专利名称：一种耧斗菜族植物中提取纯化木兰花碱的工艺的制作方法
技术领域：
本发明属于生物医药技术领域，涉及一种耧斗菜族植物中提取纯化木兰花碱的工 艺，具体来说是一种膜浓缩和大孔树脂氧化镁混合柱层析结合提取纯化木兰花碱的方法。
背景技术：
木兰花碱(Magnoflorine)，又称唐松草碱，玉兰碱，洋玉兰碱等分子式C2tlH24NO4+；分子量342. 41。耧斗菜族植物属植物隶属毛莨科(Rarumculaceae)唐松草亚科 (Thalictroideae)全草入药，具有痛经活血的功效，民间用于治疗月经不调、妇女血分病等 症。耧斗菜族植物属植物在我国有8属30多种，资源丰富，大都含有多种生理活性物质。 尖萼耧斗菜Aquilegia oxysepalaTrautv. et Mey.的流浸膏(名“血见愁”膏)治疗月经 不调、功能性子宫出血等妇科疾病；天葵Semiaquilegia adoxoides (DC. )Mak.有较长的使 用历史，广西桂林用天葵全草水煎液治疗室上性心动过速并发心源性休克阵发性室性早搏 及心肌梗死等严重心脏疾病，疗效显著。其主要化学成分有酚酸类、有机酸类、黄酮类、皂苷 类和生物碱类。药理研究表明其具有保肝、抗菌、免疫抑制、细胞毒作用，具有潜在的药用价 值。目前我国学者对这类群植物的研究及开发利用较少，主要还在化学成分分离鉴定方面， 对其活性成分的提取纯化方面研究较少。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种耧斗菜族植物中提取纯化木兰花碱的工艺， 该工艺生产木兰花碱周期短、能耗低，制备量大，适合规模化生产。本发明技术方案如下一种耧斗菜族植物中提取纯化木兰花碱的工艺，其特征在于包含以下步骤a.提取取干燥耧斗菜族植物全草，粉碎，加入4-12倍量酸性水溶液，加热至 50-80°C，提取2-5次，每次1-3小时，合并提取液；b.过滤将上述提取液用微滤膜滤过，再加入超滤膜系统超滤，最后通过纳滤膜 系统纳滤，收集浓缩液；C.萃取将上述浓缩液加入碱水溶液调节pH至7. 5-11，加入乙酸乙酯萃取3-6 次，合并乙酸乙酯萃取液；d.柱层析将上述乙酸乙酯萃取液回收试剂至浸膏状，加入大孔树脂-氧化镁混 合层析柱，石油醚-乙酸乙酯-甲醇混合溶液洗脱，TLC监测，收集木兰花碱流分，回收试剂， 得粗晶物；e.重结晶将上述粗晶物滤出，加入正己烷-丙酮回流溶解，冷却，结晶，滤出干燥 艮口得广品。所述步骤a.中的酸性水溶液可选0.5-15%的盐酸、醋酸、磷酸水溶液中的一种。所述步骤b.中膜过滤中的膜，材料为聚醚砜膜、聚砜膜、聚偏氟乙烯膜、聚丙烯腈或聚酰胺膜；微滤膜孔径为0. 2-0. 45 μ m,超滤膜截留分子量为2000-10000KD，纳滤膜截留 分子量为200-400KD，过滤压力为0. 2-0. 5Mpa。 所述步骤c.中乙酸乙酯每次加入量为浓缩液体积的1/3-4/5。所述步骤d.中大孔树脂和氧化镁的质量比为1 5-7 1，大孔树脂可选HP-20、 LD605、D180、XSD-3等中的一种，氧化镁为100-200目的氧化镁。所述步骤d.中洗脱液石油醚-乙酸乙酯_甲醇体积比为3-6 4-8 3-6。所述步骤e.中重结晶溶剂正己烷_丙酮体积比为1 1。本发明积极效果本发明采用超滤膜和纳滤膜除杂浓缩，减少了有机溶剂萃取用量，同时使柱层析 前的样品液得以净化，减轻对填料的损害，延长使用寿命；大孔树脂和氧化镁混合层析柱上 样量大、分离效果好，本发明属于能耗低、专属性强的生产木兰花碱的工艺。下面将结合具体实施方式
进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限 于下列实施方式。
