一种改善学习记忆能力障碍的保健制剂的制备方法及用图
【专利摘要】本发明公开了一种具有改善学习记忆能力障碍的保健制剂，其由栀子、三七、人参和灵芝四种可用于保健食品的提取物组成，使用药剂学常规辅料，并通过药剂学常规工艺制备成内服制剂。经药理实验证实，本发明保健制剂可明显改善阿尔茨海默氏症模型果蝇的学习记忆能力，并降低其脑部炎症反应的水平，因此可以将其制成改善学习记忆能力障碍的保健食品。
【专利说明】
一种改善学习记忆能力障碍的保健制剂的制备方法及用途
技术领域
[0001]本发明涉及制备治疗学习记忆力障碍的保健食品的制备方法和用途，属于医药制造和运用领域。
【背景技术】
[0002]学习记忆障碍是一种病理状态，可分为衰老性和疲劳性两种。
[0003]衰老性障碍主要诱因是器官因生理或病理导致的学习和记忆能力下降，其严重程度随年龄的增大而加剧。由于我国社会逐渐向老龄化发展，2010年全国65岁及以上的人口已经超过了一亿人。随着年龄增加，老年痴呆症等学习记忆障碍型疾病的发病率也迅速上升，已是世界上老年痴呆症患者最多的国家，业已超过800万。据预测，到2040年患者将达到2200万，是所有发达国家老年痴呆症患者数的总和。这给中国的经济带来了沉重的负担，也是中国经济社会可持续发展的一个重要阻碍。
[0004]疲劳性学习障碍是由长期的应激损害导致的。长期的睡眠不足，用脑过度和亚健康都都会导致和加剧此种现象。虽然并无权威数据统计，但由于社会生活节奏加快，白领人群的日益扩大，以及社会和个人的不重视，此类障碍的人群也日益扩大。
[0005]衰老性和疲劳性学习障碍的引发原因有很多，其中一个共通的特点是脑部的炎症。临床上业已发现，老年阿兹海默症患者的脑部有明显的炎症反应。与此同时，用药物诱发小鼠脑部的炎症反应，也能引起小鼠的学习记忆能力障碍。因此，改善脑部的炎症反应有助于改善脑功能。不过，直接治疗炎症的药物，如C0X-2抑制剂或NSAID，并不能改善记忆。一些科学家认为，脑部炎症损伤了大脑的功能，使得学习记忆能力出现障碍，但在障碍后单独地降低炎症并不能修复已经发生的损伤。因此，两者结合，在挽救学习记忆能力障碍的同时挽救炎症可以取得更好的疗效。
[0006]为了治疗学习记忆能力障碍，科学家们从机理着手，运用动物模型并发现多个与学习记忆相关的靶点，并据此开发了多种药物和保健品。从机理上说，可以分为神经营养剂，神经受体调控剂，特异性靶点调控剂三个大类。深海鱼油(富含欧米伽-3)，卵磷脂，牛磺酸等是经典的神经营养剂；乙酰胆碱酯酶抑制剂，天门冬氨酸拮抗剂等属于神经受体调控剂;而Abeta/磷酸化Tau蛋白抗体则属于特异性靶点调控剂。这三类物质都能够在一定程度上改善学习记忆障碍。其中，第一种物质主要能改善疲劳性学习障碍，后两种主要能改善衰老型学习障碍。但令人遗憾的是，这些物质的改善幅度都不大，不能根治或预防学习记忆障碍，对脑部炎症也没有很好的效果，因此市场需要新的治疗或改善学习记忆能力障碍的药物及保健食品。
[0007]中药在健脑益智上有着长久的历史，本草纲目中就记载灵芝能益心气、宁心神、增智慧。本发明的发明人将传统上具有健脑益智的四种可用于保健食品的中药提取物制成制剂。在实验研究中发现，该制剂能够改善由老年痴呆症引起的学习记忆能力障碍，并降低其脑部炎症反应。因此，可以将其制备成治疗学习记忆障碍的药物或保健食品等。
【发明内容】
[0008]本发明的目的是提供一种具有改善学习记忆能力障碍的保健制剂和制备方法和用途。
[0009]本发明公开的制备改善学习记忆能力障碍的保健食品的活性成分的方法。所述保健食品包含栀子、三七、人参和灵芝四种可用于保健食品的提取物。
[0010]各原料的用量以重量份表示为:人参提取物:30?100 ；灵芝提取物:40?80 ；三七提取物:30?100;栀子提取物:30?100。
