专利名称：牻牛兒草中老鹤草素的分离提纯方法以及分离出的高纯老鹤草素的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及栊牛兒草中所含有有效活性成分的高纯度的分离提纯方法，以及利用该方法而得到的活性成分在功能性食品，食品原料，食品添加剂，健康食品，医药品，医药护肤品，以及化妆品等方面的应用。
背景技术：
猶牛兒草学名Geraniumnepakense Sweet sunsp. Thunbergii (Sieb. et Zucc.Hara)，是一种多年生的老鹤草属的草本植物，在中国和日本都是具有代表性的药草之一，一般在山野之间野生为主，取其上半部分自然干燥之后用水煎煮可以止泻，防便秘，和清热解毒等作用，由于效果很好，在民间也一直广泛的使用。另外有文献报道其用水和酒精分离出的精制液，可以用在止汗剂，化妆品，医药护肤品等或可以跟其他草药一起共同使用。但是，这些方法基本都是用水和酒精对栊牛兒草进行抽提，用其抽提液或抽出物跟其他草药混合使用，单独使用栊牛兒草中特定有效成分的功能的报道还没有。另外对市场上买的干燥栊牛兒草中的有效成分进行分析，发现其中含有的有效成分老鹤草素(Geraniin)是非常低的，这跟栽培方法，收割季节和干燥工序的有关系。用水或酒精抽提栊牛兒草的时候，主要有效成分老鹤草素会随着加热时间而分解成为柯里拉京(Corilagin)，鞣花酸和没食子酸，而导致老鹤草素的含量大大减少。另外在对老鹤草素和其分解物以及栊牛兒草的活性研究中，发现老鹤草素是其中活性最高的。然而，至今为止还没有公开报道对栊牛兒草中真正有活性的老鹤草素的有效提纯和应用。
发明内容
本发明提供一种栊牛兒草中老鹤草素的分离提纯方法，以克服现有技术存在的上述缺陷。本发明是通过如下的技术方案实现的一种栊牛兒草中老鹤草素的分离提纯方法，包括如下步骤将栊牛兒草在含有有机酸的水溶液或酒精水溶液或甲醇水溶液中进行提取步骤，然后采用超临界抽出法、膜处理法、透析膜处理法、再结晶法、离心分离法、合成树脂吸收法、离子交换树脂法的至少一种进行提纯步骤，得到高纯老鹤草素。所述提纯步骤包括将提取液经过合成树脂法进行处理后，以10-60ml/min的速度通过活性化色谱柱后，水洗；用体积浓度为10-40% v/v乙醇，以10-60ml/min的速度洗脱后回收；得到的溶析液使用逆渗透膜进行膜处理，真空浓缩；用10-50%v/v乙醇，在1_15°C下通过结晶法进行精制，结晶物回收后，再次用40-80%v/v乙醇进行溶解，得到的溶解液通过真空浓缩干固，得到闻纯老鹤早素。所述活性化色谱柱最好是HP-20型号的色谱柱，并且用质量浓度4_10%Na0H水溶液以10-60ml/min的速度通液后水洗。然后，用质量浓度4_10%H2S04水溶液以10_60ml/min的速度通液后水洗； 所述逆渗透膜优选膜面积O. 6-1. 2m2，NaCl阻止率55-80% ；所述膜处理优选在循环压力8-15kg/cm2，循环流量5_10L/min的条件下进行；所述高纯老鹤草素中老鹤草素质量含量为50-99. 9% ；所述有机酸可以是一元酸、二元酸或多元酸，如醋酸，酒石酸，苹果酸，琥珀酸等，优先多元酸，最好是柠檬酸；所述栊牛兒草可以是干燥或者未干燥的，并且最好选择叶子部分，因为研究发现该部位中老鹤草素含量最高。栊牛兒草可采用野生，也可以栽培，最好是采用如下方法栽培环境温度控制在10-20度左右，把栊牛兒草的种子播种到定植用的容器中，定植4周后长成的5-8公分的幼苗移植到铺有塑料薄膜的地里，按每列5-8株，株间15-25公分定植，取定植10-12周后的栊牛兒草。采用上述方法栽培的栊牛兒草在定植10-12周后收割为最佳，其叶子中含有的有效成分最闻。本发明可把栊牛兒草中的有效成分老鹤草素在不被分解的情况下的提取出来，方法简单易行，效率高。本发明还公开了上述方法制备的高纯老鹤草素的应用，研究发现，本发明得到的高纯老鹤草素可阻碍黑色素生成，因此可作为美白化妆品添加剂，起到美白效果；其还具有优异的抗氧化效果，因此可作为功能性食品、保健食品、医药品、准药品中的添加剂；高纯老鹤草素还具有抑制碱性磷酸酶(ALP)活性的效果，从而可应用于消除狐臭、体臭的腋下除臭剂。