具体实施例方式实施例1 实施例1 将耧斗菜族植物粉碎，取IOkg投入小型提取罐中，加入80L5%的盐酸水溶液，力口 热至60°C恒温动态提取2小时，提取3次，合并提取液。先将提取液用微滤膜(膜材为聚酰 胺膜)处理，再加入截留分子量2000KD的超滤膜，膜材为聚丙烯腈膜，控制压力在0. 4Mpa 左右，收集透过液加入截留分子量100KD的纳滤膜，膜材为聚醚砜膜，得浓缩液3L，将浓缩 液加入氨水调节PH至9. 0，加入IL乙酸乙酯萃取，萃取4次，合并乙酸乙酯萃取层，回收乙 酸乙酯至总体积的1/15。取LD605大孔树脂和200目氧化镁(质量比为3 1)装柱，将 浓缩液加入柱顶，先水洗至中性，再用石油醚-乙酸乙酯-甲醇(6 4 3)洗脱有效成 分，TLC监测洗脱，收集高浓度流分，回收试剂，静置结晶，将粗晶物滤出，用正己烷-丙酮 (1 1)回流溶解，冷却，结晶，滤出并干燥即得木兰花碱，含量98.7%。实施例2 将耧斗菜族植物粉碎，取IOkg投入小型提取罐中，加入60L0. 5%的磷酸水溶液， 加热至50°C恒温动态提取1小时，提取5次，合并提取液。先将提取液用微滤膜(膜材为聚 酰胺膜)处理，再加入截留分子量6000KD的超滤膜，膜材为聚醚砜膜，控制压力在0. 5Mpa 左右，收集透过液加入截留分子量200KD的纳滤膜，膜材为聚砜膜，得浓缩液3L，将浓缩液 加入氨水调节PH至7. 5，加入1. 2L乙酸乙酯萃取，萃取6次，合并乙酸乙酯萃取层，回收乙 酸乙酯至总体积的1/10。取HP20大孔树脂和100目氧化镁(质量比为1 2)装柱，将浓缩 液加入柱顶，先水洗至中性，再用石油醚-乙酸乙酯-甲醇(3 7 5)洗脱有效成分，TLC 监测洗脱，收集高浓度流分，回收试剂，静置结晶，将粗晶物滤出，用正己烷-丙酮(1 1) 回流溶解，冷却，结晶，滤出并干燥即得木兰花碱，含量98.9%。实施例3 将耧斗菜族植物粉碎，取20kg投入小型提取罐中，加入100L1 %的醋酸水溶液， 加热至80°C恒温动态提取1小时，提取4次，合并提取液。先将提取液用微滤膜(膜材为聚酰胺膜)处理，再加入截留分子量4000KD的超滤膜，膜材为聚偏氟乙烯膜，控制压力在 0. 2Mpa左右，收集透过液加入截留分子量100KD的纳滤膜，膜材为聚醚砜膜，得浓缩液5L， 将浓缩液加入氨水调节PH至8. 0，加入2L乙酸乙酯萃取，萃取3次，合并乙酸乙酯萃取层， 回收乙酸乙酯至总体积的1/15。取LD605大孔树脂和200目氧化镁(质量比为1 5)装 柱，将浓缩液加入柱顶，先水洗至中性，再用石油醚-乙酸乙酯-甲醇(3 8 5)洗脱有 效成分，TLC监测洗脱，收集高浓度流分，回收试剂，静置结晶，将粗晶物滤出，用正己烷-丙 酮(1 1)回流溶解，冷却，结晶，滤出并干燥即得木兰花碱，含量98.6%。实施例4 将耧斗菜族植物粉碎，取20kg投入小型提取罐中，加入80L8%的磷酸水溶液，加 热至50°C恒温动态提取3小时，提取3次，合并提取液。先将提取液用微滤膜(膜材为聚 酰胺膜)处理，再加入截留分子量3000KD的超滤膜，膜材为膜材为聚醚砜膜，，控制压力在 0. 3Mpa左右，收集透过液加入截留分子量100KD的纳滤膜，膜材为聚砜膜，得浓缩液6L，将 浓缩液加入氨水调节PH至8. 5，加入4L乙酸乙酯萃取，萃取4次，合并乙酸乙酯萃取层，回 收乙酸乙酯至总体积的1/12。取XSD-3大孔树脂和200目氧化镁(质量比为5 1)装柱， 将浓缩液加入柱顶，先水洗至中性，再用石油醚-乙酸乙酯-甲醇(4 8 6)洗脱有效 成分，TLC监测洗脱，收集高浓度流分，回收试剂，静置结晶，将粗晶物滤出，用正己烷-丙酮 (1 1)回流溶解，冷却，结晶，滤出并干燥即得木兰花碱，含量98. 1%。实施例5:将耧斗菜族植物粉碎，取30kg投入小型提取罐中，加入360L15%的醋酸水溶液， 加热至70°C恒温动态提取2小时，提取5次，合并提取液。先将提取液用微滤膜(膜材为 聚酰胺膜)处理，再加入截留分子量5000KD的超滤膜，膜材为聚偏氟乙烯膜，控制压力在 0. 4Mpa左右，收集透过液加入截留分子量300KD的纳滤膜，膜材为聚醚砜膜，得浓缩液8L， 将浓缩液加入氨水调节PH至11.0，加入4L乙酸乙酯萃取，萃取5次，合并乙酸乙酯萃取层， 回收乙酸乙酯至总体积的1/10。