使用pd-1轴结合拮抗剂和mek抑制剂治疗癌症的方法
【专利摘要】本发明描述了包含PD-1轴结合拮抗剂和MEK抑制剂的联合治疗及其使用方法，包括治疗期望增强的免疫原性的状况（诸如提高肿瘤免疫原性以治疗癌症）的方法。
【专利说明】使用PD-1轴结合拮抗剂和MEK抑制剂治疗癌症的方法
[0001]对相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求2011年8月I日提交的美国临时申请流水号61/574，406的优先权权益，其内容通过提及完整收入本文。
[0003]发明背景
[0004]对T细胞提供两种截然不同的信号是一种关于抗原呈递细胞(APC)对静息T淋巴细胞的淋巴细胞活化的广泛公认的模型。Lafferty等，Aust.J.Exp.Biol.Med.ScL53:27-42 (1975)。此模型进一步提供了自身与非自身的辨别和免疫耐受性。Bretscher等，Sciencel69:1042-1049(1970) ；Bretscher, P.A., P.N.A.S.USA96:185-190(1999)；Jenkins等，J.Exp.Med.165:302-319(1987)。在主要组织相容性复合体(MHC)的背景中呈递的外来抗原肽的识别后，第一信号，或抗原特异性信号经由T细胞受体(TCR)转导。第二或共刺激信号通过抗原呈递细胞(APC)上表达的共刺激分子投递至T细胞，并且诱导T细胞以促进克隆扩充，细胞因子分泌和效应器功能。Lenschow等，Ann.Rev.1mmunol.14:233(1996)。在缺乏共刺激的情况中，T细胞能对抗原刺激变得不应，不发起有效的免疫应答，并且进一步可以导致对外来抗原的耐受性或耗竭。
[0005]在两信号模型中，T细胞接受正和负第二共刺激信号两者。此类正和负信号的调节对于在维持免疫耐受性和防止自身免疫的同时使宿主的保护性免疫应答最大化是至关重要的。负第二信号对于诱导T细胞耐受性似乎是必需的，而正信号促进T细胞活化。虽然简单的两信号模型仍然为未免疫淋巴细胞提供有效解释，但是宿主的免疫应答是一个动态过程，并且也可以对抗原暴露的T细胞提供共刺激信号。共刺激的机制是治疗学方面感兴趣的，因为已经显示了共刺 激信号的操作提供增强或终止基于细胞的免疫应答的手段。最近，已经发现了 T细胞功能障碍或无反应性与抑制性受体(编程性死亡I多肽(PD-1))的诱导且持续的表达并行发生。因此，PD-1和经由与ro-1的相互作用发信号的其它分子，诸如编程性死亡配体I (ro-Ll)和编程性死亡配体2(ro-L2)的治疗性靶向是强烈感兴趣的领域。
[0006]PD-Ll在许多癌症中过表达,并且经常与不良预后关联(Okazaki T等，Intern.1mmun.2007, 19(7): 813; Thompson RH 等，Cancer Res2006, 66 (7): 3381)。令人感兴趣地，与正常组织中的T淋巴细胞和外周血T淋巴细胞形成对比，大多数肿瘤浸润性T淋巴细胞主要表达F1D-1,这指示肿瘤反应性T细胞上F1D-1的上调可以促成受损的抗肿瘤免疫应答(Blood2009114(8):1537)。这可以是由于利用由与TO-1表达T细胞相互作用的TO-Ll表达肿瘤细胞介导的I3D-Ll信号传导以导致T细胞活化的减弱及逃避免疫监视(Sharpe等，NatRev2002) (Keir ME 等，2008Annu.Rev.1mmunol.26:677)。因此，对 PD-LI/PD-1 相互作用的抑制可以增强CD8+T细胞介导的肿瘤杀伤。
[0007]已经提出经由其直接配体(例如ro-Ll，PD-L2)抑制H)_l轴信号传导为增强T细胞免疫以治疗癌症(例如肿瘤免疫)的手段。此外，已经通过抑制ro-Ll与结合配偶B7-1的结合观察到对T细胞免疫的类似增强。此外，对ro-1信号传导与在肿瘤细胞中脱调节的其它信号传导途径(例如MAPK途径，“MEK”)的组合抑制可以进一步增强治疗功效。然而，最佳的治疗性处理会组合ro-ι受体/配体相互作用的阻断与直接抑制肿瘤生长的药剂，任选地进一步包括单独的ro-1阻断没有提供的独特免疫增强特性。仍然需要用于治疗各种癌症，稳定化各种癌症，预防各种癌症，和/或延迟各种癌症形成的此类最佳疗法。
[0008]在此通过提及将本文中公开的所有参考文献，出版物，和专利申请完整收录。
[0009]发明概述
[0010]本发明描述了联合治疗，其包含MEK抑制剂(其具有直接的肿瘤靶向效果和免疫增强特性)和ro-1轴结合拮抗剂。
[0011]本文中提供了在个体中治疗癌症或延迟癌症进展的方法，其包括对所述个体施用有效量的ro-1轴结合拮抗剂和MEK抑制剂。[0012]本文中还提供了 ro-Ι轴结合拮抗剂在制造药物中的用途，所述药物用于与MEK抑制剂组合在个体中治疗癌症或延迟癌症进展。本文中还提供了 MEK抑制剂在制造药物中的用途，所述药物用于与ro-ι轴结合拮抗剂组合在个体中治疗癌症或延迟癌症进展。本文中还提供了 ro-ι轴结合拮抗剂和MEK抑制剂在制造药物中的用途，所述药物用于在个体中治疗癌症或延迟癌症进展。本文中还提供了用于在个体中治疗癌症或延迟癌症进展的药物的制造方法，其特征在于使用ro-1轴结合拮抗剂和MEK抑制剂。本文中还提供了 ro-1轴结合拮抗剂，其用于与MEK抑制剂组合在个体中治疗癌症或延迟癌症进展。本文中还提供了MEK抑制剂，其用于与ro-1轴结合拮抗剂组合在个体中治疗癌症或延迟癌症进展。
[0013]治疗的癌症可以含有BRAF V600E突变、BRAF野生型、KRAS野生型、或活化性KRAS突变。癌症可以是黑素瘤、结肠直肠癌、非小细胞肺癌、卵巢癌、乳腺癌、前列腺癌、胰腺癌、血液学恶性(malignancy)或肾细胞癌。癌症可以为早期阶段或晚期阶段。在一些实施方案中，治疗的个体是人。
[0014]在一些实施方案中，治疗导致停止治疗后个体中持续的应答。在一些实施方案中，治疗在个体中产生完全应答，部分应答，或稳定疾病。
[0015]本文中还提供了在具有癌症的个体中增强免疫功能的方法，其包括施用有效量的PD-1轴结合拮抗剂和MEK抑制剂。在一些实施方案中，个体是人。
[0016]本文中还提供了 ro-Ι轴结合拮抗剂在制造药物中的用途，所述药物用于与MEK抑制剂组合在具有癌症的个体中增强免疫功能。本文中还提供了 MEK抑制剂在制造药物中的用途，所述药物用于与ro-1轴结合拮抗剂组合在具有癌症的个体中增强免疫功能。本文中还提供了 I3D-1轴结合拮抗剂和MEK抑制剂在制造药物中的用途，所述药物用于在具有癌症的个体中增强免疫功能。本文中还提供了用于在个体中增强免疫功能的药物的制造方法，其特征在于使用ro-ι轴结合拮抗剂和MEK抑制剂。本文中还提供了 ro-1轴结合拮抗剂，其用于与MEK抑制剂组合在具有癌症的个体中增强免疫功能。本文中还提供了 MEK抑制剂，其用于与ro-ι轴结合拮抗剂组合在具有癌症的个体中增强免疫功能。在一些实施方案中，个体是人。
