一种提高高温应激条件下公猪精液质量的中药乌梅提取物的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种提高高温应激条件下公猪精液质量的中药乌梅提取物，该乌梅提取物通过如下方法制备：（a）将干燥的乌梅和香樟根混合，粉碎，用75~85%乙醇溶液热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味得到乙醇提取浓缩液；（b）将步骤（a）所得乙醇提取浓缩液用水稀释，依次用石油醚、乙酸乙酯和水饱和的正丁醇萃取，减压浓缩，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（c）正丁醇萃取物用水溶解，过滤，用AB?8型大孔树脂富集活性成分，先用8~12%乙醇冲洗6~10个柱体积除去大极性成分，再用65~75%乙醇洗脱8~12个柱体积，收集65~75%乙醇洗脱液，减压浓缩；其中，香樟根占乌梅与香樟根总重的5%~15%。
【专利说明】
-种提高高溫应激条件下公猪精液质量的中药乌梅提取物
技术领域
[0001 ]本发明属于畜牧业，设及兽药，具体设及一种提高高溫应激条件下公猪精液质量 的中药香精根提取物，该提取物可明显提高高溫应激条件下公猪精液质量。
【背景技术】
[0002] 品种、营养和环境Ξ大因素直接影响一个猪场的经济效益，对于种公猪而言，环境 溫度是影响其繁殖性能的首要因素。夏天高溫导致公猪食欲不振，性欲下降，公猪精液品质 下降，如死精、少精、无精等。生产中通过调整饲粮蛋白质和氨基酸水平、提高能量浓度可减 少体增热，是克服热应激的有效措施之一，但是效果有限。
[0003] 中药乌梅为菩薇科植物梅的干燥未成熟果实。5月间采摘将成熟的绿色果实（青 梅），按大小分开，分别化赔，火力不宜过大，溫度保持在40°C左右。当梅子赔至六成干时，须 上下翻动（勿翻破表皮），使其干燥均匀。一般化赔2~3昼夜，至果肉呈黄褐色起皱皮为度， 赔后再炯2~3天，待变成黑色即成。原植物梅为落叶小乔木，高可达10米。树皮淡灰色或淡 绿色，多分枝。单叶互生;有叶柄，通常有腺体;嫩枝上叶柄基部有线形托叶2片，托叶边缘具 不整齐细锐银齿;叶片卵形至长圆状卵形，长4~9厘米，宽2.4~4厘米，先端长尾尖，基部阔 模形，边缘具细锐银齿，沿脉背有黄褐色毛。花单生或2朵簇生，白色或粉红色，芳香，通常先 叶开放，有短梗;巷片鱗片状，褐色;專筒钟状，裂片5，墓部与花托合生;花瓣单瓣或重瓣，通 常5片，阔倒卵形，雄蕊多数，生于花托边缘;雌蕊1，子房密被毛，花柱细长，弯曲。核果球形， 直径约2~3厘米，一侧有浅槽，被毛，绿色，熟时黄色，核硬，有槽纹。花期1~2月。果期5月。 全国各地均有栽培。主产四川、浙江、福建、湖南、贵州。此外，广东、湖北、云南、陕西、安徽、 江苏、广西、江西、河南等地亦产。
[0004] 香精根为精科植物精的根。春、秋季采挖，洗净，切片，晒干。不宜火烘，W免香气挥 发。原植物精为常绿乔木，高20-30m。树皮灰褐色或黄褐色，纵裂;小枝淡褐色，光滑;枝和叶 均有精脑味。叶互生，革质，卵状楠圆形W至卵形，长6-12cm，宽3-6畑1，先端渐尖，基部纯或 阔模形，全缘或呈波状，上面深绿色有光泽，下面灰绿色或粉白色，无毛，幼叶淡红色，脉在 基部W上3出，脉蔽内有隆起的腺体;叶柄长2-3畑1。圆锥花序蔽生；花小，绿白色或淡黄色， 长约2mm;花被6裂，楠圆形，长约2mm，内面密生细柔毛;能育雄蕊9,花药4室;子房卵形，光滑 无毛，花柱短;柱头头状。核果球形，宽约1cm，熟时紫黑色，基部为宿存、扩大的花被管所包 围。花期4-6月。果期8-11月。栽培或野生于河旁，或生于较为湿润的平地。分布广东、广西、 云南、贵州、江苏、浙江、安徽、福建、台湾、江西、湖北、湖南、四川等地。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是提供一种提高高溫应激条件下公猪精液质量的中药乌梅提取物， 该提取物可明显提高高溫应激条件下公猪精液质量。
