专利名称：针对人抗苗勒管激素ii型受体的新的突变型人源化12g4抗体及其片段的制作方法
针对人抗苗勒管激素I I型受体的新的突变型人源化12G4抗体及其片段本发明涉及针对抗苗勒管激素II型受体的新的突变型人源化12G4抗体及其片段。卵巢癌是妇科癌症的主要原因并且是女性中癌症死亡率的第五大原因，其三个组织学来源为下列:■表面上皮(具有不同亚型的上皮性肿瘤)，其占卵巢癌的85-90%，■生殖索/间质(粒层细胞瘤(全部卵巢癌的3%))，其占卵巢肿瘤的大约10%，■生殖细胞，其占卵巢癌的5%。卵巢癌在初始阶段期间通常是无症状的，这使它得到“无声杀手”的别名(La Marca A.,Volpe A.The Ant1-Mullerian hormone andovarian cancer.HumanReproduction Update,第 13 卷，第 3 期，第 265-273 页,2007)。存在有四个阶段和预后(FIG0分类:国际妇产科学联盟)，对于其来说，存活率自第二阶段开始大大地降低:阶段1:局限于卵巢的肿瘤(5年存活率:90_70%)，阶段I1:延伸至骨盆的在一个或两个卵巢中的肿瘤(5年存活率:70_40%)，阶段II1:延伸至骨盆外的在一个或两个卵巢中的肿瘤(5年存活率:20%)，
阶段IV:远程转移，不包括腹膜转移(5年存活率:〈10%)，(Fauci, Braunwald等人，Principles of internal medicine.Harrison’s第 17版/National Cancer Institutecancer, gov/CNGOF (法国国家妇产科学学会))。对于治疗卵巢癌所采用的主要策略是外科手术和化学疗法，特别是作为第一线治疗,例如卡钼和紫杉醇的混合物。最近还开发了单克隆抗体，例如西妥昔单抗，其针对表皮生长因子受体(EGFR, Ozols R.F 等人，Focus on epithelial ovarian cancer,CancerCell.2004，Jan;5(l):19-24)0其他单克隆抗体目前处于III期临床阶段，例如针对CA-125的阿巴伏单抗(abagovomab)、针对血管内皮生长因子(VEGF-A)的阿瓦斯丁或针对叶酸受体a (FRA)的法利珠单抗(far Ietuzumab )。人抗苗勒管激素是具有560个氨基酸的糖蛋白，其为TGF-P家族的成员。这是由胎儿睾丸的塞尔托利细胞所释放的激素，其引起苗勒管的退化。在成人中，它在塞尔托利细胞和莱迪希细胞(睾丸)以及粒层细胞(卵巢)中表达。它在成人卵巢的调节卵泡生成的活性中发挥作用。抗苗勒管激素II型受体(AMHR-1I)是具有573个氨基酸的肽，并且具有丝氨酸-苏氨酸激酶活性。它牵涉与人的生殖系统的发育相关的苗勒管的退行。苗勒管在男性中萎缩，在男性中它仅形成前列腺囊和睾丸附件；但苗勒管在女性中持续存在，在女性中它作为输卵管、子宫和大部分阴道的起源。
该受体经常在人卵巢的肿瘤上皮细胞上表达。国际申请W02008/053330描述了用于治疗卵巢癌的针对AMHR-1I的鼠类12G4单克隆抗体。然而，本领域技术人员众所周知的是，给人施用鼠类单克隆抗体引起免疫反应。该国际申请还提到所述抗体可以是嵌合的或人源化的，但并没有照那样的来描述它们。然而，嵌合抗体也引发免疫反应，并且弱免疫原性的人源化抗体具有这样的缺点，即具有可能降低的对于抗原的结合亲和力并因而是活性较低的。根据该申请，可能的是，通过存在于人源化抗体中的氨基酸的突变来增加所述亲和力，这通过尤其是修饰人源化抗体的肽序列但同时不妨碍亲水指数，即其疏水性和其电荷，例如通过下列氨基酸的置换:精氨酸-赖氨酸置换或谷氨酸-天冬氨酸置换或丝氨酸-苏氨酸置换或谷氨酰胺-天冬酰胺置换或缬氨酸-亮氨酸-异亮氨酸置换。本发明的目标之一是提供突变型人源化12G4抗体，或所述抗体的片段，其具有至少与相应的非突变型嵌合抗体相等的亲和力和对于受体AMHR-1I的特异性，并且不引发免疫反应。
本发明的另一个目标还在于提供产生特异于受体AMHR-1I的所述抗体的方法。本发明的另一个目标涉及这些抗体作为用于治疗卵巢癌的药物的用途。本发明涉及人源化12G4单克隆抗体，其包含下列组分或由下列组分构成:a)轻链，其包含下列组分或由下列组分构成:-可变区，其氨基酸序列由SEQID NO: 2 (无前导序列)或SEQ ID NO:4 (具有前导序列)表示，和-恒定区，其氨基酸序列由SEQID NO: 6或由与SEQ ID NO: 6具有至少80%的同源性的序列表示，b)重链，其包含下列组分或由下列组分构成:-可变区，其氨基酸序列由SEQID N0:8 (无前导序列)或SEQ ID NO: 10 (具有前导序列)表示，和-恒定区，其氨基酸序列由SEQID NO: 12或由与SEQ ID NO: 12具有至少80%的同源性的序列表示，所述人源化12G4单克隆抗体是突变的，在轻链和/或重链中包含至少一个突变，并且具有至少与嵌合12G4单克隆抗体相等的对于人抗苗勒管激素II型受体(AMHRII)的KD，所述嵌合12G4单克隆抗体包含下列组分或由下列组分构成:a)轻链，其由下列组分构成:-可变区，其氨基酸序列由SEQID NO: 14 (无前导序列)表示，和-恒定区,其氨基酸序列由SEQID N0:6表示，b)重链，其由下列组分构成:-可变区，其氨基酸序列由SEQID NO: 18 (无前导序列)或SEQ ID NO: 10 (具有前导序列)表示，和-恒定区，其氨基酸序列由SEQID NO: 12表示，对于所述受体，Kd优选地小于101，尤其是小于1(T8M，特别地为KT9M至l(TnM。本发明的抗体还具有至少与鼠类12G4抗体的亲和力的三分之一或一半相等的亲和力。在整个说明书中，在序列编号后面的处于括号之中的表述“具有前导序列”意味着所述序列包含信号肽或编码信号肽的序列，信号肽即为决定蛋白质将被分泌的肽。相反地，括号之中的表述“无前导序列”意味着所述序列不包含信号肽或编码信号肽的序列。本发明基于发明人所作出的这样的发现，即本发明的突变型人源化12G4抗体，尽管在CDR(三个决定抗原识别的区域)(其亲水指数并非不受妨碍)中，即在对于与抗原的亲和力和结合来说关键的并且通常仅支持具有相同亲水指数的氨基酸的置换(例如精氨酸-赖氨酸、谷氨酸-天冬氨酸、丝氨酸-苏氨酸、谷氨酰胺-天冬酰胺或缬氨酸-亮氨酸-异亮氨酸)的区域中具有至少一个突变，但依然具有下列特性:-它具有至少与相应的嵌合12G4抗体相似或甚至比相应的嵌合12G4抗体小的对于受体AMHR-1I的Kd (根据实施例1所测定的)，并因此具有比相应的嵌合12G4抗体大或与相应的嵌合12G4抗体相等的亲和力，或者相比于现有技术的抗体或抗体片段而言，-它具有对于受体AMHR-1I的特异性，-它不引发免疫反应或者引发比鼠类抗体更小的反应。作为例子，实施例1呈现了用在CHO或YB2/0细胞中产生的本发明的抗体所获得的Kd。在整个说明书中，术语“12G4”和也使用的术语“LFB112”，是指相同的事物并且表示相同的抗体。所述抗体的亲和力可以通过本领域技术人员熟知的BIAcore测试来测定。在本发明中，术语“抗体”是指免疫球蛋白，即参与获得性免疫应答的由4条链构成的多聚体蛋白质。免疫球蛋白是本领域技术人员熟知的，并且由两个二聚体的装配而构成，所述两个二聚体中的每一个由重链和轻链构成。该多聚体复合物通过经由在两个半胱氨酸之间的二硫桥而造成的轻链与重链的连接来装配，其中两条重链本身也过两个二硫桥彼此相连。重链和轻链中的每一个由恒定区和可变区构成。构成抗体的链的装配使得能够确定特征性的Y形三维结构，其中-Y的基部相应于恒定区Fe，其被补体和Fe受体识别，和-Y的臂的末端相应于各自的轻链可变区和重链可变区的装配。更精确地，每个轻链由可变区(')和恒定区(CJ构成。每个重链由可变区(Vh)和恒定区构成，所述恒定区由三个恒定结构域CH1、Ch2和Ch3构成。结构域Ch2和Ch3构成结构域Fe。在
图1中示意性地显示了抗体的结构。轻链的可变区由三个决定抗原识别的区域(CDR)构成，所述三个决定抗原识别的区域被四个构架结构域包围。可变区的三维折叠是这样的，即从而将所述3个CDR暴露在蛋白质的相同侧并允许形成识别确定抗原的特定结构。
