细胞渗透型抗dna抗体和其抑制dna修复的用途

细胞渗透型抗dna抗体和其抑制dna修复的用途
【专利摘要】提供渗透细胞核并抑制DNA修复或干扰DNA代谢的抗体用于治疗癌症（直接地以及通过使癌细胞对DNA损伤型治疗敏感）或者抑制或预防病毒感染、增殖或代谢。所述方法涉及用含有细胞渗透型抗DNA抗体或其衍生物的组合物处理细胞，单独或与诱导DNA损伤的治疗（例如DNA损伤型化学疗法或放射）组合。细胞渗透型抗DNA抗体或其衍生物的影响在DNA修复不足的癌细胞中得到增强，并且细胞渗透型抗DNA抗体或其衍生物对DNA修复不足的癌细胞具有合成致死性。
【专利说明】细胞渗透型抗DNA抗体和其抑制DNA修复的用途
[0001]相关申请案的交叉引用
[0002]本申请案要求2011年4月I日申请的美国临时申请案第61/470，918号的权利，其以全文引用的方式并入本文中。
[0003]关于联邦政府赞助研究或开发的声明
[0004]本发明是在政府支持下根据国立卫生研究院授予皮特?格雷泽(Peter GlazerMA协议POl CA129186进行。政府拥有本发明的某些权利。
【技术领域】
[0005]本发明大体上是关于用于治疗癌症的抗体疗法领域，并且更特定地是关于细胞渗透型抗DNA抗体用于抑制DNA修复、使细胞对放射疗法和DNA损伤型化学疗法敏感以及选择性地杀死先前已存在DNA修复不足的癌细胞的用途。
【背景技术】
[0006]大部分癌症疗法因非特异性组织毒性所引起的显著副作用而严重受限，并且鉴别对癌细胞具有选择性毒性或者选择性地使肿瘤对治疗敏感的新颖药剂是癌症研究中的重要目标。大量工作集中于将单株抗体的特异性结合活性应用于肿瘤特异性疗法的开发。选择性抗体(例如曲妥珠单抗(trastuzumab)(赫赛(Herceptin?))、利妥昔单抗(rituximab) (.'ΜΡΦΦ (Rituxan?))和西妥昔单抗(cetuximab)(爱必妥繁(Erbitax?)))已获准用于人类癌症疗法中，但其均缺乏渗透到癌细胞中的能力并且因此仅限于攻击位于肿瘤细胞外表面的标靶。
[0007]大量肿瘤特 异性标靶位于细胞和细胞核内，并且多种癌症尤其易受抑制DNA修复的疗法的攻击。
[0008]因此本发明的一个目标是提供抑制DNA修复的细胞渗透型抗体，例如抗DNA抗体。
[0009]本发明的另一个目标是提供提高癌细胞对放射疗法和/或化学疗法的敏感性的组合物。
[0010]本发明的另一个目标是提供细胞渗透型抗体和其衍生物，其对先前已存在DNA修复不足的癌症或其他不合需要的细胞具有选择性毒性，这些细胞通常与家族性综合症有关，这些综合症是由DNA修复基因突变引起，但是也偶尔在DNA修复基因沉默或突变时发生。
[0011]本发明的另一个目标是提供细胞渗透型抗体和其衍生物，其通过扰乱主体DNA修复而预防或者抑制病毒感染、整合和/或复制。

【发明内容】

[0012]已经开发出使用抗DNA抗体渗透细胞核并抑制DNA修复的方法。在优选实施例中，细胞是赘生物，通常是癌细胞，例如癌瘤。治疗癌性或某些受感染细胞的方法涉及使所述细胞与细胞渗透型抗DNA抗体(单独或与其他药剂(例如化学治疗剂或放射)组合)接触。在一些实施例中，所述方法涉及分析受试者或肿瘤中损害DNA修复的一种或多种基因突变或正常基因表达的变化，接着如果鉴别出一种或多种突变或发生改变的表达或功能的模式那么选择抗DNA抗体用于治疗细胞。
[0013]DNA修复受损的细胞是此方法的尤其优良的标靶。在优选实施例中，细胞在与DNA修复、DNA损伤检查点、DNA合成、同源重组或非同源末端接合有关的基因的表达方面存在缺陷或所述基因发生突变。例示性基因包括XRCCUADPRT (PARP-1)、ADPRTL2 (PARP-2)、聚合酶 β、CTPS、MLHl、MSH2、FANCD2、PMS2、p53、p21、PTEN、RPA, RPAl、RPA2、RPA3、XPD、ERCCl、XPF, MMS19、RAD51、RAD51b.、RAD51C、RAD51D、DMCl、XRCCR、XRCC3、BRCAl、BRCA2、PALB2、RAD52、RAD54、RAD50、MRE11、NB51、WRN、BLM、KU70、KU80、ATM、ATR CHKl、CHK2、FANCA、FANCB、FANCC,FANCDI,FANCD2,FANCE,FANCF,FANCG,FANCC,FANCDI,FANCD2,FANCE,FANCF,FANCG,RADl和RAD9。在一些实施例中，存在缺陷的基因是肿瘤抑制基因。举例来说，细胞可能在BRCAl或BRCA2中具有一种或多种突变。
[0014]许多癌症疗法程序(例如化学疗法和放射疗法)通过压制细胞修复DNA损伤的能力，引起细胞死亡来起作用。在一些实施例中，细胞对放射疗法和/或化学疗法具有抗性。还提供了通过向受试者投予含有细胞渗透型抗DNA抗体的组合物来增强放射疗法和/或化学疗法在受试者中的功效的方法。在一些实施例中，抗体提高细胞对放射疗法和/或化学疗法的敏感性。可以通过此方法增强的化学疗法包括损伤DNA或者抑制DNA修复的化学疗法。可以在投予放射疗法和/或化学疗法之前、同时或者之后向受试者投予抗DNA抗体。在优选实施例中，在投予放射疗法和/或化学疗法之前或之后至少两天，更优选地在投予放射疗法和/或化学疗法之前或之后至少一天，甚至更优选地与放射疗法和/或化学疗法同时向受试者投予抗DNA抗体。 [0015]披露了抑制DNA修复的细胞渗透型抗DNA抗体。这些抗体在不借助于载剂或结合物的情况下被转运到 细胞的细胞核中。在一些实施例中，抗DNA抗体可以与单链DNA(ssDNA)、双链DNA (dsDNA)或其组合结合。70%全身性红斑狼疮(SLE)患者中存在对双链DNA具有特异性的抗体，相比之下，无全身性红斑狼疮的人群中仅0.5%的人具有这种抗体。因此，在一些实施例中，从患有SLE的受试者或者患有类似的自体免疫病状的动物(例如小鼠或兔)分离或者获得细胞渗透型抗DNA抗体，接着人类化或重组性表达并且以二聚物或单链抗体形式投予。