[0006] 上述目的是通过如下技术方案得W实现的： 一种提局局温应激条件下公猪精?攸质量的中药乌梅提取物，通过如下方法制备：（a)将 干燥的乌梅和香精根混合，粉碎，用75~85%乙醇溶液热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇 味得到乙醇提取浓缩液;（b)将步骤(a)所得乙醇提取浓缩液用水稀释，依次用石油酸、乙酸 乙醋和水饱和的正下醇萃取，减压浓缩，分别得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物和正下醇 萃取物；（C)正下醇萃取物用水溶解，过滤，用AB-8型大孔树脂富集活性成分，先用8~12%乙 醇冲洗6~10个柱体积除去大极性成分，再用65~75%乙醇洗脱8~12个柱体积，收集65~75%乙 醇洗脱液，减压浓缩;其中，香精根占乌梅与香精根总重的5%~15%。
[0007]进一步地，所述的中药乌梅提取物通过如下方法制备：（a)将干燥的乌梅和香精根 混合，粉碎，用80%乙醇溶液热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味得到乙醇提取浓缩液； (b)将步骤(a)所得乙醇提取浓缩液用水稀释，依次用石油酸、乙酸乙醋和水饱和的正下醇 萃取，减压浓缩，分别得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物和正下醇萃取物；（C)正下醇萃取 物用水溶解，过滤，用AB-8型大孔树脂富集活性成分，先用10%乙醇冲洗8个柱体积除去大极 性成分，再用70%乙醇洗脱10个柱体积，收集70%乙醇洗脱液，减压浓缩;其中，香精根占乌梅 与香精根总重的10%。
[000引进一步地，所述的中药乌梅提取物通过如下方法制备：（a)将干燥的乌梅和香精根 混合，粉碎，用75%乙醇溶液热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味得到乙醇提取浓缩液； (b)将步骤(a)所得乙醇提取浓缩液用水稀释，依次用石油酸、乙酸乙醋和水饱和的正下醇 萃取，减压浓缩，分别得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物和正下醇萃取物；（C)正下醇萃取 物用水溶解，过滤，用AB-8型大孔树脂富集活性成分，先用8%乙醇冲洗10个柱体积除去大极 性成分，再用65%乙醇洗脱12个柱体积，收集65%乙醇洗脱液，减压浓缩;其中，香精根占乌梅 与香精根总重的5%。
[0009] 进一步地，所述的中药乌梅提取物通过如下方法制备：（a)将干燥的乌梅和香精根 混合，粉碎，用85%乙醇溶液热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味得到乙醇提取浓缩液； (b)将步骤(a)所得乙醇提取浓缩液用水稀释，依次用石油酸、乙酸乙醋和水饱和的正下醇 萃取，减压浓缩，分别得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物和正下醇萃取物；（C)正下醇萃取 物用水溶解，过滤，用AB-8型大孔树脂富集活性成分，先用12%乙醇冲洗6个柱体积除去大极 性成分，再用75%乙醇洗脱8个柱体积，收集75%乙醇洗脱液，减压浓缩;其中，香精根占乌梅 与香精根总重的15%。
[0010] 上述的中药乌梅提取物在提高高溫应激条件下公猪精液质量方面的应用。
[0011]本发明的优点： 本发明提供的提高高溫应激条件下公猪精液质量的中药乌梅提取物制备方法简单，可 工业化生产;该提取物可明显提高高溫应激条件下公猪精液质量。