[0011 ] 优选配比:人参提取物:50?75 ；灵芝提取物:40?60 ；三七提取物:50?75 ；栀子提取物:50?75。
[0012]最佳配比:人参提取物:75;灵芝提取物:50;三七提取物:62.5;栀子提取物:62.5。
[0013]所述各活性成分是由以下步骤制成:
(1)栀子提取物制备:将栀子原料粉碎后，用水加热回流提取三次，每次二小时。合并提取液后，真空减压浓缩。将浓缩浸膏喷雾干燥后，过筛，备用；
(2)二七提取物制备:将二七原料粉碎后过40目筛去除细粉，使用70%乙醇提取二遍。合并提取液后，经15μπι细度过滤器过滤，80°C减压浓缩。将浓缩浸膏120°C灭菌6秒后，喷雾干燥，所得提取物过80目筛，备用；
(3)人参提取物制备:将人参根原料使用乙醇提取三遍，合并提取液后，80°C减压浓缩，真空干燥，所得提取物过100目筛，备用；
(4)灵芝提取物制备:将灵芝原料粉碎后，100°C水提取三次，每次一点五小时。合并提取液80°C真空浓缩，将浓缩液放入反应釜中，冷却后加入4倍乙醇醇沉12小时后，将沉淀取出，加水复溶成浸膏。将浸膏喷雾干燥后，过筛，备用；
将步骤(I)?(4)所得的提取物，在合并后，加入与合并后提取物总重量比为I?1.2的微晶纤维素，混合20分钟；然后加入80%乙醇溶液制软材，18目筛制粒，湿颗粒干燥后，18目筛整粒;之后加入常规辅料，制备成临床可接受的口服固体剂型，如胶囊剂、片剂、颗粒剂或滴丸等。
[0014]下面以通过对老年痴呆症模型果蝇为例，依照实施例1中提取物的配比，对本发明保健制剂改善学习记忆能力障碍和降低脑部炎症反应测试的效果进行说明。
[0015]试验1:本发明对老年痴呆症模型果蝇改善记忆力减退的挽救测试。
[0016]试验目的:评估本发明保健制剂对老年痴呆症模型果蝇改善记忆力减退的挽救测试。
[0017]动物:转入人类老年痴呆症相关的Abeta42蛋白的UAS_Abeta42/Cyo(H29.3)果蝇；诱导Abeta42在脑中特异性表达的ElaV-Gal4G133果蝇(P35);以及作为对照的野生型W1118果蝇(2U)，均由清华大学提供。测试选用P35和H29.3杂交后代中表达Abeta的雄性果蝇作为老年痴呆症模型果蝇，P35和2U杂交后不表达Abeta的雄性果蝇作为野生型对照果蝇。所有果蝇均饲养于装有果蝇培养基(自制)的玻璃瓶中，并放入23-25°C，相对湿度40-50% ,12:12光暗循环的房间中。
[0018]试剂:鹿糖，3-Octanol，4_MethyIcyclohexanol均为Sigma公司产品。
[0019]药物:按本发明实施例1中配比制得，并以0.05mg/ml的浓度溶解在药物溶剂中。药物溶剂:4%的蔗糖水。
[0020]试验设备:果蝇巴甫洛夫嗅觉逃避条件反射自动训练仪;T型迷宫测试仪。以上设备均为自制。
[0021]喂药方法:挑取羽化后雄性的老年痴呆症模型果蝇或野生型对照果蝇的雄蝇，以100只/瓶的密度将其饲养在装有标准果蝇培养基的玻璃指管中，从羽化后第三天到第十天，每天给予模型果蝇溶剂或药物，同时给予野生型对照果蝇溶剂。
[0022]巴甫洛夫嗅觉测试:在果蝇开始喂食药物I周后(羽化后第10天)，将果蝇放入250C，70%湿度的暗室中，每管果蝇各放入一内铺有铜网的训练管中，在I分钟的环境适应后，先后通入两种气味OCT及MCH各I分钟，中间间隔45秒新鲜空气。在通入第一种气味的同时，对铜网施加60V的脉冲电压(宽度1.5秒，间隔3.5秒)，此时第一种气味标记为CS+。在该过程内，果蝇会被施加以I分钟的电击惩罚。之后在45秒新鲜空气后，通入第二种气味，但并不给铜网施加电压，此时第二种气味标记为CS-。之后再通入45秒的新鲜空气保证管内无气味残留。以上过程为一个训练周期。测试时，将训练好的果蝇转移至T迷宫内，迷宫左右两臂分别通入CS+及CS-两种气味。让果蝇在其中选择2分钟。之后，将两臂果蝇收集起来分别统计数量。