[0016]有效的细胞渗透型抗DNA抗体的实例是单株抗DNA抗体3E10或其与3E10结合相同抗原决定基的变异体或片段。在优选实施例中，抗DNA抗体是抗DNA抗体的单链可变片段或其保守性变异体。举例来说，抗DNA抗体可以是3E10的单链可变片段(3E10scFV)或其保守性变异体。3E10scFv优选地以从哺乳动物细胞中的表达载体(例如酵母，例如毕赤酵母(Pichia pastoris))表达的重组型蛋白质形式产生。
[0017]在优选实施例中，抗体与由ATCC寄存编号PTA2439融合瘤产生的单株抗体3E10具有相同的抗原决定基特异性。此可以通过产生含有单株抗体3E10的抗体结合部位的重组型抗体来实现。或者，此可以通过由从患有自体免疫疾病(例如SLE)的人类受试者或小鼠或其他实验动物分离的淋巴细胞产生融合瘤来实现。合适抗体包括全长抗体、单链抗体和抗体片段。抗体还可以是双特异性单株抗体，其特异性结合细胞的细胞核中的第二治疗标靶。举例来说，在一些实施例中，抗体特异性结合细胞的细胞核中的蛋白质，例如DNA修复蛋白、DNA复制蛋白、DNA损伤反应蛋白、细胞周期调节蛋白、DNA损伤检查点蛋白、细胞凋亡调节蛋白或应力反应蛋白。这些类别中的例示性标靶分别包括RAD52蛋白、共济失调毛细血管扩张突变蛋白(ATM)、CHK2或CHKl蛋白、BCL2蛋白、热休克蛋白70 (HSP70)、Myc蛋白和Ras蛋白。
[0018]在一个优选实施例中，细胞渗透型抗DNA抗体是以单位剂量形式以有效抑制癌症中的DNA修复的量提供，其可以包括处于同一个小瓶中或分别处于试剂盒中的药学上可接受之赋形剂，其中抗体以有效抑制癌细胞中的DNA修复的量存在。在优选实施例中，抗体是以约 200mg/m2 到约 1000mg/m2，包括约 200、250、300、350、400、450、500、600、700、800、900 或1000mg/m2的量存在。在一些实施例中，医药组合物是呈用于静脉内注射的单位剂型形式。在一些实施例中，医药组合物是呈用于瘤内注射的单位剂型形式。
[0019]医药组合物(例如剂量单元)可以更含有其它治疗剂或者与其他治疗剂一起提供在试剂盒中。举例来说，其它治疗剂可以是抗肿瘤剂、放射增敏剂或其组合。抗肿瘤剂优选地损伤DNA或抑制DNA修复。在一些实施例中，抗肿瘤剂是顺钼(cisplatin)、环磷酰胺(Cytoxan)、阿霉素(doxorubicin)、甲氨蝶呤(methotrexate)、丝裂霉素C(mitomycin C)、氮芥(nitrogen mustard)、核糖核苷酸还原酶抑制剂(例如羟基脲)、替拉扎明(tirapazamine)、替莫唑胺(temozolomide)或拓扑异构酶抑制剂(例如喜树碱(camptothecin))。
[0020]可以存在于医药组合物中的放射增敏剂的非限制性实例包括顺钼、阿霉素、吉西他滨(gemcitabine)、5_氟尿嘧唳(5-fluorouracil)、PARPl抑制剂、组织蛋白脱乙酰基酶抑制剂、蛋白酶体抑制剂、表皮生长因子受体(EGFR)抑制剂、胰岛素样生长因子-1 (IGF-1)受体抑制剂、CHKl抑制剂、mTOR抑制剂、激酶抑制剂、己酮可可碱(pentoxifylline)和长春瑞滨(vinorelbine)。
[0021]医药组合物(例如剂量单元)可更含有一种或多种用于治疗癌症的治疗性单株抗体。在优选实施例中，治疗性单株抗体是贝伐珠单抗(bevacizumab)、西妥昔单抗(cetuximab)、利妥昔单抗 (rituximab)、曲妥珠单抗(trastuzumab)或其组合。
【专利附图】

【附图说明】
[0022]图1A是3E10单链抗体可变片段(3E10scFv)的示意图,此片段由通过连接结构域(LD)接合的3E10轻链和重链的可变区组成。添加Myc和His6标签以便进行检测和纯化。3E10scFv渗入癌细胞的细胞核中(在Skov-3卵巢癌细胞用5 μ M3E10scFv处理30分钟接着固定并用抗Myc抗体染色的情况下证明)。图1B是柱状图，其显示当存在对照缓冲液(柱I和柱3)或10 μ M3E10Fv (柱2和柱4)时用OGy (柱1_2)或4Gy (柱3_4)照射的U251人神经胶质瘤细胞的克隆源性存活(与对照物相比的存活分数)。误差条表示重复实验的标准误差。图1C-1D是显示当存在(虚线)或不存在(实线)10yM3E10scFv时U87人神经胶质瘤细胞的细胞死亡(％，通过碘化丙锭萤光测量)随阿霉素(Dox) (0-250nM)(图1E)或太平洋紫杉醇(paclitaxel) (0_2.5nM)(图1F)的变化的图形。
[0023]图2A说明3E10-DNA结合实验中使用的DNA受质的不同构造。图2B是显示在与递增浓度的3E10 (0-1 μ M)—起培育后当存在(实线)或不存在(虚线)由3Ε10结合的自由单链尾端(tail)时经放射性标记的 寡核苷酸的百分比(％)(通过凝胶迁移率变动分析确定)。这些结合曲线得出当存在和不存在自由单链尾端时3E10与受质结合的Kd分别是0.2 μ M和
0.4 μ M0图2C-2H呈现各DNA构造的个别3E10-DNA结合曲线。图21是柱状图，其显示当存在对照缓冲液(空心柱)或20 μ Μ3Ε10 (实心柱)时与所需的修复酶一起培育的合成性经放射性标记的双螺旋DNA受质中的单链断裂/碱基切除修复(BER) (η+1产物％表示不完全修复中间物的比例，其中已将核苷酸添加到有间隙的双螺旋分子中，但未修复剩余单链断裂以便产生全长产物)。在所示时间点时停止修复反应，并且通过凝胶电泳和自动放射线照相对η、η+1和双螺旋反应产物进行定量。