取D180大孔树脂和100目氧化镁(质量比为1 1)装 柱，将浓缩液加入柱顶，先水洗至中性，再用石油醚-乙酸乙酯-甲醇(4 7 4)洗脱有 效成分，TLC监测洗脱，收集高浓度流分，回收试剂，静置结晶，将粗晶物滤出，用正己烷-丙 酮(1 1)回流溶解，冷却，结晶，滤出并干燥即得木兰花碱，含量98.5%。实施例6 将耧斗菜族植物粉碎，取50kg投入小型提取罐中，加入250L10%的盐酸水溶液， 加热至55°C恒温动态提取2小时，提取4次，合并提取液。先将提取液用微滤膜(膜材为聚 酰胺膜)处理，再加入截留分子量10000KD的超滤膜，膜材为聚醚砜膜，控制压力在0. 5Mpa 左右，收集透过液加入截留分子量400KD的纳滤膜，膜材为聚砜膜，得浓缩液13L，将浓缩液 加入氨水调节PH至10.0，加入7L乙酸乙酯萃取，萃取6次，合并乙酸乙酯萃取层，回收乙酸 乙酯至总体积的1/15。取XSD-3大孔树脂和200目氧化镁(质量比为7 1)装柱，将浓缩 液加入柱顶，先水洗至中性，再用石油醚-乙酸乙酯-甲醇(5 6 4)洗脱有效成分，TLC 监测洗脱，收集高浓度流分，回收试剂，静置结晶，将粗晶物滤出，用正己烷-丙酮(1 1) 回流溶解，冷却，结晶，滤出并干燥即得木兰花碱，含量98.2%。
权利要求
1.一种耧斗菜族植物中提取纯化木兰花碱的工艺，其特征在于包含以下步骤a.提取取干燥耧斗菜族植物全草，粉碎，加入4-12倍量酸性水溶液，加热至50-80°C， 提取2-5次，每次1-3小时，合并提取液；b.过滤将上述提取液用微滤膜滤过，再加入超滤膜系统超滤，最后通过纳滤膜系统 纳滤，收集浓缩液；c.萃取将上述浓缩液加入碱水溶液调节pH至7.5-11，加入乙酸乙酯萃取3-6次，合 并乙酸乙酯萃取液；d.柱层析将上述乙酸乙酯萃取液回收试剂至浸膏状，加入大孔树脂-氧化镁混合层 析柱，石油醚-乙酸乙酯-甲醇混合溶液洗脱，TLC监测，收集木兰花碱流分，回收试剂，得 粗晶物；e.重结晶将上述粗晶物滤出，加入正己烷-丙酮回流溶解，冷却，结晶，滤出干燥即得
2.根据权利要求1所述的耧斗菜族植物中提取纯化木兰花碱的工艺，其特征在于所述 步骤a.中的酸性水溶液可选0. 5-15%的盐酸、醋酸、磷酸水溶液中的一种。
3.根据权利要求1所述的耧斗菜族植物中提取纯化木兰花碱的工艺，其特征在于所 述步骤b.中膜过滤中的膜，材料为聚醚砜膜、聚砜膜、聚偏氟乙烯膜、聚丙烯腈或聚酰胺 膜；微滤膜孔径为0. 2-0. 45 ym，超滤膜截留分子量为2000-10000KD，纳滤膜截留分子量为 200-400KD，过滤压力为 0. 2-0. 5Mpa。
4.根据权利要求1所述的耧斗菜族植物中提取纯化木兰花碱的工艺，其特征在于所述 步骤c.中乙酸乙酯每次加入量为浓缩液体积的1/3-4/5。
5.根据权利要求1所述的耧斗菜族植物中提取纯化木兰花碱的工艺，其特征在于所述 步骤d.中大孔树脂和氧化镁的质量比为1 5-7 1，大孔树脂可选HP-20、LD605、D180、 XSD-3等中的一种，氧化镁为100-200目的氧化镁。
6.根据权利要求1所述的耧斗菜族植物中提取纯化木兰花碱的工艺，其特征在于所述 步骤d.中洗脱液石油醚-乙酸乙酯-甲醇体积比为3-6 4-8 3-6。
7.根据权利要求1所述的耧斗菜族植物中提取纯化木兰花碱的工艺，其特征在于所述 步骤e.中重结晶溶剂正己烷_丙酮体积比为1 1。
全文摘要
本发明涉及一种耧斗菜族植物中提取纯化木兰花碱的工艺，工艺步骤是原料粉碎→酸水煎煮→膜浓缩→碱调pH→乙酸乙酯萃取→大孔树脂-氧化镁混合柱层析→正己烷-丙酮重结晶→干燥得成品。本方法生产木兰花碱周期短、能耗低，制备量大，适合规模化生产。
文档编号C07D221/18GK102001998SQ20101052026
公开日2011年4月6日 申请日期2010年10月26日 优先权日2010年10月26日
发明者苏刘花 申请人:南京泽朗农业发展有限公司