专利名称：可溶于水的新的氟乙基喜树碱衍生物及其制造方法
技术领域：
本发明涉及具有抗肿瘤作用的新的化合物及其制造方法。
背景技术：
喜树碱是由喜树类植物分离出的生物碱(Wall等、J.Am.Chem.Soc，88，3888-3890(1966).)，已知是通过阻碍核酸合成，显示其抗肿瘤活性的(Lown等、Biochem，Pharmacol.，29,905-915(1989).)。可是在美国进行的临床试验结果表明，在毒性方面存在问题，而作为医药品停止开发。以后，以减轻毒性和增强活性为目的，对其衍生物进行了研究，但目前还未解决强毒性问题。例如，即使在喜树碱衍生物中，作为可进行静脉给药的抗肿瘤药剂最新开发的盐酸益立诺泰康(irinotecan hydrochloride)(Sawada等，Chem.Pharm.Bull，39,1446-1454(1991).)，除了有骨髓抑制等副作用之外，还发现由于为使其可溶于水，而加入的前体药物部分的氨基甲酰基结构，则产生胆碱酯酶阻碍作用，由此引起的消化道障碍的问题(川户等，基础和临床24,229-234(1990).)。
另外，作为可溶于水的喜树碱衍生物，最近公开的10，11-亚甲二氧基-20-O-甘氨酰喜树碱(Wall等，J.Med.Chem.，36,2689(1993).)，具有与本发明化合物相类似的结构，但未公开对于固形肿瘤的抗肿瘤效果，另外，毒性也强。
另外，由于大多数喜树碱衍生物难溶于水，在临床上，作为最普通的给药方法的静脉给药是困难的，在作为医药品开发上存在较大问题。例如将喜树碱衍生物的20位的乙基变换成2-氟乙基的氟乙基喜树碱衍生物(特开平5-17479号)，虽然是能维持强的抗肿瘤活性，并且也是降低了原来毒性的化合物，但该化合物难溶于水，作为注射剂，难以开发。
发明的公开鉴于这样的背景，本发明者们对于具有强的抗肿瘤活性，并与以往的喜树碱衍生物相比较，具有低毒性，且可溶于水的氟乙基喜树碱衍生物，进行了潜心地研究。其结果发现，10-乙氧基-7-乙基-18-氟喜树碱的20位羟基的甘氨酰酯具有高于以往的喜树碱衍生物的，优良的抗肿瘤活性和高安全性，及可静脉给药的水溶性，从而完成了本发明。
因此，本发明的目的在于提供用下式(1)表示的化合物，及其盐。
本发明化合物，例如可通过下述的反应式1表示的方法进行制造。
即，将化合物(2)，在二氯甲烷、氯仿等卤化烃类；四氢呋喃、二噁烷、乙二醇二甲基醚等的醚类；苯、甲苯等的芳香族烃类；N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺等的酰胺类；乙腈或醋酸乙酯等的溶剂中，与保护了氮的甘氨酸衍生物，必要时使用N，N′-二环己基碳化二亚胺、1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐、碳化二咪唑等缩合剂，在三乙胺、二异丙基胺，吡啶、4-(N，N-二甲氨基)吡啶、1，8-二氮杂双环-7-(十一)碳烯等的胺存在下，进行反应后，通过酸、碱或接触还原进行脱保护，既可制造用式(1)表示的化合物。反应通常在-78℃～120℃、优选的在0℃～120℃下，进行10分钟～48小时，优选的是30分钟～24小时。
作为形成盐所使用的酸，只要是生理学上容许的，没有特别限制，但可举出盐酸、硫酸、磷酸等无机酸、甲酸、乙酸等有机酸。另外，将这些酸，使用水、甲醇、乙醇、2-丙醇等醇类、四氢呋喃、二噁烷、乙二醇二甲基醚等的醚类、乙腈或醋酸乙酯等作为溶剂，进行氨基酸的脱保护，可直接制造用式(1)表示的化合物的盐。反应通常在-78℃～120℃、优选的是0℃～120℃下，进行10分钟～48小时，优选的是30分钟～24小时。反应式1
用实验例说明本发明的效果。实验例1将5×106个肉瘤180细胞，移植到5周龄的ICR雌性小鼠的腋窝部的皮下，从移植次日起，每隔4天，从尾静脉给药3次。移植后的第14天，测定摘出的肿瘤重量，将给药组的平均肿瘤重量(T)和对照组的平均肿瘤重量(C)的比(T/C)得到的肿瘤增殖抑制率(TGI＝(1-T/C)×100)，作为所具有的抗肿瘤效果。其结果如表1所示。实验例2将1×106个小鼠结肠癌colon26细胞，移植到9周龄的CDF-1雌性小鼠腋窝部的皮下，通过指触，确认肿瘤的移植6天后，每隔4天，从尾静脉给药3次。测定移植后第17天～19天摘出的肿瘤重量，将给药组的平均肿瘤重量(T)和对照组的平均肿瘤重量(C)的比(T/C)得到的肿瘤增殖抑制率(TGI＝(1-T/C)×100)，作为所具有的抗肿瘤效果。其结果如表2所示。实验例3按照Ellman等的报告(Biochem.Pharmacol.，7，88-95(1961).)，利用乙酰胆碱酯酶以碘化乙酰硫胆碱作为基质时，生成的硫胆碱与二硫双硝基苯甲酸(DTNB)结合、发色的反应，测定乙酰胆碱酯酶反应的阻碍。即，在2.6ml的0.1M钠-磷酸缓冲液(pH＝8.0)中，加入0.1ml的10mMDTNB溶液、0.1ml的酶液或水，及0.1ml的阻制剂溶液，在25℃下，保温15分钟，加入0.1ml的碘化乙酰硫胆碱，测定412nm处的吸光度。按照line wave.bark法对反应速度和碘化乙酰硫胆碱的浓度进行作图，求出Vmax.Km，进而从阻制剂的浓度，算出阻制常数(Ki)。其结果如表3所示。表1对小鼠肉瘤180肿瘤的效果