[0024]图3Α是试管内DNA链交换分析法的示意图。图3Β和3C是柱状图，其显示递增剂量的3Ε10 (0-35 4 10对使用野生型11狀051蛋白(图38)或变异体11狀0511(1331?(图3C)的RAD51介导的链交换的影响。hRAD51K133R变异体与野生型蛋白质相比对于链交换的活性甚至更高，因为其未使ATP水解。3E10抑制野生型RAD51和hRAD51K133R变异体的链交换。
[0025]免疫荧光图象说明当存在对照缓冲液或10 μ M3E10scFv时用2Gy照射后24小时，每个U251神经胶质瘤细胞中的DNA双链断裂(YH2AX聚集点)。图3D是柱状图，其显示当存在对照缓冲液(空心柱)或10 μ M3E10scFv (实心柱)时用2Gy照射后24小时，每个U251神经胶质瘤细胞中DNA双链断裂(YH2AX聚集点)的平均数目。误差条表示标准误差。
[0026]图4A-4B是柱状图，其通过处理后1_2周测量的集落形成显示用对照缓冲液(空心柱)或10 μ M3E10scFv (实心柱)处理的BRCA2健全型(图4A)或BRCA2不足型(图4B)人卵巢癌细胞的克隆源性存活(与对照物相比的存活分数)。图4C是显示用3Ε10%Ρν(0-2μΜ)处理的BRCA2不足型(PEOl)和BRCA2健全型(ΡΕ04)人卵巢癌细胞的细胞死亡％的图形。在处理后三天通过CellTftefGk--荧光(其报导ATP含量作为代谢活性细胞的测量值)评估3E10scFv对细胞存活的影响。误差条表示六次测量的平均值的标准误差。图4D是显示用对照缓冲液或3E10scFV处理的BRCA2不足型CAPANl/neo细胞(人胰腺癌细胞)的克隆源性存活(通过集落形成测量的与对照物相比的存活 分数)。图4E是显示用O μ M、2.5 μ Μ、5 μ M或10 μ M完全3Ε10抗体处理的BRCA2不足型(虚线)或BRCA2健全型(实线)人卵巢癌细胞的细胞死亡(％)的图形。图4F和4G是柱状图，其显示用对照缓冲液(柱1)、10μΜ3Ε10 (柱2)、3ηΜ阿霉素(Dox)(柱3)或10 μ Μ3Ε10+3ηΜ阿霉素(柱4)处理的BRCA2不足型(图4G)或BRCA2健全型(图4F)人卵巢癌的细胞死亡(％)。
[0027]图5是柱状图，其显示通过腹膜内注射对照缓冲液(柱I)、单独3Ε10抗体(0.Smg于0.5mL PBS中，10 μ Μ)(柱2)、单独阿霉素(Dox) (80μ g/kg)(柱3)或3E10和阿霉素(柱4)进行皮下注射处理的SCID小鼠中产生的U87神经胶质瘤的肿瘤体积(增加％)。各处理组包含4只小鼠。注射后三天，通过测量肿瘤生长来评估处理的影响。
[0028]图6A是显示人神经胶质瘤异种移植小鼠中肿瘤体积(mm3)随时间(天)变化的图形，这些小鼠是在U87细胞植入后二十六天(肿瘤已经生长到约IOOmm3的平均尺寸)通过腹膜内注射对照性PBS缓冲液(实心菱形和三角形)或3E10 (Img于PBS中)(空心菱形和三角形)来处理，24小时后重复再次进行上述注射，接着在第二次注射后用OGy (菱形)或SGy(三角形)照射2小时。
[0029]图6B呈现各组中无疾病进展存活率的卡普兰-麦尔(Kaplan-Meier)曲线。无疾病进展存活率定义为肿瘤尺寸与基线尺寸相比未增加达到超过三倍的存活率。基线尺寸定义为在抗体处理前一天的肿瘤尺寸，其表示为图6A中的第25天和图6B中的第O天。用8Gy处理的肿瘤中肿瘤增至三倍的时间(肿瘤体积增加达到基线的三倍所需的时间)是9.5±0.5天，相比之下，用8Gy+3E10处理的肿瘤的肿瘤增至三倍的时间是13.7±1.8天(p=0.04)。但是，与单独对照缓冲液相比，单独3E10对U87肿瘤无影响，对照性肿瘤的肿瘤增至三倍的时间是6.8±0.7天，而相比之下，用单独3E10处理的肿瘤的肿瘤增至三倍的时间是 6.5±0.3 天(p=0.67)。
【具体实施方式】
[0030]1.定义
[0031]术语“抗体”是指选择性结合靶抗原的天然或合成抗体。所述术语包括多株和单株抗体。除完整免疫球蛋白分子之外，术语“抗体”还包括这些免疫球蛋白分子的片段或聚合物，和选择性结合靶抗原的免疫球蛋白分子的人或人类化型式。
[0032]术语“细胞渗透型抗DNA抗体”是指被转运到活哺乳动物细胞的细胞核中并且特异性结合DNA (例如单链和/或双链DNA)的抗体。在优选实施例中，抗体是在不借助于载剂或结合物的情况下被转运到细胞的细胞核中。在其它实施例中，抗体与细胞渗透型部分(例如细胞渗透型肽)结合。
[0033]术语“特异性结合”是指抗体与其同源抗原(例如DNA)结合而不与其它抗原显著结合。优选地，抗体以大于约 105mol 1 (例如 106mol \ 107mol 'IO8Iiiol \ 109mol \ 1010mol \IO11mOr1和1l2Hior1或更大)的与该第二分子的亲和力常数(Ka)与所述抗原“特异性结
么”
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[0034]术语“单株抗体”或“MAb”是指从实质上同类的抗体群获得的抗体，即除了一小群抗体分子中可能存在的天然突变外，所述群内的个别抗体是相同的。
[0035]术语“DNA修复”是指细胞用来鉴别和矫正对DNA分子的损伤的一系列过程。通过碱基切除修复(BER)、核苷酸切除修复(NER)或错配修复(MMR)来修复单链缺陷。通过非同源末端接合(NHEJ)、微同源介导的末端接合(MMEJ)或同源重组来修复双链断裂。在DNA损伤后，细胞周期检查点被活化，其暂停细胞周期以便为细胞提供时间修复损伤，随后继续分裂。检查点介体蛋白包括 BRCAl、MDCl、53BP1、p53、ATM、ATR、CHKl、CHK2 和 p21。