在图2中显示了抗体的轻链或重链的可变区的“珍珠项链”状的结构。分离并纯化了在本发明中所描述的抗体，并且它们不同于天然抗体，因为它们是人源化的。这些抗体是成熟的，即它们具有使其能够识别抗原的特别的三维结构，并且具有所有的对于其抗原识别来说必需的翻译后修饰，尤其是糖基化以及分子内和分子间二硫桥的形成。它们为单克隆抗体，即它们仅识别受体AMHR-1I中的单一的抗原决定簇，这与多克隆抗体相反，多克隆抗体相应于抗体的混合物，并因此可以识别同一蛋白质中的多个抗原决定簇。在本发明中，“嵌合单克隆抗体”是指这样的分离的抗体，其中构成所述抗体的每个轻链和/或每个重链的序列包含来自至少两种不同动物(或人)的杂合序列或者由来自至少两种不同动物(或人)的杂合序列构成。特别地，嵌合12G4抗体是小鼠/人杂合体，这意味着轻链和重链的序列的某区域来自小鼠免疫球蛋白12G4的序 列，而所述重链和所述轻链的序列的其余部分来自一个或任选地数个人免疫球蛋白的序列。图18显示了使得能够产生嵌合12G4抗体的表达载体的图谱。在本发明中，“人源化12G4单克隆抗体”是指这样的分离的抗体，其中仅将12G4抗体(尤其是鼠类12G4抗体)的每个轻链和重链的CDR嫁接在人抗体的轻链和重链中。图19显示了使得能够产生人源化12G4抗体的表达载体的图谱。在说明书的所有下面部分中，表述“嵌合12G4抗体”和“非突变型嵌合12G4抗体”是指相同的抗体。在本发明中，“突变型人源化12G4单克隆抗体”是指这样的人源化12G4单克隆抗体，其中在轻链的可变区和/或轻链的恒定区和/或重链的可变区或重链的恒定区中进行了至少一个突变。因此，本发明的突变型人源化单克隆抗体的定义同时涵盖:-突变型人源化抗体(尤其是如上面所定义的人/小鼠抗体)的前体，和-突变型人源化抗体，尤其是如上面所定义的人/小鼠抗体。在一个有利的实施方案中，本发明涉及如上面所定义的突变型人源化12G4单克隆抗体，其在轻链可变区的至少一个⑶R中包含至少一个突变，并且具有至少与所述嵌合12G4单克隆抗体相等的对于所述受体的亲和力。在该实施方案中，当存在单一突变时，它位于⑶Rl或⑶R2或⑶R3中。当存在超过一个的突变时，第二个突变以及其他突变可以位于⑶Rl和/或⑶R2和/或CDR3和/或抗体的任何其他区域中。在一个有利的实施方案中，本发明涉及如上面所定义的突变型人源化12G4单克隆抗体，其还在轻链(VL)的FR区中包含至少一个突变。在本发明中，发明人发现，当在人源化12G4抗体的⑶Rl或⑶R2或⑶R3中进行至少一个突变且在轻链的可变区(特别是FR)中进行至少一个突变时，并非必然不妨碍氨基酸的亲水指数的所述至少一个突变仍然使得能够不仅保留该人源化抗体的活性，而且还获得突变型人源化抗体，其具有至少与非突变型嵌合抗体相等的亲和力并且不引起免疫反应或引起更小的免疫反应。在一个有利的实施方案中，本发明涉及如上面所定义的突变型人源化12G4单克隆抗体，其在⑶Rl中包含至少一个突变和在轻链(VL)的FR区中包含至少一个突变。在本发明中，发明人发现，当在人源化12G4抗体的⑶Rl中进行至少一个突变且在轻链的可变区(特别是FR)中进行至少一个突变时，并非必然不妨碍氨基酸的亲水指数的所述至少一个突变仍然使得能够不仅保留该人源化抗体的活性，而且还获得突变型人源化抗体，其具有至少与非突变型嵌合抗体相等的亲和力并且不引起免疫反应。在一个有利的实施方案中，本发明涉及如上面所定义的突变型人源化12G4单克隆抗体，其在⑶R2中包含至少一个突变和在轻链(VL)的FR区中包含至少一个突变。在本发明中，发明人发现，当在人源化12G4抗体的⑶R2中进行至少一个突变且在轻链的可变区(特别是FR)中进行至少一个突变时，并非必然不妨碍氨基酸的亲水指数的所述至少一个突变仍然使得能够不仅保留该人源化抗体的活性，而且还获得突变型人源化抗体，其具有至少与非突变型嵌合抗体相等的亲和力并且不引起免疫反应。在一个有利的实施方案中，本发明涉及如上面所定义的突变型人源化12G4单克隆抗体，其在⑶R3中包含至少一个突变和在轻链(VL)的FR区中包含至少一个突变。在本发明中，发明人发现，当在人源化12G4抗体的⑶R3中进行至少一个突变且在轻链的可变区(特别是FR)中进行至少一个突变时，并非必然不妨碍氨基酸的亲水指数的所述至少一个突变仍然使得能够不仅保留该人源化抗体的活性，而且还获得突变型人源化抗体，其具有至少与非突变型嵌合抗体相等的亲和力并且不引起免疫反应。在一个有利的实施方案中，本发明涉及如上面所定义的突变型人源化12G4单克隆抗体，其具有针对表达受体AMHR II的细胞(尤其是Cov434、Ascl和META 2815)的ADCC，该ADCC尤其是大于所述非突变型人源化12G4单克隆抗体的针对相同细胞的ADCC。ADCC (抗体依赖性细胞毒性)是这样的一种机制，其中当抗体识别抗原时，抗体的Fe部分被杀伤细胞的受体Fe Y所识别，所述杀伤细胞在结合后能够杀死携带所述抗原的细胞。在本发明中，发明人 发现，当在人源化12G4抗体(其亲和力相对于相应的嵌合或鼠类抗体而言特别地降低(实施例2))的一个或多个CDR中进行至少一个突变时，并且尽管CDR相应于对于抗原识别来说特别重要的区域，但所述至少一个突变使得能够不仅保留该人源化抗体的活性，而且还获得突变型人源化抗体，其具有至少与非突变型嵌合抗体相等的亲和力并且不引起免疫反应或引起更小的反应。在本发明的背景下，所采用的编号方式基于ScFv片段的编号方式，其中重链从I至115进行编号，而轻链从131至236进行编号，如在图3A和3B中对于人源化12G4抗体所显示的，在其中画有线的灰色珠相应于在所述序列中不存在的氨基酸。两条链通过包含氨基酸116至130的连接体彼此相连。在一个有利的实施方案中，本发明涉及如上面所定义的突变型人源化12G4单克隆抗体，其中所述在轻链可变区的至少一个⑶R中的突变之中的至少一个突变位于包括在轻链可变区的包含氨基酸179至氨基酸184的区域中的CDR中，所述轻链可变区的氨基酸序列由SEQ IDNO: 2表示。所述包含氨基酸179至氨基酸184的区域不相应于完整的⑶R。在该实施方案中，如果该抗体仅具有一个突变，那么它位于轻链CDR的包含氨基酸179至氨基酸184的区域中。当然，可以具有在其他⑶R中的其他突变。在本发明中，发明人发现，当在人源化12G4抗体的⑶R的包含氨基酸179至184的区域中进行至少一个突变时，所述至少一个突变使得能够不仅保留该人源化抗体的活性，而且还获得突变型人源化抗体，其具有至少与非突变型嵌合抗体相等的亲和力并且不引起免疫反应。在一个有利的实施方案中，本发明涉及如上面所定义的突变型人源化12G4单克隆抗体，其中所述位于包括在包含氨基酸179至氨基酸184的区域中的CDR中的突变之中的至少一个突变相应于至少一个下列氨基酸的置换:S179P、E184K、E184G、E184D、S182F。此处所使用的标注相应于本领域技术人员熟知的单字母密码。例如，标注“S179P”意味着在位置179处的丝氨酸被脯氨酸置换。在本发明中，发明人发现，当在人源化12G4抗体的⑶R的包含氨基酸179至184的区域中进行至少一个突变时，并非必然不妨碍被置换的氨基酸的亲水指数的所述至少一个突变仍然使得能够不仅保留该人源化抗体的活性，而且还获得突变型人源化抗体，其具有至少与非突变型嵌合抗体相等的亲和力。作为例子，图17显示了根据本发明的突变型人源化抗体与受体AMHR-1I的结合亲和力。抗体6B_78仅具有一个位于轻链可变区的CDR中的突变(E184K)，其中谷氨酸被赖氨酸替代，即酸性氨基酸被碱性氨基酸酸替代，因此具有完全不同的电荷(因为是相反的)，然而依然具有活性，特别是比非突变型人源化12G4抗体明显更好的和与非突变型嵌合12G4抗体相等的亲和力，并且不引起免疫反应。在一个有利的实施方案中，本发明涉及如上面所定义的突变型人源化12G4单克隆抗体，其还在轻链(VL)的FR区中包含至少一个突变。在本发明中，发明人发现，当在人源化12G4抗体的⑶R的包含氨基酸179至184的区域中进行至 少一个突变且在轻链的可变区(特别是FR)中进行至少一个突变时，并非必然不妨碍氨基酸的亲水指数的所述至少一个突变仍然使得能够不仅保留该人源化抗体的活性，而且还获得突变型人源化抗体，其具有至少与非突变型嵌合抗体相等的亲和力并且不引起免疫反应。在一个有利的实施方案中，本发明涉及如上面所定义的突变型人源化12G4单克隆抗体，其还在重链中包含至少一个突变。在本发明中，发明人发现，当在人源化12G4抗体的⑶R的包含氨基酸179至184的区域中进行至少一个突变，在轻链的可变区(特别是FR)中进行至少一个突变，并且在重链中进行至少一个突变时，并非必然不妨碍氨基酸的亲水指数的所述至少一个突变仍然使得能够不仅保留该人源化抗体的活性，而且还获得突变型人源化抗体，其具有至少与非突变型嵌合抗体相等的亲和力并且不引起免疫反应。在一个有利的实施方案中，本发明涉及如上面所定义的突变型人源化12G4单克隆抗体，其中所述在轻链(VL)的FR区中的突变之中的至少一个突变位于与包含氨基酸179至氨基酸184的区域相邻的FR区中。作为例子，图17以及表I和VII (通过ELISA测定的与靶标AMHRI1-Fc的结合)显示了根据本发明的突变型人源化抗体与受体AMHR-1I的结合亲和力。因此，抗体3C_23具有三个突变:-在轻链可变区的CDR中的突变(S179P)，其中丝氨酸被脯氨酸替代，即亲水氨基酸被疏水氨基酸替代，