[0017]在一些实施方案中，PD-1轴结合拮抗剂是ro-Ι结合拮抗剂，PD-Ll结合拮抗剂或PD-L2结合拮抗剂。在一些实施方案中，PD-1结合拮抗剂抑制ro-1与ro-Ll的结合和/或PD-1与ro-L2的结合。在一些实施方案中，PD-1结合拮抗剂是抗体(例如本文中描述的抗体MDX-1106，CT-Oll和Merck3745)，其抗原结合片段，免疫粘附素，融合蛋白，或寡肽。在一些实施方案中，PD-1结合拮抗剂是包含与Fe域融合的H)-L2胞外域的免疫粘附素(例如本文中描述的AMP-224)。在一些实施方案中，PD-Ll结合拮抗剂抑制I3D-Ll与TO-1的结合和/或ro-Ll与B7-1的结合。在一些实施方案中，PD-Ll结合拮抗剂是抗体(例如本文中描述的抗体YW243.55.S70、MPDL3280A和MDX-1105)，其抗原结合片段，免疫粘附素，融合蛋白，或寡肽。在一些实施方案中，PD-L2结合拮抗剂抑制ro-L2与ro-1的结合。在一些实施方案中，PD-L2结合拮抗剂是抗体，其抗原结合片段，免疫粘附素，融合蛋白，或寡肽。
[0018]在一些实施方案中，MEK抑制剂是如下文描述的式(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)、或(VI)的化合物，或其药学可接受盐或溶剂合物。
[0019]在一些实施方案中，MEK抑制剂是竞争性MEK抑制剂。在一些实施方案中，MEK抑制剂针对活化性KRAS突变更有选择性。在一些实施方案中，MEK抑制剂是变构性MEK抑制剂。在一些实施方案中，MEK抑制剂针对活化性BRAF突变更有选择性。在一些实施方案中，MEK 抑制剂选自下组:G02442104，G-38963，G02443714, G00039805，和⑶C-0973，或其药学可接受盐或溶剂合物。
[0020]在一些实施方案中，连续或间歇施用MEK抑制剂。在一些实施方案中，在施用ro-1轴结合拮抗剂前，与施用ro-1轴结合拮抗剂同时，或在施用ro-1轴结合拮抗剂后施用MEK抑制剂。在一些实施方案中，以不同剂量给药频率施用MEK抑制剂和ro-1轴结合拮抗剂。 [0021]在另一个方面，提供了包含ro-1轴结合拮抗剂和/或MEK抑制剂的试剂盒，其用于在个体中治疗癌症或延迟癌症进展或者在具有癌症的个体中增强免疫功能。试剂盒可以包含ro-1轴结合拮抗剂和包装插页，该包装插页包含关于与MEK抑制剂组合使用ro-1轴结合拮抗剂在个体中治疗癌症或延迟癌症进展或在具有癌症的个体中增强免疫功能的用法说明书。试剂盒可以包含MEK抑制剂和包装插页，该包装插页包含关于与ro-1轴结合拮抗剂组合使用MEK抑制剂在个体中治疗癌症或延迟癌症进展或在具有癌症的个体中增强免疫功能的用法说明书。试剂盒可以包含ro-ι轴结合拮抗剂和MEK抑制剂，及包装插页，该包装插页包含关于使用ro-ι轴结合拮抗剂和MEK抑制剂在个体中治疗癌症或延迟癌症进展或在具有癌症的个体中增强免疫功能的用法说明书。
[0022]附图简述
[0023]图1显示了用MEK抑制剂处理后黑素瘤和结肠直肠肿瘤细胞系上增强的MHC I表面表达。(A)显示用MEK抑制剂处理的人肿瘤细胞系的表面上升高的MHC I表达的直方图。(B)显示用MEK抑制剂处理的小鼠肿瘤细胞系的表面上升高的MHC I表达的直方图。
[0024]图2的直方图显示了用BRAF抑制剂处理人黑素瘤细胞系(其中5/8的细胞系是BRAF突变体；BRAF野生型细胞用星号标示)没有上调MHC I表面表达。
[0025]图3显示了用MEK抑制剂处理人外周血单个核细胞没有上调MHC I表面表达。(A-D)显示MEK抑制剂处理后⑶4+T细胞，⑶8+T细胞，B细胞，或单核细胞中未改变的MHCI表面表达的直方图。
[0026]图4表明尽管有MEK抑制剂处理，共刺激信号使T细胞变为响应性。(A)⑶8+T细胞水平的图显示了 MEK抑制剂处理降低正常情况下通过⑶3刺激诱导的T细胞增殖和活化。⑶⑶8+T细胞的图显示了⑶3和⑶28的共刺激足以克服MEK抑制剂处理的抑制效应。
[0027]图5显示了 MEK抑制剂处理增强用抗⑶40抗体刺激的树突细胞成熟和活化。(A-C)显示用抗CD40抗体刺激且用MEK或BRAF抑制剂处理的树突细胞的直方图。MEK抑制剂增强DC活化，如通过DC表面活化标志物⑶83，MHC II和⑶86的上调证明的。(D-F)活化的树突细胞水平的图表明MEK抑制剂以剂量依赖性方式增强DC活化。[0028]图6的图显示了癌症体内模型中免疫抑制性和促肿瘤性细胞因子的降低的血清水平。(A和C)与仅用抗ro-Ll或MEK抑制剂处理的处理相比，免疫抑制性细胞因子IL-10在用抗ro-Ll抗体和MEK抑制剂共处理后7天降低。(B和D)与仅用抗I3D-Ll或MEK抑制剂处理的处理相比，促肿瘤性细胞因子KC在用抗I3D-Ll抗体和MEK抑制剂共处理后降低。
[0029]图7表明MEK抑制剂处理在结肠直肠癌体内模型中增强抗I3D-Ll抗体的抗肿瘤活性。(A)描绘在抗ro-Ll抗体和MEK抑制剂共处理的情况中肿瘤体积变化的图表明与仅抗PD-Ll抗体或MEK抑制剂处理相比显著的早期阶段肿瘤生长降低和持续的抗肿瘤效应。(B)描绘在抗ro-Ll抗体和MEK抑制剂共处理的情况中肿瘤体积变化的图表明与仅抗ro-Ll抗体或MEK抑制剂处理相比显著的晚期阶段肿瘤生长降低。
[0030]图8是一系列图，其表明MEK抑制剂剂量在与抗I3D-Ll抗体组合使用以治疗结肠直肠癌体内模型时更有效。(A)描绘在渐增剂量的MEK抑制剂GDC-0973处理的情况中肿瘤体积降低的图。(B)描绘与不同剂量的MEK抑制剂GDC-0973组合施用抗TO-Ll抗体后肿瘤体积降低的图。mpk表示毫克每千克(mg/kg)。
[0031]图9的图表明用MEK抑制剂G02443714的处理在结肠直肠癌体内模型中增强抗PD-Ll抗体的抗肿瘤活性。与仅用 抗I3D-Ll抗体或MEK抑制剂G02443714的处理相比，在抗PD-Ll抗体和MEK抑制剂联合治疗的情况中观察到增强的肿瘤体积降低。
[0032]图10的图表明用MEK抑制剂G02442104的处理在结肠直肠癌体内模型中增强抗PD-Ll抗体的抗肿瘤活性。与仅用抗ro-Ll抗体或MEK抑制剂G02442104的处理相比，在抗PD-Ll抗体和MEK抑制剂联合治疗的情况中观察到增强的肿瘤体积降低。