如表1所示，本发明化合物，在研究抗肿瘤效果上，显示了，对于作为一般的固形肿瘤的小鼠的肉瘤180，用静脉给药，超过盐酸益立诺泰康的肿瘤增殖抑制效果。
进而，还值得惊奇的是，如表2所示，盐酸益立诺泰康和，具有与本发明化合物类似结构的10，11-亚甲基二氧基-20-O-甘氨酰喜树碱盐酸盐，对于在小鼠身上进展的结肠癌26肿瘤完全不显示效果，但当静脉给药本发明化合物时则显示了明显的肿瘤增殖抑制效果，这证明本发明化合物具有优于以往的喜树碱衍生物的抗肿瘤活性。
另外，本发明化合物，即使总给药量为180mg/kg，也未发现毒性，比起仅仅20mg/kg的给药量就发现毒性的10，11-亚甲二氧基-20-O-甘氨酰喜树碱盐酸盐就不用待言，而且也显示了超过盐酸益立诺泰康的安全性。
进而，如表3所示，与盐酸益立诺泰康相比较，胆碱酯酶的阻碍作用显著弱，发现痢疾等消化道障碍的可能性低。另外，由于是氨基酸的前体药物，所以不必担心在生物体内，复归母化合物后，由于前体药物部分而引起毒性。
进而，本发明化合物，对于进行静脉内给药所必要的水，具有溶解度。
这样，本发明化合物的抗肿瘤活性优良、安全性高、是水溶性的，因此作为抗肿瘤药剂是有用的。
以下，用实施例及参考例，进一步详细地说明本发明。
实施本发明的最佳方案实施例14-〔(氨基甲基羰基)氧基〕-9-乙氧基-11-乙基-4-(2-氟乙基)-1H-吡喃并〔3′，4′6，7〕吲哚嗪并〔1，2-b〕喹啉-3，14(4H，12H)-二酮盐酸盐的合成将9-乙氧基-11-乙基-4-(2-氟乙基)-4-羟基-1H-吡喃并〔3′，4′6，7〕吲哚嗪并〔1，2-b〕喹啉-3，14(4H，12H)-二酮294mg、N-(叔丁氧羰基)甘氨酸235mg、1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐661mg、4-(N，N-二甲氨基)吡啶50mg及二氯甲烷35ml进行混合在氩气流下，在室温下，搅拌1.5小时用二氯甲烷30ml稀释反应液，水洗，用无水硫酸钠干燥后，进行浓缩，用硅胶柱(洗脱溶剂；二氯甲烷∶甲醇＝25∶1)精制残渣。将洗脱出的黄色泡状物质，溶解在盐酸饱和醋酸乙酯(3摩尔/升)3ml中，在室温下，搅拌1小时后，滤取析出晶体。用醋酸乙酯，接着，用乙醚，洗涤滤取的结晶，得到290mg的黄色粉末目的物。
熔点201～210℃(分解)元素分析值以C26H26FN3O6·2HCl·2H2O计计算值(％)C，51.66；H，5.34；N，6.95实测值(％)C，51.57；H，5.21；N，7.20。实施例2(-)-4-〔(氨基甲基羰基)氧基〕-9-乙氧基-11-乙基-4-(2-氟乙基)-1H-吡喃并〔3′，4′6，7〕吲哚嗪并〔1，2-b〕喹啉-3，14(4H，12H)二酮盐酸盐的合成将(+)-9-乙氧基-11-乙基-4-(2-氟乙基)-4-羟基-1H-吡喃并〔3′，4′6，7〕吲哚嗪并〔1，2-b〕喹啉-3，14(4H，12H)-二酮10.0mg、N-(叔丁氧羰基)甘氨酸8.0mg、1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐22.0mg、4-(N，N-二甲氨基)吡啶2mg、及二氯甲烷1ml进行混合，在氩气流中，在室温下，搅拌1小时。用二氯甲烷2ml，稀释反应液，进行水洗，用无水硫酸钠干燥后，浓缩，用硅胶柱(洗脱溶剂；二氯甲烷∶甲醇＝25∶1)精制残渣。将洗脱出的黄褐色泡状物质，溶解在盐酸饱和醋酸乙酯(3摩尔/升)0.2ml中，在室温下，搅拌30分钟后，滤取析出结晶。将滤取的结晶，用醋酸乙酯、接着，用乙醚洗涤，得到黄色固体的目的物3.6mg。
质谱(FAB)m/e＝496〔(M+H)+〕(α)D25＝-67.2℃(C＝0.13、水)产业上可利用性本发明新的氟乙基喜树碱衍生物具有强的抗肿瘤活性，且与以往的喜树碱衍生物相比较，是毒性低，可溶于水的有用化合物。
权利要求
1.用下式(1)表示的化合物及其盐。
2.用式(1)表示的化合物及其盐的制造方法，其特征是将保护了氨基的甘氨酸衍生物，与用下式(2)
表示的化合物反应后，进行脱保护制备下式(1)表示的化合物及其盐。
全文摘要
本发明涉及用化学式(1)表示的化合物,及其盐,以及其制造方法。上述氟乙基喜树碱衍生物是具有强抗肿瘤活性、低毒性、可溶于水的有用化合物。
文档编号C07D491/147GK1187195SQ96194556
公开日1998年7月8日 申请日期1996年6月5日 优先权日1995年6月8日
发明者朝比奈由和, 大森康男 申请人:杏林制药株式会社