[0036]术语“受损DNA修复”是指其中突变细胞或基因表达发生改变的细胞不能进行DNA修复或其中一种或多种DNA修复路径的活性降低或与野生型细胞相比修复其DNA损伤所需的时间更长的状态。
[0037]术语“化学敏感性”是指癌细胞对抗癌药作用的相对敏感性。癌细胞的化学敏感性越高，杀死这种癌细胞所 需的抗癌药越少。
[0038]术语“放射敏感性”是指细胞对电离放射的不良作用的相对敏感性。细胞的放射敏感性越高，杀死这种细胞所需的放射越少。通常，已经发现细胞放射敏感性与细胞分裂速率成正比并且与细胞的DNA修复能力成反比。
[0039]术语“抗放射性”是指当暴露于临床合适剂量的放射时不会死亡的细胞。
[0040]术语“赘生性细胞”是指发生异常细胞增殖(“瘤形成”)的细胞。赘生性细胞的生长过度并且与其周围的正常组织不协调。这种生长通常即使在刺激停止后仍然持续按相同过度方式进行，并且通常引起肿瘤形成。
[0041]术语“肿瘤”或“赘生物”是指含有赘生性细胞的异常组织块。赘生物和肿瘤可以是良性的、恶化前的或恶性的。
[0042]术语“癌症”或“恶性赘生物”是指显示生长不受控、对相邻组织的侵袭并且通常转移到身体其他位置的细胞。
[0043]术语“抗肿瘤药”是指可以抑制或预防癌症发展、侵袭和/或转移的组合物，例如药物或生物制品。
[0044]术语“抗癌部分”是指可以与所披露的抗DNA抗体组合以便增强所述抗体的抗癌性质的任何药剂，例如肽、蛋白质、核酸或小分子。所述术语包括抗肿瘤药、结合并抑制癌细胞中其他治疗标靶的抗体以及对癌细胞具有亲和力以便定向靶向癌细胞的物质。
[0045]术语“病毒转型细胞”是指已经受病毒感染或者其基因组中已经并入病毒DNA或RNA的细胞。病毒可以是急性转型或慢性转型致癌病毒。在急性转型病毒中，病毒粒子载运编码活性过度的致癌基因的基因(称为病毒-致癌基因(v-onc))，并且一旦v-onc被表达，则受感染细胞发生转型。相比之下，在慢性转型病毒中，将病毒基因组插入宿主基因组中原致癌基因附近。例示性致癌病毒包括人乳头状瘤病毒(HPV)、B型肝炎(HBV)、C型肝炎(HCV)、人亲T淋巴细胞性病毒(HTLV)、与卡堡氏肉瘤(Kaposi’s sarcoma)有关的疱疹病毒(HHV-8)、梅克尔细胞(Merkel cell)多瘤病毒、埃-巴二氏病毒(Epstein-Barr virus ；EBV)、人免疫缺陷病毒(HIV)和人巨细胞病毒(CMV)。
[0046]病毒感染细胞是指已经暴露于病毒或受病毒感染或携带病毒遗传物质(RNA或DNA)的细胞。病毒可以是致癌病毒或裂解病毒或潜伏性病毒并且会引起癌症、免疫缺陷、肝炎、脑炎、肺炎、呼吸道疾病或其它疾病病状。早先已证实逆转录酶病毒(特别是HIV)在某种程度上依赖于碱基切除修复(BER)路径来整合到宿主DNA中。3E10抑制DNA修复的能力提供了一种机制，使3E10和其它抗DNA抗体可以改善病毒引起的疾病，特别是通过干扰DNA修复并且由此通过阻断DNA或RNA代谢(其是病毒生命周期的一部分以及细胞病毒感染的一部分)。实例证明3E10抑制BER路径，支持抑制所述反转录病毒的感染性的功效。
[0047]术语“个体”、“宿主”、“受试者”和“患者”可以互换地使用，是指作为投药或治疗对象的任何个体。受试者可以是脊椎动物，例如哺乳动物。因此，受试者可以是人或兽医学患者。
[0048]术语“治疗有效性”意指所使用的组合物量是足以改善疾病或病症的一种或多种病因或症状的量。所述改善仅需减轻或改变，而不一定是消除。用于治疗癌症的组合物的治疗有效量优选地是足以引起肿瘤消退或使肿瘤对放射或化学疗法敏感的量。
[0049]术语“药学上可接受”是指不会在生物学或其它方面不合需要的物质，即所述物质可以被投予个体而不会引起任何不合需要的生物学作用或通过有害的方式与含有它的医药组合物中的任一种其它组分相互作用。如本领域的普通技术人员所熟知，将容易地选择载剂以便使活性成分的任何降解最少以及使个体中的任何不良副作用最少。
[0050]术语“治疗”是指意图治愈、改善、稳定或预防疾病、病理学病状或病症的对患者的医学管理。此术语包括积极治疗，即治疗特别针对疾病、病理学病状或病症的改善，并且还包括病因治疗，即治疗针对去除相关疾病、病理学病状或病症的病因。此外，此术语包括姑息治疗，即治疗被设计成 用于缓解症状而非治愈疾病、病理学病状或病症；预防性治疗，即治疗针对最小化或部分抑制或完全抑制相关疾病、病理学病状或病症的发展；和支持治疗，即治疗用于补充另一种针对改善相关疾病、病理学病状或病症的特定治疗。[0051]术语“抑制”意指降低活性、反应、病状、疾病或其它生物参数。此术语可以包括(但不限于)完全消除活性、反应、病状或疾病。此术语还可以包括(例如)使活性、反应、病状或疾病与原始或对照程度相比降低10%。因此，与原始或对照程度相比，降低程度可达10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、100% 或其间的任何降低量。
[0052]“融合蛋白”是指通过接合两个或多于两个多肽而形成的多肽，所述接合是通过一个多肽的氨基末端与另一个多肽的羧基末端之间形成的肽键进行。融合蛋白可以通过成分多肽的化学偶合而形成或者其可以表达为来自编码单一相连融合蛋白的核酸序列的单一多肽。单链融合蛋白是具有单一相连多肽主结构的融合蛋白。融合蛋白可以使用分子生物学中的常规技术通过将两个基因同框接合到单一核酸序列中接着在产生融合蛋白的条件下在合适的宿主细胞中表达核酸来制备。
[0053]I1.组合物
[0054]A.抗 DNA 抗体