【具体实施方式】
[0012] 下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容，但并不W此限定本发明保护范 围。尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可W对 本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
[0013] 实施例1:乌梅提取物的制备 (a)将化g干燥的乌梅和香精根（占总重10%)混合，粉碎，用80%乙醇溶液热回流提取 (2化X3次），合并提取液，浓缩至无醇味得到乙醇提取浓缩液；（b)将步骤(a)所得乙醇提取 浓缩液用水稀释(3L)，依次用石油酸(3LX3次）、乙酸乙醋（3LX3次)和水饱和的正下醇萃 取(3LX3次），减压浓缩，分别得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物和正下醇萃取物；（C)正 下醇萃取物用水溶解，过滤，用AB-8型大孔树脂富集活性成分，先用10%乙醇冲洗8个柱体积 除去大极性成分，再用70%乙醇洗脱10个柱体积，收集70%乙醇洗脱液，减压浓缩即得。
[0014] 实施例2:乌梅提取物的制备 (a)将化g干燥的乌梅和香精根（占总重5%)混合，粉碎，用75%乙醇溶液热回流提取(2化 X3次），合并提取液，浓缩至无醇味得到乙醇提取浓缩液;（b)将步骤(a)所得乙醇提取浓缩 液用水稀释(3L )，依次用石油酸(化X 3次）、乙酸乙醋(化X 3次)和水饱和的正下醇萃取(3L X3次），减压浓缩，分别得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物和正下醇萃取物；（C)正下醇萃 取物用水溶解，过滤，用AB-8型大孔树脂富集活性成分，先用8%乙醇冲洗10个柱体积除去大 极性成分，再用65%乙醇洗脱12个柱体积，收集65%乙醇洗脱液，减压浓缩即得。
[0015] 实施例3:乌梅提取物的制备 (a)将化g干燥的乌梅和香精根（占总重15%)混合，粉碎，用85%乙醇溶液热回流提取，合 并提取液(2化X3次），浓缩至无醇味得到乙醇提取浓缩液；（b)将步骤(a)所得乙醇提取浓 缩液用水稀释(3L)，依次用石油酸(3L X 3次）、乙酸乙醋(3L X 3次)和水饱和的正下醇(化X 3次)萃取，减压浓缩，分别得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物和正下醇萃取物；（C)正下醇 萃取物用水溶解，过滤，用AB-8型大孔树脂富集活性成分，先用12%乙醇冲洗6个柱体积除去 大极性成分，再用75%乙醇洗脱8个柱体积，收集75%乙醇洗脱液，减压浓缩即得。
[0016] 实施例4:实施例1的对比，不添加香精根 (a)将化g干燥的乌梅粉碎，用80%乙醇溶液热回流提取(2化X 3次），合并提取液，浓缩 至无醇味得到乙醇提取浓缩液；（b)将步骤(a)所得乙醇提取浓缩液用水稀释(3L)，依次用 石油酸(3L X 3次）、乙酸乙醋（3L X 3次)和水饱和的正下醇萃取(3L X 3次），减压浓缩，分别 得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物和正下醇萃取物；（C)正下醇萃取物用水溶解，过滤，用 AB-8型大孔树脂富集活性成分，先用10%乙醇冲洗8个柱体积除去大极性成分，再用70%乙醇 洗脱10个柱体积，收集70%乙醇洗脱液，减压浓缩即得。
