一种滑菇多糖粗品的制备方法
【专利摘要】本发明提供一种滑菇多糖粗品的制备方法，涉及抗肿瘤药物领域，其具体工艺过程如下：粉碎、筛分→微波处理→浸提→酶解→膜过滤→提取→脱色→干燥八个步骤完成；本发明的优点在于：1、纯度高，纯度为70~75%高纯度的可溶性滑菇多糖。2、生产工艺简单，避免了传统真菌多糖提取工艺中大量使用有机溶剂、工艺过程复杂的缺点，简化了生产工艺。3、产率高，本发明制备滑菇多糖的产率高，一般为2~3%，均高于其他食用菌制备真菌多糖的产率。
【专利说明】一种滑菇多糖粗品的制备方法
[0001]一、【技术领域】
本发明涉及抗肿瘤药物领域，尤其涉及一种滑菇多糖粗品的制备方法。
[0002]二、【背景技术】
由于肿瘤细胞与人体某些正常细胞有高度的相似性，能直接杀伤癌细胞的化疗药大多也能杀伤那些正常细胞，这正是大多数化疗药产生毒副作用的原因所在。由于肿瘤的发生和发展与机体免疫能力密切相关，因此，有专家提出“肿瘤免疫法”的概念:在正常人体内存在着多种免疫因子，它们可对癌细胞实施有效攻击，例如香菇多糖、云芝多糖、滑菇多糖具有广泛免疫调剂和抗肿瘤活性，现已批准成为临床常用的抗癌药物。这种通过提高自身免疫力的疗法不失为治疗肿瘤的有效途径之一，肿瘤免疫疗法确有其独具的潜力和实用价值。
[0003]滑燕(Pholiota nameko),又名珍珠燕、滑子蘑,担子菌纲,伞菌目，盖球燕科,磷伞属。台湾称为珍珠菇，日本称为纳美菇。滑菇属低温结实型菇类，菌丝体生长的温度范围为4~32°C，子实体生长的温度范围为5~20°C，能耐酸性，适合其生长的pH范围一般为
4.0~8.0 ;菇伞直径3~8cm，菇柄长2~5cm，菇伞呈茶褐色或橙褐色，也有的呈黄色或锈橙色。由于子实体表面附有粘液，手摸粘滑，故以滑菇得名。它是一种木材腐生菌，营养丰富。含氨基酸15.78%、粗脂肪4%，并含有多种矿物质元素。滑子菇菇体小、长势丛集、表面有半透明黏胶质 、生长旺盛、耐寒性强、味道鲜美、营养丰富，是汤料的美好添加品。滑子菇原产于日本，上世纪80年代在东北引种成功。近年来研究表明，滑菇能提高机体免疫功能、增进智力、改善视力、提高耐力；尤其是滑菇中多糖物质，对肿瘤具有抑制作用，并可预防葡萄球菌、大肠杆菌、肺炎杆菌、结核杆菌的感染。松本保久研究发现，热水提取的滑菇多糖(PNP)对小白鼠肉瘤180的抑制率达86.5%，此外，滑菇子实体的热水提取物对小鼠S-180的抑制率为60%，氢氧化钠溶液提取物对小白鼠肉瘤180的抑制率达90%，对艾氏腹水癌的抑制率达70%。
[0004]三、
【发明内容】
本发明的目的在于提供一种滑菇多糖粗品的制备方法；其具体工艺过程如下:一种滑菇多糖粗品的制备方法，是由以下步骤完成:
步骤一:粉碎、筛分，将滑菇子实体在粉碎机里粉碎，粉碎的粉末过用10~20目筛网筛分，筛下物加入到容器中，并加入筛下物重量的8~15倍的水；
步骤二:微波处理，微波波长为2450MHz，功率为800w，处理时间为3~5分钟；步骤三:浸提，将步骤二微波处理过的溶液加热至90~100°C，时间2~4小时，间歇搅拌，并加水保持容器内液面高度不变，煎煮液用60~80目滤布过滤，得提取液，滤渣继续加入8~15倍重量的水，重复步骤二、步骤三，除去残渣，合并两次提取的上清液；
步骤四:酶解，将步骤三得到的上清液加热至40~60°C，保温，加入上清液重量的
0.25%~0.5%的中性蛋白酶，PH值为6.0~8.0,间歇搅拌，酶解2~4小时后将酶解液升温至90~100°C，保温25~35分钟，保温结束后，用60~100目滤布过滤酶解液；
步骤五:膜过滤，将步骤四得到的过滤酶解液用截留分子量为5000~10000D的超滤膜过滤，收集截流液，将截留液浓缩至滑菇子实体粉I~2倍的重量；
步骤六:提取，再向步骤五得到的浓缩液中加入3~4倍重量的浓度为95%的乙醇，边加边搅拌，室温放置24~28小时，2000~3500rpm离心机分离8~12分钟，收集沉淀物，将沉淀物再溶于滑菇子实体粉I~2倍的重量水中，重复上述步骤2次；