[0055]披露用于增强靶细胞对化学疗法和/或放射的敏感性的细胞渗透型抗DNA抗体。经常在全身性红斑狼疮(SLE)患者的血清中发现针对单链或双链脱氧核糖核酸(DNA)的自身抗体并且它们通常与疾病发病机理有关。因此，在一些实施例中，可以从SLE患者获得或分离抗DNA抗体。在优选实施例中，抗DNA抗体是单株抗体或者其片段或变异体。存在DNA反应性循环自身抗体(抗DNA抗体)是全身性红斑狼疮(SLE)患者中的标志性实验室发现。尽管抗DNA抗体在SLE中的确切作用尚不清楚，但已经表明所述抗体在SLE病理生理学中起积极作用。在二十世纪九十年代早期，在针对SLE的实验疫苗疗法中测试鼠类狼疮抗DNA抗体3E10。这些工作的目的在于开发抗个体基因型抗体，其将特异性结合SLE患者中的抗DNA抗体。但是，意外发现3E10可以渗透到活细胞和细胞核中而不引起任何可观测到的细胞毒性(韦斯巴特RH (Weisbart RH)等人，免疫学杂志(J Immunol.) 1990144 (7):2653-2658 ;扎克 DJ (Zack DJ)等人，免疫学杂志 1996157 (5):2082-2088)。对 SLE 疫苗疗法中3E10的研究接着 被集中于开发用于将治疗分子转运到细胞和细胞核中的分子递送工具的3E10的努力所替代。也报告了其它抗体能够渗透细胞。
[0056]3E10抗体和其单链可变片段(3E10scFv)渗透到细胞和细胞核中并且已证实其能够通过化学结合或重组型融合来转运连接到所述抗体的治疗性蛋白货物。通过3E10或3E10scFv递送到细胞的蛋白货物包括过氧化氢酶、p53和Hsp70 (韦斯巴特RH等人，免疫学杂志 2000164 =6020-6026 ;汉森 JE (Hansen JE)等人，癌症研究(Cancer Res.) 2007 年2 月 15 日；67 (4):1769-74 ;汉森 JE 等人，脑部研究(Brain Res.)2006 年 5 月 9 日；1088(I): 187-96)。3E10scFv在活体内有效地介导将Hsp70递送到神经元并且由此降低大鼠中风模型中的大脑梗塞体积和改良神经功能(詹X (Zhan X)等人，中风学(Stroke)，201041(3):538-43)。
[0057]现已发现3E10和3E10scFv在不与任何治疗性蛋白质结合的情况下可以增强癌细胞放射敏感性和化学敏感性并且此作用在DNA修复不足的细胞中得到增强。此外，3E10和3E10scFv即使在不进行放射或化学疗法的情况下仍对DNA修复不足的癌细胞有选择性致死性。美国食品和药物管理局(FDA)已经建立开发单株抗体用于人类疗法的途径，并且FDA已经批准将3E10用于I期人类临床试验，此试验被设计成测试3E10在针对SLE的实验疫苗疗法中的功效(斯佩尔蒂尼F (Spertini F)等人,风湿病学杂志(J Rheumatol) 1999, 26(12):2602-8)。因此，这些类型的抗体可以用于DNA修复不足的癌症的靶向疗法以及针对癌症的新靶向疗法以便增强DNA修复健全型癌症以及DNA修复不足型癌症中的其他癌症治疗形式。
[0058]已知其它细胞渗透型抗体(均天然存在于SLE患者中)并且通过筛选抗体文库或已知细胞渗透型抗体的衍生化作用来获得。在一些实施例中，抗DNA抗体与细胞渗透型部分(例如细胞渗透型肽)结合以便有助于进入细胞中和转运到细胞核。细胞渗透型肽的实例包括(但不限于)聚精氨酸(例如R9)、触角足(Antennapedia)序列、TAT、HIV-Tat,穿膜肽(Penetratin)、Antp-3A (Antp突变体)、蟾蜍肽II (Buforin II)、细胞穿透肽(Transportan)、MAP (模型两性肽)、K-FGF、Ku70、朊病毒、pVEC、Pep-1、SynB1、Pep-7、HN-1、BGSC (双胍盐-亚精胺-胆固醇^PBGTC (双胍盐-三氨乙基胺-胆固醇)。在其它实施例中，使用TransMabs?技术(不列颠哥伦比亚省温哥华市的英钠克斯生物技术公司(InNexusBiotech., Inc., Vancouver, BC))修饰抗体。
[0059]在优选实施例中，抗DNA抗体是在不借助于载剂或结合物的情况下被转运到细胞的细胞核中。举例来说，在活体内被转运到哺乳动物细胞的细胞核中而无细胞毒素作用的单株抗体3E10和其活性片段披露于颁予理查德.韦斯巴特(Richard Weisbart)的美国专利第4，812，397号和第7，189，396号中，其描述3E10抗体以及产生和修饰3E10抗体的方法。简单地说，可以根据已知技术通过使来自抗DNA抗体的血清含量升高的宿主(例如MRL/lpr小鼠)的脾细胞与骨髓瘤细胞融合或者通过用合适的转型载体使脾细胞转型以便使细胞永生化来制备抗体。可以在选择性培养基中培养细胞并且进行筛选以便选择结合DNA的抗体。
[0060]可以使用的抗体包括任何类别的完全免疫球蛋白(即完整抗体)、其片段和至少含有抗体的抗原结合可变域的合成蛋白质。可变域在抗体间序列不同并且用于各特定抗体针对其特定抗原的结合和特异性。但是，可变性通常并不在抗体的可变域内均匀分布。其通常集中于称为互补决定区(CDR`)或高变区(均位于轻链和重链可变域中)的三个区段中。可变域中保守性更高的部分被称为构架(FR)。原生重链和轻链的可变域各包含四个FR区域，其主要呈β片状构造，由三个⑶R连接，其形成环连接并且在一些情况下形成β片状结构的一部分。各链中的⑶R通过FR区域保持紧密靠近在一起并且与来自另一条链的⑶R —起贡献抗体的抗原结合位点的形成。因此，抗体至少含有渗透细胞、保持DNA结合和/或干扰DNA修复的⑶R组分。3Ε10的可变区含有所有三种性质。
[0061]还披露具有生物活性的抗体片段。片段(无论是否连接到其它序列)包括插入、缺失、取代或特定区域或特异性氨基酸残基的其他所选修饰，只要与未经过修饰的抗体或抗体片段相比不显著改变或损害片段的活性即可。
