积浓度为90%的乙醇。浸渍1~5h后，回流提取1~3次，每次提取时间1~ 2h，合并提取液，浓缩成浓度为0.5~1.5g · ml/1药液，上X-5大孔吸附树脂，湿法上柱，先用 水冲洗1~5BV柱体积除杂，再用体积浓度为30~90%的乙醇溶液洗脱1~10BV柱体积，收集 洗脱液，再用有机溶剂萃取1~3次，挥干溶剂，即得甘草三萜提取物，纯度>90%。
[0032]甘草多糖提取物的制备:取甘草，加6~30倍体积水，回流提取1~3次，每次0.5~ 2h，提取液浓缩至0.5~2mg/mL，加乙醇，调节终浓度至70~90%，沉淀12~36h，过滤，挥干， 即得甘草多糖提取物，纯度>50%。
[0033]香附挥发油提取物的制备:取香附，加7~9倍体积水，水蒸气蒸馏提取3~7h，即得 香附挥发油提取物，相对于水的密度为〇. 9000~0.9999。
[0034] 3均匀设计方案。
[0035]按照U6(63)均匀设计表设计方案，分别精密称取甘草多糖(A)、甘草三萜(B)、香附 挥发油(C)，配制成6个不同比例的配伍组，均匀设计表如下。
[0038] 4 MTT法药效检测。
[0039] 取对数生长期、生长状态良好的SH-SY5Y细胞，经PBS清洗，用0.25%胰蛋白酶消化， 待细胞趋于变圆，用含15%进口胎牛血清的DMEM培养液冲洗吹打细胞，制成单细胞悬液。以 每毫升IX 105个细胞接种于96孔培养板中，每孔100 HL(除空白调零孔外），将培养板置于 C〇2培养箱中继续培养，24 h后模型组和给药组加入含H2〇2(终浓度为100 μπιο? .1/1)的roS 溶液，构建氧化损伤抑郁模型，空白对照组加无 H2〇2的roS溶液，造模2 h后空白对照组和模 型组加入10 %血清的培养基100 yL培养，各给药组分别加入10 %血清的含药培养基100 μ L。设空白调零组（只加培养基，酶标仪调零用）、空白对照组、模型组（只加细胞）和给药组 (加入各配伍组药物），设5个复孔。在37 °C、5%C02培养箱中继续培养24h后，每孔吸取细胞上 清液50 uL，置-20°C保存，留作测试剂盒用，每孔补加50 uL培养液，继续培养3 h，每孔加 入20 μΚ5 mg/mL)MTT，继续培养4 h后吸净孔内上清液，每孔加入150 uL DMS0用酶标仪振 摇lOmin，使紫色结晶完全溶解，在492 nm处，测定吸光度(0D)值。结果如表3所示。其中细胞 存活率=〇D试验组/0D空白对照组X 100 %。
[0041 ] 5数据处理。 应用CSZ均匀设计软件对数据进行处理。回归方程为：￥=-30.2328-8.1764父3-0 · 1531X22+1 ·4452X1X2+1 · 2133X2X3(R2=0 ·9998)，F=599 ·6378>F(i,4)°.°5。以细胞存活率为 抗抑郁症体外药效指标，得到抗抑郁有效组分的最佳配伍量为：甘草多糖提取物： 70.7361mg，甘草三萜提取物：25.5756mg，香附挥发油提取物：15.9573mg。抗抑郁有效组分 的最佳配伍比例为甘草多糖提取物：甘草三萜提取物：香附挥发油提取物=4.4328: 1.6028：1〇
[0042] 6验证试验。
[0043]按筛选出的最佳配伍量配置中药组分复方，考察其对SH-SY5Y细胞的保护作用，结 果细胞存活率达88.75%(n=5)。
[0044]由以上结果可知，甘草多糖提取物、甘草三萜提取物、香附挥发油提取物组成的中 药药效组分复方对SH-SY5Y细胞有很好的保护作用，具有较强的抗抑郁作用，为抗抑郁新药 的开发提供理论依据。
【主权项】
1. 一种具有抗抑郁作用的中药药效组分复方，其特征在于，所述中药药效组分复方由 甘草有效组分和香附有效组分组成;所述甘草有效组分为甘草多糖、甘草三萜，香附有效组 分为香附挥发油。2. 如权利要求1所述的一种具有抗抑郁作用的中药药效组分复方，其特征在于，所述甘 草多糖、甘草三萜、香附挥发油的用量比为（1~50份）：（1~50份）：（1~50份）。3. 如权利要求2所述的一种具有抗抑郁作用的中药药效组分复方，其特征在于，所述中 药药效组分复方中甘草多糖、甘草三萜、香附挥发油的用量最佳配伍比为4.4328:1.6028: 1〇4. 如权利要求1所述的一种具有抗抑郁作用的中药药效组分复方，其特征在于： 所述甘草多糖的制备：取甘草，加8~12倍量90%乙醇，浸渍1~5h后，回流提取1~3次， 每次提取时间1~2h，合并提取液，浓缩成浓度为0.5~1.5g · ml/1药液，上X-5大孔吸附树 月旨，湿法上柱，先用水冲洗1~5BV柱体积除杂，再用浓度为30~90%的乙醇溶液洗脱1~10BV 柱体积，收集洗脱液，再用有机溶剂萃取1~3次，挥干溶剂，即得甘草三萜，纯度>90%; 所述甘草三萜的制备:取甘草，加6~30倍量水，回流提取1~3次，每次0.5~2h，提取液 浓缩至0.5~2mg/mL，加乙醇，调节终浓度至70~90%，沉淀12~36h，过滤，挥干，即得甘草多 糖提取物，纯度>50%; 所述香附挥发油的制备:取香附，加7~9倍量水，水蒸气蒸馏提取3~7h，即得香附挥发 油，相对于水的密度为〇. 9000~0.9999。5. 如权利要求1所述的一种具有抗抑郁作用的中药药效组分复方，其特征在于，所述中 药药效组分复方可以制备成多种制剂，并可添加药学上可接受的辅料及载体应用于临床抗 抑郁新药的开发。6. 如权利要求5所述的一种具有抗抑郁作用的中药药效组分复方，其特征在于，所述制 剂的剂型可以为:糖衣片剂、薄膜衣片剂、肠溶衣片剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、口服液、口含 剂、颗粒剂、冲剂、蜜丸剂、散剂、丹剂、注射剂、栓剂、硬膏剂、糖衆剂、针粉剂、□崩剂或缓释 胶囊剂等。
【专利摘要】一种具有抗抑郁作用的中药药效组分复方，所述中药药效组分复方由甘草有效组分和香附有效组分组成；所述甘草有效组分为甘草多糖提取物、甘草三萜提取物，香附有效组分为香附挥发油提取物。所述甘草多糖提取物、甘草三萜提取物、香附挥发油提取物的优选的重量比为4.4328：1.6028：1。所述中药药效组分复方可添加药学上可接受的辅料及载体应用于临床抗抑郁新药的开发。本发明提供的一种具有抗抑郁作用的中药药效组分复方，通过对甘草和香附有效组分的配伍，得到了高效的抗抑郁中药药效组分复方，为抗抑郁方面的新药开发奠定基础，克服了传统中药配伍有效成分不清楚、质量无法控制而导致治疗效果不明确的缺陷。
【IPC分类】A61K36/8905, A61P25/24
【公开号】CN105616839
【申请号】CN201610104739
【发明人】孟宪生, 王帅, 包永睿, 张丽敏, 李天娇
【申请人】辽宁中医药大学
【公开日】2016年6月1日
【申请日】2016年2月26日