一种木瓜制备生物刺激素的方法、生物刺激素、肥料及其制备方法与流程

本发明涉及生物，尤其涉及一种木瓜制备生物刺激素的方法、生物刺激素、肥料及其制备方法。

背景技术：

1、木瓜是具有代表性的岭南特色水果之一，其皮薄多汁，具有健脾消食、美容养颜等功效。除鲜食外，木瓜及其加工产品用途广泛，在蛋白酶、化妆品、制革、食品加工、啤酒等领域发挥着重要的作用。随着木瓜新用途的不断开发及种植的不断推广，产生了大量皮、籽等加工副产物，如不加以利用直接丢弃，势必造成资源浪费。

2、木瓜籽作为木瓜鲜食或加工后产生的副产物，长期以来被作为废弃物丢弃，按联合国粮农组织(fao)估算，木瓜籽在全球每年累计可产生废弃达70万吨，如此多废弃木瓜籽不仅会造成大量生物资源的浪费，同时也导致环境污染，加重环境负担。

技术实现思路

1、为了克服现有技术的不足，本发明的第一个目的是为了提供一种木瓜制备生物刺激素的方法。对木瓜籽采用酶解的方法，将木瓜籽中的蛋白质、糖类等进行酶解，生物刺激效果显著。将青木瓜小果、木瓜果皮或木瓜叶片处理，浓缩木瓜蛋白酶，本发明无副产物产生，所添加的木瓜废弃物原料最后均可以以产物的形式输出，绿色环保。

2、本发明的第二个目的是为了提供一种生物刺激素，所述生物刺激素由上述的一种木瓜制备生物刺激素的方法制备得到。

3、本发明的第三个目的是为了提供一种肥料，包含上述的一种生物刺激素。

4、本发明的第四个目的是为了提供一种肥料的制备方法。

5、本发明的第一个目的采用如下技术方案实现：

6、一种木瓜制备生物刺激素的方法，包括以下步骤：

7、(1)向木瓜籽中添加木瓜蛋白酶和水，并添加中性蛋白酶、碱性蛋白酶和蛋白酶菌株进行酶解反应，得到酶解产物；

8、(2)将步骤(1)的酶解产物固液分离，收集分离液得到所述生物刺激素。

9、进一步地，所述木瓜蛋白酶的制备方法包括以下步骤：

10、(11)向粉碎的木瓜废弃物中加入乙二胺四乙酸、nacl和硫酸镁缓冲液，搅拌反应，得到反应产物；

11、(12)将步骤(11)的反应产物固液分离，收集分离液，向分离液中加入(nh4)2so4进行分级沉淀，得到混合物；

12、(13)将步骤(12)的混合物固液分离后浓缩分离液，得到木瓜蛋白酶。

13、进一步地，所述步骤(11)的具体过程为：按照(0.5～1.5):(0.1～0.3)的体积比向粉碎的木瓜废弃物中加入0.1～0.3mmol/l乙二胺四乙酸、0.5～1.5mmol/l的nacl和0.5～1.5mmol/l的硫酸镁缓冲液，搅拌10～30min；所述木瓜废弃物为青木瓜小果、木瓜果皮或木瓜叶片中的一种或两种以上的组合物。

14、进一步地，所述步骤(12)的固液分离方式为离心分离，离心的转速为3000～4000r/min，离心时间为10～30min；在1～10℃的温度下加入(nh4)2so4粉末至饱和度30～50％；所述步骤(13)的固液分离方式为离心分离，离心的转速为1500～2500r/min，离心时间为5～15min；所述步骤(13)的浓缩温度为40～50℃。

15、进一步地，步骤(1)所述木瓜籽和水的比例为(0.5～1.5):(9～11)；所述中性蛋白酶、碱性蛋白酶和蛋白酶菌株为木瓜籽、水和木瓜蛋白酶总重量的1％～2％；所述酶解反应的ph为6.5～7.5，所述酶解反应的反应温度为35～45℃，反应时间为3～5h；所述步骤(2)的固液分离方式为离心分离，离心的转速为2500～3500r/min，离心时间为20～40min。