[0062]还可以修改技术以便用于产生对抗原性蛋白质具有特异性的单链抗体。本领域的普通技术人员熟知用于产生单链抗体的方法。可以通过使用短肽连接子使重链和轻链的可变域融合在一起，由此在单一分子上重新构成抗原结合位点来产生单链抗体。已经在不显著破坏抗原结合或结合特异性的情况下产生单链抗体可变片段(scFv)，其中一个可变域的C端通过具有15个到25个氨基酸的肽或连接子系到另一个可变域的N端。选择连接子以允许重链和轻链按照其合适的构造定向结合在一起。
[0063]可以修饰抗DNA抗体以便改良其治疗潜力。举例来说，在一些实施例中，细胞渗透型抗DNA抗体与另一种抗体结合，所述另一种抗体对癌细胞的细胞核中的第二治疗标靶具有特异性。举例来说，细胞渗透型抗DNA抗体可以是融合蛋白，其含有3E10scFv和特异性结合第二治疗标靶的单株抗体的单链可变片段。在其它实施例中，细胞渗透型抗DNA抗体是双特异性抗体，其具有来自3E10的第一重链和第一轻链以及来自特异性结合第二治疗标靶的单株抗体的第二重链和第二轻链。
[0064]可以通过连接两个scFv来工程改造出二价单链可变片段(二-scFv)。此可以通过产生具有两个VH和两个VL区域的单肽链从而产生串联scFv来进行。ScFv也可以被设计成具有对于使两个可变区折叠在一起来说太短的连接肽(约五个氨基酸)，从而迫使scFv发生二聚。此类型被称为双功能抗体。已经证实双功能抗体的解离常数比相应scFv低高达40倍，表明其对其标靶的亲和力高得多。更短的连接子(一个或两个氨基酸)引起形成三聚物(三功能抗体)。四功能抗体亦己被产生。其与双功能抗体相比对其标祀呈现出甚至更高的亲和力。
[0065]抗体的治疗功能可以通过使抗体或其片段与治疗剂偶合来增强。所述抗体或片段与治疗剂的偶合可以通过形成免疫结合物或形成融合蛋白，或通过使抗体或片段连接到核酸(例如siRNA)或小分子(包含抗体或抗体片段和治疗剂)来实现。
[0066]重组型融合蛋白是通过融合基因的遗传工程改造而产生的蛋白质。此通常涉及从编码第一个蛋白质的cDNA序列去除终止密码子，接着通过接合或重叠扩展PCR同框连接第二个蛋白质的cDNA序列。DNA序列接着将被细胞表达成单一蛋白质。蛋白质可以被工程改造成包括两种原始蛋白质的完全序列或任一蛋白质的一部分序列。如果两个实体是蛋白质，那么通常还添加连接子(或“间隔基”)肽，其使蛋白质更有可能独立地折叠并且按预期起作用。
[0067]本领域中熟知将非人类抗体人类化的方法。通常，人类化抗体中引入有一个或多个来自非人类来源的氨基酸残基。这些非人类氨基酸残基通常被称为“输入”残基，其通常是从“输入”可变域获得。抗体人类化技术通常涉及使用重组DNA技术操作编码抗体分子中一个或多个多肽链的DNA序列。
[0068]在一些实施例中，修饰细胞渗透型抗体以便改变其半衰期。在一些实施例中，需要延长抗体的半衰期以使其在循环中或在治疗位点处存在更长的时间。举例来说，当单独使用抗DNA抗体治疗癌症(例如DNA修复受损的癌细胞)时，可能需要长时间保持循环或治疗位置中抗体的效价。在其它实施例中，缩短抗DNA抗体的半衰期以便降低潜在副作用。举例来说，当抗体与放射疗法或化学疗法结合使用时，抗体优选地在放射或抗肿瘤药治疗期间以高剂量存在于循环中，但在其它时间则快速地从循环中去除。预期抗体片段(例如3E10scFv)的半衰期比全尺寸抗体短。其它改变半衰期的方法已知并且可用于所述方法中。举例来说，抗体可以用延长半衰期的Fe变异体工程改造，例如使用Xtend?抗体半衰期延长技术(加利福尼亚州蒙罗维亚的先科公司(Xencor, Monrovia, CA))。
[0069]B.癌症和病毒转型细胞
[0070]抗体可用于治疗发生生长失调、侵袭或转移的细胞。DNA修复受损的癌细胞是细胞渗透型抗DNA抗体的尤其优良的对象。在一些实施例中，细胞渗透型抗DNA抗体对DNA修复受损的细胞具有致死性。在优选实施例中，细胞在与DNA修复、DNA合成或同源重组有关的基因表达方面存在缺陷。例示性基因包括XRCCl、ADPRT (PARP-1)、ADPRTL2 (PARP-2)、聚合酶 β、CTPS, MLH1、MSH2、FANCD2、PMS2、ρ53、ρ21、PTEN、RPA, RPAl、RPA2、RPA3、XPD、ERCCU XPF、MMS19、RAD51、RAD51B、RAD51C、RAD51D、DMCU XRCCR、XRCC3、BRCAU BRCA2、PALB2、RAD52、RAD54、RAD50、MREl1、ΝΒ51、WRN、BLM、KU70、KU80、ATM、ATR CFIKl、CHK2、FANCA、FANCB、FANCC、FANCD1、FANCD2、FANCE、FANCF、FANCG、FANCC、FANCD1、FANCD2、FANCE、FANCF、FANCG、RAD1和RAD9。在一些实施例中，存在缺陷的基因是肿瘤抑制基因。在优选实施例中，细胞的BRCAl或BRCA2中具有一个或多个突变。基因突变(例如BRCAl和BRCA2突变)可以使用标准PCR、杂交或定序技术鉴别。
[0071] 因此，在一些实施例中，抗DNA抗体可以用于治疗由DNA修复不足型家族性综合症引起的癌症，例如乳癌、卵巢癌和胰腺癌。在这些实施例中，抗DNA抗体可以在无放射疗法或化学疗法的情况下有效。举例来说，抗DNA抗体可以用于治疗与BRCAl、BRCA2、PALB2或RAD51B、RAD51C、RAD51D或相关基因中的突变有关的癌症。抗DNA抗体还可以用于治疗跟与DNA错配修复有关的基因(例如MSH2、MLHU PMS2和相关基因)中的突变有关的结肠癌、子宫内膜肿瘤或脑肿瘤。抗DNA抗体还可以用于治疗伴有DNA修复基因(例如BRCAUMLH1或RAD51B、RAD51C或RAD51D)沉默的癌症。在这些优选实施例中，抗DNA抗体抑制DNA修复的能力与这些癌症固有的修复不足相组合便足以诱导细胞死亡。