[0023]在完成测试后，将以上所述测试后的果蝇数量，按以下公式进行计算得到行为指数(Performance Index，PI):Pi/2=((CS+)- (CS-))/((CS+)+ (CS-))* 100。将OCT及MCH分别作为CS+各进行一次所得的PI1/2值进行平均后，记为I个PI。不同组别的果蝇所测得的PI值，作为对化合物效果的评估标准。
[0024]数据处理:采用One way Anova比较各组间差异情况。
[0025]实验结果:如图1所示，老年痴呆症的模型果蝇相对于野生型对照果蝇，在PI值上有明显的下降，意味着存在明显的学习记忆障碍。而本发明所述保健制剂，可以有效地挽救该下降(P〈0.01)，表明其对老年痴呆症造成的学习记忆缺陷有挽救效果。
[0026]试验2:本发明对老年痴呆症模型果蝇降低脑部炎症反应的挽救测试。
[0027]试验目的:评估本发明保健制剂对老年痴呆症模型果蝇降低脑部炎症反应的作用。
[0028]动物:转入人类老年痴呆症相关的Abeta42蛋白的UAS_Abeta42/Cyo(H29.3)果蝇；诱导Abeta42在脑中特异性表达的ElaV-Gal4G133果蝇(P35);以及作为对照的野生型W1118果蝇(2U)，均由清华大学提供。测试选用P35和H29.3杂交后代中表达Abeta的雄性果蝇作为老年痴呆症模型果蝇，P35和2U杂交后不表达Abeta的雄性果蝇作为野生型对照果蝇。所有果蝇均饲养于装有果蝇培养基(自制)的玻璃瓶中，并放入23-25°C，相对湿度40-50% ,12:12光暗循环的房间中。
[0029]试剂:实时定量PCR试剂盒，ABI公司产品；RNA提取试剂盒(TrizoUi)Jnvitrogen公司产品;逆转录试剂盒，Invitrogen公司产品;标准果绳培养基:自制；
药物溶剂:4%的蔗糖水(蔗糖采购自Sigma)。
[0030]药物:按本发明实施例1中配比制得，并以0.05mg/ml的浓度溶解在药物溶剂中。
[0031]引物，苏州金维智公司合成，其序列为 G3_Rp49Forward: GACGCTTCAAGGGACAGTATCTG G3_Rp49Reverse: AAACGCGGTTCTGCATGAGG3_Drosomyciη(Drs)Fw: CGTGAGAACCTTTTCCAATATGATGG3_Drosomycin(Drs)Rv: TCCCAGGACCACCAGCATG3_Diptericin(Dipt)Fw: GCTGCGCAATCGCTTCTACTG3_Diptericin(Dipt)Rv: TGGTGGAGTGGGCTTCATGG3_Attacin(AttC)Fw: TGGGCTACAACAATCATGGAG3_Attacin(AttC)Rv: GCGTATGGGTTTTGGTCAGTG3_Cecropin(Cec)Fw: ACGCGTTGGTCAGCACACTG3_Cecropin(Cec)Rv: ACATTGGCGGCTTGTTGAGG3_Metchnikowin(Mtk)Fw: CGTCACCAGGGACCCATTTG3_Metchnikowin(Mtk)Rv: CCGGTCTTGGTTGGTTAGGA。
[0032]仪器:实时定量PCR机，ABI公司产品；Nanodrop，赛默飞公司产品。
[0033]实验方法:挑取羽化后雄性的老年痴呆症模型果蝇或野生型对照果蝇的雄蝇，以100只/瓶的密度将其饲养在装有标准果蝇培养基的玻璃指管中，从羽化后第三天到第十天，每天给予模型果蝇溶剂或药物，同时给予野生型对照果蝇溶剂。在羽化第十天，取果蝇脑部并用trizol法提取RNA。将提取到的RNA用逆转录试剂盒转录为cDNA。取Iug的cDNA，加A1 uM的指定引物对和实时定量PCR试剂，放入实时定量PCR机中运行程序。