[0033]图11的图表明用MEK抑制剂G00039805的处理在结肠直肠癌体内模型中增强抗PD-Ll抗体的抗肿瘤活性。与仅用抗ro-Ll抗体或MEK抑制剂G00039805的处理相比，在抗PD-Ll抗体和MEK抑制剂联合治疗的情况中观察到增强的肿瘤体积降低。
[0034]图12表明MEK抑制剂处理在黑素瘤体内模型中增强抗I3D-Ll抗体的抗肿瘤活性。(A和B)描绘在抗ro-Ll抗体和MEK抑制剂共处理的情况中肿瘤体积变化的图表明与仅抗PD-Ll抗体或MEK抑制剂处理相比显著降低的肿瘤生长。
[0035]图13的图表明用抗I3D-Ll抗体和化疗剂Temodar的共处理没有降低黑素瘤体内模型中的肿瘤生长。因此，MEK抑制剂和抗ro-Ll抗体的抗肿瘤效果是特异性的。
[0036]图14的图表明用抗0X40抗体和MEK抑制剂的共处理没有降低体内结肠直肠模型中的肿瘤生长。因此，MEK抑制剂和抗ro-Ll抗体的抗肿瘤效果是特异性的。
[0037]图15含有几幅图，其显示了 MEK抑制剂提高树突细胞活化，这不依赖于抗I3D-Ll抗体处理。(A)表明抗ro-Ll抗体处理略微提高MHC I表面表达的图。MEK抑制剂处理显著增强MHC I表达，然而，与抗I3D-Ll抗体共处理没有增强MEK抑制剂处理的效果。(B-D)表明抗I3D-Ll抗体处理没有提高树突细胞活化标志物MHC II，⑶80，和⑶86表达的图。比较而言，MEK抑制剂处理显著增强树突细胞活化标志物的表达。与抗ro-Li抗体共处理没有增强MEK抑制剂处理的效果。(E-H)表明用抗CD40抗体刺激树突细胞没有改变MEK抑制剂和抗I3D-Ll共处理对树突细胞活化的影响的图。
[0038]发明详述
[0039]1.通用技术
[0040]本文中描述或提及的技术和规程是本领域技术人员一般充分了解且通常采用的，其使用常规方法，诸如例如广泛利用的方法进行，该方法记载于Sambrook等，MolecularCloning:A Laboratory Manual3d edition(2001)Cold Spring Harbor LaboratoryPress,Cold Spring Harbor,N.Y.;Current Protocols in Molecular Biology (F.M.Ausubel 等编，(2003));丛刊 Methods in Enzymology (Academic Press, Inc.):PCR2:APractical Approach (M.J.MacPhersonj B.D.Hames and G.R.Taylor 编(1995))，Harlow和 Lane 编(1988)Antibodies, A Laboratory Manual,and Animal Cell Culture(R.1.Freshney 编(1987))；
[0041]Oligonucleotide Synthesis(M.J.Gait 编，1984) ；Methods in MolecularBiology, Humana Press;Cell Biology: A Laboratory Notebook(J.E.Cellis 编，1998)Academic Press;Animal Cell Culture(R.1.Freshney)编，1987);Introduction toCell and Tissue Culture (J.P.Mather 和 Ρ.Ε.Roberts，1998)Plenum Press;Cell andTissue Culture: Laboratory Procedures (A.Doyle,J.B.Griffiths,和 D.G.Newell编,1993-8)J.Wiley and Sons;Handbook of Experimental Immunology (D.M.Weir 和 C.C.Blackwell 编);Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells (J.M.Miller 和 Μ.P.Calos 编，1987);PCR:The Polymerase Chain Reaction, (Mullis等编，1994);Current Protocols in Immunology (J.E.Coligan 等编，1991);ShortProtocols in Molecular Biology (Wi ley 和 Sons，1999) ;Immunobiology (C.A.Janeway 和 P.Travers，1997);Antibodies(P.Finch，1997);Antibodies:A PracticalApproach(D.Catty.编，IRL Press,1988-1989);Monoclonal Antibodies:A PracticalApproach(P.Shepherd 和 C.Dean 编，Oxford University Press，2000) ;UsingAntibodies:A Laboratory Manual (E.Harlow 和 D.Lane(Cold SpringHarbor LaboratoryPress, 1999) ;The Antibodies (M.Zanetti 和 J.D.Capra 编，Harwood AcademicPublishers,1995); Cancer!Principles and Practice of Oncology(V.T.DeVita 等编，J.Β.Lippincott Company, 1993)。
[0042]I1.定义
[0043]术语“PD-1轴结合拮抗剂”是一种抑制ro-1轴结合配偶与一种或多种其结合配偶的相互作用，使得消除源自ro-1信号传导轴上的信号传导的τ细胞功能障碍(结果是恢复或增强T细胞功能(例如增殖、细胞因子生成、靶细胞杀伤))的分子。如本文中使用的，PD-1轴结合拮抗剂包括ro-l结合拮抗 剂、PD-Ll结合拮抗剂和ro-L2结合拮抗剂。
