专利名称：蝎镇痛抗菌活性肽的镇痛活性突变体及其获得方法
技术领域：
本发明涉及生物医药技术领域，涉及蝎镇痛抗菌活性肽的镇痛活性突变体及其获 得方法，具体地说，本发明涉及蝎镇痛抗菌活性肽的镇痛活性系列突变体或该系列突变体 的部分片段或该系列突变体衍生物、类似物的结构及其制备方法，以及作为镇痛药物在医 药领域中的应用。
背景技术：
蝎作为传统中药已有2000多年的药用历史，又称全虫，全蝎，在“诗经”、“本草纲 目”等医学著作中对其药用性即进行了系统描述，是我国的传统名贵中药，具有祛风镇惊， 通络止痛等功能。用于偏、正头痛，神经痛，躯身锐痛等，具有较大的开发价值。近年来人们 已经发现了多种具有抗肿瘤、抗炎、镇痛、抗癫痫等药理作用的蝎毒单组分多肽。天然蝎毒 产量极低，因此，采用基因工程方法，用简单的原核或真核生物表达宿主生产具有药用价值 的活性蝎毒多肽的方法显得尤为重要。疼痛是人类共有而又有较大个体差异性的一种不愉快的主观感觉，它在躯体受到 威胁时提供警报信号，是生命不可缺少的一种保护机制。专利名称为蝎镇痛抗菌活性肽及 其获得方法(申请号20071010058)的发明提供了一种具有较好镇痛效果的蝎镇痛抗菌活 性肽及其获得方法，而要得到镇痛活性提高的系列突变体或该系列突变体的部分片段或该 系列突变体衍生物、类似物及其获得方法却有待于进一步研究。
发明内容
本发明的目的是针对蝎镇痛抗菌活性肽的镇痛活性，利用基因工程技术获得一系 列蝎镇痛抗菌活性肽突变体或该系列突变体的部分片段或该系列突变体衍生物、类似物， 通过获得表达产物的实验动物体内镇痛活性，以获得可以进一步开发镇痛类药物的蝎镇痛 抗菌活性肽系列突变体或该系列突变体的部分片段或该系列突变体衍生物、类似物，本发 明所述的镇痛系列突变体或该系列突变体的部分片段或该系列突变体衍生物、类似物的获 得方法常规、简单、产量高，不仅具有重要的指导意义和实用价值，也为工业化生产奠定了 ■石出。本发明是通过如下技术方案实现的，即分别在蝎镇痛抗菌活性肽第八位(K)、第九 位(Y)和第五十八位(N)进行相应的小R侧链氨基酸、F和酸性侧链氨基酸的替代以及上 述三个突变位点进行组合替代。本发明的另一个目的是提供生产上述系列蝎镇痛抗菌活性肽突变体或该系列突 变体的部分片段或该系列突变体衍生物、类似物的方法，该方法包括(1)将系列蝎镇痛抗菌活性肽突变体或该系列突变体的部分片段或该系列突变体 衍生物、类似物编码DNA重组至表达载体；(2)用步骤(1)的重组表达载体转化适当的宿主细胞(原核或真核细胞)；(3)在适合的诱导表达条件下，培养步骤O)的被转化的宿主细胞；
(4)收获并纯化所得到的蛋白质。本发明的再一个目的是提供含有如上限定的蛋白质及一种或多种医药上可接受 的载体或赋形剂的药物组合物。本发明的再一个目的是提供如上限定的蛋白质在生产镇痛药物中的应用。本发明提供上述系列蝎镇痛抗菌活性肽突变体或该系列突变体的部分片段或该 系列突变体衍生物、类似物的表达产物分离纯化方法。可使用盐析沉淀、超滤、离子交换层 析、疏水作用层析和凝胶过滤等方法从细胞的溶胞产物及培养液中分离并纯化所需的表达 产物。在表达产物的分离和纯化过程中，可使用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳法 (SDS-PAGE)、酶联免疫吸附法(ELISA)或蛋白免疫印迹法(WESTERN)检测表达产物的存在 及相应分子大小。本发明还提供了上述系列蝎镇痛抗菌活性肽突变体或该系列突变体的部分片段 或该系列突变体衍生物、类似物在生物制药领域的应用，具体地说包括镇痛生物活性。本发明首次进行上述系列蝎镇痛抗菌活性肽突变体或该系列突变体的部分片段 或该系列突变体衍生物、类似物的小鼠体内镇痛生物学活性实验。