步骤七:脱色，将步骤六得到的沉淀物溶于滑菇子实体I~2倍的重量的水中，水溶液里加入溶液0.02~0.1倍重量浓度为10~11%的双氧水，于40~60°C搅拌2~3小时，至溶液变白；
步骤八:干燥，将步骤七得到的白色水溶液加热升温至90~100°C，保温15分钟，55°C~105°C喷雾干燥，使水份除到5~8%，得到滑菇多糖粗品产物；
本发明具有如下有益效果:1、纯度高，本发明以新鲜滑菇子实体为原料，采用微波辅助热水浸提、蛋白酶水解、超滤膜过滤、乙醇沉淀的方式，使滑菇中的胶体、鞣质和蛋白质被去除，再采用双氧水进行脱色，使滑菇多糖色泽鲜白，最后经干燥得到品质好、纯度为70-75%高纯度的可溶性滑菇多糖。2、生产工艺简单，本发明利用现代生物技术，采用蛋白酶水解、超滤膜过滤的方式，大量的去除蛋白、色素等杂质，避免了传统真菌多糖提取工艺中大量使用有机溶剂、工艺过程复杂的缺点，简化了生产工艺。3、产率高，本发明制备滑菇多糖的产率高，一般为2~3%。
[0005]四、【具体实施方式】
实施例1:一种滑菇多糖粗品的制备方法，其是由以下步骤完成:
步骤一:粉碎、筛分，将滑菇子实体在粉碎机里粉碎，粉碎的粉末过用10目筛网筛分，将20kg筛下物加入到容器中，并加入筛下物重量的8倍的水；
步骤二:微波处理，微波波 长为2450MHz，功率为800w，处理时间为3分钟；
步骤三:浸提，将步骤二微波处理过的溶液加热至90°C，时间2小时，间歇搅拌，并加水保持容器内液面高度不变，煎煮液用60目滤布过滤，得提取液，滤渣继续加入8倍重量的水，重复步骤二、步骤三，除去残渣，合并两次提取的上清液；
步骤四:酶解，将步骤三得到的上清液加热至40°C，保温，加入上清液重量的0.25%的中性蛋白酶，PH值为6.0,间歇搅拌，酶解2小时后将酶解液升温至90°C，保温25分钟，保温结束后，用60目滤布过滤酶解液；
步骤五:膜过滤，将步骤四得到的过滤酶解液用截留分子量为5000D的超滤膜过滤，收集截流液，将截留液浓缩至滑菇子实体粉I倍的重量；
步骤六:提取，再向步骤五得到的浓缩液中加入3倍重量的浓度为95%的乙醇，边加边搅拌，室温放置24小时，2000rpm离心机分离8分钟，收集沉淀物，将沉淀物再溶于滑菇子实体粉I倍的重量水中，重复上述步骤2次；
步骤七:脱色，将步骤六得到的沉淀物溶于滑菇子实体I倍的重量的水中，水溶液里加入溶液0.02倍重量浓度为10%的双氧水，于40°C搅拌2~3小时，至溶液变白；
步骤八:干燥，将步骤七得到的白色水溶液加热升温至90°C，保温15分钟，55°C喷雾干燥，使水份除到8%,得到0.458kg滑菇多糖粗品产物，滑菇粗多糖的纯度为71.8%，产率为2.29%ο
[0006]实施例2:—种滑菇多糖粗品的制备方法，其是由以下步骤完成:
步骤一:粉碎、筛分，将滑菇子实体在粉碎机里粉碎，粉碎的粉末过用12目筛网筛分，将20kg筛下物加入到容器中，并加入筛下物重量的10倍的水；
步骤二:微波处理，微波波长为2450MHz，功率为800w，处理时间为3.5分钟；
步骤三:浸提，将步骤二微波处理过的溶液加热至93°C，时间2.5小时，间歇搅拌，并加水保持容器内液面高度不变，煎煮液用65目滤布过滤，得提取液，滤渣继续加入10倍重量的水，重复步骤二、步骤三，除去残渣，合并两次提取的上清液；
步骤四:酶解，将步骤三得到的上清液加热至45°C，保温，加入上清液重量的0.30%的中性蛋白酶，PH值为6.5，间歇搅拌，酶解2.5小时后将酶解液升温至95°C，保温28分钟，保温结束后，用70目滤布过滤酶解液；
步骤五:膜过滤，将步骤四得到的过滤酶解液用截留分子量为6500D的超滤膜过滤，收集截流液，将截留液浓缩至滑菇子实体粉1.2倍的重量；