[0044]术语“PD-1结合拮抗剂”是一种降低、阻断、抑制、消除或干扰源自ro-1与一种或多种其结合配偶，诸如ro-Ll，PD-L2的相互作用的信号转导的分子。在一些实施方案中，PD-1结合拮抗剂是一种抑制ro-Ι与其结合配偶结合的分子。在一个具体的方面，PD-1结合拮抗剂抑制ro-ι与ro-Ll和/或ro-L2的结合。例如，pd-1结合拮抗剂包括降低、阻断、抑制、消除或干扰源自ro-1与ro-Li和/或ro-L2相互作用的信号转导的抗ro-1抗体、其抗原结合片段、免疫粘附素、融合蛋白、寡肽和其它分子。在一个实施方案中，pd-1结合拮抗剂降低负共剌激信号，从而使功能障碍τ细胞不太有功能障碍(例如增强对抗原识别的效应器应答)，所述负共剌激信号经由ro-1由或经由τ淋巴细胞上表达的细胞表面蛋白介导的信号传导介导。在一些实施方案中，ro-1结合拮抗剂是抗ro-1抗体。在一个具体的方面，PD-1结合拮抗剂是本文中描述的MDX-1106。在另一个具体的方面，PD-1结合拮抗剂是本文中描述的Merck3745。在另一个具体的方面，PD-1结合拮抗剂是本文中描述的CT-011。
[0045]术语“PD-L1结合拮抗剂”是一种降低、阻断、抑制、消除或干扰源自PD-Ll与一种或多种其结合配偶，诸如ro-1，B7-1的相互作用的信号转导的分子。在一些实施方案中，PD-Ll结合拮抗剂是抑制ro-Ll与其结合配偶结合的分子。在一个具体的方面，PD-Ll结合拮抗剂抑制ro-Ll与ro-1和/或B7-1的结合。在一些实施方案中，PD-Ll结合拮抗剂包括降低、阻断、抑制、消除或干扰源自PD-Ll与一种或多种其结合配偶，诸如ro-l，B7-l的相互作用的信号转导的抗ro-Ll抗体，其抗原结合片段，免疫粘附素，融合蛋白，寡肽和其它分子。在一个实施方案中，PD-Ll结合拮抗剂降低负共刺激信号，从而使功能障碍T细胞不太有功能障碍(例如增强对抗原识别的效应器应答)，所述负共刺激信号经由ro-Ll由或经由T淋巴细胞上表达的细胞表面蛋白介导的信号传导介导。在一些实施方案中，PD-Ll结合拮抗剂是抗ro-Ll抗体。在一个具体的方面，抗ro-Ll抗体是本文中描述的YW243.55.S70。在另一个具体的方面，抗ro-Ll抗体是本文中描述的MDX-1105。在又一个具体的方面，抗ro-Ll抗体是本文中描述的MPDL3280A。
[0046]术语“PD-L2结合拮抗剂”是一种降低、阻断、抑制、消除或干扰源自PD-L2与一种或多种其结合配偶，诸如ro-1的相互作用的信号转导的分子。在一些实施方案中，PD-L2结合拮抗剂是抑制H)-L2与其结合配偶结合的分子。在一个具体的方面，PD-L2结合拮抗剂抑制ro-L2与ro-ι的结合。在一些实施方案中，PD-L2拮抗剂包括降低、阻断、抑制、消除或干扰源自PD-L2 一种或多种其结合配偶，诸如ro-1的相互作用的信号转导的抗ro-L2抗体，其抗原结合片段，免疫粘附素，融合蛋白，寡肽和其它分子。在一个实施方案中，PD-L2结合拮抗剂降低负共刺激信号，从而使功能障碍T细胞不太有功能障碍(例如增强对抗原识别的效应器应答)，所述负共刺激信号经由ro-L2由或经由T淋巴细胞上表达的细胞表面蛋白介导的信号传导介导。在一些实施方案中，PD-L2结合拮抗剂是免疫粘附素。
[0047]术语“功能障碍”在免疫功能障碍的背景中指降低的对抗原性刺激的免疫响应性的状态。该术语包括可以发生抗原识别，但是随后的免疫应答对于控制感染或肿瘤生长无效的耗竭和/或无反应性两者的共同要素。
[0048]如本文中使用的，术语“功能障碍”还包括对抗原识别的不感受或不响应，特别地，将抗原识别转化成下游T细胞效应器功能，诸如增殖，细胞因子生成(例如IL-2)和/或靶细胞杀伤的能力受损。
[0049]术语“无反应性”指源自经由T细胞受体投递的不完全或不充分信号(例如在缺乏ras活化的情况中胞内Ca+2增加)的对抗原刺激的无响应性状态。T细胞无反应性也可以在缺乏共刺激的情况中在用抗原刺激后发生，生成即使在共刺激的背景中对抗原的随后活化变得不感受的细胞。无响应性状态经常可以被白介素-2的存在超越。无反应性T细胞不经历克隆扩充和/或获得效应器功能。
[0050]术语“耗竭”指作为源自在许多慢性感染和癌症期间发生的持续TCR信号传导的T细胞功能障碍状态的T细胞耗竭。它与无反应性的区别在于它不经由不完全或缺乏的信号传导，而是由于持续信号传导而发生。它以较差的效应器功能，持续的抑制性受体表达和与功能性效应或记忆T细胞的转录状态不同的转录状态限定。耗竭阻止感染和肿瘤的最佳控制。耗竭可以源自外在负调节途径(例如免疫调节细胞因子)及细胞固有负调节(共刺激)途径(PD-1，B7-H3, B7-H4,等等)两者。[0051]“增强T细胞功能”意指诱导，引起或刺激T细胞具有持续或放大的生物学功能，或者恢复或再活化耗竭的或无活性的T细胞。增强T细胞功能的例子包括:相对于干预前的此类水平，升高的来自CD8+T细胞的Y-干扰素分泌，升高的增殖，升高的抗原响应性(例如病毒，病原体，或肿瘤清除)。在一个实施方案中，增强的水平是至少50%，或者60%，70%，80%，90%, 100%, 120%, 150%, 200%。测量此增强的方式是本领域普通技术人员已知的。
[0052]“T细胞功能障碍性病症”是以降低的对抗原性刺激的响应性为特征的T细胞病症或状况。在一个具体的实施方案中，τ细胞功能障碍性病症是明确与经由ro-1的不适当升高的信号传导有关的病症。在另一个实施方案中，τ细胞功能障碍性病症是如下的病症，其中τ细胞是无反应性的或者具有降低的分泌细胞因子，增殖，或者执行细胞裂解活性的能力。在一个具体的方面，降低的响应性导致对表达免疫原的病原体或肿瘤的无效控制。以τ细胞功能障碍为特征的τ细胞功能障碍性病症的例子包括未分辨的急性感染，慢性感染和肿瘤免疫。
[0053]“肿瘤免疫”指肿瘤逃避免疫识别和清除的过程。如此，作为治疗概念，肿瘤免疫在此类逃避减弱时得到“治疗”，并且肿瘤被免疫系统识别并攻击。肿瘤识别的例子包括肿瘤结合，肿瘤收缩和肿瘤清除。
[0054]“免疫原性”指特定物质引发免疫应答的能力。肿瘤是免疫原性的，并且增强肿瘤免疫原性有助于通过免疫应答清除肿瘤细胞。增强肿瘤免疫原性的例子包括用抗I3DL抗体和MEK抑制剂处理。
[0055]“持续应答”指在停止处理后对降低肿瘤生长的持续影响。例如，与施用阶段开始时的大小相比，肿瘤大小可以保持为相同或更小。在一些实施方案中，持续应答具有与处理持续时间至少相同的持续时间，处理持续时间的至少1.5倍，2.0倍，2.5倍，或3.0倍长度。
[0056]术语“抗体”包括单克隆抗体(包括具有免疫球蛋白Fe区的全长抗体)，具有多表位特异性的抗体组合物，多特异性抗体(例如双特异性抗体)，双抗体，和单链分子，及抗体片段(例如Fab，F(ab’)2，和Fv)。术语“免疫球蛋白”(Ig)在本文中与“抗体”可互换使用。