本发明进一步涉及含有上述蛋白和至少一种医药上可接受的惰性载体或赋形剂 的药物组合物。可按照制药工业领域已知的基本原则和方法制备适于胃肠道外途径给药 的药物组合物(如参见 Remington’ s Pharmaceutical Science, 15th. ，Mack Publishing Company，1980)。可通过各种给药途径，特别是静脉内、肌肉内、关节内、腹腔内、鼻内、皮内、 皮下等胃肠道外途径投用本发明的药物组合物。可使用本发明的蛋白或含有该蛋白质的药物组合物作为治疗剂，用于治疗特定类 型人体的各种疼痛相关疾病。本发明的药物组合物的治疗有效剂量一般应根据疾病的性 质、严重程度及对药物的敏感适应性，以及给药途径等诸多因素由临床医生按照个体化原 则来确定。在本发明中，术语“宿主细胞”包括原核细胞和真核细胞，常用的原核宿主细胞的 例子包括大肠杆菌、枯草杆菌等。常用的真核宿主细胞包括酵母细胞、昆虫细胞和哺乳动物 细胞等。蝎镇痛抗菌活性肽突变体(AA1XAA2)书写的含义AAl是指蝎镇痛抗菌活性肽在 第X位的原有氨基酸残基，X是指AAl在蝎镇痛抗菌活性肽N-末端第X位，AA2是指在蝎镇 痛抗菌活性肽第X位将要替代的氨基酸残基。如蝎镇痛抗菌活性肽突变体(K8A)，是指在 蝎镇痛抗菌活性肽N-末端第八位K被A替代的突变体；如蝎镇痛抗菌活性肽突变体(K8A、 Y9F及N58D)，是指在蝎镇痛抗菌活性肽N-末端第八位K被A替代、第九位Y被F替代、第 五十八位N被D替代的突变体。应用本发明所得到的蝎毒镇痛活性肽表达量高，易于纯化获得目标蛋白，体内镇 痛活性得到较好的改善。
图1为蝎镇痛抗菌活性肽结构具体实施方式
下面的实施例可以使本专业技术人员更全面地理解本发明，而不是以任何方式限制本发明特批权利要求的范围。实施例1 蝎镇痛抗菌活性肽突变体(K8A)及其衍生物、类似物的获得1.蝎镇痛抗菌活性肽突变体(K8A)基因的构建本实施例列举描述用于表达本发明蝎镇痛抗菌活性肽突变体(K8A)及其衍生物、 类似物基因的构建策略和基本方法。根据蝎镇痛抗菌活性肽(结构参见图1.)氨基酸序列中第八位K前后氨基酸系列 设计相应寡核苷酸引物，针对该引物中第八位K的密码子换成A的密码子，此外以蝎镇痛抗 菌活性肽的C-末端氨基酸残基序列设计相应寡核苷酸引物；同时在上述两个寡核苷酸引 物的5'端，分别加上限制性核酸内切酶NcoI和EcoRI水解位点序列；以蝎镇痛抗菌活性 肽基因为模板进行PCR扩增，琼脂糖凝胶电泳检测产物并进行核酸片段的凝胶回收；经过 限制性核酸内切酶NcoI和EcoRI双酶切后与同样进行双酶切的质粒在T4 DNA Iigase的作 用下进行重组连接，热转化大肠杆菌感受态细胞DH 5 α，经过菌落PCR和限制性核酸内切 酶酶切验证筛选获得阳性转化子后提交生物技术服务公司进行DNA序列测定。结果表明， 通过上述基因工程的方法成功构建蝎镇痛抗菌活性肽突变体(Κ8Α)基因。2.蝎镇痛抗菌活性肽突变体(Κ8Α)及其衍生物、类似物的获得利用基因过程技术，将蝎镇痛抗菌活性肽突变体(Κ8Α)基因重组至大肠杆菌表达 质粒中，提取质粒进行测序。该重组表达质粒编码表达产物的结构特征为MHHHHHHMDNGYLLD (K — A) YTGCKVffC VINNESCNSECKIRGGYYGYCYFWKLACFCQGARNSELWNYNTNKCNGKL。将阳性重组质粒热转化大肠杆菌BL21 ( λ DE3)，然后从该LB固体平板上挑取单 菌落后接种至3ml LB(含卡那抗生素，50yg/ml)，于37°C，200r/min振荡过夜培养。按 照1 %接种量将过夜培养物接种至400ml含相应抗生素的新鲜LB培养基的三角瓶中，于 370C，200r/min振荡培养至0D600为0. 6-0. 8，加入终浓度为0. 