[0017] 实施例5:实施例1的对比，香精根占总重的20% (a)将化g干燥的乌梅和香精根（占总重20%)混合，粉碎，用80%乙醇溶液热回流提取 (2化X3次），合并提取液，浓缩至无醇味得到乙醇提取浓缩液；（b)将步骤(a)所得乙醇提取 浓缩液用水稀释(3L)，依次用石油酸(3LX3次）、乙酸乙醋（3LX3次)和水饱和的正下醇萃 取(3LX3次），减压浓缩，分别得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物和正下醇萃取物；（C)正 下醇萃取物用水溶解，过滤，用AB-8型大孔树脂富集活性成分，先用10%乙醇冲洗8个柱体积 除去大极性成分，再用70%乙醇洗脱10个柱体积，收集70%乙醇洗脱液，减压浓缩即得。
[0018] 实施例6:对高溫应激条件下公猪精液质量的影响 一、材料与方法 1、试验时间与地点：试验于2014年7-8月在重庆某原种猪场进行，预试期7d，正试期 42d。试验器猪舍外溫度平均31.79 °C，猪舍内溫度平均29.89 °C。
[0019] 2、试验样品：分别按照实施例^5制备乌梅提取物^5。
[0020] 3、方法 3.1试验动物、分组及饲养方法 选取营养状况、身体状况相近的长白公猪34头，随机分成6组，对照组4头，试验组^5每 组6头。对照组饲喂基础饲粮，试验组1~5分别在基础饲粮的基础上分别添加250g/t的乌梅 提取物1~5。基础饲粮采用大型饲料公司生产的全价公猪饲料。试验猪自由饮水，每天上午 和下午各清理1次猪舍。试验公猪均是成年且在生产中正常使用的繁殖种公猪。试验开始每 周保持正常的1~2次采精频率。猪舍采用西南地区规模化猪场常用的风机-湿帘降溫方式， 每天观察猪的精神状况，记录猪舍内外溫度、湿度。
[0021] 3.2样品的收集与处理 试验前样品的收集:饲喂前6组在同一天内进行采精、镜检，2000r/min离屯、20min，取上 清液ImL装于EP管，-20°C冰箱冷冻保存待测。试验至第6周后开始收集饲喂后精液样品（同 饲喂前样品收集方法一致）。精液采用BTS稀释后常溫保存，比较其保存时间的差异。采精耐 受性试验，连续3d保持每天采精1次，第3天收集的精液采用相同方法处理。
[0022] 3.3测定指标 参照国家标准GB23238-2009《种猪常溫精液》方法测定猪的射精量、颜色气味、精子活 力、精子崎形率，精子密度采用血球计数板测量，然后根据射精量与精子密度计算每次射精 总精子数。精液收集和检测均由同一经验丰富的技术人员负责；精清生化指标丙二醒 (MAD)、天口冬氨酸氨基转移酶(AST)、睾酬(T)的含量用北京冬歌博业生物科技有限公司进 口分装的化ISA(酶联免疫吸附试验)检测试剂盒，使用分光光度计进行测定。
[0023] 3、统计分析 试验数据采用SPSS20.0软件进行方差分析，差异显著性进行Duncans多重比较，表中数 值表示为Mean + SD。
[0024] 二、结果 1、 饲粮中提取物对精子总数和活力的影响 试验收集期精液的颜色与气味均正常。由表1可W看出，试验组^3与对照组相比，饲喂 前后精子总数增加率差异显著(P<〇.05);试验组4和5与对照组相比，精子总数增加率无显 著性差异（P>0.05)。试验组1~3与对照组相比，饲喂前后精子活力提高率差异显著（P< 0.05);试验组4和5与对照组相比，精子活力提高率无显著性差异(P>0.05)。
[0025] 表1饲粮中提取物对精子总数和活力的影响
2、 饲粮中提取物对精液保存时间的影响 由表2可W看出，试验组1~3与对照组相比，保存相同时候后精子活力更高，差异显著(P <0.05)，说明可W保存更长的时间；试验组4和5与对照组相比，保存相同时候后精子活力 相近，无显著性差异(P>〇. 05)。
[0026] 表2饲粮中提取物对精液保存时间的影响
结果表明，本发明提供的提取物可W显著提高公猪的精子总数和活力，显著提高精液 保存时间。本发明提取物的上述作用与是否添加香精根W及香精根的加入量有关。