[0034]PCR程序为:95度2分钟后开展一个40次的循环，循环内容为95度30秒，60度45秒，72度30秒。循环结束后进行以0.5度为步长的融解曲线。
[0035]数据处理。数据以双重Ct差值法处理，以平均值+_标准差表示，采用One wayAnova比较各组间差异情况。
[0036]实验结果。如图2所示，相对于定义为I的野生型对照果蝇脑部炎症基因的表达水平，老年痴呆症的模型果蝇脑部5个炎症基因的表达在mRNA水平上都明显上调，而根据本发明实施例1制备的药物能够挽救这种上调(P〈0.01)，表明其对炎症反应有明显的降低作用。
[0037]具体实例
以下结合实施例对本发明作进一步的阐述，但不局限于此。
[0038]实施例1:本发明的片剂制备
以每1000片片剂为例，原辅料配比如下:人参提取物:75 g;灵芝提取物:50 g;三七提取物:62.5 g;栀子提取物:62.5 g;微晶纤维素:285 g。将以上各组分过80目筛，混合2分钟，加入80%乙醇溶液制软材，18目筛制粒，湿颗粒干燥后，18目筛整粒。加入硬脂酸镁3 go总混5分钟，按0.6 g每片压片。取12 g薄膜包衣预混剂制包衣液包衣。以上步骤均在10万级洁净区内进行操作。
【主权项】
1.一种具有改善学习记忆能力障碍的保健制剂，其特征是以栀子、三七、人参和灵芝的提取物为原料，使用药剂学常规辅料，并通过药剂学常规工艺制备成内服制剂。2.如权利要求1所述具有改善学习记忆能力障碍作用的保健制剂，其特征在于，所述各原料的用量以重量份表示为，人参提取物:30?100;灵芝提取物:40?80;三七提取物:30?100;栀子提取物:30?100。3.如权利要求1所述具有改善学习记忆能力障碍作用的保健制剂，其特征在于，所述各原料的用量以重量份表示为:人参提取物:50?75;灵芝提取物:40?60;三七提取物:50?75;栀子提取物:50?75。4.如权利要求1所述具有改善学习记忆能力障碍作用的保健制剂，其特征在于，所述各原料的用量以重量份表示为:人参提取物:75;灵芝提取物:50;三七提取物:62.5;栀子提取物:62.505.如权利要求1所述的保健制剂，其特征在于，所述各活性成分是由以下步骤制成:(1)栀子提取物制备:将栀子原料粉碎后，用水加热回流提取三次，每次二小时;合并提取液后，真空减压干燥;将浓缩浸膏喷雾干燥后，过80目筛，备用；(2)三七提取物制备:将三七原料粉碎后过40目筛去除细粉，用70%乙醇提取三次;合并提取液后，经15μπι细度过滤器过滤，80°C减压浓缩;将浓缩浸膏120°C灭菌6秒后，喷雾干燥，所得提取物过80目筛，备用；(3)人参提取物制备:将人参根原料用70%乙醇提取三次，合并提取液后，80 °C减压浓缩，真空干燥，所得提取物过100目筛，备用；(4)灵芝提取物制备:将灵芝原料粉碎后，用100°C水提取三次，每次一个半小时;合并提取液后，80°C减压浓缩，将浓缩液放入反应釜中，在冷却后加入4倍乙醇；醇沉12小时后，将沉淀取出，加水复溶成浸膏；将浸膏喷雾干燥后，过80目筛，备用。6.如权利要求1所述的保健制剂，其特征在于，所述各活性成分，在合并后，加入与合并后提取物总重量比为I?1.2的微晶纤维素，混合20分钟;然后加入80%乙醇溶液制软材，18目筛制粒，湿颗粒干燥后，18目筛整粒;之后加入常规辅料制备成临床可接受的口服固体剂型，如胶囊剂、片剂、颗粒剂或滴丸等。
【文档编号】A61P25/28GK106038761SQ201610537617
【公开日】2016年10月26日
【申请日】2016年7月11日
【发明人】陶埜, 马伟伟, 彭峰, 彭一峰
【申请人】苏州卓凯生物技术有限公司