166mmol/L的诱导物异丙基 β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)，培养4h。结束发酵，3000g、4°C离心20min，收集菌体。用40ml 裂解缓冲液(0. IM PBS, 0. 15M NaCl，50mM咪唑)重悬菌体，进行超声破碎，超声结束后于 12，000g、4°C离心20min，得上清液，所得沉淀按照上述步骤重复破碎一次，合并两次上清 液，直接上样于0. IM PBS(pH 8.0)预先平衡好的金属离子螯合层析柱，经过两个不同阶段 的PH缓冲液分别充分洗涤5个柱床体积后，使用0. 5M咪唑(pH 9. 0)进行洗脱并收获该洗 脱液。所得产物经过15% SDS-PAGE验证其纯度。由柱层析色谱图和SDS-PAGE图谱说明， 重组蛋白质获得高效表达，达到电泳纯度。上述获得的表达产物，利用化学法在M处断裂肽 链，从而获得蝎镇痛抗菌活性肽突变体(K8A)，结构特征为DNGYLLDAYTGCKVWCVINNESCNSE CKIRGGYYGYCYFWKLACFCQGARNSELWNYNTNKCNGKL。同上原则获得表达产物，其结构特征为MDNGniJ)AYTGCKVWCVINNESCNSECKIRGGYY GYCYFWKLACFCQGARNSELWNYNTNKCNGKLHHHHHH。同上原则获得表达产物，其结构特征为MDNGniJ)AYTGCKVWCVINNESCNSECKIRGGYY GYCYFWKLACFCQGARNSELWNYNTNKCNGKL。同上原则获得表达产物，其结构特征为MHHHHHHDNGniJ)AYTGCKVWCVINNESCNSECK IRGGYYGYCYFffKLACFCQGARNSELffNYNTNKCNGKL
3.蝎镇痛抗菌活性肽突变体(K8A)在酵母中的表达及其纯化将编码蝎镇痛抗菌活性肽突变体(K8A)基因的序列用下列寡核苷酸引物进行扩 增，获得插入片断。PCR反应所使用的5'寡核苷酸引物序列含有EcoRV限制性内切酶的酶切位点和 蝎镇痛抗菌活性肽的N末端区域氨基酸序列的编码序列。3'端引物序列含有EcoR I限制 性内切酶的酶切位点、一个翻译终止密码子和蝎镇痛抗菌活性肽突变体(K8A)的C末端区 域氨基酸序列的编码序列。引物上的限制性内切酶的酶切位点对应于酵母表达载体pPIC9K上的限制性内切 酶酶切位点(其中EcoRV和SnaB I的内切酶切口为平末端)，该质粒载体编码抗生素抗性 (Amplr和KarO，一个来自2 μ质粒的复制子，一个AOXl启动子，在毕赤酵母中可由甲醇诱导 高效表达，一个α -因子的信号肽序列，一个转录终止信号，一个HIS4选择性标记以及整合 序列。用SnaB I和EcoR I消化pPIC9K载体，用EcoRV和EcoR I消化插入片段，随后将 插入片段连入PPIC9K载体，连接产物热转化E. coli DH 5α菌株，在含有Amp的LB培养皿 上筛选转化子，在含有Amp (100 μ g/ml)的LB液体培养基中过夜培养含所需构建物的克隆。 抽提质粒，测序验证插入片段正确插入。取质粒线性化后，电转化入酵母细胞，线性化的重组载体通过与宿主基因组的同 源序列发生同源重组产生稳定的酵母转化体。利用G418筛选出高拷贝的整合转化子。 将筛选得到的菌株接种于装有25ml MGY、BMG或BMGY培养基的250ml摇瓶中，于28 300C /250 300转/分培养至0D600 = 2 6 (16 18ti)；室温下3000转/分离心5min，收 集菌体，用1/5到1/10原培养体积的匪、BMM或BMMY重悬菌体(约10 20ml)；将步骤2所 得的菌液置于IOOml的摇瓶中，用双层纱布或粗棉布封口，放置于28 30°C /250 300转 /分的摇床上继续生长；每24h向培养基中添加100%甲醇至终浓度为0. 