16、进一步地，步骤(1)所述的木瓜籽为经过脱脂的木瓜籽，脱脂的具体过程为方式一或方式二：方式一、在水中淘洗去除木瓜籽残余果肉，高速粉碎机粉碎过80目筛，向粉碎的木瓜籽中加入料液比为1:2的石油醚脱脂，在10～30℃的水浴振荡器中提取2～4h，固液分离，30～50℃条件下烘干；方式二、在水中淘洗去除木瓜籽残余果肉，30～50℃条件下烘干，高速粉碎机粉碎过70～90目筛，采用索氏抽提法脱脂6h～7h，重复1～3次。

17、本发明的第二个目的采用如下技术方案实现：

18、一种生物刺激素，所述生物刺激素由上述的一种木瓜制备生物刺激素的方法制备得到。

19、本发明的第三个目的采用如下技术方案实现：

20、一种肥料，包含上述的一种生物刺激素。

21、本发明的第四个目的采用如下技术方案实现：

22、一种肥料的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：将步骤(2)固液分离的沉淀物和(12)、(13)固液分离的沉淀物的混料进行混合，得到混合物，并添加纤维素酶、酵母和芽孢杆菌，发酵并浓缩，得到肥料。

23、进一步地，所述步骤(2)固液分离的沉淀物与步骤(12)、(13)固液分离的沉淀物的混料按照(1～3):(1～3)的重量比混合；所述纤维素酶为混合物重量的0.5％～1.5％、酵母为混合物重量的0.1％～0.3％、芽孢杆菌为混合物重量的0.1％～0.3％；所述发酵的温度为20～30℃，发酵的时间为4～8h。

24、相比现有技术，本发明的有益效果在于：

25、(1)一种木瓜制备生物刺激素的方法，对木瓜籽采用酶解的方法，对木瓜籽中的蛋白质、糖类等进行酶解、离心，生物刺激效果显著。将青木瓜小果、木瓜果皮或木瓜叶片处理，浓缩木瓜蛋白酶。本发明无副产物产生，所添加的木瓜废弃物最后均可以以产物的形式输出，绿色环保。

26、(2)一种生物刺激素，可以活化土壤，促进根系生长，增加养分和水分的摄入量；中和酸性和碱性土壤；双向调节土壤ph值；充当天然的金属离子螯合剂，促进根系的吸收，提升元素的利用率；增强根系呼吸，促进新根生成；提高种子的发芽率和活力；提高植物对病虫害的自然抵抗力；提高农药的利用效率，增加药效。

27、(3)一种含有生物刺激素的肥料，对作物生长具有良好的刺激作用。肥料中含有氮、磷、钾、镁、氨基酸、多肽、糖类、微生物菌剂等成分。

28、(4)一种肥料的制备方法，本发明是对木瓜籽采用先酶解后发酵的方法，对木瓜籽蛋白质的降解，形成多肽或氨基酸，纤维素酶可以对木瓜皮或木瓜叶中的纤维素进行分解，形成多糖类物质，丰富了肥料的组成成分。本发明肥料的制备无副产物产生，所添加的木瓜废弃物原料最后均可以以产物的形式输出，绿色环保。不仅降低成本、节省人力，而且还减少了对环境的污染。

技术特征：

1.一种木瓜制备生物刺激素的方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种木瓜制备生物刺激素的方法，其特征在于，所述木瓜蛋白酶的制备方法包括以下步骤：