[0057]基本的4链抗体单元是由两条相同的轻链(L)和两条相同的重链(H)构成的异四聚体糖蛋白。IgM抗体由5个基本的异四聚体单元及称作J链的另外多肽组成，而且包含10个抗原结合位点，而IgA抗体包含与J链组合的2-5个能聚合而形成多价装配物的基本4链单元。在IgG的情况中，4链单元通常是约150，000道尔顿。每条轻链通过一个共价二硫键与重链相连，而两条重链通过一个或多个二硫键彼此相连，二硫键的数目取决于重链的同种型。每条重链和轻链还具有间隔规律的链内二硫键。每条重链在N-末端具有一个可变域(Vh)，接着是三个(对于α和Y链)或四个(对于μ和ε同种型)恒定域(Ch)。每条轻链在N-末端具有一个可变域(VJ，接着是其另一端的一个恒定域(CJ。'与Vh排列在一起，而Q与重链第一恒定域(ChI)排列在一起。认为特定的氨基酸残基在轻链和重链可变域之间形成界面。一个Vh和一个'一起配对而形成一个抗原结合位点。关于不同类别抗体的结构和性质，参见例如Basic and Clinical Immunology,第 8 版，Daniel P.Sties, Abba1.Terr and Tristram G.Parsolw (编)，Appleton&Lange, Norwalk, CT, 1994,第 71 页和第6章。根据其恒定域氨基酸序列，来自任何脊椎动物物种的L链可归入两种截然不同类型中的一种，称作卡帕(K)和拉姆达(λ)。根据其重链恒定域(C0)氨基酸序列，免疫球蛋白可归入不同的类别或同种型。有五类免疫球蛋白:IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，分别具有称作Ct、δ、ε、Y和μ的重链。根据Ch序列和功能的较小差异，Y和Ct类可进一步分为亚类，例如人类表达下列亚类=IgGU IgG2A、IgG2B、IgG3、IgG4、IgAl 和 IgA2。
[0058]抗体的“可变区”或“可变域”指抗体重链或轻链的氨基末端结构域。重链可变域和轻链可变域分别可以称为“VH”和“VL”。这些结构域一般是抗体的最易变部分(相对于同一类的其它抗体而言)且包含抗原结合位点。[0059]术语“可变的”指可变域中的某些区段在抗体间序列差异广泛的实情。V结构域介导抗原结合且限定特定抗体对其特定抗原的特异性。然而，变异性并非均匀分布于可变域的整个跨度。而是，它集中于轻链和重链可变域二者中称作高变区(HVR)的三个区段。可变域中更加高度保守的部分称作框架区(FR)。天然重链和轻链的可变域各自包含四个FR区，它们大多采取β_折叠片构象，通过形成环状连接且在有些情况中形成β_折叠片结构一部分的三个HVR连接。每条链中的HVR通过FR区非常接近的保持在一起，并与另一条链的HVR 一起促成抗体的抗原结合位点的形成(参见Kabat等，Sequences of ImmunologicalInterest,第 5 版，National Institute of Health, Bethesda, MD.(1991))。恒定域不直接参与抗体与抗原的结合，但展现出多种效应器功能，诸如抗体在抗体依赖性细胞的细胞毒性中的参与。
[0060]术语“单克隆抗体”在用于本文时指从一群基本上同质的抗体获得的抗体，即构成群体的各个抗体相同，除了可能以极小量存在的可能的天然存在突变和/或翻译后修饰(例如异构化、酰胺化)外。单克隆抗体是高度特异性的，针对单一抗原性位点。与典型的包含针对不同决定簇(表位)的不同抗体的多克隆抗体制备物不同，每种单克隆抗体针对抗原上的单一决定簇。在它们的特异性以外，单克隆抗体的优势在于它们是由杂交瘤培养物合成的，未受到其它免疫球蛋白的污染。修饰语“单克隆”指示抗体从基本上同质的抗体群获得的特征，不应解释为要求通过任何特定方法来生成抗体。例如，有待依照本发明使用的单克隆抗体可通过多种技术来生成，包括例如杂交瘤法(例如Kohler and Milstein., Nature,256:495-97(1975);Hongo等,Hybridoma, 14(3):253-260 (1995), Harlow等,Antibodies:ALaboratory Manual, (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2nd ed.1988);Hammerling等，in:Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas563-681(Elsevier, N.Y., 1981))>重组DNA法(参见例如美国专利N0.4,816, 567)、噬菌体展示技术(参见例如Clackson等,Nature352:624-628(1991);Marks 等,J.Mol.Biol.222:581-597(1992);Sidhu 等,J.Mol.Biol.338(2):299-310(2004) ; Lee 等，J.Mol.Biol.340(5): 1073-1093(2004) ;Fellouse, Proc.Nat.Acad.Sc1.USAlOl (34): 12467-12472 (2004) ; Lee 等,J.1mmunol.Methods284 (1-2):119-132 (2004))、及用于在具有部分或整个人免疫球蛋白基因座或编码人免疫球蛋白序列的基因的动物中生成人或人样抗体的技术(参见例如W01998/24893;W01996/34096;W01996/33735;W01991/10741;Jakobovits 等，Proc.Nat 1.Acad.Sc1.USA90:2551(1993);Jakobovits 等，Nature362:255-258(1993);Bruggemann 等，Yearin Immunol.7:33 (1993);美国专利 N0.5，545，807; 5，545，806; 5，569，825; 5，625，126; 5,633, 425;5, 661, 016;Marks 等,Bio/TechnologylO:779-783 (1992);Lonberg 等,Nature368:856-859(1994);Morrison, Nature368:812-813(1994);Fishwild 等,Nature Biotechnol.14:845-851 (1996);Neuberger, Nature Biotechnol.14:826(1996);Lonberg andHuszar, Intern.Rev.Tmmunol.13:65-93(1995))。[0061]术语“裸抗体(裸露的抗体)”指未缀合细胞毒性模块或放射性标记物的抗体。