步骤六:提取，再向步骤五得到的浓缩液中加入3.2倍重量的浓度为95%的乙醇，边加边搅拌，室温放置25小时，2500rpm离心机分离9分钟，收集沉淀物，将沉淀物再溶于滑菇子实体粉1.2倍的重量水中，重复上述步骤2次；
步骤七:脱色，将步骤六得到的沉淀物溶于滑菇子实体1.2倍的重量的水中，水溶液里加入溶液0.04倍重量浓度为10.2%的双氧水，于45°C搅拌2.2小时，至溶液变白；
步骤八:干燥，将步骤七得到的白色水溶液加热升温至92°C，保温15分钟，65°C V喷雾干燥，使水份除到7%，得到0.47kg滑菇多糖粗品产物，滑菇粗多糖的纯度为73.5%，产率为2.37%。
[0007]实施例3: —种滑菇多糖粗品的制备方法，其由以下步骤完成:
步骤一:粉碎、筛分，将滑菇子实体在粉碎机里粉碎，粉碎的粉末过用15目筛网筛分，将20kg筛下物加入到容器中，并加入筛下物重量的11倍的水；
步骤二:微波处理，微波波长为2450MHz，功率为800w，处理时间为4分钟；
步骤三:浸提，将步骤二微波处理过的溶液加热至95°C，时间3小时，间歇搅拌，并加水保持容器内液面高度不变，煎煮液用70目滤布过滤，得提取液，滤渣继续加入8~15倍重量的水，重复步骤二、步骤三，除去残渣，合并两次提取的上清液；
步骤四:酶解，将步骤三得到的上清液加热至50°C，保温，加入上清液重量的0.33%的中性蛋白酶，PH值为7.0,间歇搅拌，酶解3小时后将酶解液升温至95°C，保温30分钟，保温结束后，用80目滤布过滤酶解液；
步骤五:膜过滤，将步骤四得到的过滤酶解液用截留分子量为7500D的超滤膜过滤，收集截流液，将截留液浓缩至滑菇子实体粉1.5倍的重量；
步骤六:提取，再向步骤五得到的浓缩液中加入3.5倍重量的浓度为95%的乙醇，边加边搅拌，室温放置26小时，2750rpm离心机分离10分钟，收集沉淀物，将沉淀物再溶于滑菇子实体粉1.5倍的重量水中，重复上述步骤2次；
步骤七:脱色，将步骤六得到的沉淀物溶于滑菇子实体1.5倍的重量的水中，水溶液里加入溶液0.06倍重量浓度为10.5%的双氧水，于50°C搅拌2.5小时，至溶液变白；
步骤八:干燥，将步骤七得到的白色水溶液加热升温至95°C，保温15分钟，85°C喷雾干燥，使水份除到6%，得到0.578kg滑菇多糖粗品产物；滑菇粗多糖的纯度为78.6%，产率为2.89%ο
[0008]实施例4:一种滑菇多糖粗品的制备方法，其特征是:是由以下步骤完成:步骤一:粉碎、筛分，将滑菇子实体在粉碎机里粉碎，粉碎的粉末过用17目筛网筛分，将20kg筛下物加入到容器中，并加入筛下物重量的14倍的水；
步骤二:微波处理，微波波长为2450MHz，功率为800w，处理时间为4.5分钟；
步骤三:浸提，将步骤二微波处理过的溶液加热至97°C，时间3.5小时，间歇搅拌，并加水保持容器内液面高度不变，煎煮液用75目滤布过滤，得提取液，滤渣继续加入14倍重量的水，重复步骤二、步骤三，除去残渣，合并两次提取的上清液；
步骤四:酶解，将步骤三得到的上清液加热至55°C，保温，加入上清液重量的0.45%的中性蛋白酶，PH值为7.5，间歇搅拌，酶解3.5小时后将酶解液升温至98°C，保温32分钟，保温结束后，用90目滤布过滤酶解液； 步骤五:膜过滤，将步骤四得到的过滤酶解液用截留分子量为8500D的超滤膜过滤，收集截流液，将截留液浓缩至滑菇子实体粉I~2倍的重量；
步骤六:提取，再向步骤五得到的浓缩液中加入3.8倍重量的浓度为95%的乙醇，边加边搅拌，室温放置27小时，3000rpm离心机分离11分钟，收集沉淀物，将沉淀物再溶于滑菇子实体粉1.8倍的重量水中，重复上述步骤2次；
步骤七:脱色，将步骤六得到的沉淀物溶于滑菇子实体1.8倍的重量的水中，水溶液里加入溶液0.08倍重量浓度为10.8%的双氧水，于55°C搅拌2.8小时，至溶液变白；