3.根据权利要求2所述的一种木瓜制备生物刺激素的方法，其特征在于，所述步骤(11)的具体过程为：按照(0.5～1.5):(0.1～0.3)的体积比向粉碎的木瓜废弃物中加入0.1～0.3mmol/l乙二胺四乙酸、0.5～1.5mmol/l的nacl和0.5～1.5mmol/l的硫酸镁缓冲液，搅拌10～30min；所述木瓜废弃物为青木瓜小果、木瓜果皮或木瓜叶片中的一种或两种以上的组合物。

4.根据权利要求2所述的一种木瓜制备生物刺激素的方法，所述步骤(12)的固液分离方式为离心分离，离心的转速为3000～4000r/min，离心时间为10～30min；在1～10℃的温度下加入(nh4)2so4粉末至饱和度30～50％；所述步骤(13)的固液分离方式为离心分离，离心的转速为1500～2500r/min，离心时间为5～15min；所述步骤(13)的浓缩温度为40～50℃。

5.根据权利要求1所述的一种木瓜制备生物刺激素的方法，其特征在于，步骤(1)所述木瓜籽和水的重量比为(0.5～1.5):(9～11)；所述中性蛋白酶、碱性蛋白酶和蛋白酶菌株为木瓜籽、水和木瓜蛋白酶总重量的1％～2％；所述酶解反应的ph为6.5～7.5，所述酶解反应的反应温度为35～45℃，反应时间为3～5h；步骤(2)的固液分离方式为离心分离，离心的转速为2500～3500r/min，离心时间为20～40min。

6.根据权利要求1所述的一种木瓜制备生物刺激素的方法，其特征在于，步骤(1)所述的木瓜籽为经过脱脂的木瓜籽，脱脂的具体过程为方式一或方式二：方式一、在水中淘洗去除木瓜籽残余果肉，高速粉碎机粉碎过70～90目筛，向粉碎的木瓜籽中加入料液比为(0.5～1.5):(1～3)的石油醚脱脂，在10～30℃的水浴振荡器中提取2～4h，固液分离，30～50℃下烘干；方式二、在水中淘洗去除木瓜籽残余果肉，30～50℃条件下烘干，高速粉碎机粉碎过70～90目筛，采用索氏抽提法脱脂6h～7h，重复1～3次。

7.一种生物刺激素，其特征在于，所述生物刺激素由权利要求1～6任一项所述的一种木瓜制备生物刺激素的方法制备得到。

8.一种肥料，其特征在于，包含权利要求7所述的一种生物刺激素。

9.一种肥料的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：将权利要求1步骤(2)固液分离得到的沉淀物和权利要求2步骤(12)、(13)固液分离得到的沉淀物进行混合，得到混合物，并添加纤维素酶、酵母和芽孢杆菌，发酵并浓缩，得到肥料。

10.根据权利要求9所述的一种肥料的制备方法，其特征在于，所述权利要求1步骤(2)固液分离的沉淀物与权利要求步骤(12)、(13)固液分离的沉淀物的混料按照(1～3):(1～3)的重量比混合；所述纤维素酶为混合物重量的0.5％～1.5％、酵母为混合物重量的0.1％～0.3％、芽孢杆菌为混合物重量的0.1％～0.3％；所述发酵的温度为20～30℃，发酵的时间为4～8h。

技术总结
本发明公开了一种木瓜制备生物刺激素的方法、生物刺激素、肥料及其制备方法。一种木瓜制备生物刺激素的方法，所述方法包括以下步骤：向木瓜籽中添加木瓜蛋白酶和水，并添加中性蛋白酶、碱性蛋白酶和蛋白酶菌株进行酶解反应，得到酶解产物；将酶解产物离心，上清液即为生物刺激素。对木瓜籽采用酶解的方法，对木瓜籽中的蛋白质、糖类等进行酶解、离心，生物刺激效果显著。本发明无副产物产生，所添加的木瓜废弃物原料最后均可以以产物的形式输出，绿色环保。

技术研发人员：刘会丽,何焯杰,罗冬贵,王晓春
受保护的技术使用者：拉多美科技集团股份有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15