专利名称：一种斯氏木碱的制备方法
技术领域：
本发明属于天然产物分离领域，具体是涉及一种应用高速逆流色谱技术从威廉斯氏木中纯化斯氏木碱的方法。
背景技术：
斯氏木碱(Sickingine)是从菌草科植物染料斯氏木tinctoria (HBK)Schum.及威廉斯氏木williamsii Standi.植物中分离得到的一种卩引哚类生物碱，呈淡黄色无定形粉末转，mp. 136-138 。现代药理研究表明，斯氏木碱具有抑制回肠收缩作用，可抑制膝鼠尚体回肠由点刺激引起的收缩，ED5tl为100 μ M。现有提取斯氏木碱的报道并不多见，市场上也尚未有斯氏木碱对照品的出售，因此提供一种斯氏木碱的制备方法则很有必要，可以为其后续研究提供支持。
发明内容
本发明的目的是提供一种斯氏木碱的制备方法，该方法制得的斯氏木碱质量好，
纯度高。为了达到上述目的，本发明采用以下技术方案
一种斯氏木碱的制备方法，其特征在于包含以下步骤
(1)提取将威廉斯氏木药材粉碎，加入5 12倍量的乙醇水溶液液回流或渗漉提取广2次，每次O. 5^5h,合并得提取液；
(2)除杂将上述提取液浓缩至小体积，加入2飞倍量质量百分比浓度为1%的盐酸水溶液溶解，过滤，再加入碱液将稀释液调至pHfll，加等体积量的二氯甲烷萃取，萃取液回收试剂得威廉斯氏木总生物碱；
(3 )纯化将上述威廉斯氏木总生物碱采用高速逆流色谱法分离纯化，设定色谱仪转速为80(T900r/min，流速为I. 5 5. Oml/min，收集流出液，回收试剂，真空干燥得产品。步骤(I)所述乙醇液为体积百分比浓度为6(Γ80%的乙醇水溶液。步骤(2)所述提取液浓缩至密度I. 2^1. 6g/ml。步骤(2)所述碱性溶液为2 5mol/L的氨水溶液。步骤(3)所述高速逆流色谱法采用的溶剂系统是二氯甲烷-甲醇-pH3. 3磷酸盐缓冲液(5-9:15-17:5-8)。步骤(3)所述溶剂系统制备方法为将氯仿-甲醇-PH3. 3磷酸盐缓冲液按上述比例量取，混合均匀后静置，放出上层作为固定相，下层作为流动相，将威廉斯氏木总生物碱用下相溶解。本发明的有益效果是采用高速逆流色谱法纯化，样品损失少，得率高。
具体实施例方式
下面将结合具体实施方式
进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。
实施例I :
取威廉斯氏木全植物10kg，粉碎，加入50L60%乙醇回流提取2次，每次O. 5h，合并提取液，浓缩至密度I. 5g/ml，加入2倍量1%盐酸溶液稀释，滤除沉淀后，加入2mol/L氨水调至pH9. 2，用等量二氯甲烷萃取，萃取液回收试剂，得威廉斯氏木总碱。取氯仿-甲醇-pH3. 3磷酸盐缓冲液按(5:13:6)体积比置于分液漏斗中，混匀后，静置，放出上层作为固定相，下层作为流动相，将威廉斯氏木总碱用下相溶解，开启制备型高速逆流色谱仪，先将固定相泵入色谱柱中，再以I. 5ml/min流速泵入流动相，并通过进样阀连续进样，控制转速为800r/min，收集流出液，浓缩，干燥得斯氏木碱I. 45g，检测含量
94.4%ο实施例2: 取威廉斯氏木全植物20kg，粉碎，加入240L70%乙醇渗漉提取2次，每次5h，合并提取液，浓缩至密度I. 6g/ml，加入3倍量1%盐酸溶液稀释，滤除沉淀后，加入4mol/L氨水调至PHlI. 0，用等量二氯甲烷萃取，萃取液回收试剂，得威廉斯氏木总碱。取氯仿-甲醇-pH3. 3磷酸盐缓冲液按(6:17:5)体积比置于分液漏斗中，混匀后，静置，放出上层作为固定相，下层作为流动相，将威廉斯氏木总碱用下相溶解，开启制备型高速逆流色谱仪，先将固定相泵入色谱柱中，再以3. 5ml/min流速泵入流动相，并通过进样阀连续进样，控制转速为920r/min，收集流出液，浓缩，干燥得斯氏木碱2. 81g，检测含量96. 2%ο实施例3:
取威廉斯氏木全植物20kg，粉碎，加入160L80%乙醇回流提取I次，提取3h，合并提取液，浓缩至密度I. 2g/ml，加入5倍量1%盐酸溶液稀释，滤除沉淀后，加入5mol/L氨水调至ρΗΙΟ. 3，用等量二氯甲烷萃取，萃取液回收试剂，得威廉斯氏木总碱。取氯仿-甲醇-pH3. 3磷酸盐缓冲液按(9:16:8)体积比置于分液漏斗中，混匀后，静置，放出上层作为固定相，下层作为流动相，将威廉斯氏木总碱用下相溶解，开启制备型高速逆流色谱仪，先将固定相泵入色谱柱中，再以5ml/min流速泵入流动相，并通过进样阀连续进样，控制转速为1000r/min，收集流出液，浓缩，干燥得斯氏木碱3. 46g，检测含量93. 7%。实施例4:
取威廉斯氏木全植物20kg，粉碎，加入138L65%乙醇回流提取2次，提取2. 5h，合并提取液，浓缩至密度I. 4g/ml，加入3倍量1%盐酸溶液稀释，滤除沉淀后，加入2mol/L氨水调至ρΗΙΟ. 6，用等量二氯甲烷萃取，萃取液回收试剂，得威廉斯氏木总碱。取氯仿-甲醇-pH3.3磷酸盐缓冲液按(8:15:7)体积比置于分液漏斗中，混匀后，静置，放出上层作为固定相，下层作为流动相，将威廉斯氏木总碱用下相溶解，开启制备型高速逆流色谱仪，先将固定相泵入色谱柱中，再以2. 2ml/min流速泵入流动相，并通过进样阀连续进样，控制转速为850r/min，收集流出液，浓缩，干燥得斯氏木碱3. 43g，检测含量
95.3%。
权利要求
1.一种斯氏木碱的制备方法，其特征在于包含以下步骤 (1)提取将威廉斯氏木药材粉碎，加入5 12倍量的乙醇水溶液液回流或渗漉提取广2次，每次O. 5^5h,合并得提取液； (2)除杂将上述提取液浓缩至小体积，加入2飞倍量质量百分比浓度为1%的盐酸水溶液溶解，过滤，再加入碱液将稀释液调至pHfll，加等体积量的二氯甲烷萃取，萃取液回收试剂得威廉斯氏木总生物碱； (3 )纯化将上述威廉斯氏木总生物碱采用高速逆流色谱法分离纯化，设定色谱仪转速为80(T900r/min，流速为I. 5^5. Oml/min，收集流出液，回收试剂，真空干燥得产品。
2.如权利要求I所述的一种斯氏木碱的制备方法，其特征在于步骤(I)所述乙醇液为体积百分比浓度为6(Γ80%的乙醇水溶液。
3.如权利要求I所述的一种斯氏木碱的制备方法，其特征在于步骤(2)所述提取液浓 缩至密度1.2 L6g/ml。
4.如权利要求I所述的一种斯氏木碱的制备方法，其特征在于步骤(2)所述碱性溶液为2飞mol/L的氨水溶液。
5.如权利要求I所述的一种斯氏木碱的制备方法，其特征在于步骤(3)所述高速逆流色谱法采用的溶剂系统是二氯甲烷-甲醇_pH3. 3磷酸盐缓冲液(5-9:15-17:5-8)。
6.如权利要求5所述的一种斯氏木碱的制备方法，其特征在于步骤(3)所述溶剂系统制备方法为将氯仿-甲醇-PH3. 3磷酸盐缓冲液按上述比例量取，混合均匀后静置，放出上层作为固定相，下层作为流动相，将威廉斯氏木总生物碱用下相溶解。
全文摘要
本发明提供一种斯氏木碱的制备方法，其特征在于包含以下步骤(1)将威廉斯氏木药材粉碎，用乙醇水溶液采用回流或渗漉法提取，提取液浓缩至小体积，加盐酸溶解，滤除不溶物，再将酸液调至碱性，用二氯甲烷萃取，萃取液回收试剂得总生物碱；(2)将上述总生物碱采用高速逆流色谱法分离纯化得斯氏木碱。本方法具有所得产品含量高，操作简单，提率高等优点。
文档编号C07H1/08GK102875616SQ20121035991
公开日2013年1月16日 申请日期2012年9月25日 优先权日2012年9月25日
发明者苏刘花 申请人:南京泽朗农业发展有限公司