5 1. 0%;分离样 品的上清液，用截留分子量为3000Da的超滤膜超滤除去色素，用SDS-PAGE、Western-Blot 及活性实验检测与鉴定重组蛋白的表达。该体系表达产物结构特征为DNGYLLD(K —A)YT GCKVWCVINNESCNSECKIRGGYYGYCYFWKLACFCQGARNSELWNYNTNKCNGKL。实施例2 蝎镇痛抗菌活性肽突变体(K8G)及其衍生物、类似物的获得本实施例的策略、基本方法和基本过程同实施例1。蝎镇痛抗菌活性肽突变体 (K8G)及其衍生物、类似物的结构特征为1. DNGYLLDGYTGCKVWCVINNESCNSECKIRGGYYGYCYFWKLACFCQGARNSELWNYNTNKCNGKL。2. MHHHHHHMDNGYLLDGYTGCKVWCVINNESCNSECKIRGGYYGYCYFWKLACFCQGARNSELWNYNT NKCNGKL。3. MHHHHHHDNGYLLDGYTGCKVWCVINNESCNSECKIRGGYYGYCYFWKLACFCQGARNSELWNYNTN KCNGKL。4.MDNGYLLDGYTGCKVWCVINNESCNSECKIRGGYYGYCYFWKLACFCQGARNSELWNYNTNKCNGKL HHHHHH。5. MDNGYLLDGYTGCKVWCVINNESCNSECKIRGGYYGYCYFWKLACFCQGARNSELWNYNTNKCNGK L0
实施例3 蝎镇痛抗菌活性肽突变体(Y9F)及其衍生物、类似物的获得本实施例的策略、基本方法和基本过程同实施例1。蝎镇痛抗菌活性肽突变体(Y9F)的结构特征为DNGYLLDKFTGCKVWCVINNESCNSECK IRGGYYGYCYFffKLACFCQGARNSELffNYNTNKCNGKL。蝎镇痛抗菌活性肽突变体(Y9F)衍生物、类似物的结构特征与实施例1的策略一样。实施例4 蝎镇痛抗菌活性肽突变体(N58D)及其衍生物、类似物的获得本实施例的策略、基本方法和基本过程同实施例1。蝎镇痛抗菌活性肽突变体(N58D)的结构特征为DNGYLLDKYTGCKVWCVINNESCNSEC KIRGGYYGYCYFWKLACFCQGARNSELWNYDTNKCNGKL。蝎镇痛抗菌活性肽突变体(N58D)衍生物、类似物的结构特征与实施例1的策略一样。实施例5 蝎镇痛抗菌活性肽突变体(N58E)及其衍生物、类似物的获得本实施例的策略、基本方法和基本过程同实施例1。蝎镇痛抗菌活性肽突变体(N58E)的结构特征为DNGYLLDKYTGCKVWCVINNESCNSEC KIRGGYYGYCYFWKLACFCQGARNSELWNYETNKCNGKL。蝎镇痛抗菌活性肽突变体(N58E)衍生物、类似物的结构特征与实施例1的策略一样。实施例6 蝎镇痛抗菌活性肽第八位和第九位、第八位和五十八位、第九位和五十八位双位 点突变体及其衍生物、类似物的获得本实施例的策略、基本方法和基本过程同实施例1。蝎镇痛抗菌活性肽第八位和第九位双位点突变体的结构特征为蝎镇痛抗菌活性 肽突变体(K8A和Y9F)；蝎镇痛抗菌活性肽突变体(K8G和Y9F)；蝎镇痛抗菌活性肽第八位和五十八双位点突变体的结构特征为蝎镇痛抗菌活性 肽突变体(K8A和N58D)；蝎镇痛抗菌活性肽突变体(K8A和N58E)；蝎镇痛抗菌活性肽突变 体(K8G和N58D)和蝎镇痛抗菌活性肽突变体(K8G和N58E)。蝎镇痛抗菌活性肽第九位和五十八双位点突变体的结构特征为蝎镇痛抗菌活性 肽突变体(Y9F和N58D)；蝎镇痛抗菌活性肽突变体(Y9F和N58E)；蝎镇痛抗菌活性肽第八位和第九位、第八位和五十八位、第九位和五十八位双位 点突变体衍生物、类似物的结构特征与实施例1的策略一样。