-在轻链可变区(特别是FR)中的突变(I177T)，即疏水氨基酸被亲水氨基酸替代，它们此外还具有完全不同的亲水指数值，根据国际申请W02008/053330 (对于异亮氨酸为+4.5，和对于苏氨酸为-0.7)，和-在重链中的突变(Q3R)，即谷氨酰胺被精氨酸替代，它们的亲水指数值，根据国际申请W02008/053330，从-3.5 (对于谷氨酰胺)变化至-4.5 (对于精氨酸)，然而具有比非突变型人源化12G4抗体明显更好的和比非突变型嵌合12G4抗体大的亲和力。同样地，抗体3C_23K(其除了抗体3C_23的突变外，还具有在轻链可变区的⑶R中的第二个突变(E184K)，其中谷氨酸被赖氨酸替代，即酸性氨基酸被碱性氨基酸替代，因此具有完全不同的电荷，因为有着相反的符号)然而依然具有活性，特别是比非突变型人源化12G4抗体明显更好的和比非突变型嵌合12G4抗体大的亲和力，并且不引起免疫反应。在一个有利的实施方案中，本发明涉及如上面所定义的突变型人源化12G4单克隆抗体，其中所述在轻链(VL)的FR区中的突变之中的至少一个突变相应于至少一个下列氨基酸的置换:I132T、Α143Τ、Τ150Α、S158P、L175Q、Ι177Τ、Υ178Η、V187A、S192T、G197D、F212S。在一个有利的实施方案中，本发明涉及如上面所定义的突变型人源化12G4单克隆抗体，其中所述在重链中的突变之中的至少一个突变相应于至少一个下列氨基酸的置换:Q1E、Q3E、Q3R、Q6E、A9T、Vl 1A、K12R、K13R、K19E、V20A、A24G、A24V、A24T、Q39E、A40V、S31G、L45P、D56N、A76T、A79T、R87G、T58A、Q62R、V67M、I70N、T74A、S77P、A79T、S88P、E89D、F102S、A103T、LllOP、S114T。在一个有利的实施方案中`，本发明涉及如上面所定义的突变型人源化12G4单克隆抗体，其具有选自下列的轻链和重链:a)轻链，其包含可变区和恒定区或由可变区和恒定区构成，所述可变区的氨基酸序列由SEQ ID N0:2表示，在该SEQ ID NO:2中进行了至少一个下列位于⑶R之一中的氨基酸置换:S179P、E184K、E184G、E184D、S182F ;并且所述恒定区的氨基酸序列由SEQ ID NO:6表示；或轻链，其包含可变区和恒定区或由可变区和恒定区构成，所述可变区的氨基酸序列由SEQ ID N0:2表示，在该SEQ ID NO:2中进行了至少一个下列位于⑶R之一中的氨基酸置换:S179P、E184K、E184G、E184D、S182F，和进行了至少一个下列位于FR区中的氨基酸置换:1132T、A143T、T150A、S158P、L175Q、Y178H、V187A、S192T、G197D、F212S ;并且所述恒定区的氨基酸序列由SEQ ID N0:6表示，b)重链，其氨基酸序列由SEQ ID N0:58表示，在该SEQ ID N0:58中进行了至少一个下列氨基酸的置换:Q1E、Q3E、Q3R、Q6E、A9T、V11A、K12R、K13R、K19E、V20A、A24G、A24V、A24T、Q39E、A40V、S31G、L45P、D56N、A76T、A79T、R87G、T58A、Q62R、V67M、I70N、T74A、S77P、A79T、S88P、E89D、F102S、A103T、LllOP、S114T。实施例3的表VII呈现了所获得的各种不同克隆和其置换。它还显示，亲水指数随突变而显著地变化，但并不因此导致活性和/或亲和力(对于抗原)的丧失，并且甚至对于某些克隆来说，使得能够获得相对于相应的嵌合抗体而言的亲和力的增加(等于或大于I的“本发明的Ab/嵌合抗体”的比率)。
在该实施方案中，可能的是，形成来自事先获得的两种抗体的组合的抗体，并进一步增加对于受体AMHR-1I的活性和亲和力，相对于非突变型嵌合12G4抗体而言。在一个有利的实施方案中，本发明涉及如上面所定义的突变型人源化12G4单克隆抗体，其具有选自下列的轻链和重链:a)轻链，其包含可变区和恒定区或由可变区和恒定区构成，所述可变区的氨基酸序列由下列表不:-SEQ ID NO:22 (无前导序列)或SEQ ID NO:24 (具有前导序列)，或-SEQ ID NO:30 (无前导序列)或SEQ ID NO:32 (具有前导序列)，或-SEQ ID NO:34 (无前导序列)或SEQ ID NO:36 (具有前导序列)，或-SEQ ID NO:46 (无前导序列)或SEQ ID NO:48 (具有前导序列)，并且所述恒定区的氨基酸序列由SEQ ID N0:6表示，b)重链，其包含可变区和恒定区或由可变区和恒定区构成，所述可变区的氨基酸序列由下列表不: -SEQ ID NO:38 (无前导序列)或SEQ ID NO:40 (具有前导序列)，-SEQ ID NO:26 (无前导序列)或SEQ ID NO:28 (具有前导序列)，-SEQ ID NO:8 (无前导序列)或SEQ ID NO: 10 (具有前导序列)，-SEQ ID NO:42 (无前导序列)或SEQ ID NO:44 (具有前导序列)，-SEQ ID NO:50 (无前导序列)或SEQ ID NO:52 (具有前导序列)，并且所述恒定区的氨基酸序列由SEQ ID NO: 12表示。在一个有利的实施方案中，本发明涉及如上面所定义的突变型人源化12G4单克隆抗体，其具有:a)轻链，其由下列所表示的氨基酸序列构成:-SEQ ID NO:70 (无前导序列)或SEQ ID NO:72 (具有前导序列)，和b)重链，其由下列所表示的氨基酸序列构成:-SEQ ID NO:74 (无前导序列)或SEQ ID NO:76 (具有前导序列)(抗体3C_23)，或者a)轻链，其由下列所表示的氨基酸序列构成:-SEQ ID NO:78 (无前导序列)或SEQ ID NO:80 (具有前导序列)，和b)重链，其由下列所表示的氨基酸序列构成:-SEQ ID NO:58 (无前导序列)或SEQ ID NO:60 (具有前导序列)(抗体6B_78)，或者a)轻链，其由下列所表示的氨基酸序列构成:-SEQ ID NO:82 (无前导序列)或SEQ ID NO:84 (具有前导序列)，和b)重链，其由下列所表示的氨基酸序列构成:-SEQ ID NO:86 (无前导序列)或SEQ ID NO:88 (具有前导序列)(抗体3C_23K)，或者
a)轻链，其由下列所表示的氨基酸序列构成:-SEQ ID NO:78 (无前导序列)或SEQ ID NO:80 (具有前导序列)，和b)重链，其由下列所表示的氨基酸序列构成:-SEQ ID NO:90 (无前导序列)或SEQ ID NO:92 (具有前导序列)(抗体4C_35)，或者a)轻链，其由下列所表示的氨基酸序列构成:-SEQ ID NO:94 (无前导序列)或SEQ ID NO:96 (具有前导序列)，和b)重链，其由下列所表示的氨基酸序列构成:-SEQ ID NO:98 (无前导序列)或SEQ ID NO: 100 (具有前导序列)(抗体5B_42)。
根据另一个方面，本发明涉及如上面所定义的突变型人源化12G4单克隆抗体的片段，其选自下列片段:Fv> Fab、F (ab，) 2、Fab’、dsFv、scFv、sc (Fv)2、“双抗体”。根据另一个方面，本发明涉及核酸，其包含编码上面所定义的单克隆抗体的轻链的序列或由编码上面所定义的单克隆抗体的轻链的序列构成，和/或包含编码上面所定义的单克隆抗体的重链的序列或由编码上面所定义的单克隆抗体的重链的序列构成。在一个有利的实施方案中，本发明涉及上面所定义的核酸，其中所述编码轻链的序列包含下列序列或由下列序列构成:a)编码由SEQ ID N0:53所表示的轻链的可变区的序列，在该序列中进行了至少一个密码子的置换，其允许在⑶R之一中一个或多个下列氨基酸的置换:S179P、E184K、E184G、E184D、S182F，或b)编码由SEQ ID NO:53所表示的轻链的可变区的序列，在该序列中:-进行了密码子的至少一个置换，其允许在⑶R之一中一个或多个下列氨基酸的置换:S179P、E184K、E184G、E184D、S182F,和-进行了至少一个密码子的至少一个置换，其允许在FR之一中一个或多个下列氨基酸的置换:I132T、Α143Τ、Τ150Α、S158P、L175Q、Υ178Η、V187A、S192T、G197D、F212S,和编码由SEQ ID Ν0:5所表示的恒定区的序列。在一个有利的实施方案中，本发明涉及上面所定义的核酸，其中所述编码重链的序列包含下列序列或由下列序列构成:a) SEQ ID NO: 57,其中进行了至少一个密码子的置换,其允许一个或多个下列氨基酸的置换:Q1E、Q3E、Q3R、Q6E、A9T、V11A、K12R、K13R、K19E、V20A、A24G、A24V、A24T、Q39E、A40V、S31G、L45P、D56N、A76T、A79T、R87G、T58A、Q62R、V67M、I70N、T74A、S77P、A79T、S88P、E89D、F102S、A103T、LllOP、S114T。在一个有利的实施方案中，本发明涉及上面所定义的核酸，其包含上面所定义的轻链和上面所定义的重链。在一个有利的实施方案中，本发明涉及上面所定义的核酸，其中所述编码轻链的序列包含选自下列的编码可变区的序列和编码恒定区的序列或由选自下列的编码可变区的序列和编码恒定区的序列构成:a)可变区:-SEQ ID N0:21 (无前导序列)或SEQ ID NO:23 (具有前导序列)，或-SEQ ID NO:29 (无前导序列)或SEQ ID NO:31 (具有前导序列)，或-SEQ ID NO:33 (无前导序列)或SEQ ID NO:35 (具有前导序列)，或-SEQ ID NO:45 (无前导序列)或SEQ ID NO:47 (具有前导序列)，b)恒定区:-SEQ ID NO:5。在一个有利的实 施方案中，本发明涉及上面所定义的核酸，其中所述编码重链的序列包含选自下列的编码可变区的序列和编码恒定区的序列或由选自下列的编码可变区的序列和编码恒定区的序列构成:a)可变区:-SEQ ID NO:25 (无前导序列)或SEQ ID NO:27 (具有前导序列)，或-SEQ ID NO:7 (无前导序列)或SEQ ID N0:9 (具有前导序列)，或-SEQ ID NO:37 (无前导序列)或SEQ ID NO:39 (具有前导序列)，或-SEQ ID N0:41 (无前导序列)或SEQ ID NO:43 (具有前导序列)，或-SEQ ID NO:49 (无前导序列)或SEQ ID N0:51 (具有前导序列)，b)恒定区:-SEQ ID NO: 11。