具体实施例方式下面结合附图
给出本发明较佳实施例，以详细说明本发明的技术方案。实施例I栊牛兒草的栽培日中气温约在15度左右的3-4月左右，把栊牛兒草的种子3-5粒播种到定植用的杯子中，定植4周后长成的6公分的幼苗移植到铺有塑料薄膜的地里(宽130公分，高30公分,长25米)，按每列6株,株间15公分定植。定植后每隔2周采摘5-6株,测定每株各部位的新鲜部分的重量和老鹤素的含量。结果见表1，根据表I的结果，各部位中，叶子中所含老鹤素的含量最高，另外，新鲜重量最多的是在定植11周后收割为最佳时机，叶子中含有有效成分最闻。表I定植后新鲜的栊牛兒草重量和老鹤草素的含量(％)
权利要求
1.一种栊牛兒草中老鹤草素的分离提纯方法，其特征在于，包括如下步骤将栊牛兒草在含有机酸的水溶液或酒精水溶液或甲醇水溶液中进行提取步骤，然后采用超临界抽出法、膜处理法、透析膜处理法、再结晶法、离心分离法、合成树脂吸收法、离子交换树脂法的至少一种进行提纯步骤，得到高纯老鹤草素。
2.如权利要求I所述的方法，其特征在于，所述提纯步骤包括将提取液经过合成树脂法进行处理后，以10-60ml/min的速度通过活性化色谱柱后，水洗；用体积浓度为10-40%v/v乙醇，以10-60ml/min的速度洗脱后回收；得到的溶析液使用逆渗透膜进行膜处理，真空浓缩；用10-50%v/v乙醇，在1_15°C下通过结晶法进行精制，结晶物回收后，再次用40-80%v/v乙醇进行溶解，得到的溶解液通过真空浓缩干固，得到高纯老鹤草素。
3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述活性化色谱柱最好是HP-20型号的色谱柱，并且用质量浓度4-10%Na0H水溶液以10_60ml/min的速度通液后水洗。然后，用质量浓度4-10%H2S04水溶液以10-60ml/min的速度通液后水洗。
4.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述逆渗透膜优选膜面积O.6-1. 2m2，NaCl阻止率55-80%。
5.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述膜处理优选在循环压力8-15kg/cm2，循环流量5-10L/min的条件下进行。
6.如权利要求1-5任一项所述的方法，其特征在于，所述高纯度老鹤草素中老鹤草素质量含量为50-99. 9%。
7.如权利要求I所述的方法，其特征在于，所述有机酸选自柠檬酸，醋酸，酒石酸，苹果酸或琥珀酸的至少一种。
8.如权利要求I所述的方法，其特征在于，所述栊牛兒草是干燥或者未干燥，选择叶子部分。
9.如权利要求I所述的方法，其特征在于，栊牛兒草采用如下方法栽培环境温度控制在10-20度左右，把栊牛兒草的种子播种到定植用的容器中，定植4周后长成的5-8公分的幼苗移植到铺有塑料薄膜的地里，按每列5-8株，株间15-25公分定植，取定植10-12周后的栊牛兒草。
10.根据权利要求1-9任一项所述方法制备的高纯老鹤草素在美白化妆品、功能性食品、保健食品、医药品、准药品、腋下除臭剂中的应用。
全文摘要
本发明提供一种牻牛兒草中老鹤草素的分离提纯方法，包括如下步骤将牻牛兒草在含有机酸的水溶液或酒精水溶液或甲醇水溶液中进行提取，然后采用超临界抽出法、膜处理法、透析膜处理法、再结晶法、离心分离法、合成树脂吸收法、离子交换树脂法等至少一种进行提纯步骤，得到高纯老鹤草素。本发明可把牻牛兒草中的有效成分老鹤草素在不被分解的情况下的提取出来，方法简单易行，效率高。分离出的高纯老鹤草素因具有超强的抗氧化效果，阻碍黑色素形成效果，特定酶的活性阻碍效果，和具有SOD活性作用效果等功能，可广泛应用于美白化妆品、功能性食品、保健食品、医药品、准药品、腋下除臭剂等。
文档编号A61Q15/00GK102924541SQ20121044545
公开日2013年2月13日 申请日期2012年11月8日 优先权日2012年11月8日
发明者钟旭东, 市龙太 申请人:食味添(上海)科技贸易有限公司