一种棉盲蝽成虫脑的解剖方法
【技术领域】
[0001]本发明属于昆虫解剖学领域，具体涉及一种棉盲蝽成虫脑的解剖方法。
【背景技术】
[0002]棉盲蝽主要包括绿盲蝽、中黑盲蝽、三点盲蝽、苜蓿盲蝽等，属于半翅目(Hemiptera)，盲蝽科(Miridae)，后丽盲蝽属(ApoIygus)。随着转基因抗虫棉的广泛种植，以绿盲蝽、中黑盲蝽为主的棉盲蝽逐渐由次要害虫上升为主要害虫，成为很多关键农作物和果树上的主要害虫。
[0003]棉盲蝽为寄主广泛的杂食性害虫，寄主有葡萄、枣树、石榴、茶树、樱桃等果树及棉花、三叶草、向日葵等多种作物，并随着季节变换而转换寄主(Hongsheng Pan et al，2015)。棉盲蝽的若虫和成虫以刺吸式口器刺吸寄主植物嫩芽、嫩叶、花蕾和幼果，严重影响了农产品的质量和产量。
[0004]当前，对棉盲蝽的研究主要集中在发生分布、生物学特性、防治及抗药性治理等方面，而对于棉盲蝽神经系统的研究未见详细报道。脑是昆虫中枢神经系统的重要组成部分，对昆虫的生长发育行为起着控制和调节作用。对棉盲蝽脑的研究有助于理解昆虫的行为，为棉盲蝽的生物防控提供一定的依据。
[0005]当前，对体型较大昆虫脑的解剖一般是切下头部，在生理液中破坏脑壳解剖出脑。棉盲蝽体型较小，相应地头的体积更小，而且棉盲蝽头部呈三角形，内部脑不成形，难以解剖出完整的脑。
【发明内容】
[0006]本发明的目的就在于提供一种解剖棉盲蝽成虫脑的方法，能最大程度的保证脑内神经细胞的活性，维持良好的组织形态，利于下一步研究。
[0007]本发明的目的是以下述技术方案实现的:
一种棉盲蝽成虫脑的解剖方法，包括以下步骤:先固定虫体，使脑组织成形，然后破坏复眼外壳，以口器为突破口，由口器沿着复眼打开脑壳，剖出脑，得到完整的脑组织。
[0008]具体包括以下步骤:
(1)将棉盲蝽放入固定液中固定；
(2)将固定后的棉盲蝽移出，滴加生理液；
(3)夹破复眼外壳，使两侧复眼露出外壳，从前胸小盾片处去除虫体中后胸及腹部，然后固定昆虫头部，夹破昆虫口器，使口器上下分开，并延伸至复眼，继续分离，使整个脑壳上下分开，上部分脑壳沿向上方向去除，下部分沿向下方向去除，继续去除脑上其他组织，得到完整的脑组织。
[0009]所述步骤(I)中固定液为甲醛、多聚甲醛或戊二醛固定液。
[0010]所述步骤(2)中生理液为Ringer’s生理液。
[0011]所述步骤(3)中脑组织为脑、咽下神经和前胸。
[0012]本发明的有益效果:通过提前用固定液固定棉盲蝽，从而使脑组织成形，然后去除复眼的部分外壳，以口器为突破口，使脑壳上下分开，剖出脑，保证了脑的完整性。本发明能够在短时间内得到完整的棉盲蝽脑，最大程度地保持了脑内超微结构的原始状态，避免了结构损伤，利于进行下一步的研究。
【附图说明】
[0013]图1是绿盲蝽成虫完整的脑前面观(面对昆虫眼睛)视图(VHX-600E数码显微镜)； 图2是绿盲蝽成虫完整的脑后面观(从昆虫头壳方向观)视图。
【具体实施方式】
[0014]实施例1
本发明提供的棉盲蝽成虫脑的解剖方法，先用固定液固定棉盲蝽虫体，使脑组织成形，然后破坏复眼外壳，以口器为突破口，由口器沿着复眼打开脑壳，剖出脑，得到完整的脑组织，保证了脑的完整性，具体包括以下步骤:
1.将冷冻致死且脑未损伤的棉盲蝽成虫，用镊子夹破棉盲蝽腹部，加入固定液浸泡棉盲蝽成虫，浸泡时间约lh，使脑组织成形；固定液可选用甲醛、多聚甲醛或戊二醛固定液;冷冻致死的棉盲蝽成虫能最大限度的保持脑组织的活性;夹破腹部可使固定液进入棉盲蝽体内，加快固定时间;保持构成神经组织的蛋白质仍然具有活性；
2.将固定后的棉盲蝽转移至玻璃培养皿上，在培养皿底上滴I滴Ringer’s生理液，用以保湿并保持脑的活性；
3.左手用镊子固定棉盲蝽身体，右手拿镊子轻轻夹破复眼外壳，使两侧复眼露出外壳；
4.从前胸小盾片处去除虫体中后胸及腹部;将昆虫腹面朝上，左手拿镊子挡住昆虫头部不动，右手拿镊子夹破昆虫口器，使口器上下分开，并延伸至复眼，继续分离，使整个脑壳上下分开;上部分脑壳沿向上方向去除；下部分沿向下的方向去除；继续去除肌肉及脑上其他组织，最终得到完整的脑组织，此脑组织不但包括脑，还包括咽下神经节和前胸神经器官，本发明获得的脑组织不但包括脑，还包括咽下神经节和前胸神经器官，是因为棉盲蝽的这几部分结构愈合程度很高，成为一体，若从颈部切开，只取脑，很可能造成结构不完整，因此，本发明最大限度的保证了棉盲蝽神经系统的完整性。