[0072]因此，在一些实施例中，抗DNA抗体可以用于治疗病毒转型细胞，例如受致癌病毒感染的细胞。病毒转型可以迫使细胞发生表达型变化，例如高饱和密度、不依赖于锚定的生长(anchorage-1ndependent growth )、接触抑制损失、定向生长损失、永生化和细胞骨架分裂。细胞转型需要细胞内持续存在病毒基因组的至少一部分。此可以通过从多种病毒基因(例如致癌基因)持续表达来实现。这些基因可能干扰细胞的信号传导途径，引起观测到的细胞的表型变化。在一些情况中，将病毒基因组插入宿主基因组中原致癌基因附近。最终结果是转型细胞显示细胞分裂增加，其对病毒是有利的。在一些实施例中，病毒转型、病毒感染和/或代谢依赖于DNA修复机制。在这些实施例中，使用所披露的抗DNA抗体抑制DNA修复也抑制细胞中的病毒转型、病毒感染和/或代谢。
[0073]在一些实施例中，病毒转型、病毒感染和/或代谢依赖于作为病毒生命周期的一部分的病毒编码RNA或DNA的代谢，产生容易被3E10或其它抗DNA抗体结合和/或抑制的中间物。在这些实施例中，用所披露的抗DNA抗体进行的治疗也抑制细胞中的病毒转型、病毒感染和/或代谢。
[0074]早先已发现慢病毒(例如HIV)的感染和整合依赖于宿主BER活性(约德(Yoder)等人，公共科学图书馆?综合(PLoS 0ne)，2011年3月，6 (3)el7862)。此外，共济失调-微血管扩张突变型(ATM) DNA损伤反应似乎对HIV复制比较关键(刘(Lau)等人，自然细胞生物学(Nat Cell Biol),20057 (5):493_500)。在一些实施例中，反转录病毒(包括慢病毒、HIV)感染和整合依赖于宿主DNA修复机制。在这些实施例中，用所披露的抗DNA抗体进行的治疗也可以抑制病毒感染/整合和抑制病毒生命周期中的再感染。
[0075]在一些实施例中，慢病毒(HIV)复制依赖于DNA修复。在这些实施例中，用所披露的抗DNA抗体进行的治疗也可以抑制病毒复制和抑制病毒生命周期中的再感染。因此，抗DNA抗体可以用于治疗受病毒(例如致癌病毒)感染的细胞。在一些实施例中，抗体抑制病毒转型、复制、代谢或其组合。会受抗DNA抗体影响的例示性致癌病毒包括人乳头状瘤病毒(HPV)、B型肝炎(HBV)、C型肝炎(HCV)、人亲T淋巴细胞性病毒(HTLV)、卡堡氏肉瘤相关疱疹病毒(HHV-8)、梅克尔细胞多瘤病毒、埃-巴二氏病毒(EBV)、人免疫缺陷病毒(HIV)和人巨细胞病毒(CMV)。抗DNA抗体也可以用于治疗潜伏性病毒。在一些实施例中，受感染细胞设置针对病毒(例如HSV-1)的DNA损伤反应的失效有助于产生潜伏期。因此这些受病毒感染细胞的DNA修复受损并且对用抗DNA抗体进行的治疗敏感。例示性潜伏性病毒包括CMV、EBV、单纯疱疹病毒(I型和2型)以及水痘带状疱疹病毒。
[0076]抗DNA抗体也可以用于治疗由病毒引起的病毒感染，这些病毒会引起癌症、免疫缺陷、肝炎、脑炎、肺炎、呼吸道疾病或其它疾病病状，借助于抗体结合DNA和干扰DNA修复或RNA代谢(其是病毒生命周期的一部分)的能力。
[0077]生命周期或所引起的感染的症状可能受到抗体投药影响的代表性病毒包括人乳头状瘤病毒(HPV)、B型肝炎(HBV)、C型肝炎(HCV)、人亲T淋巴细胞性病毒(HTLV)、卡堡氏肉瘤相关疱疹病毒(HHV-8)、梅克尔细胞多瘤病毒、埃-巴二氏病毒(EBV)、人免疫缺陷病毒(HIV)和人巨细胞病毒(CMV)。
[0078]其它可能受:到抗体投药影响的病毒包括细小病毒、痘病毒、疱疫病毒和其它DNA
病毒:
[0079]
【权利要求】
1.一种抑制赘生细胞或暴露于病毒的细胞或受感染细胞中DNA修复的方法，其包含使所述细胞与包含细胞渗透型抗DNA抗体的医药组合物接触,所述细胞渗透型抗DNA抗体增强DNA损伤或干扰DNA代谢。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述赘生细胞是从由以下各项所构成的族群中选出的癌细胞:肉瘤、淋巴瘤、白血病、癌瘤和腺癌、胚细胞瘤、生殖细胞肿瘤、神经胶质瘤、神经内分泌肿瘤、黑素瘤、横纹肌样瘤、胚胎性瘤、神经外胚层肿瘤、类癌瘤、颅咽管瘤、组织细胞瘤、髓上皮瘤、间皮瘤、多发性骨髓瘤、慢性骨髓增生性疾病、原始神经外胚层肿瘤、唾液腺肿瘤、胸腺瘤、胸腺癌瘤、甲状腺癌和威耳姆士瘤。
3.根据权利要求1所述的方法，其中所述细胞具有抗放射性。
4.根据权利要求1所述的方法，其中所述细胞对化学疗法具有抗性。
5.根据权利要求1所述的方法，其中所述细胞具有固有性存在缺陷的或不足的DNA修复。
6.根据权利要求1所述的方法，其中所述细胞暴露于具有或引起DNA修复缺陷或不足的病毒或受到所述病毒感染，或所述病毒依赖于宿主DNA修复途径进行感染、整合或复制。
7.根据权利要求6所述的方法，其中所述细胞暴露于慢病毒或受慢病毒感染。
8.根据权利要求1所述的方法，其中所述细胞具有从由以下各项所构成的族群中选出的DNA修复基因的一种或多种突变或异常表达:XRCC1、ADPRT(PARP-1 )、ADPRTL2(PARP-2)、聚合酶 β、CTPS, MLH1、MSH2、FANCD2、PMS2、p53、p21、PTEN、RPA, RPAl、RPA2、RPA3、XPD,ERCCl、XPF, MMS19、RAD51、RAD51b.、RAD51C、RAD51D、DMCl、XRCCR、XRCC3、BRCAl、BRCA2、PALB2、RAD52、RAD54、RAD50、MRE11、NB51、WRN、BLM、KU70、KU80、ATM、ATR CHK1、CHK2、FANCA、FANCB、FANCC、FANCD1、FANCD2、FANCE、FANCF、FANCG、FANCC、FANCD1、FANCD2、FANCE、FANCF、FANCG、RADl 和 RAD9。
9.根据权利要求1所述的方法，其中所述细胞具有存在缺陷的肿瘤抑制基因，例如BRCAl 或 BRCA2。
