专利名称：短果茴芹中孕烯醇酮的提取分离方法
技术领域：
本发明涉及一种食用植物的提取分离方法，具体涉及一种短果茴芹中有效成分孕烯醇酮的提取分离方法。
背景技术：
短果茴芹可入药，具有活血降压、清热解毒、利湿、止痛等功效。目前，短果茴芹的研究仅见菜籽精油化学组成分析和全草的营养成分分析，而其具体的功能成分研究未见报道。有研究表明孕烯醇酮饱和后的类固醇类的孕烷醇酮可以用作制备治疗和预防高血压的药物。提取分离过程中尽可能保存有效成分，简化步骤，减少成本，是开发短果茴芹成为降血压功能性食品的关键。
发明内容
本发明的目的是提供一种短果茴芹中孕烯醇酮的提取方法。该方法工艺简单，耗时短。所述方法包括乙醇提取，溶剂萃取，硅胶柱分离，大孔树脂柱分离和十八烷基键合相硅胶C-18柱分离。新鲜短果茴芹，阴干，粉碎成粗粉。乙醇提取加入粗粉重量10倍质量浓度为90%的乙醇，回流提取3次，每次煮沸 2h。过滤，合并提取液，备用。溶剂萃取将提取液减压回收乙醇，吹干至无醇味，得浸膏。加入浸膏重量5倍的蒸馏水形成混悬液。石油醚萃取至无色后，用乙酸乙酯萃取。回收乙酸乙酯溶液得短果茴芹乙酸乙酯层提取物，减压回收晾干，得乙酸乙酯层浸膏。硅胶柱分离乙酸乙酯层浸膏与100-200目硅胶按质量比1 1拌样，装入10倍浸膏质量的硅胶柱中进行分离。用环己烷-乙酸乙酯-甲醇(20 1 0 — 0 0 1)为洗脱剂进行梯度洗脱，用TLC法检测洗脱液。每份洗脱液250ml，减压回收，共收集405瓶。大孔树脂柱分离合并第335-345份的洗脱液，吹干后90%的乙醇溶解，蒸馏水稀释过滤后用大孔树脂柱分离。分别用质量浓度为75%、85%和100%的乙醇对分离液进行梯度洗脱。十八烷基键合相硅胶C-18柱分离收集75%的洗脱液，减压回收再进行C-18层析柱分离，甲醇水(3 10— 1 0)，每次收集洗脱液15ml于小瓶中，甲醇重结晶，得无色细晶，经核磁解析得出为孕烯醇酮。
图1孕烯醇酮结构2孕烯醇酮1H NMR图谱图3孕烯醇酮13CNMR图谱
具体实施例方式实施例1提取首先取新鲜短果茴芹，阴干，粉碎成粗粉4. 395kg。然后加入粗粉重量10倍质量浓度为90%的乙醇回流提取3次，每次煮沸2h。过滤，合并提取液，备用。将提取液减压回收乙醇，吹干至无醇味，得浸膏。萃取加入上述浸膏重量5倍的蒸馏水形成混悬液。石油醚萃取至无色后，用乙酸乙酯萃取。回收乙酸乙酯溶液得短果茴芹乙酸乙酯层提取物，减压回收晾干，得乙酸乙酯层浸膏125g。分离乙酸乙酯层浸膏与100-200目硅胶按质量比1 1拌样，装入10倍质量的硅胶柱中进行分离。用环己烷-乙酸乙酯-甲醇(20 1 0 —0 0 1)为洗脱剂进行梯度洗脱，用TLC法检测洗脱液。每份洗脱液250ml，减压回收，共收集405瓶。合并第 335-345份的洗脱液，吹干后90%的乙醇溶解，蒸馏水稀释过滤后用大孔树脂柱分离。分别用质量浓度为75 %、85 %和100 %的乙醇对分离液进行梯度洗脱。收集75 %的洗脱液，减压回收再进行C-18层析柱分离，甲醇水(3 10— 1 0)，每次收集洗脱液15ml于小瓶中，甲醇重结晶，得无色细晶15mg。实施例2提取首先取新鲜短果茴芹，阴干，粉碎成粗粉7. Okgo然后加入粗粉重量10倍质量浓度为90%的乙醇回流提取3次，每次煮沸2h。过滤，合并提取液，备用。将提取液减压回收乙醇，吹干至无醇味，得浸膏。萃取加入上述浸膏重量5倍的蒸馏水形成混悬液。石油醚萃取至无色后，用乙酸乙酯萃取。回收乙酸乙酯溶液得短果茴芹乙酸乙酯层提取物，减压回收晾干，得乙酸乙酯层浸膏140g。分离乙酸乙酯层浸膏与100-200目硅胶按质量比1 1拌样，装入10倍质量的硅胶柱中进行分离。