实施例7 蝎镇痛抗菌活性肽第八位、第九位和五十八位三位点突变体及其衍生物、类似物 的获得本实施例的策略、基本方法和基本过程同实施例1。蝎镇痛抗菌活性肽第八、第九 位和五十八位三位点突变体的结构特征为第8位是小R侧链氨基酸残基(如A、G等)替换，第9位是F替换，第58位是酸性氨基酸残基替换。1.蝎镇痛抗菌活性肽突变体(K8A、Y9F和N58D)。2.蝎镇痛抗菌活性肽突变体(K8A、Y9F和N58E)。3.蝎镇痛抗菌活性肽突变体(K8G、Y9F和N58D)。4.蝎镇痛抗菌活性肽突变体(K8G、Y9F和N58E)。蝎镇痛抗菌活性肽第八位、第九位和五十八位三位点突变体衍生物、类似物的结 构特征与实施例1的策略一样。实施例8 突变体蛋白体内镇痛活性本实施例通过小鼠体内镇痛模型旨在验证特定位点氨基酸改造后系列蝎镇痛抗 菌活性肽突变体及其衍生物、类似物的镇痛活性。蛋白浓度采用Lowry方法进行测定。小鼠醋酸扭体法镇痛模型将冰醋酸作为化学刺激物注入昆明种小鼠腹腔内，继 而引起深部的、大面积而较持久的疼痛刺激，致使小鼠产生“扭体”反应(腹部内凹、躯干与 后腿伸张、臀部高起)。18-22g昆明种小鼠，雌雄各半，随机分组，每组8只，腹腔注射各种样品 (0. 14口11101/1^体重)，201^11后按0.&11/2(^腹腔注射0.6% (ν/ν)醋酸引起内脏痛，5min 后记录小鼠IOmin内的扭体次数。以吗啡为阳性对照(3.514!1101/1^体重)，生理盐水为空白对照，按照下述公式计算各个给药组的扭体反应抑制率。Jfflifell^空白组扭体次数-给药组扭体次数imw 抑制牟=-,-X100%空白组扭体次数镇痛生物活性实验结果表明1.生理盐水空白组实验动物扭体次数(Mean士 SEM)为43. 70 士 2. 99。2.阳性对照组实验动物扭体次数(Mean士SEM)为29. 37士 1. 85，扭体抑制率为 32. 79%。3.蝎镇痛抗菌活性肽组的实验动物扭体抑制率为55.6%。4.通过基因工程技术获得并在宿主细胞中克隆表达纯化的蝎镇痛抗菌活性肽突 变体K8A及其衍生物、类似物和蝎镇痛抗菌活性肽突变体K8G及其衍生物、类似物的实验动 物扭体抑制率均在63. 6%以上。5.通过基因工程技术获得并在宿主细胞中克隆表达纯化的蝎镇痛抗菌活性肽突 变体Y9F及其衍生物、类似物的实验动物扭体抑制率均在62. 8%以上。6.通过基因工程技术获得并在宿主细胞中克隆表达纯化的蝎镇痛抗菌活性肽突 变体N58D及其衍生物、类似物和蝎镇痛抗菌活性肽突变体N58E及其衍生物、类似物的实验 动物扭体抑制率均在69%以上。7.通过基因工程技术获得并在宿主细胞中克隆表达纯化的蝎镇痛抗菌活性肽突 变体(K8A和Y9F)及其衍生物、类似物和蝎镇痛抗菌活性肽突变体(K8G和Y9F)及其衍生 物、类似物的实验动物扭体抑制率均在84. 3%以上。8.通过基因工程技术获得并在宿主细胞中克隆表达纯化的蝎镇痛抗菌活性肽突 变体(K8A和N58D)及其衍生物和类似物、蝎镇痛抗菌活性肽突变体(K8A和N58E)及其衍生物和类似物、蝎镇痛抗菌活性肽突变体(K8G和N58D)及其衍生物和类似物、蝎镇痛抗菌 活性肽突变体(K8G和N58E)及其衍生物和类似物的实验动物扭体抑制率均在89. 3%以上。9.通过基因工程技术获得并在宿主细胞中克隆表达纯化的蝎镇痛抗菌活性肽突 变体(Y9F和N58D)及其衍生物、类似物和蝎镇痛抗菌活性肽突变体(Y9F和N58E)及其衍 生物、类似物的实验动物扭体抑制率均在87. 9%以上。10.通过基因工程技术获得并在宿主细胞中克隆表达纯化的蝎镇痛抗菌活性肽突 变体(K8A、Y9F和N58D)及其衍生物和类似物、蝎镇痛抗菌活性肽突变体(K8A、Y9F和N58E) 及其衍生物和类似物、蝎镇痛抗菌活性肽突变体(K8G、Y9F和N58D)及其衍生物和类似物、 蝎镇痛抗菌活性肽突变体(K8G、Y9F和N58E)及其衍生物、类似物的实验动物扭体抑制率均 在100%，在此时剂量条件下，实验动物没有扭体。