[0027] 上述实施例的作用在于说明本发明的实质性内容，但并不W此限定本发明的保护 范围。本领域的普通技术人员应当理解，可W对本发明的技术方案进行修改或者等同替换， 而不脱离本发明技术方案的实质和保护范围。
【主权项】
1. 一种提高高温应激条件下公猪精液质量的中药乌梅提取物，其特征在于，通过如下 方法制备：（a)将干燥的乌梅和香樟根混合，粉碎，用75~85%乙醇溶液热回流提取，合并提取 液，浓缩至无醇味得到乙醇提取浓缩液;（b)将步骤(a)所得乙醇提取浓缩液用水稀释，依次 用石油醚、乙酸乙酯和水饱和的正丁醇萃取，减压浓缩，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯 萃取物和正丁醇萃取物；（c)正丁醇萃取物用水溶解，过滤，用AB-8型大孔树脂富集活性成 分，先用8~12%乙醇冲洗6~10个柱体积除去大极性成分，再用65~75%乙醇洗脱8~12个柱体 积，收集65~75%乙醇洗脱液，减压浓缩;其中，香樟根占乌梅与香樟根总重的5%~15%。2. 根据权利要求1所述的中药乌梅提取物，其特征在于，通过如下方法制备：（a)将干燥 的乌梅和香樟根混合，粉碎，用80%乙醇溶液热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味得到乙 醇提取浓缩液；（b)将步骤(a)所得乙醇提取浓缩液用水稀释，依次用石油醚、乙酸乙酯和水 饱和的正丁醇萃取，减压浓缩，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物； (c)正丁醇萃取物用水溶解，过滤，用AB-8型大孔树脂富集活性成分，先用10%乙醇冲洗8个 柱体积除去大极性成分，再用70%乙醇洗脱10个柱体积，收集70%乙醇洗脱液，减压浓缩;其 中，香樟根占乌梅与香樟根总重的10%。3. 根据权利要求1所述的中药乌梅提取物，其特征在于，通过如下方法制备：（a)将干燥 的乌梅和香樟根混合，粉碎，用75%乙醇溶液热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味得到乙 醇提取浓缩液；（b)将步骤(a)所得乙醇提取浓缩液用水稀释，依次用石油醚、乙酸乙酯和水 饱和的正丁醇萃取，减压浓缩，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物； (c)正丁醇萃取物用水溶解，过滤，用AB-8型大孔树脂富集活性成分，先用8%乙醇冲洗10个 柱体积除去大极性成分，再用65%乙醇洗脱12个柱体积，收集65%乙醇洗脱液，减压浓缩;其 中，香樟根占乌梅与香樟根总重的5%。4. 根据权利要求1所述的中药乌梅提取物，其特征在于，通过如下方法制备：（a)将干燥 的乌梅和香樟根混合，粉碎，用85%乙醇溶液热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味得到乙 醇提取浓缩液；（b)将步骤(a)所得乙醇提取浓缩液用水稀释，依次用石油醚、乙酸乙酯和水 饱和的正丁醇萃取，减压浓缩，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物； (c)正丁醇萃取物用水溶解，过滤，用AB-8型大孔树脂富集活性成分，先用12%乙醇冲洗6个 柱体积除去大极性成分，再用75%乙醇洗脱8个柱体积，收集75%乙醇洗脱液，减压浓缩；其 中，香樟根占乌梅与香樟根总重的15%。5. 权利要求1~4任一所述的中药乌梅提取物在提高高温应激条件下公猪精液质量方面 的应用。
【文档编号】A61P15/08GK105878460SQ201610321227
【公开日】2016年8月24日
【申请日】2016年5月16日
【发明人】徐珍
【申请人】苏州毕诺佳医药技术有限公司