[0062]术语“全长抗体”、“完整抗体”和“全抗体”可互换使用，指基本上完整形式的抗体，与抗体片段不同。具体而言，完整抗体包括那些具有重链和轻链(包括Fe区)的。恒定域可以是天然序列恒定域(例如人天然序列恒定域)或其氨基酸序列变体。在有些情况中，完整抗体可具有一项或多项效应器功能。
[0063]“抗体片段”包含完整抗体的一部分，优选完整抗体的抗原结合和/或可变区。抗体片段的例子包括Fab、Fab’、F(ab’)2和Fv片段；双抗体；线性抗体(参见美国专利5, 641, 870,实施例 2; Zapata 等，Protein Eng.8 (10): 1057-1062 (1995));单链抗体分子;及由抗体片段形成的多特异性抗体。用木瓜蛋白酶消化抗体产生两个相同的抗原结合片段，称作“Fab”片段，和一个残余“Fe”片段，其名称反映了它易于结晶的能力。Fab片段由完整L链及H链可变区域(Vh)和重链第一恒定域(ChI)组成。每个Fab片段对于抗原结合是单价的，即它具有一个抗原结合位点。胃蛋白酶处理抗体产生一个较大F(ab’)2片段，它大体相当于两个通过二硫键相连的Fab片段，具有不同抗原结合活性且仍能够交联抗原。Fab’片段因在ChI结构域的羧基末端增加了少数残基而与Fab片段有所不同，包括来自抗体铰链区的一个或多个半胱氨酸。Fab’-SH是本文中对其中恒定区半胱氨酸残基携带游离硫醇基的Fab’的称谓 。F(ab’)2抗体片段最初是作为成对Fab’片段生成的，在Fab’片段之间具有铰链半胱氨酸。还知道抗体片段的其它化学偶联。
[0064]Fe片段包含通过二硫键保持在一起的两条H链的羧基末端部分。抗体的效应器功能由Fe区中的序列来决定，该区域也受到在某些类型的细胞上找到的Fe受体(FcR)识别。
[0065]“Fv”是包含完整抗原识别和结合位点的最小抗体片段。此片段由紧密、非共价结合的一个重链可变区和一个轻链可变区的二聚体组成。从这两个结构域的折叠中生发出六个高变环(重链和轻链各3个环)，贡献出抗原结合的氨基酸残基并赋予抗体以抗原结合特异性。然而，即使是单个可变域(或只包含对抗原特异的三个HVR的半个Fv)也具有识别和结合抗原的能力，尽管亲和力低于完整结合位点。
[0066]“单链Fv”，也缩写成“sFv”或“scFv”，是包含连接成一条多肽链的Vh和\抗体结构域的抗体片段。优选的是，sFv多肽在Vh与'结构域之间进一步包含多肽接头，其使得sFv能够形成结合抗原的期望结构。关于sFv的综述参见Pluckthun,于《The Pharmacologyof Monoclonal Antibodies》，第 113 卷，Rosenburg 和 Moore 编，Springer-Verlag, NewYork，第 269-315 页，1994。
[0067]本发明抗体的“功能性片段”包含完整抗体的一部分，一般包括完整抗体的抗原结合或可变区或抗体的保留或具有改良FcR结合能力的Fe区。抗体片段的例子包括线性抗体、单链抗体分子和自抗体片段形成的多特异性抗体。
[0068]术语“双抗体”指通过在Vh和\结构域之间使用短接头(约5-10个残基)构建sFv片段(见上一段)而制备的小型抗体片段，由于接头短，使得V结构域实行链间而非链内配对，由此导致二价片段，即具有两个抗原结合位点的片段。双特异性双抗体是两个“交叉” sFv片段的异二聚体，其中两种抗体的V1^P \结构域存在于不同多肽链上。双抗体更详细的描述于例如 EP404, 097;W093/11161;Hollinger 等,Proc.Natl.Acad.Sc1.USA, 90:6444-6448(1993)。
[0069]单克隆抗体在本文中明确包括“嵌合”抗体(免疫球蛋白)，其中重链和/或轻链的一部分与衍生自特定物种或属于特定抗体类别或亚类的抗体中的相应序列相同或同源，而链的剩余部分与衍生自另一物种或属于另一抗体类别或亚类的抗体中的相应序列相同或同源，以及此类抗体的片段，只要它们展现出期望的生物学活性(美国专利N0.4，816，567;Morrison 等，Proc.Natl.Acad.Sc1.USA81:6851-6855 (1984))。本文中感兴趣的嵌合抗体包括“灵长类化”抗体，其中抗体的抗原结合区衍生自通过用例如感兴趣抗原免疫短尾猴(macaque monkey)而生成的抗体。如本文中所使用的，“人源化抗体”是“嵌合抗体”的一个子集。
[0070]非人(例如鼠)抗体的“人源化”形式指最低限度包含衍生自非人免疫球蛋白的序列的嵌合抗体。在一个实施方案中，人源化抗体指人免疫球蛋白(受体抗体)中的HVR残基(下文限定)用具有期望特异性、亲和力和/或能力的非人物种(供体抗体)(诸如小鼠、大鼠、家兔或非人灵长类动物)的HVR残基替换的免疫球蛋白。在有些情况中，将人免疫球蛋白的框架(“FR”)残基用相应的非人残基替换。此外，人源化抗体可包含在受体抗体中或在供体抗体中没有找到的残基。进行这些修饰可以是为了进一步改进抗体的性能，诸如结合亲和力。一般而言，人源化抗体将包含至少一个、通常两个基本上整个如下的可变域，其中所有或基本上所有高变环对应于非人免疫球蛋白序列的高变环，且所有或基本上所有FR区是人免疫球蛋白序列的FR区，尽管FR区可包含一处或多处改进抗体性能(诸如结合亲和力、异构化、免疫原性等)的个别FR残基替代。FR中这些氨基酸替代的数目，H链中通常不超过6处，L链通常不超过3处。人源化抗体任选还将包含至少部分免疫球蛋白恒定区(Fe)，通常是人免疫球蛋白的恒定区。更多细节参见例如Jones等，Nature321:522-525 (1986);Riechmann 等,Nature332:323-329(1988);及 Presta, Curr.0p.Struct.Biol.2:593-596 (1992)。还可参见例如 Vaswani and Hamilton, Ann.Allergy, Asthma&Immunol.1:105-115 (1998) ; Harris, Biochem.Soc.Transactions23:1035-1038 (1995) ; Hurleand Gross, Curr.0p.Biotech.5:428-433(1994);及美国专利 N0.6，982，321 和 7，087，409。