权利要求
1.蝎镇痛抗菌活性肽的镇痛活性突变体，其特征在于，蝎镇痛抗菌活性肽的第8位氨 基酸残基K、第9位Y和第58位N至少一个被替换。
2.根据权利要求1所述的蝎镇痛抗菌活性肽的镇痛活性突变体，其特征在于，所述的 替换包括通过小R侧链氨基酸、F和酸性侧链氨基酸替换。
3.根据权利要求1所述的蝎镇痛抗菌活性肽的镇痛活性突变体，其特征在于，蝎镇痛 抗菌活性肽的第8位K被A或G替换获得蝎镇痛抗菌活性肽突变体K8A或K8G。
4.根据权利要求1所述的蝎镇痛抗菌活性肽的镇痛活性突变体，其特征在于，蝎镇痛 抗菌活性肽的第9位Y被F替换获得蝎镇痛抗菌活性肽突变体Y9F。
5.根据权利要求1所述的蝎镇痛抗菌活性肽的镇痛活性突变体，其特征在于，蝎镇痛 抗菌活性肽的第58位N被D或E替换获得蝎镇痛抗菌活性肽突变体N58D或N58E。
6.根据权利要求1所述的蝎镇痛抗菌活性肽的镇痛活性突变体，其特征在于，蝎镇痛 抗菌活性肽的第8位K被A替换同时第9位Y被F替换获得蝎镇痛抗菌活性肽突变体K8A 和 Y9F。
7.根据权利要求1所述的蝎镇痛抗菌活性肽的镇痛活性突变体，其特征在于，蝎镇痛 抗菌活性肽的第8位K被G替换同时第9位Y被F替换获得蝎镇痛抗菌活性肽突变体K8G 和 Y9F。
8.根据权利要求1所述的蝎镇痛抗菌活性肽的镇痛活性突变体，其特征在于，蝎镇痛 抗菌活性肽的第8位K被小R侧链氨基酸和第58位N被酸性侧链氨基酸同时进行替换分 别获得蝎镇痛抗菌活性肽突变体K8A和N58D、蝎镇痛抗菌活性肽突变体K8A和N58E、蝎镇 痛抗菌活性肽突变体K8G和N58D、蝎镇痛抗菌活性肽突变体K8G和N58E。
9.根据权利要求1所述的蝎镇痛抗菌活性肽的镇痛活性突变体，其特征在于，蝎镇痛 抗菌活性肽的第9位Y和第58位N同时进行替换获得蝎镇痛抗菌活性肽突变体Y9F和 N58D、蝎镇痛抗菌活性肽突变体Y9F和N58E。
10.根据权利要求1所述的蝎镇痛抗菌活性肽的镇痛活性突变体，其特征在于，蝎镇痛 抗菌活性肽的第8位K、第9位Y和第58位N同时进行替换，第8位是小R侧链氨基酸残 基，第9位是F，第58位是酸性氨基酸残基。
11.蝎镇痛抗菌活性肽突变体的衍生物或类似物或活性片段，其特征在于，它包含权利 要求1-10任何一项所述的氨基酸序列全序或片段。
12.根据权利要求11所述的蝎镇痛抗菌活性肽突变体及其衍生物或类似物或活性片 段，可以利用基因工程技术进行表达获得，其特征在于，表达宿主细胞为原核细胞或真核细 胞。
13.蝎镇痛抗菌活性肽突变体或其衍生物或类似物或活性片段在制备镇痛药物中的应用。
14.根据权利要求13所述的应用，其特征在于所述的蝎镇痛抗菌活性肽突变体或其 衍生物或类似物或活性片段可以与药学上可接受的载体混合制备临床上可接受的注射剂、 口服制剂、透皮吸收制剂、粘膜吸收制剂。
全文摘要
本发明属于生物医药技术领域，涉及通过基因工程的方法对蝎镇痛抗菌活性肽进行定向改造。本发明利用DNA重组技术构建了一系列蝎镇痛抗菌活性肽的突变体，通过基因工程技术实现了表达并经纯化收获突变体，经过实验动物体内镇痛活性实验，表明系列蝎镇痛抗菌活性肽突变体的镇痛活性得到提高。本发明方法操作简便，产量高，生物活性好。
文档编号C07K14/435GK102050873SQ20101010746
公开日2011年5月11日 申请日期2010年2月9日 优先权日2010年2月9日
发明者刘岩峰, 吴春福, 崔勇, 张景海, 郭桂丽 申请人:沈阳药科大学