10.根据权利要求1所述的方法，其中所述细胞是缺氧肿瘤的一部分。
11.根据权利要求1所述的方法，其中所述抗体是与放射增敏剂组合投予。
12.根据权利要求11所述的方法，其中所述放射增敏剂是从由以下各项所构成的族群中选出:顺钼(cisplatin)、阿霉素(doxorubicin)、吉西他滨(gemcitabine)、5-氟尿嘧唳(5-fluorouraCil)、PARPl抑制剂、组织蛋白脱乙酰基酶抑制剂、蛋白酶体抑制剂、表皮生长因子受体(EGFR)抑制剂、胰岛素样生长因子-1 (IGF-1)受体抑制剂、CHKl抑制剂、mTOR抑制剂、激酶抑制剂、己酮可可碱(pentoxify11 ine )和长春瑞滨(vinorelbine )。
13.根据权利要求1所述的方法，其进一步包含用放射疗法治疗受试者，其中所述细胞渗透型抗DNA抗体提高所述细胞对放射疗法的敏感性。
14.根据权利要求1所述的方法，其进一步包含用损伤DNA或抑制DNA修复的抗肿瘤药治疗所述细胞，其中所述细胞渗透型抗DNA抗体提高所述细胞对所述抗肿瘤药的敏感性。
15.根据权利要求1所述的方法，其中所述赘生细胞是位于受试者中，其进一步包含用治疗性单株抗体治疗所述受试者。
16.根据权利要求1所述的方法，其中所述细胞渗透型抗DNA抗体是来源于患有自体免疫疾病的受试者或动物。
17.根据权利要求16所述的方法，其中所述自体免疫疾病是全身性红斑狼疮或其动物模型。
18.根据权利要求1所述的方法，其中所述细胞渗透型抗DNA抗体包含单株抗体3E10、其细胞渗透片段、保守性变异体或人类化形式。
19.根据权利要求18所述的方法，其中所述细胞渗透型抗DNA抗体包含3E10的单链可变片段(3E10scFv)。
20.根据权利要求1所述的方法，其中所述细胞渗透型抗DNA抗体是在不借助于载剂或结合物的情况下被转运到所述细胞的细胞核中。
21.一种剂量单元，其包含于药学上可接受的赋形剂中的细胞渗透型抗DNA抗体或其片段，其中所述抗体是以有效抑制具有或不具有固有的DNA修复不足的癌症或受病毒感染细胞中的DNA修复的量存在。
22.根据权利要求21所述的剂量单元，其进一步包含抗肿瘤药或放射增敏剂。
23.根据权利要求22所述的剂量单元，其中所述抗肿瘤剂是从由以下各项所构成的族群中选出:顺钼、环磷酰胺(Cytoxan)、阿霉素、甲氨蝶呤(methotrexate)、丝裂霉素 C (mitomycin C)、氮芥(nitrogen mustard)、羟基脲、替拉扎明(tirapazamine)、替莫唑胺(temozolomide)、喜树喊(camptothecin)、PARP 抑制剂、卡钼(carboplatin)、表柔比星(epirubicin)、核糖核苷酸还原酶抑制剂、异环磷酰胺(ifosphamide)、西妥昔单抗(cetuximab)、利妥昔单抗(rituximab)、舒尼替尼(sunitinib)、链脲霉素(streptozocin)、索拉非尼(sorafenib)、放线菌素 D (actinomycin D)、甲基苯甲餅(procarbazine)、DTIC、8_M0P、培美曲塞(pemetrexed)、依维莫司(everolimus)、长春新喊(vincristine)、长春喊(vinblastine)、博来霉素(bleomycin)、达卡巴嗪(dacarbazine)、依托泊苷(etoposide)、格`立得(Gliadel)、烷化剂、核苷或核苷酸类似物以及它们的组合。
24.根据权利要求22所述的剂量单元，其中所述放射增敏剂是从由以下各项所构成的族群中选出:顺钼、阿霉素、吉西他滨、5-氟尿嘧啶、PARPl抑制剂、组织蛋白脱乙酰基酶抑制剂、蛋白酶体抑制剂、表皮生长因子受体(EGFR)抑制剂、胰岛素样生长因子-1 (IGF-1)受体抑制剂、CHKl抑制剂、mTOR抑制剂、己酮可可碱、长春瑞滨、迷索硝唑(misonidazole)、丝裂霉素C、烷化剂、核苷类似物和核苷酸类似物。
25.—种人或人类化单株细胞渗透型抗DNA抗体,其抑制DNA修复,所述细胞渗透型抗DNA抗体是在不借助于载剂或结合物的情况下被转运到所述细胞的细胞核中，且所述抗体并非为由ATCC寄存编号PTA2439融合瘤产生的单株抗体3E10。
26.根据权利要求25所述的抗体，其与由ATCC寄存编号PTA2439融合瘤产生的单株抗体3E10具有相同或不同抗原决定基特异性。
27.根据权利要求26所述的抗体，其包含具有单株抗体3E10的抗体结合部位的重组型抗体。
28.根据权利要求25所述的抗体，其是由使用从患有自体免疫疾病的人类受试者或从自体免疫疾病的动物模型分离的淋巴细胞制备的融合瘤产生。
29.根据权利要求26至28中任一项所述的抗体，其中所述抗体是单链抗体或其片段。
30.根据权利要求26至28中任一项所述的抗体，其中所述抗体是双特异性单株抗体，其特异性结合第二标靶。
31.根据权利要求30所述的抗体，其中所述抗体特异性结合从由DNA修复蛋白、DNA复制蛋白和DNA损伤反应蛋白所构成的族群中选出的蛋白质。
32.根据权利要求31所述的抗体，其中所述抗体特异性结合热休克蛋白(HSP)、Myc蛋白或Raf/Ras蛋白。
33.一种测定受试者对DNA损伤疗法的敏感性的方法，其包含分析来自所述受试者的样品中的细胞渗透型抗DNA抗体含量,其中所述样品与对照物相比细胞渗透型抗DNA抗体增加表明所述受试 者对所述DNA损伤疗法敏感。
【文档编号】C07K16/44GK103874710SQ201280025431
【公开日】2014年6月18日 申请日期:2012年4月2日 优先权日:2011年4月1日
【发明者】J·E·汉森, P·M·格雷泽, R·H·维斯波尔, R·N·西村, G·陈 申请人:耶鲁大学, 加利福尼亚大学董事会, 美国政府代表的退伍军人事务部