在一个有利的实施方案中，本发明涉及上面所定义的核酸，其中所述编码轻链的序列选自下列序列:-SEQ ID NO:69 (无前导序列)或SEQ ID N0:71 (具有前导序列)，或-SEQ ID NO:77 (无前导序列)或SEQ ID NO:79 (具有前导序列)，或-SEQ ID N0:81 (无前导序列)或SEQ ID NO:83 (具有前导序列)，或-SEQ ID NO:93 (无前导序列)或SEQ ID NO:95 (具有前导序列)，并且，所述编码重链的序列选自下列序列:-SEQ ID NO:73 (无前导序列)或SEQ ID NO:75 (具有前导序列)，或-SEQ ID NO:57 (无前导序列)或SEQ ID NO:59 (具有前导序列)，或-SEQ ID NO:85 (无前导序列)或SEQ ID NO:87 (具有前导序列)，或-SEQ ID NO:89 (无前导序列)或SEQ ID N0:91 (具有前导序列)，或-SEQ ID NO:97 (无前导序列)或SEQ ID NO:99 (具有前导序列)。在一个有利的实施方案中，本发明涉及上面所定义的核酸，其中所述编码轻链的序列和所述编码重链的序列为下列序列:a)编码轻链的序列SEQ ID NO:69 (无前导序列)或SEQ ID N0:71 (具有前导序列)，和b)编码重链的序列SEQ ID NO:73 (无前导序列)或SEQ ID NO:75 (具有前导序列)(抗体3C_23)，或者
a)编码轻链的序列SEQ ID NO:77 (无前导序列)或SEQ ID NO:79 (具有前导序列)，和b)编码重链的序列SEQ ID NO:57 (无前导序列)或SEQ ID NO:59 (具有前导序列)(抗体6B_78)，或者a)编码轻链的序列SEQ ID N0:81 (无前导序列)或SEQ ID NO:83 (具有前导序列)，和b)编码重链的序列SEQ ID NO:85 (无前导序列)或SEQ ID NO:87 (具有前导序列)(抗体3C_23K)，或者
a)编码轻链的序列SEQ ID NO:77 (无前导序列)或SEQ ID NO:79 (具有前导序列)，和b)编码重链的序列SEQ ID NO:89 (无前导序列)或SEQ ID N0:91 (具有前导序列)(抗体4C_35)，或者a)编码轻链的序列SEQ ID NO:93 (无前导序列)或SEQ ID NO:95 (具有前导序列)，和b)编码重链的序列SEQ ID NO:97 (无前导序列)或SEQ ID NO:99 (具有前导序列)(抗体5B_42)。根据另一个方面，本发明涉及包含至少一个上面所定义的核酸的表达载体，所述核酸处于允许其表达的元件的控制之下。在本发明中，“表达载体”定义了这样的DNA分子，所述DNA分子具有允许其在至少一种活生物体中进行复制(加倍)的元件。这些允许复制的元件尤其为酵母或细菌的复制起点，或者病毒复制的控制元件。根据本发明的载体(vector)尤其为质粒、噬菌体、酵母人工染色体(YAC)、细菌人工染色体(BAC)、复制型病毒的经修饰的基因组或整合型病毒的经修饰的基因组，等等。这些载体被称为“表达载体”，因为它们具有允许表达(即将它们所控制的核苷酸序列转录成RNA)的核苷酸序列。在本发明中，包含在所述载体中的所述核酸序列被置于“允许其表达的元件的控制之下”。这意味着，所述表达载体具有至少一个转录起始序列，例如病毒启动子，例如猿猴病毒SV40或巨细胞病毒(CMV)的早期启动子或者劳斯肉瘤病毒(RSV)的启动子序列，尤其是包含TATAA盒的序列或启动子。此外，所述载体还具有至少一个转录终止序列，特别是来自哺乳动物(尤其是人)的基因的多腺苷酸化序列。可以向这些对于包含在所述载体中的核苷酸序列的表达来说不可缺少的序列增添其他使得能够调控或调节所述序列的表达的序列。一个非穷尽的列表包括:哺乳动物(尤其是人)的基因的内含子，增强子类型的转录调控序列，或者哺乳动物(尤其是人)的基因的转录但非翻译的序列。本发明的一个有利的实施方案涉及如上面所定义的表达载体，其包含至少一个选自包含下列序列的核酸的核酸:SEQ ID N0:59、71、75、79、83、87、91、95或99。在另一个有利的实施方案中，本发明涉及如上面所定义的表达载体，其包含 第一核酸，其选自具有下列序列的核酸:SEQ ID N0:71、79、83或95，所述第一核酸处于允许其表达的元件的控制之下，和 第二核酸，其选自具有下列序列的核酸:SEQ ID NO:59、75、87、91或99，所述第二核酸处于允许其表达的元件的控制之下。因此，该表达载体包含上面提及的两个核酸序列，更特别地包含编码上面所定义的单克隆抗体的轻链的核酸序列和编码上面所定义的单克隆抗体的重链的核酸序列。优选地，所述表达载体包含第一元件(其允许编码上面所定义的单克隆抗体的轻链的核酸序列表达)和第二元件(其允许编码上面所定义的单克隆抗体的重链的核酸序列表达)，其中允许所述核酸序列表达的所述第一元件和所述第二元件是相同的或不同的，优选地是相同的。这些控制元件尤其为病毒RSV的长末端重复序列(LTR)。本发明的另一个实施方案涉及上面所定义的表达载体，其包含至少一个抗生素抗性基因。在本发明中，“至少一个抗性基因”是指，所述表达载体可以包含I个或2个或3个或4个或5个或6个抗生素抗性基因。在本发明中，“抗 生素抗性基因”定义了其表达产物发挥细胞的抑制细胞效应(生长抑制)或溶细胞效应(细胞死亡)的基因。本发明所涉及的抗生素尤其对于原核细胞具有效应，但也可以对于真核细胞具有效应，不论其是酵母、植物、昆虫、两栖动物还是哺乳动物。更特别地，上面提及的表达载体具有对于特异于原核细胞的抗生素的抗性基因，和至少I个，优选地2个对于特异于真核细胞的抗生素的抗性基因。作为特异于原核细胞的抗生素，可以提及:氨苄青霉素、四环素及其衍生物、潮霉素、卡那霉素，等等。作为特异于真核细胞的抗生素，可以提及:G418、遗传霉素(G418的盐)、嘌呤霉素、氨甲蝶呤、杀稻瘟素，等等。将编码重链和轻链的目的转录单位(TU)以cDNA的形式且以受RSV启动子支配的形式进行克隆。该启动子相应于在其5’区域中包含增强子元件的劳斯肉瘤病毒的LTR(长末端重复序列)。紧在启动子的3’处克隆人工内含子，其就可变剪接进行了优化并且由在5’处的分离自人β_珠蛋白的供者序列和在3’处的源自免疫球蛋白重链可变区基因的受者序列组成。目的TU以从人来源的生长激素(hGH)(对于重链)和牛来源的生长激素(bGH)(对于轻链)的基因得到的多腺苷酸化序列为终止。在PolyA的选择中实现该来源差异，以便限制目的基因之间的重组。选择了 LTRRSV启动子、嵌合内含子、cDNA和polyA序列这一联合，因为它赋予在YB2/0细胞系中的高的转录和翻译活性。除了目的TU外，所述表达载体还包含数个化学分子抗性TU:Bla基因:该基因(在载体的限制性酶切图谱中被称为Amp)在细菌(原核启动子)中表达β-内酰胺酶并赋予对于氨苄青霉素的抗性；Neo基因:该基因在SV40启动子的控制之下编码酶npt II (新霉素磷酸转移酶II)，并且赋予经转染且表达该基因的哺乳动物细胞以对于各种不同的抗生素例如新霉素、卡那霉素或G418的抗性；Dhfr基因:该基因在SV40启动子的控制之下编码酶DHFR (二氢叶酸还原酶)，并且赋予对于氨甲蝶呤(MTX)的抗性。该方法可以用于通过增加MTX的浓度来实现基因扩增，由此导致由经转染的细胞来进行的抗体产生增加。图18至22显示了用于产生克隆3C_23、6B_78、3C_23K、4C_35和5B_42的表达载体的图谱。在另一个方面，本发明涉及被上面所定义的核酸和/或上面所定义的表达载体转化的宿主细胞或细胞系。特别地，所述细胞或细胞系的特征在于:它 具有低于25%的凋亡， 在细胞分裂过程中是稳定的，和 分泌至少14 μ g/ml的前面所定义的单克隆抗体。细胞稳定性的概念意味着，由于来自包含至少一个载体的细胞的所克隆出的细胞的克隆过程而产生的细胞能够在各种不同的分裂的过程中保留其抗生素抗性特性并产生单克隆抗体，所述载体允许根据本发明的单克隆抗体的表达。在另外一个方面，本发明涉及药物组合物，尤其是疫苗组合物，其至少包含:
上面所定义的单克隆抗体，或 上面所定义的核酸，或 上面所定义的载体，或 上面所定义的所述单克隆抗体的片段，以及与之相联合的药学上可接受的媒介物(vehicle)。有利地，本发明涉及药物组合物，尤其是疫苗组合物，其包含至少一种上面所定义的单克隆抗体，以及与之相联合的药学上可接受的媒介物。活性物质的剂量特别地依赖于施用方式，并且由本领域技术人员容易地确定。“药学上可接受的媒介物”是指与生物系统(例如细胞、细胞培养物、组织或生物体)相容的非毒性材料。在数周或数月期间，在一个或多个每周一次施用中，治疗有效量(单位剂量)可以从 0.01mg/kg 至 500mg/kg,优选地从 0.lmg/kg 至 500mg/kg,优选地从 0.lmg/kg 至 IOOmg/kg,优选地从0.lmg/kg至20mg/kg,优选地从0.lmg/kg至10mg/kg,和更优选地从lmg/kg至10mg/kg变化。同样地，在数周或数月期间，在一个或多个每周一次施用中，治疗有效量(单位剂量)可以从0.2mg/m2至10g/m2,优选地从0.2mg/m2至lg/m2,优选地从2mg/m2至lg/m2,优选地从20mg/m2至lg/m2,和更优选地从20mg/m2至0.5g/m2变化。本发明的药物组合物可以尤其通过静脉内途径(尤其是通过注射或通过逐步灌注)、通过皮下途径、通过全身途径、通过借助于渗透的局部途径、经口或通过借助于气雾剂的呼吸或肺途径来进行施用。用于肠胃外施用的制剂可以包括无菌的水性或非水性溶液、悬浮液或乳液。非水性溶剂的例子为丙二醇、聚乙二醇、植物油(例如橄榄油)或可注射的有机酯(例如油酸乙酯)。水性媒介物包括水、醇/水溶液、乳液或悬浮液。本发明的药物组合物的有利的盖仑氏形式为通过口服途径可施用的，并且包含: 上面所定义的单克隆抗体，或 上面所定义的核酸，或 上面所定义的表达载体，或 上面所定义的所述单克隆抗体的片段，以及与之相联合的赋形剂，在推进剂存在或不存在下。 在本发明的一个实施方案中，所述气雾剂以包含所述突变型人源化抗体和赋形剂的液体的形式存在。所述赋形剂最通常为醇类，但在本发明的背景下可使用本领域技术人员已知的任何其他赋形剂。以液体形式的气雾剂可以与推进气体(例如氯氟烃(CFC)或氢氟烃(HFA))相联合。以液体形式的气雾剂还可以由脂质微颗粒和赋形剂构成。在该情况下，所述赋形剂可以选自合成的二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)、乳糖或羟乙基淀粉(HES)。然后，借助于吹入器来施用所述微颗粒。在本发明的另一个实施方案中，所述气雾剂以粉末的形式存在。所述粉末由具有I至10 μ m，优选地小于9 μ m,或优选地小于5 μ m的尺寸的颗粒组成。作为非限制性的例子，下面的方法可以用于获得干燥的粉末:伴随冷冻干燥的喷雾，或超声结晶，定向沉淀。气雾剂的施用将根据其以液体形式还是以固体形式存在而借助于可以是气动的、超声的或具筛的喷雾器来施行，或者对于液体制剂，借助于(具加压液体的、机械的、电流体动力学的、热的)计量气雾剂来施行，或者对于固体制剂，借助于吸入器来施行(ReychlerG., Dessanges JF 和 Vecellio L, Rev.Mal.Respir, 2007;24:1013-1023)。根据另一个方面，本发明涉及产品，其包含:包含上面所定义的单克隆抗体的第一药物制剂，和包含常规抗癌化合物(尤其是紫杉醇或钼盐，特别是奥沙利钼、顺钼或卡钼)的第二药物制剂，以作为用于在患有与人抗苗勒管激素II型受体相关的病理学状态的患者的治疗中同时地、分开地或顺次地使用的联合制剂，所述与人抗苗勒管激素II型受体相关的病理学状态尤其为:卵巢癌，特别是转移性卵巢癌，浆液性癌，肾上腺样瘤、子宫内膜样癌、胶样上皮癌，前列腺癌，生殖细胞癌，子宫内膜癌，子宫混合性苗勒恶性肿瘤，平滑肌肉瘤，子宫内膜间质肉瘤。根据另一个方面，本发明涉及至少下列物质在制备用于治疗或预防与人抗苗勒管激素II型受体相关的病理学状态的药物中的用途:
上面所定义的单克隆抗体，或 上面所定义的所述单克隆抗体的片段，或
上面所定义的核酸，或 上面所定义的载体，或 上面所定义的细胞，所述与人抗苗勒管激素II型受体相关的病理学状态尤其为:卵巢癌，特别是转移性卵巢癌，浆液性癌，肾上腺样瘤、子宫内膜样癌、胶样上皮癌，前列腺癌，生殖细胞癌，子宫内膜癌，子宫混合性苗勒恶性肿瘤，平滑肌肉瘤，子宫内膜间质肉瘤。“治疗”是指医治其症状是可见的、发作的病理学状态的手段。“预防”是指防止所述病理学状态发作的手段。
在一个有利的实施方案中，本发明涉及上面所定义的抗体或上面所定义的所述抗体的片段用于诊断和/或监测 卵巢癌的用途。在一个有利的实施方案中，本发明涉及上面所定义的抗体或上面所定义的所述抗体的片段的用途，其还包含常规抗癌药物，尤其是紫杉醇或钼盐，特别是奥沙利钼、顺钼或卡钼。根据另一个方面，本发明涉及: 如上面所定义的单克隆抗体，或 如上面所定义的所述单克隆抗体的片段，或 如上面所定义的核酸，或 如上面所定义的载体，或 如上面所定义的细胞，其用于其在治疗或预防与人抗苗勒管激素II型受体相关的病理学状态中的应用，所述与人抗苗勒管激素II型受体相关的病理学状态尤其为:卵巢癌，特别是转移性卵巢癌，浆液性癌，肾上腺样瘤、子宫内膜样癌、胶样上皮癌，前列腺癌，生殖细胞癌，子宫内膜癌，子宫混合性苗勒恶性肿瘤，平滑肌肉瘤，子宫内膜间质肉瘤。在一个有利的实施方案中，上面所定义的单克隆抗体或上面所定义的所述单克隆抗体的片段用于诊断和/或监测与人抗苗勒管激素II型受体相关的癌症，所述与人抗苗勒管激素II型受体相关的癌症尤其为:卵巢癌，特别是转移性卵巢癌，浆液性癌，肾上腺样瘤、子宫内膜样癌、胶样上皮癌，前列腺癌，生殖细胞癌，子宫内膜癌，子宫混合性苗勒恶性肿瘤，平滑肌肉瘤，子宫内膜间质肉瘤。在一个有利的实施方案中，上面所定义的单克隆抗体，或上面所定义的所述单克隆抗体的片段，或上面所定义的核酸，或上面所定义的载体，或上面所定义的细胞还包含常`规抗癌药物，尤其是紫杉醇或钼盐，特别是奥沙利钼、顺钼或卡钼。根据另一个方面，本发明涉及试剂盒，其至少包含: 上面所定义的单克隆抗体，或 上面所定义的所述单克隆抗体的片段，或 上面所定义的核酸，或 上面所定义的载体，或 上面所定义的细胞，该试剂盒用于在诊断与人抗苗勒管激素II型受体相关的病理学状态，尤其是卵巢癌中的应用。根据另一个方面，本发明涉及在人的生物学样品上诊断与人抗苗勒管激素II型受体相关的病理学状态，尤其是卵巢癌的方法，其包括下列步骤:a.对事先从患者获取的活组织检查物进行标记，b.测定人抗苗勒管激素II型受体的存在情况。根据另一个方面，本发明涉及在人的生物学样品上诊断与人抗苗勒管激素II型受体相关的病理学状态，尤其是卵巢癌的方法，其包括下列步骤:a.对患者实施活组织检查，b.对活组织检查物进行标记，c.测定人抗苗勒管激素II型受体的存在情况。活组织检查物的标记根据本领域技术人员熟知的技术来进行。所述受体的存在情况的测定可以通过本领域技术人员熟知的技术(例如免疫测定法、结合测定法，等等)来进行。活组织检查物的标记根据本领域技术人员熟知的技术来进行。所述受体的存在情况的测定可以通过本领域技术人员熟知的技术(例如免疫测定法、结合测定法，等等)来进行。根据另一个方面，本发明涉及在人的生物学样品上治疗与人抗苗勒管激素II型受体相关的病理学状态，尤其是卵巢癌的方法，其包括下列步骤:a.对患者实施活组织检查，b.对活组织检查物进行标记，c.测定人抗苗勒管激素II型受体的存在情况，d.如果确定了人抗苗勒管激素II型受体的存在，则用下列物质对患者进行治疗:
1.上面所定义的单克隆抗体，或 .上面所定义的所述单克隆抗体的片段，或ii1.上面所定义的核酸，或iv.上面所定义的载体，或V.上面所定义的细胞。附图描述图1相应于抗体的示意性图示。黑色部分相应于重链的恒定部分，深灰色部分相应于轻链的恒定部分，浅灰色部分相应于重链的可变部分，和白色部分相应于轻链的可变部分。-S-S-表示在两个半胱氨酸之间建立的二硫桥。⑶R区和构架区由箭头指示。还显不了 Fab和Fe片段。
图2相应于免疫球蛋白的轻链或重链的可变部分的氨基酸序列的“珍珠项链”状示意性图示。黑色球相应于形成构架区的氨基酸，和灰色球相应于表示CDR的氨基酸。图3相应于人源化12G4抗体的重链的可变部分(图3A:氨基酸1-115，SEQ IDN0:8)和轻链的可变部分(图3B:氨基酸131-236，SEQ ID NO: 2)的氨基酸序列的“珍珠项链”状示意性图示，具有为了确定突变位置而采用的编号。画有线的灰色珠相应于在所述序列中不存在的氨基酸，其因此不计入编号。图4相应于嵌合12G4抗体的重链(SEQ ID N0:66)的可变部分的氨基酸序列的“珍珠项链”状示意性图示。图5相应于嵌合12G4抗体的轻链(SEQ ID N0:62)的可变部分的氨基酸序列的“珍珠项链”状示意性图示。图6相应于非突变型人源化12G4抗体的重链(SEQ ID NO:58)和突变型人源化12G4抗体的重链(6B_78 ；SEQ ID NO: 58)的可变部分的氨基酸序列的“珍珠项链”状示意性图示。图7相应于非突变型人源化12G4抗体的轻链(SEQ ID NO: 54)的可变部分的氨基酸序列的“珍珠项链”状示意性图示。图8相应于突变型人源化12G4抗体的重链(3C_23 ；SEQ ID N0:74)的可变部分的氨基酸序列的“珍珠项链”状示意性图示。图9相应于突变型人源化12G4抗体的轻链(3C_23 ；SEQ ID N0:70)的可变部分的氨基酸序列的“珍珠项链”状示意性图示。图10相应于突变型人源化12G4抗体的轻链(6B_78 ；SEQ ID N0:78)的可变部分的氨基酸序列的“珍珠项链”状示意性图示。图11相应于突变型人源化12G4抗体的重链(3C_23K ；SEQ ID N0:86)的可变部分的氨基酸序列的“珍珠项链”状示意性图示。图12相应于突变型人源化12G4抗体的轻链(3C_23K ；SEQ ID N0:82)的可变部分的氨基酸序列的“珍珠项链”状示意性图示。图13相应于突变型人源化12G4抗体的重链(4C_35 ；SEQ ID NO:90)的可变部分的氨基酸序列的“珍珠项链”状示意性图示。图14相应于突变型人源化12G4抗体的轻链(4C_35 ；SEQ ID NO:78)的可变部分的氨基酸序列的“珍珠项链”状示意性图示。