用环己烷-乙酸乙酯-甲醇(20 1 0 —0 0 1)为洗脱剂进行梯度洗脱，用TLC法检测洗脱液。每份洗脱液250ml，减压回收，共收集405瓶。合并第 335-345份的洗脱液，吹干后90%的乙醇溶解，蒸馏水稀释过滤后用大孔树脂柱分离。分别用质量浓度为75%、85%和100%的乙醇对分离液进行梯度洗脱。收集75%的洗脱液，减压回收再进行C-18层析柱分离，甲醇水(3 10 —1 0)，每次收集洗脱液15ml于小瓶中，甲醇重结晶，得无色细晶孕烯醇酮的鉴定无色细晶，不溶于水，溶于乙醇等有机溶剂。1H 匪R(100MHz，DMS0) δ 0. 62 (3H，s，H-19)，1. 08 (3H，s，H-18)，2. 11 (3H，s，H-21)， 3. 51 (1H, m, Η-3)，5· 34 (1Η, t, J = 2. 3Ηζ, Η_6)；13C NMR (400ΜΗζ，DMS0) δ 12. 9 (C—18)，19. 1 (C—19)，20. 6 (C_l 1)，22. 2 (C—16)， 24. 0 (C-15) ,31. 2(C-2) ,31. 4 (C_7) ,31. 4(C_8, C-21) ,31. 4(C_21) , 36. 9 (C-IO)， 37. 9 (C-I)，38. 9 (C-12)，42. 2 (C_4)，43. 2 (C-13)，49. 5 (C_9)，56. 0 (C-14)，62. 6 (C-17)， 70. 0 (C-3)，120. 2 (C-6)，141. 2 (C_5)，208. 5 (C-20)。
权利要求
1.本发明涉及一种从短果茴芹中分离纯化孕烯醇酮的方法，其特征在于所述方法包括下述步骤a)溶剂萃取将提取液减压回收乙醇，吹干至无醇味，得浸膏，加入浸膏重量5倍的蒸馏水形成混悬液，石油醚萃取至无色后，用乙酸乙酯萃取；b)硅胶柱分离乙酸乙酯层拌样，装入硅胶柱中进行分离，用环己烷-乙酸乙酯-甲醇(20 1 0 —0 0 1)为洗脱剂进行梯度洗脱，用TLC法检测洗脱液，每份洗脱液 250ml，减压回收，共收集405瓶；c)大孔树脂柱分离合并第335-345份的洗脱液，吹干后90%的乙醇溶解，蒸馏水稀释样品，过滤后用大孔树脂柱分离，分别用不同浓度的乙醇对样品进行梯度洗脱；d)十八烷基键合相硅胶C-18柱分离收集洗脱液，减压回收再进行十八烷基键合相硅胶C-18层析柱分离，甲醇水(3 10 — 1 0)，每次收集洗脱液15ml于小瓶中，甲醇重结晶，得无色细晶。
2.根据权利要求Ia所述的溶剂萃取，其特征在于和蒸馏水形成混悬液后，石油醚萃取需至无色。
3.根据权利要求Ib所述的硅胶柱分离，乙酸乙酯层浸膏与100-200目硅胶按质量比是 1 1拌样，装入10倍浸膏质量的硅胶柱中进行分离。
4.根据权利要求Ic所述的大孔树脂分离，洗脱液乙醇的质量浓度是75%、85%和 100%。
5.根据权利要求Id所述的十八烷基键合相硅胶C-18柱分离，收集的洗脱液是75%的乙醇洗脱液。
全文摘要
本发明公开了一种短果茴芹中有效成分孕烯醇酮的提取方法。该方法工艺简单，D101大孔树脂和十八烷基键合相硅胶C-18填料可以反复再生使用，成本低，耗时短。所述方法包括乙醇提取，溶剂萃取，硅胶柱分离，大孔树脂柱分离和十八烷基键合相硅胶C-18柱分离。探究短果茴芹中有效成分的提取工艺，是开发短果茴芹成为降血压功能性食品的关键。
文档编号C07J7/00GK102382162SQ20111041208
公开日2012年3月21日 申请日期2011年12月13日 优先权日2011年12月13日
发明者关爽, 卢静, 王大成, 许琳莉, 邓婕, 邓旭明, 钱文辉, 黄国任 申请人:吉林大学