[0071]“人抗体”指拥有与由人生成的抗体的氨基酸序列对应的氨基酸序列和/或使用本文所公开的用于生成人抗体的任何技术生成的抗体。人抗体的这种定义明确排除包含非人抗原结合残基的人源化抗体。人抗体可使用本领域已知的多种技术来生成，包括噬菌体展不文库(Hoogenboom and Winter, J.Mol.Biol.227:381 (1991) ;Marks 等，J.Mol.Biol.222:581 (1991))。还可用于制备人单克隆抗体的是以下文献中记载的方法=Cole等,Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy,Alan R.Liss, p.77(1985);Boerner等，J.1mmunol.147 (I):86-95 (1991)。还可参见 van Dijk and van de ffinkel, Curr.0pin.Pharmacol., 5:368-74(2001)。可通过给已经修饰以应答抗原性刺激而生成人抗体但其内源基因组已经失去能力的转基因动物例如经过免疫的异种小鼠(xenomice)施用抗原来制备人抗体(参见例如美国专利N0.6，075，181和6，150，584，关于XEN0M0USE?技术)。还可参见例如 Li 等，Proc.Natl.Ascad.Sc1.USA, 103:3557-3562 (2006)，关于经人 B-细胞杂交瘤技术生成的人抗体。
[0072]术语“高变区”、“HVR”或“HV”在用于本文时指抗体可变域中序列上高度可变和/或形成结构上定义的环的区域。通常，抗体包含六个HVR:
[0073]三个在VH中(H1、H2、H3)，三个在VL中(L1、L2、L3)。在天然抗体中，H3和L3展示这六个HVR的最大多样性，而且认为特别是H3在赋予抗体以精密特异性中发挥独特作用。参见例如 Xu 等，Immunityl3:37-45 (2000) ; Johnson and Wu,于:Methods in MolecularBiology248:1-25 (Lo 编，Human Press, Totowa, NJ, 2003)。事实上,仅由重链组成的天然存在camelid抗体在缺乏轻链时是有功能的且稳定的。参见例如Hamers-Casterman等，Nature363:446-448 (1993);Sheriff 等，Nature Struct.Biol.3:733-736 (1996)。
[0074]本文中使用且涵盖许多HVR的叙述。Kabat互补决定区(CDR)是以序列变异性为基础的，而且是最常用的(Kabat等，Sequences of Proteins ofImmunological Interest, 5th Ed.Public Health Service, National Institutes ofHealth, Bethesda, MD.(1991))。Chothia 改为指结构环的位置(Chothia and Lesk J.Mol.Biol.196:901-917(1987)) o AbM HVR 代表 Kabat HVR 与 Chothia 结构环之间的折衷，而且得到Oxford Molecular的AbM抗体建模软件的使用。“接触” HVR是以对可获得的复合物晶体结构的分析为基础的。下文记录了这些HVR中每一个的残基。
【权利要求】
1.一种在个体中治疗癌症或延迟癌症进展的方法，其包括对所述个体施用有效量的PD-1轴结合拮抗剂和MEK抑制剂。
2.权利要求1的方法，其中所述ro-ι轴结合拮抗剂选自下组:ro-1结合拮抗剂、PD-Li结合拮抗剂和ro-L2结合拮抗剂。
3.权利要求2的方法，其中所述ro-1轴结合拮抗剂是ro-1结合拮抗剂。
4.权利要求3的方法，其中所述ro-1结合拮抗剂抑制ro-1与其配体结合配偶的结合。
5.权利要求4的方法，其中所述ro-1结合拮抗剂抑制ro-1与ro-Li的结合。
6.权利要求4的方法，其中所述ro-1结合拮抗剂抑制ro-1与ro-L2的结合。
7.权利要求4的方法，其中所述ro-1结合拮抗剂抑制ro-1与ro-Li和ro-L2两者的结合 ?
8.权利要求4的方法，其中所述ro-1结合拮抗剂是抗体。
9.权利要求8的方法，其中所述ro-Ι结合拮抗剂是MDX-1106。
10.权利要求8的方法，其中所述ro-Ι结合拮抗剂是Merck3745。
11.权利要求8的方法，其中所述ro-1结合拮抗剂是CT-OiI。
12.权利要求4的方法，其中所述ro-Ι结合拮抗剂是AMP-224。
13.权利要求2的方法，其中所述ro-Ι轴结合拮抗剂是PD-Ll结合拮抗剂。
14.权利要求13的方法，其中所述ro-Ll结合拮抗剂抑制PD-Ll与TO-1的结合。
15.权利要求13的方法，其中所述I3D-Ll结合拮抗剂抑制PD-Ll与B7-1的结合。
16.权利要求13的方法，其中所述ro-Ll结合拮抗剂抑制ro-Ll与ro-1和B7-1两者的结合。
17.权利要求13的方法，其中所述ro-Ll结合拮抗剂是抗体。
18.权利要求17的方法，其中所述ro-Ll结合拮抗剂选自下组:YW243.55.S70、MPDL3280A、和 MDX-1105。
19.权利要求17的方法，其中所述抗体包含重链和轻链，所述重链包含HVR-Hl序列SEQID NO:15，HVR-H2 序列 SEQ ID NO: 16，和 HVR-H3 序列 SEQ ID NO: 3 ;所述轻链包含 HVR-Ll序列 SEQ ID NO: 17，HVR-L2 序列 SEQ ID NO: 18，和 HVR-L3 序列 SEQ ID NO: 19。
20.权利要求17的方法，其中所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含氨基酸序列SEQ ID NO:24，所述轻链可变区包含氨基酸序列SEQ ID NO:21。
21.权利要求2的方法，其中所述ro-1轴结合拮抗剂是H)-L2结合拮抗剂。
22.权利要求21的方法，其中所述H)-L2结合拮抗剂是抗体。
23.权利要求21的方法，其中所述H)-L2结合拮抗剂是免疫粘附素。
24.权利要求1-23中任一项的方法，其中所述MEK抑制剂是竞争性MEK抑制剂。
25.权利要求1-23中任一项的方法，其中所述MEK抑制剂针对活化性KRAS突变更有选择性。
26.权利要求1-23中任一项的方法，其中所述MEK抑制剂是变构性MEK抑制剂。
27.权利要求1-23中任一项的方法，其中所述MEK抑制剂针对活化性BRAF突变更有选择性。
28.权利要求1-23中任一项的方法，其中所述MEK抑制剂是式(I)，(II)，(III)，(IV)，(V), (VI)或(VII)的化合物，或其药学可接受盐或溶剂合物。
29.权利要求1-23中任一项的方法，其中所述MEK抑制剂选自下组:G02442104、G-38963、G02443714、G00039805和(?C-0973，或其药学可接受盐或溶剂合物。