图15相应于突变型人源化12G4抗体的重链(5B_42 ；SEQ ID N0:98)的可变部分的氨基酸序列的“珍珠项链”状示意性图示。图16相应于突变型人源化12G4抗体的轻链(5B_42 ；SEQ ID N0:94)的可变部分的氨基酸序列的“珍珠项链”状示意性图示。图17显示了用根据本发明的突变型抗体(Fab)所获得的在常规ELISA测试中抗体与受体AMHR-1I的结合亲和力的测定。横坐标轴表不以P g/ml显不的(Fab)浓度，和纵坐标轴表不450nm处的0D。具有白色空心圆圈的点状曲线表示非突变型人源化12G4抗体的结合。具有黑色实心三角形的曲线表示在轻链可变区的⑶R中具有突变(E184K)的突变型人源化12G4抗体(抗体6B_78)的结合。具有白色空心三角形的曲线表示在轻链可变区的⑶R中具有突变(S179P)、在轻链可变区的FR区中具有突变(I177T)且在重链可变区中具有突变(Q3R)的突变型人源化12G4抗体(抗体3C_23)的结合。具有白色空心圆圈的曲线表示在轻链可变区的⑶R中具有突变(E184K)、在轻链可变区的⑶R中具有突变(S179P)、在轻链可变区的FR区中具有突变(I177T)且在重链可变区中具有突变(Q3R)的突变型人源化12G4抗体(抗体3C_23K)的结合。具有黑色实心圆圈的曲线表示非突变型嵌合12G4抗体的结合。图18相应于用于包含重链和轻链的嵌合12G4抗体的克隆载体H622-14的示意性图示，在所述重链中，AMHR-1I VH前导序列与重链可变区(AMHR-1I VH)相融合，后者与人免疫球蛋白的恒定区(CH T125)相融合，和在所述轻链中，AMHR-1I VK前导序列与轻链可变区(AMHR-1IVK)相融合，后者与人免疫球蛋白的恒定区(CK T125)相融合。还显示了各种不同的调控元件(启动子、嵌合内含子、多腺苷酸化位点，等等)以及抗生素抗性基因和复制起点。图19相应于用于包含重链和轻链的非突变型人源化12G4抗体的克隆载体H622-18的示意性图示，在所述重链中，人源化AMHR-1I VH前导序列与重链可变区(人源化AMHR-1I VH)相融合，后者与人免疫球蛋白的恒定区(CH T125)相融合，和在所述轻链中，AMHR-1I VK前导序列与轻链可变区(人源化AMHR-1I VK)相融合，后者与人免疫球蛋白的恒定区(CK T125)相融合。还显示了各种不同的调控元件(启动子、嵌合内含子、多腺苷酸化位点，等等)以及抗生素抗性基因和复制起点。图20相应于用于包含重链和轻链的突变型人源化12G4抗体3C_23的克隆载体H622-18MA03C23的示意性图示，在所述重链中，3C_23VH前导序列与重链可变区(3C_23VH)相融合，后者与人免疫球蛋白的恒定区(CH T125)相融合，和在所述轻链中，3C_23VK前导序列与轻链可变区(3C_23VK)相融合，后者与人免疫球蛋白的恒定区(CK T125)相融合。还显示了各种不同的调控元件(启动子、嵌合内含子、多腺苷酸化位点，等等)以及抗生素抗性基因和复制起点。 图21相应于用于包含重链和轻链的突变型人源化12G4抗体6B_78的克隆载体H622-18MA06B_78的示意性图示，在所述重链中，人源化AMHR-1I VH前导序列与重链可变区(人源化AMHR-1I VH)相融合，后者与人免疫球蛋白的恒定区(CH T125)相融合，和在所述轻链中，6B_78VK前导序列与轻链可变区(6B_78VK)相融合，后者与人免疫球蛋白的恒定区(CK T125)相融合。还显示了各种不同的调控元件(启动子、嵌合内含子、多腺苷酸化位点，等等)以及抗生素抗性基因和复制起点。图22相应于用于包含重链和轻链的突变型人源化12G4抗体3C_23K的克隆载体H622-18MA03C_23K的示意性图示，在所述重链中，3C_23K VH前导序列与重链可变区(3C_23K VH)相融合，后者与人免疫球蛋白的恒定区(CH T125)相融合，和在所述轻链中，3C_23KVK前导序列与轻链可变区(3C_23K VK)相融合，后者与人免疫球蛋白的恒定区(CKT125)相融合。还显示了各种不同的调控元件(启动子、嵌合内含子、多腺苷酸化位点，等等)以及抗生素抗性基因和复制起点。图23显示了构建scFv片段的示意性实验方案。在VH的“2/3”区域下的黑色箭头指出了编码肽连接链的N-末端2/3的序列。在VL的“2/3”区域下的黑色箭头指出了编码肽连接链的C-末端2/3的序列。图24A和24B显示了将抗体mLFB112和huLFB112的轻链VL-CL和重链VH-CHl的核苷酸序列亚克隆到表达载体pMG62-Fab中。图 24A:mLFB112图 24B:huLFB112。图25显示了相比于非突变型人源化12G4抗体而言，本发明的人源化抗-AMHRII抗体的ADCC活性。结果表示为随所添加的抗体的量(ng/ml)(横坐标轴)而变化的ASCl细胞的裂解的百分比(纵坐标轴)。平均值土SEM。具有菱形的曲线表示抗- AMHRII抗体3C_23 (R9013C_23)，具有尖端向上的三角形的曲线表示抗-AMHRII抗体6B_78 (R9016B_78),具有尖端向下的三角形的曲线表示抗-AMHRII抗体3C_23K (R9013C_23K),具有圆圈的曲线表示非突变型人源化12G4抗-AfflRII抗体。图26显示了用于产生cov434-AMHRII细胞系的质粒表达载体pIRES-neo的图谱。图27A和27B显示了在YB2/0细胞(图27A)和CHO细胞(图27B)中产生的嵌合的和人源化的抗-AMHRII抗体对于C0V434-AMHRII细胞系的ADCC活性。结果表示为随所添加的抗体的量(ng/ml)(横坐标轴)而变化的C0V434-AMHRII细胞的裂解的百分比(纵坐标轴)。3次测试的平均值土SEM。图27A:具有菱形的曲线表示非突变型嵌合12G4抗-AMHRII抗体，具有实心正方形的曲线表示抗-AMHRII抗体YB2/03C_23 (R9013C_23),具有尖端向下的三角形的曲线表示抗-AMHRII抗体YB2/06B_78( R9016B_78 )，具有尖端向上的三角形的曲线表示抗-AMHRII抗体YB2/03C_23K (R9013C_23K)，和具有空心长方形的曲线表示用作阴性对照的抗-CD20抗体。图27B:具有菱形的曲线表示非突变型嵌合12G4抗-AMHRII抗体，具有尖端向上的三角形的曲线表示抗-AMHRII抗体CH03C_23 (R9013C_23),具有尖端向下的三角形的曲线表示抗-AMHRII抗体CH03C_23K (R9013C_23K)，具有圆圈的曲线表示抗-AMHRII抗体CH06B_78 (R9016B_78)，和具有空心长方形的曲线表示用作阴性对照的抗-⑶20抗体。
图28显示了在YB2/0和CHO细胞中产生的人源化抗-AMHRII抗体对于Ascl细胞系的ADCC活性。结果表示为随所添加的抗体的量(ng/ml)(横坐标轴)而变化的Ascl细胞的裂解的百分比(纵坐标轴)。3次测试的平均值土SEM。具有菱形的曲线表示抗-AMHRII抗体YB2/03C_23K，具有尖端向上的三角形的曲线表示抗-AMHRII抗体CH03C_23K。图29显示了在YB2/0和CHO中产生的人源化抗-AMHRII抗体对于META2815细胞系的ADCC活性。结果表示为随所添加的抗体的量(ng/ml)(横坐标轴)而变化的META2815细胞的裂解的百分比(纵坐标轴)。3次测试的平均值土SEM。具有菱形的曲线表示抗-AMHRII抗体YB2/03C_23K，具有尖端向上的三角形的曲线表示抗-AMHRII抗体CH03C_23K，具有圆圈的曲线表示用作阴性对照的抗-CD20抗体(抗-CD20A/R60309/045)。图30显示了抗-AMHRII抗体3C_23K对于C0V434-AMHRII细胞的增殖的影响。100%的值相应于没有抗体时所观察到的C0V434-AMHRII细胞的增殖(3次测试的平均值土SD)。从左至右，柱状图表示:没有抗体的对照，抗-P24抗体，抗-AMHRII抗体YB2/03C_23K，抗-AMHRII抗体CH03C_23K，在交联剂(CK)存在下的抗-P24抗体，在CK存在下的抗-AMHRII抗体YB2/03C_23K,在CK存在下的抗-AMHRII抗体CH03C_23K，I μ g/ml的秋水仙素。
图31显示了抗-AMHRII抗体3C_23K对于META2815细胞的增殖的影响。100%的值相应于没有抗体时所观察到的META2815细胞的增殖(3次测试的平均值土SD)。从左至右，柱状图表示:没有抗体的对照，抗-P24抗体，抗-AMHRII抗体YB2/03C_23K，抗-AMHRII抗体CH03C_23K,仅交联剂，在交联剂(CK)存在下的抗-P24抗体，在CK存在下的抗-AMHRII抗体YB2/03C_23K，在CK存在下的抗-AMHRII抗体CH03C_23K，I μ g/ml的秋水仙素。图32A和32B显示了在cov434_AMHRII模型中，在用3C23K-YB2/0进行的治疗的影响下，肿瘤体积的变化(图32A)和存活曲线(图32B)，所述治疗通过下述方式来进行:以10mg/kg/注射的剂量，以2-3天的间隔，进行抗体的腹膜内注射，总共18次注射(黑色箭头)。图32A:纵坐标轴:肿瘤体积(mm3)，横坐标轴:肿瘤细胞注射后的天数，具有菱形的曲线:媒介物，具有长方形的曲线:抗-AMHRII抗体YB2/03C_23K。图32B:纵坐标轴:存活百分比，横坐标轴:肿瘤细胞注射后的天数，具有菱形的曲线:媒介物，具有长方形的曲线:抗-AMHRII抗体YB2/03C_23K。图33A和33B显示了在Ascla5模型中，在用3C_23K_YB2/0进行的治疗的影响下，肿瘤体积的变化(图33A)和存活曲线(图33B)，所述治疗通过下述方式来进行:以10mg/kg/注射的剂量，以2-3天的间隔，进行抗体的腹膜内注射，总共18次注射(黑色箭头)。 图 33A: 纵坐标轴:肿瘤体积(mm3)，横坐标轴:肿瘤细胞注射后的天数，具有菱形的曲线:媒介物，具有长方形的曲线:抗-AMHRII抗体YB2/03C_23K。图33B:纵坐标轴:存活百分比，横坐标轴:肿瘤细胞注射后的天数，具有菱形的曲线:媒介物，