[0015]实施例2
1.用镊子夹破冷冻致死且脑未损伤的绿盲蝽腹部，加入甲醛固定液浸泡绿盲蝽成虫，浸泡时间Ih左右，使脑组织成形；
2.将固定后的绿盲蝽转移至玻璃培养皿上，在培养皿底上滴I滴Ringer’s生理液；用于维持生物体的正常渗透压；
3.左手用镊子固定绿盲蝽身体，右手拿镊子轻轻夹破复眼外壳，使两侧复眼露出外壳；
4.从前胸小盾片处去除虫体中后胸及腹部;将昆虫腹面朝上，左手拿镊子挡住昆虫头部不动，右手拿镊子夹破昆虫口器，使口器上下分开，并延伸至复眼，继续分离，使整个脑壳上下分开;上部分脑壳沿向上方向去除；下部分沿向下的方向去除；继续去除肌肉及脑上其他组织，最终得到完整的脑组织;如图1和图2所示，绿盲蝽脑组织状态良好，内部结构完整。
[0016]实施例3 1.用镊子夹破冷冻致死且脑未损伤的黑盲蝽腹部，加入多聚甲醛固定液浸泡黑盲蝽成虫约Ih，使脑组织成形；
2.将固定后的黑盲蝽转移至玻璃培养皿上，在培养皿底上滴I滴Ringer’s生理液；
3.左手用镊子固定黑盲蝽身体，右手拿镊子轻轻夹破复眼外壳，使两侧复眼露出外壳；
4.从前胸小盾片处去除虫体中后胸及腹部;将昆虫腹面朝上，左手拿镊子挡住昆虫头部不动，右手拿镊子夹破昆虫口器，使口器上下分开，并延伸至复眼，继续分离，使整个脑壳上下分开;上部分脑壳沿向上方向去除；下部分沿向下的方向去除；继续去除肌肉及脑上其他组织，最终得到完整的脑组织。
[0017]实施例4
1.用镊子夹破冷冻致死且脑未损伤的三点盲蝽腹部，加入戊二醛固定液浸泡三点盲蝽成虫约Ih，使脑组织成形；
2.将固定后的三点盲蝽转移至玻璃培养皿上，在培养皿底上滴I滴Ringer’s生理液；
3.左手用镊子固定三点盲蝽身体，右手拿镊子轻轻夹破复眼外壳，使两侧复眼露出外壳；
4.从前胸小盾片处去除虫体中后胸及腹部;将昆虫腹面朝上，左手拿镊子挡住昆虫头部不动，右手拿镊子夹破昆虫口器，使口器上下分开，并延伸至复眼，继续分离，使整个脑壳上下分开;上部分脑壳沿向上方向去除；下部分沿向下的方向去除；继续去除肌肉及脑上其他组织，最终得到完整的脑组织。
【主权项】
1.一种棉盲蝽成虫脑的解剖方法，其特征在于包括以下步骤:先固定虫体，使脑组织成形，然后破坏复眼外壳，以口器为突破口，由口器沿着复眼打开脑壳，剖出脑，得到完整的脑组织。2.如权利要求1所述的棉盲蝽成虫脑的解剖方法，其特征在于包括以下步骤: (1)将棉盲蝽放入固定液中固定； (2)将固定后的棉盲蝽移出，滴加生理液； (3)夹破复眼外壳，使两侧复眼露出外壳，从前胸小盾片处去除虫体中后胸及腹部，然后固定昆虫头部，夹破昆虫口器，使口器上下分开，并延伸至复眼，继续分离，使整个脑壳上下分开，上部分脑壳沿向上方向去除，下部分沿向下方向去除，继续去除脑上其他组织，得到完整的脑组织。3.如权利要求2所述的棉盲蝽成虫脑的解剖方法，其特征在于所述步骤(I)中固定液为甲醛、多聚甲醛或戊二醛固定液。4.如权利要求2所述的棉盲蝽成虫脑的解剖方法，其特征在于所述步骤(2)中生理液为Ringer’s生理液。5.如权利要求2所述的棉盲蝽成虫脑的解剖方法，其特征在于所述步骤(3)中脑组织为脑、咽下神经和前胸。
【专利摘要】一种棉盲蝽成虫脑的解剖方法，包括以下步骤：先固定虫体，使脑组织成形，然后破坏复眼外壳，以口器为突破口，由口器沿着复眼打开脑壳，剖出脑，得到完整的脑组织。本发明通过提前用固定液固定棉盲蝽，从而使脑组织成形，然后去除复眼的部分外壳，以口器为突破口，使脑壳上下分开，剖出脑，保证了脑的完整性。本发明能够在短时间内得到完整的棉盲蝽脑，最大程度地保持了脑内超微结构的原始状态，避免了结构损伤，利于进行下一步的研究。
【IPC分类】A61B16/00, A61D1/00
【公开号】CN105616029
【申请号】CN201511011561
【发明人】谢桂英, 赵新成, 林爱丽, 邵凯敏, 郭培
【申请人】河南农业大学
【公开日】2016年6月1日
【申请日】2015年12月30日