步骤八:干燥，将步骤七得到的白色水溶液加热升温至98°C，保温15分钟，95°C喷雾干燥，使水份除到5.5%，得到0.526kg滑菇多糖粗品产物，滑菇粗多糖的纯度为75.1%，产率为2.63%。
[0009]实施例5: —种滑菇多糖粗品的制备方法，其特征是:是由以下步骤完成:
步骤一:粉碎、筛分，将滑菇子实体在粉碎机里粉碎，粉碎的粉末过用20目筛网筛分，将20kg筛下物加入到容器中，并加入筛下物重量的15倍的水；
步骤二:微波处理，微波波长为2450MHz，功率为800w，处理时间为5分钟；
步骤三:浸提，将步骤二微波处理过的溶液加热至100°C，时间4小时，间歇搅拌，并加水保持容器内液面高度不变，煎煮液用80目滤布过滤，得提取液，滤渣继续加入15倍重量的水，重复步骤二、步骤三，除去残渣，合并两次提取的上清液；
步骤四:酶解，将步骤三得到的上清液加热至60°C，保温，加入上清液重量的0.5%的中性蛋白酶，PH值为8.0,间歇搅拌，酶解4小时后将酶解液升温至100°C，保温35分钟，保温结束后，用100目滤布过滤酶解液；
步骤五:膜过滤，将步骤四得到的过滤酶解液用截留分子量为10000D的超滤膜过滤，收集截流液，将截留液浓缩至滑菇子实体粉2倍的重量；
步骤六:提取，再向步骤五得到的浓缩液中加入4倍重量的浓度为95%的乙醇，边加边搅拌，室温放置28小时，3500rpm离心机分离12分钟，收集沉淀物，将沉淀物再溶于滑菇子实体粉2倍的重量水中，重复上述步骤2次；
步骤七:脱色，将步骤六得到的沉淀物溶于滑菇子实体2倍的重量的水中，水溶液里加入溶液0.1倍重量浓度为11%的双氧水，于60°C搅拌3小时，至溶液变白；
步骤八:干燥，将步骤七得到的白色水溶液加热升温至100°C，保温15分钟，105°C喷雾干燥，使水份除到5%，得到0.494kg滑菇多糖粗品产物；滑菇粗多糖的纯度为74.5%，产率为
2.47%ο
【权利要求】
1.一种滑菇多糖粗品的制备方法，其特征是:是由以下步骤完成: 步骤一:粉碎、筛分，将滑菇子实体在粉碎机里粉碎，粉碎的粉末过用10~20目筛网筛分，筛下物加入到容器中，并加入筛下物重量的8~15倍的水； 步骤二:微波处理，微波波长为2450MHz，功率为800w，处理时间为3~5分钟；步骤三:浸提，将步骤二微波处理过的溶液加热至90~100°C，时间2~4小时，间歇搅拌，并加水保持容器内液面高度不变，煎煮液用60~80目滤布过滤，得提取液，滤渣继续加入8~15倍重量的水，重复步骤二、步骤三，除去残渣，合并两次提取的上清液； 步骤四:酶解，将步骤三得到的上清液加热至40~60°C，保温，加入上清液重量的`0.25%~0.5%的中性蛋白酶，PH值为6.0~8.0,间歇搅拌，酶解2~4小时后将酶解液升温至90~100°C，保温25~35分钟，保温结束后，用60~100目滤布过滤酶解液； 步骤五:膜过滤，将步骤四得到的过滤酶解液用截留分子量为5000~10000D的超滤膜过滤，收集截流液，将截留液浓缩至滑菇子实体粉I~2倍的重量； 步骤六:提取，再向步骤五得到的浓缩液中加入3~4倍重量的浓度为95%的乙醇，边加边搅拌，室温放置24~28小时，2000~3500rpm离心机分离8~12分钟，收集沉淀物，将沉淀物再溶于滑菇子实体粉I~2倍的重量水中，重复上述步骤2次； 步骤七:脱色，将步骤六得到的沉淀物溶于滑菇子实体I~2倍的重量的水中，水溶液里加入溶液0.02~0.1倍重量浓度为10~11%的双氧水，于40~60°C搅拌2~3小时，至溶液变白； 步骤八:干燥，将步骤七得到的白色水溶液加热升温至90~100°C，保温15分钟，55°C~105°C喷雾干燥，使水份除到5~8%，得到滑菇多糖粗品产物。
【文档编号】C08B37/00GK103864944SQ201310543563
【公开日】2014年6月18日 申请日期:2013年11月6日 优先权日:2013年11月6日
【发明者】张绍龙 申请人:青海麟丰农业科技有限公司