具有长方形的曲线:抗-AMHRII抗体YB2/03C_23K。图34A和34B显示了在META2815模型中，在用3C_23K_YB2/0进行的治疗的影响下，肿瘤体积的变化(图34A)和存活曲线(图34B)，所述治疗通过下述方式来进行:以IOmg/kg/注射的剂量，以2-3天的间隔，进行抗体的腹膜内注射，总共18次注射(黑色箭头)。图34A:纵坐标轴:肿瘤体积(mm3)，横坐标轴:肿瘤细胞注射后的天数，具有菱形的曲线:媒介物，具有长方形的曲线:抗-AMHRII抗体YB2/03C_23K。图34B:纵坐标轴:存活百分比，横坐标轴:肿瘤细胞注射后的天数，具有菱形的曲线:媒介物，具有长方形的曲线:抗-AMHRII抗体YB2/03C_23K。
实施例实施例1:抗-AMHR-1I抗体的亲和力的测定在BIACore XlOO (BIACore, GE Heal thcare)上通过 SPR (表面等离子共振)技术来测定抗体对于其抗原即AMHR-1I的亲和力。将以具有Fe区的融合蛋白的形式进行表达的重组受体AMHR-1I通过其胺官能团与存在于CM5类型的传感器芯片表面上的以琥珀酰亚胺酯形式活化的右旋糖酐的羧基基团之间的共价偶联来进行固定。以10 μ I/分钟的流量用EDC/NHS混合物(0.1MN-羟基琥珀酰亚胺和0.1Μ3-(N，N- 二甲基氨基)丙基-N-乙基碳二亚胺)来活化传感器芯片的COOH基团7分钟，然后将在乙酸钠缓冲液(10mM，pH4.0)中稀释至5 μ g/ml的融合蛋白AMHR-11/Fc以5 μ I/分钟注射到传感器芯片的“道2”上以达到300RU。通过在7分钟期间以10μ I/分钟的流量注射乙醇胺-HCllM溶液(ρΗ8.5)来使未与所述融合蛋白的胺反应的酯基团去活化。像“道2” 一样，对用作阴性对照的“道I”进行活化和去活化。所有测量均在25°C下进行。将待分析的抗体在HBS-EP运行缓冲液(BIACore, GEHealthcare)中稀释至6.25nM至3333nM的浓度，并且在2分钟期间以30 μ I/分钟的流量注射到传感器芯片上。监测解离步骤10分钟，然后通过在30秒期间以10 μ I/分钟注射甘氨酸缓冲液(10mM，PH1.5)来使表面再生。通过使用软件BIAevaluation3.1的1:2动力学模型来分析所获得的传感图(sensorgram)。结果在CHO或YB2/0细胞中产生抗体(表I)表I
权利要求
1.人源化12G4单克隆抗体，其包含下列组分或由下列组分构成: a)轻链，其包含下列组分或由下列组分构成: -可变区，其氨基酸序列由SEQ ID NO: 2或SEQ ID NO:4表示，和 -恒定区，其氨基酸序列由SEQ ID N0:6或由与SEQ ID N0:6具有至少80%的同源性的序列表示， b)重链，其包含下列组分或由下列组分构成: -可变区，其氨基酸序列由SEQ ID NO:8或SEQ ID NO: 10表示，和 -恒定区，其氨基酸序列由SEQ ID NO: 12或由与SEQ ID NO: 12具有至少80%的同源性的序列表不， 所述人源化12G4单克隆抗体是突变的，在轻链和/或重链中包含至少一个突变，并且具有至少与嵌合12G4单克隆抗体相等的对于人抗苗勒管激素II型受体(AMHRI I)的KD，所述嵌合12G4单克隆抗体包含下列组分或由下列组分构成: a)轻链，其由下列组分构成: -可变区，其氨基酸序列由SEQ ID NO: 14表示，和 -恒定区，其氨基酸序列由SEQ ID NO:6表示， b)重链，其由下列组分构成: -可变区，其氨基酸序列由SEQ ID NO: 18或SEQ ID NO: 10表示，和 -恒定区，其氨基酸序列由SEQ ID NO: 12表示， 对于所述受体，Kd优选地小于10_7M，尤其是小于10_8M，特别地为KT9M至I(T11M。
2.根据权利要求1的突变型人源化12G4单克隆抗体，其在轻链可变区的至少一个CDR中包含至少一个突变，并且具有至少与所述嵌合12G4单克隆抗体相等的对于所述受体的亲和力。
3.根据权利要求1至2之一的突变型人源化12G4单克隆抗体，其中所述在轻链可变区的至少一个CDR中的突变之中的至少一个突变位于包括在轻链可变区的包含氨基酸179至氨基酸184的区域中的⑶R中，所述轻链可变区的氨基酸序列由SEQ ID NO:2表示。
4.根据权利要求1至3之一的突变型人源化12G4单克隆抗体，其中所述位于包括在包含氨基酸179至氨基酸184的区域中的CDR中的突变之中的至少一个突变相应于至少一个下列氨基酸的置换:S179P、E184K、E184G、E184D、S182F。
5.根据权利要求1至4之一的突变型人源化12G4单克隆抗体，其还在轻链(VL)的FR区中包含至少一个突变。
6.根据权利要求1至5之一的突变型人源化12G4单克隆抗体，其还在重链中包含至少一个突变。
7.根据权利要求1至6之一的突变型人源化12G4单克隆抗体，其中所述在轻链(VL)的FR区中的突变之中的至少一个突变位于与包含氨基酸179至氨基酸184的区域相邻的FR区中。
8.根据权利要求1至6之一的突变型人源化12G4单克隆抗体，其中所述在轻链(VL)的FR区中的突变之中的至少一个突变相应于至少一个下列氨基酸的置换:I132T、A143T、T150A、S158P、L175Q、Y178H、V187A、S19 2T、G197D、F212S。
9.根据权利要求1至8之一的突变型人源化12G4单克隆抗体，其中所述在重链中的突变之中的至少一个突变相应于至少一个下列氨基酸的置换:Q1E、Q3E、Q3R、Q6E、A9T、Vl 1A、K12R、K13R、K19E、V20A、A24G、A24V、A24T、Q39E、A40V、S31G、L45P、D56N、A76T、A79T、R87G、T58A、Q62R、V67M、I70N、T74A、S77P、A79T、S88P、E89D、F102S、A103T、LllOP、SlHT0
10.根据权利要求1至9之一的突变型人源化12G4单克隆抗体，其具有选自下列的轻链和重链: a)轻链，其包含可变区和恒定区或由可变区和恒定区构成，所述可变区的氨基酸序列由SEQ ID NO:2表示，在该SEQ ID NO:2中进行了至少一个下列位于⑶R之一中的氨基酸置换:S179P、E184K、E184G、E184D、S182F ;并且所述恒定区的氨基酸序列由SEQ ID NO:6表示；或 轻链，其包含可变区和恒定区或由可变区和恒定区构成，所述可变区的氨基酸序列由SEQ ID NO:2表示，在该SEQ ID NO:2中进行了至少一个下列位于⑶R之一中的氨基酸置换:5179 41841(4184641840、5182 ，和进行了至少一个下列位于？1 区中的氨基酸置换:I132T、A143T、T150A、S158P、L175Q、Y178H、V187A、S192T、G197D、F212S ;并且所述恒定区的氨基酸序列由SEQ ID NO:6表不， b)重链，其氨基酸序列由SEQ ID NO:58表示，在该SEQ ID NO:58中进行了至少一个下列氨基酸的置换:Q1E、Q3E、Q3R、Q6E、A9T、Vl 1A、K12R、K13R、K19E、V20A、A24G、A24V、A24T、Q39E、A40V、S31G、L45P、D56N、A76T、A79T、R87G、T58A、Q62R、V67M、I70N、T74A、S77P、A79T、S88P、E89D、F102S、A103T、LllOP、S114T。
11.根据权利要求1至10之一的突变型人源化12G4单克隆抗体，其具有选自下列的轻链和重链: a)轻链，其包含可变区和恒定区或由可变区和恒定区构成，所述可变区的氨基酸序列由下列表示:-SEQ ID NO:22 或 SEQ ID NO:24，或-SEQ ID NO:30 或 SEQ ID NO:32，或-SEQ ID NO:34 或 SEQ ID NO:36，或-SEQ ID NO:46 或 SEQ ID NO:48， 并且所述恒定区的氨基酸序列由SEQ ID NO:6表示， b)重链，其包含可变区和恒定区或由可变区和恒定区构成，所述可变区的氨基酸序列由下列表示:-SEQ ID NO:38 或 SEQ ID NO:40，-SEQ ID NO:26 或 SEQ ID NO:28，-SEQ ID NO:8 或 SEQ ID NO:10，-SEQ ID NO:42 或 SEQ ID NO:44,-SEQ ID NO:50 或 SEQ ID NO:52， 并且所述恒定区的氨基酸序列由SEQ ID NO: 12表示。
