] 下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明保护范 围。尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对 本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
[0028] 实施例1 :裕民贝母提取物①制备（85份裕民贝母，15份甘草）
[0029] 药材来源：裕民贝母和甘草购自安徽亳州中药材市场。
[0030] 主要试剂：食品级乙醇购自上海凌峰化学试剂有限公司；医药级AB-8大孔树脂购 自天津波鸿树脂有限公司；乙腈为HPLC级，购于TEDIA;85 %磷酸为HPLC级，购于TEDIA; 色谱用纯净水为哇哈哈纯净水。
[0031] 制备方法：将8. 5kg干燥裕民贝母和1. 5kg干燥甘草混合粉碎，用60%乙醇溶液 热回流提取（25LX3次），合并提取液，浓缩至无醇味得到乙醇提取浓缩液（2L);将所得乙 醇提取浓缩液用水稀释至3L，依次用石油醚（3LX3次）、乙酸乙酯（3LX3次）和水饱和的 正丁醇（3LX3次）萃取，减压浓缩，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取 物232g;(c)正丁醇萃取物用1. 5L水溶解，医用脱脂棉过滤，用AB-8大孔树脂（2kg，柱体 积1.5L)富集活性成分，先用10%乙醇冲洗8个柱体积（12L)除去大极性成分，再用70% 乙醇洗脱12个柱体积（18L)，收集70%洗脱液，减压浓缩，即得裕民贝母提取物约150g。
[0032] 实施例2:裕民贝母提取物②制备（80份裕民贝母，20份甘草）
[0033] 制备方法：将8. 0kg干燥裕民贝母和2. 0kg干燥甘草混合粉碎，用60%乙醇溶液 热回流提取（25LX3次），合并提取液，浓缩至无醇味得到乙醇提取浓缩液（2L);将所得乙 醇提取浓缩液用水稀释至3L，依次用石油醚（3LX3次）、乙酸乙酯（3LX3次）和水饱和的 正丁醇（3LX3次）萃取，减压浓缩，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取 物232g;(c)正丁醇萃取物用1. 5L水溶解，医用脱脂棉过滤，用AB-8大孔树脂（2kg，柱体 积1.5L)富集活性成分，先用10%乙醇冲洗8个柱体积（12L)除去大极性成分，再用70% 乙醇洗脱12个柱体积（18L)，收集70%洗脱液，减压浓缩，即得裕民贝母提取物约150g。
[0034] 实施例3:裕民贝母提取物③制备（90份裕民贝母，10份甘草）
[0035] 制备方法：将9. 0kg干燥裕民贝母和1. 0kg干燥甘草混合粉碎，用60%乙醇溶液 热回流提取（25LX3次），合并提取液，浓缩至无醇味得到乙醇提取浓缩液（2L);将所得乙 醇提取浓缩液用水稀释至3L，依次用石油醚（3LX3次）、乙酸乙酯（3LX3次）和水饱和的 正丁醇（3LX3次）萃取，减压浓缩，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取 物232g;(c)正丁醇萃取物用1. 5L水溶解，医用脱脂棉过滤，用AB-8大孔树脂（2kg，柱体 积1.5L)富集活性成分，先用10%乙醇冲洗8个柱体积（12L)除去大极性成分，再用70% 乙醇洗脱12个柱体积（18L)，收集70%洗脱液，减压浓缩，即得裕民贝母提取物约150g。
[0036] 实施例4:裕民贝母提取物④制备（75份裕民贝母，25份甘草）
[0037] 制备方法：将7. 5kg干燥裕民贝母和2. 5kg干燥甘草混合粉碎，用60%乙醇溶液 热回流提取（25LX3次），合并提取液，浓缩至无醇味得到乙醇提取浓缩液（2L);将所得乙 醇提取浓缩液用水稀释至3L，依次用石油醚（3LX3次）、乙酸乙酯（3LX3次）和水饱和的 正丁醇（3LX3次）萃取，减压浓缩，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取 物232g;(c)正丁醇萃取物用1. 5L水溶解，医用脱脂棉过滤，用AB-8大孔树脂（2kg，柱体 积1.5L)富集活性成分，先用10%乙醇冲洗8个柱体积（12L)除去大极性成分，再用70% 乙醇洗脱12个柱体积（18L)，收集70%洗脱液，减压浓缩，即得裕民贝母提取物约150g。
[0038] 实施例5:裕民贝母提取物⑤制备（95份裕民贝母，5份甘草）
[0039] 制备方法：将9. 5kg干燥裕民贝母和0. 5kg干燥甘草混合粉碎，用60%乙醇溶液 热回流提取（25LX3次），合并提取液，浓缩至无醇味得到乙醇提取浓缩液（2L);将所得乙 醇提取浓缩液用水稀释至3L，依次用石油醚（3LX3次）、乙酸乙酯（3LX3次）和水饱和的 正丁醇（3LX3次）萃取，减压浓缩，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取 物232g;(c)正丁醇萃取物用1. 5L水溶解，医用脱脂棉过滤，用AB-8大孔树脂（2kg，柱体 积1.5L)富集活性成分，先用10%乙醇冲洗8个柱体积（12L)除去大极性成分，再用70% 乙醇洗脱12个柱体积（18L)，收集70%洗脱液，减压浓缩，即得裕民贝母提取物约150g。
[0040] 实施例6 :液相色谱分析
[0041] 供试品溶液配制：取实施例1方法制得的提取物5mg至50mL棕色容量瓶中，加 30mL10 %乙腈水溶液超声溶解，冷却至室温后，继续加10 %乙腈水溶液定容。分析方法如 下：
[0042] 高效液相色谱仪：Agilent1260,二元栗；
[0043] 色谱柱：AgilentZorbaxExtent_C18柱（4. 6mmX250mm，5μm);
[0044] 流动相：A为乙腈，B为0· 5%磷酸溶液；
[0045] 梯度洗脱程序：0· 01 ~5min，A10% - 15% ;5 ~lOmin，A15% - 48% ;10 ~ 25min，A48%- 78% ;25 ~30min，A78%- 10% ;
[0046] 流动相流速：1.OmL·minS
[0047]检测波长：278nm;
[0048] 柱温：35°C;
[0049] 进样量：10μL。