30.权利要求29的方法，其中所述MEK抑制剂是G02443714，G02442104或G00039805。
31.权利要求1-30中任一项的方法，其中所述癌症含有BRAFV600E突变。
32.权利要求1-30中任一项的方法，其中所述癌症含有BRAF野生型。
33.权利要求1-30中任一项的方法，其中所述癌症含有KRAS野生型。
34.权利要求1-30中任一项的方法，其中所述癌症含有活化性KRAS突变。
35.权利要求1-34中任一项的方法，其中所述治疗导致停止所述治疗后所述个体中持续的应答。
36.权利要求1-35中任一项的方法，其中连续施用所述MEK抑制剂。
37.权利要求1-35中任一项的方法，其中间歇施用所述MEK抑制剂。
38.权利要求1-35中任一项的方法，其中在所述I3D-1轴结合拮抗剂前施用所述MEK抑制剂。
39.权利要求1-3 5中任一项的方法，其中与所述I3D-1轴结合拮抗剂同时施用所述MEK抑制剂。
40.权利要求1-36中任一项的方法，其中在所述ro-Ι轴结合拮抗剂后施用所述MEK抑制剂。
41.权利要求1-40中任一项的方法，其中所述个体具有结肠直肠癌。
42.权利要求1-40中任一项的方法，其中所述个体具有黑素瘤。
43.权利要求1-40中任一项的方法，其中所述个体具有非小细胞肺癌。
44.权利要求1-40中任一项的方法，其中所述个体具有卵巢癌。
45.权利要求1-40中任一项的方法，其中所述个体具有乳腺癌。
46.权利要求1-40中任一项的方法，其中所述个体具有胰腺癌。
47.权利要求1-40中任一项的方法，其中所述个体具有血液学恶性(malignancy)。
48.权利要求1-40中任一项的方法，其中所述个体具有肾细胞癌。
49.一种在具有癌症的个体中增强免疫功能的方法，其包括以有效量施用ro-1轴结合拮抗剂和MEK抑制剂的组合。
50.权利要求49的方法，其中相对于施用所述组合前，所述个体中的CD8T细胞具有增强的引发、活化、增殖和/或细胞裂解活性。
51.权利要求50的方法，其中所述CD8T细胞活化以相对于施用所述组合前升高的Y -1FN+CD8T细胞频率和/或增强的细胞裂解活性为特征。
52.权利要求50的方法，其中相对于施用所述组合前，CD8T细胞的数目是升高的。
53.权利要求50-52中任一项的方法，其中所述⑶8T细胞是抗原特异性⑶8T细胞。
54.权利要求50的方法，其中相对于施用所述ro-Ι轴结合拮抗剂和所述MEK抑制剂前，所述个体中的癌细胞选择性具有MHC I类抗原表达的升高表达。
55.权利要求54的方法，其中所述个体的PBMC细胞没有MHCI类抗原的升高表达。
56.权利要求49的方法，其中相对于施用所述I3D-1轴结合拮抗剂和所述MEK抑制剂前，所述个体中的抗原呈递细胞具有增强的成熟和活化。
57.权利要求56的方法，其中所述抗原呈递细胞是树突细胞。
58.权利要求56的方法，其中抗原呈递细胞的成熟以增加的CD83+树突细胞频率为特征。
59.权利要求56的方法，其中抗原呈递细胞的活化以树突细胞上升高的CD80和CD86表达为特征。
60.权利要求50的方法，其中相对于施用所述组合前，所述个体中IL-10和/或IL-8的血清水平是降低的。
61.权利要求50的方法，其中所述癌症具有升高的T细胞浸润水平。
62.权利要求49-61中任一项的方法，其中所述MEK抑制剂是式(I)，(II)，(III)，(IV)，(V), (VI)或(VII)的化合物，或其药学可接受盐或溶剂合物。
63.权利要求49-61中任一项的方法，其中所述MEK抑制剂选自下组:G02442104，G-38963, G02443714, G00039805和⑶C-0973，或其药学可接受盐或溶剂合物。
64.权利要求49-61中任一项的方法，其中所述I3D-1轴结合拮抗剂是抗PD-Ll抗体。
65.权利要求64的方法，其中癌细胞表面上的I3D-Ll受到抑制免于将信号转导至胞内途径。
66.权利要求64的方法，其中所述抗ro-Ll抗体能够抑制ro-Ll和ro-1之间和/或PD-Ll和B7-1之间的结合。
67.权利要求64的方法，其中所述抗I3D-Ll抗体是单克隆抗体。
68.权利要求64的方法，其中所述抗I3D-Ll抗体是选自下组的抗体片段:Fab，Fab，-SH, Fv, scFv,和(Fab，)2 片段。
69.权利要求64-68中任一项的方法，其中所述抗I3D-Ll抗体是人源化抗体。
70.权利要求64-68中任一项的方法，其中所述抗I3D-Ll抗体是人抗体。
71.权利要求64的方法，其中所述抗体包含重链和轻链，所述重链包含HVR-Hl序列SEQID NO: 15，HVR-H2 序列 SEQ ID NO: 16，和 HVR-H3 序列 SEQ ID NO: 3，所述轻链包含 HVR-Ll序列 SEQ ID NO: 17，HVR-L2 序列 SEQ ID NO: 18，和 HVR-L3 序列 SEQ ID NO: 19。
72.权利要求64的方法，其中所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含氨基酸序列SEQ ID NO:24，所述轻链可变区包含氨基酸序列SEQ ID NO:21。
73.权利要求1-72中任一项的方法，其中静脉内，肌肉内，皮下，表面，口服，经皮，腹膜内，眶内，通过植入，通过吸入，鞘内，室内，或鼻内施用所述ro-1轴结合拮抗剂。
74.—种试剂盒，其包含PD-1轴结合拮抗剂和包装插页，该包装插页包含关于与MEK抑制剂组合使用所述PD-1轴结合拮抗剂以在个体中治疗癌症或延迟癌症进展的用法说明书。
75.—种试剂盒，其包含I3D-1轴结合拮抗剂和MEK抑制剂及包装插页，该包装插页包含关于使用所述ro-Ι轴结合拮抗剂和所述MEK抑制剂以在个体中治疗癌症或延迟癌症进展的用法说明书。
76.—种试剂盒，其包含MEK抑制剂和包装插页，该包装插页包含关于与I3D-1轴结合拮抗剂组合使用所述MEK抑制剂以在个体中治疗癌症或延迟癌症进展的用法说明书。
77.权利要求74-76中任一项的试剂盒，其中所述I3D-1轴结合拮抗剂是抗I3D-Ll抗体。
78.权利要求74-76中任一项的试剂盒，其中所述ro-1轴结合拮抗剂是抗ro-1抗体。
79.权利要求74-76中任一项的试剂盒，其中所述ro-1轴结合拮抗剂是抗ro-1免疫粘附素。
【文档编号】C07K16/30GK103842030SQ201280048398
【公开日】2014年6月4日 申请日期:2012年8月1日 优先权日:2011年8月1日
【发明者】H.梅克, B.欧文 申请人:霍夫曼-拉罗奇有限公司