12.根据权利要求10的突变型人源化12G4单克隆抗体，其具有: a)轻链，其由下列所表示的氨基酸序列构成:-SEQ ID NO:70 或 SEQ ID NO:72，和 b)重链，其由下列所表示的氨基酸序列构成:-SEQ ID NO:74 或 SEQ ID NO:76， 或者 a)轻链，其由下列所表示的氨基酸序列构成:-SEQ ID NO:78 或 SEQ ID NO:80，和 b)重链，其由下列所表示的氨基酸序列构成: -SEQ ID NO:58 或 SEQ ID NO:60， 或者 a)轻链，其由下列所表示的氨基酸序列构成:-SEQ ID NO:82 或 SEQ ID NO:84，和 b)重链，其由下列所表示的氨基酸序列构成:-SEQ ID NO:86 或 SEQ ID NO:88， 或者 a)轻链，其由下列所表示的氨基酸序列构成:-SEQ ID NO:78 或 SEQ ID NO:80，和 b)重链，其由下列所表示的氨基酸序列构成:-SEQ ID NO:90 或 SEQ ID NO:92， 或者 a)轻链，其由下列所表示的氨基酸序列构成:-SEQ ID NO:94 或 SEQ ID NO:96，和 b)重链，其由下列所表示的氨基酸序列构成:-SEQ ID NO:98 或 SEQ ID NO:100。
13.根据权利要求1至12之一的突变型人源化12G4单克隆抗体的片段，其选自下列片段:Fv、Fab、F (ab，) 2、Fab’、dsFv、scFv、sc (Fv) 2、“双抗体”。
14.核酸，其包含编码根据权利要求1至12中任一项的单克隆抗体的轻链的序列或由编码根据权利要求1至12中任一项的单克隆抗体的轻链的序列构成，和/或包含编码根据权利要求1至12中任一项的单克隆抗体的重链的序列或由编码根据权利要求1至12中任一项的单克隆抗体的重链的序列构成。
15.根据权利要求14的核酸，其中所述编码轻链的序列包含下列序列或由下列序列构成: a)编码由SEQID NO:53所表示的轻链的可变区的序列，在该序列中进行了至少一个密码子的置换，其允许在⑶R之一中一个或多个下列氨基酸的置换:S179P、E184K、E184G、E184D、S182F， 或 b)编码由SEQID NO:53所表示的轻链的可变区的序列，在该序列中: -进行了密码子的至少一个置换，其允许在CDR之一中一个或多个下列氨基酸的置换:S179P、E184K、E184G、E184D、S182F,和 -进行了至少一个密码子的至少一个置换，其允许在FR之一中一个或多个下列氨基酸的置换:I132T、A143T、T150A、S158P、L175Q、Y178H、V187A、S192T、G197D、F212S,和编码由SEQ ID NO:5所表示的恒定区的序列。
16.根据权利要求14的核酸，其中所述编码重链的序列包含下列序列或由下列序列构成: a)SEQ ID NO: 57,其中进行了至少一个密码子的置换,其允许一个或多个下列氨基酸的置换:Q1E、Q3E、Q3R、Q6E、A9T、Vl 1A、K12R、K13R、K19E、V20A、A24G、A24V、A24T、Q39E、A40V、S31G、L45P、D56N、A76T、A79T、R87G、T58A、Q62R、V67M、I70N、T74A、S77P、A79T、S88P、E89D、F102S、A103T、LllOP、S114T。
17.根据权利要求14的核酸，其包含根据权利要求15的轻链和根据权利要求16的重链。
18.根据权利要求14至17之一的核酸，其中所述编码轻链的序列包含选自下列的编码可变区的序列和编码恒定区的序列或由选自下列的编码可变区的序列和编码恒定区的序列构成: a)可变区:-SEQ ID NO:21 或 SEQ ID NO:23，或-SEQ ID NO:29 或 SEQ ID NO:31，或-SEQ ID NO:33 或 SEQ ID NO:35，或-SEQ ID NO:45 或 SEQ ID NO:47， b)恒定区:-SEQ ID NO:5。
19.根据权利要求14至17的核酸，其中所述编码重链的序列包含选自下列的编码可变区的序列和编码恒定区的 序列或由选自下列的编码可变区的序列和编码恒定区的序列构成: a)可变区:-SEQ ID NO:25 或 SEQ ID NO:27，或-SEQ ID NO:7 或 SEQ ID NO:9，或-SEQ ID NO:37 或 SEQ ID NO:39，或-SEQ ID NO:41 或 SEQ ID NO:43，或-SEQ ID N0:49 或 SEQ ID NO:51, b)恒定区:-SEQ ID NO:11。
20.根据权利要求14至19的核酸，其中 所述编码轻链的序列选自下列序列:-SEQ ID NO:69 或 SEQ ID NO:71，或-SEQ ID NO:77 或 SEQ ID NO:79，或-SEQ ID NO:81 或 SEQ ID NO:83，或-SEQ ID NO:93 或 SEQ ID NO:95， 并且，所述编码重链的序列选自下列序列:-SEQ ID NO:73 或 SEQ ID NO:75，或-SEQ ID NO:57 或 SEQ ID NO:59，或-SEQ ID NO:85 或 SEQ ID NO:87，或-SEQ ID N0:89 或 SEQ ID N0:91，或-SEQ ID NO:97 或 SEQ ID NO:99。
21.根据权利要求14至20之一的核酸，其中所述编码轻链的序列和所述编码重链的序列为下列序列: a)编码轻链的序列SEQID NO:69或SEQ ID NO:71，和 b)编码重链的序列SEQID NO:73或SEQ ID NO:75, 或者 a)编码轻链的序列SEQ ID NO:77 或 SEQ ID NO:79, b)编码重链的序列SEQID NO:57或SEQ ID NO:59, 或者 a)编码轻链的序列SEQ ID NO:81 或 SEQ ID NO:83, b)编码重链的序列SEQID NO:85或SEQ ID NO:87, 或者 a)编码轻链的序列SEQ ID NO:77 或 SEQ ID NO:79, b)编码重链的序列SEQID NO:89或SEQ ID NO:91, 或者 a)编码轻链的序列SEQ ID NO:93 或 SEQ ID NO:95, b)编码重链的序列SEQID NO:97或SEQ ID NO:99。
22.包含至少一个根据权利要求14至21中任一项的核酸的表达载体，所述核酸处于允许其表达的元件的控制之下。
23.根据权利要求22的表达载体，其包含 第一核酸，其选自具有下列序列的核酸:SEQ ID NO:71、79、83或95，所述第一核酸处于允许其表达的元件的控制之下，和 第二核酸，其选自具有下列序列的核酸:SEQ ID NO:59、75、87、91或99，所述第二核酸处于允许其表达的元件的控制之下。
24.宿主细胞或细胞系，其被根据权利要求14至21之一的核酸和/或根据权利要求22的表达载体转化。
25.药物组合物，尤其是疫苗组合物，其至少包含: 根据权利要求1至12中任一项的单克隆抗体，或根据权利要求14至21中任一项的核酸，或 根据权利要求22或23中任一项的载体，或 根据权利要求13的所述单克隆抗体的片段， 以及与之相联合的药学上可接受的媒介物。
26.产品，其包含: 包含根据权利要求1至12中任一项的单克隆抗体的第一药物制剂，和包含常规抗癌化合物的第二药物制剂，所述常规抗癌化合物尤其是紫杉醇或钼盐，特别是奥沙利钼、顺钼或卡钼， 以作为用于在患有卵巢癌的患者的治疗中同时地、分开地或顺次地使用的联合制剂。
27.根据权利要求1至12中任一项的单克隆抗体、或根据权利要求13的所述单克隆抗体的片段、或根据权利要求14至21中任一项的核酸、或根据权利要求22或23中任一项的载体、或根据权利要求24的细胞，其用于其在治疗或预防与人抗苗勒管激素I I型受体相关的病理学状态，尤其是卵巢癌中的应用。
28.根据权利要求1至12中任一项的单克隆抗体、或根据权利要求13的所述单克隆抗体的片段，其用于诊断和/或监测与人抗苗勒管激素I I型受体相关的癌症，尤其是卵巢癌。
29.根据权利要求27的单克隆抗体或其片段或核酸或载体或细胞，其还包含常规抗癌药物，尤其是紫杉醇或钼盐，特别是奥沙利钼、顺钼或卡钼。
30.试剂盒，其至少包含: 根据权利要求1至12中任一项的单克隆抗体，或 根据权利要求13的所述单克隆抗体的片段，或 根据权利要求14至21中任一项的核酸，或 根据权利要求22或23中任一项的载体，或 籲根据权利要求24的细胞， 该试剂盒用于在诊断与人抗苗勒管激素II型受体相关的病理学状态，尤其是卵巢癌中的应用。
31.在人的生物学样品上诊断与人抗苗勒管激素II型受体相关的病理学状态，尤其是卵巢癌的方法，其包括下列步骤 : a.对事先从患者获取的活组织检查物进行标记， b.测定人抗苗勒管激素II型受体的存在情况。
全文摘要
本发明涉及针对抗苗勒管激素II型受体的新的突变型人源化12G4抗体及其片段。
文档编号C07K16/28GK103119059SQ201180032211
公开日2013年5月22日 申请日期2011年4月1日 优先权日2010年5月12日
发明者C·拜赫伦斯, I·纳瓦罗-特隆 申请人:Lfb生物技术公司, 蒙彼利埃第一大学, 国家抗癌中心, 国家健康与医学研究院