本发明涉及新的酰肼类化合物，尤其是式(I)所示化合物，其制备方法、药物组合物及其作为作为抗凝剂在治疗和预防血栓栓塞性疾病中的用途。
背景技术：
心血管疾病是发达国家人口致病和致死的主要原因，其中大多数的心血管事件主要归因于血栓形成。华法林是第一个获批上市的口服抗凝药物，其应用受困于缓慢的维生素K依赖型拮抗作用、药物与药物之间的相互作用以及药物与食物之间的相互作用，这导致了需要进行连续监测以获得准确剂量。其他的抗凝剂比如肝素、磺达肝素等只适合于肠胃外给药。现有抗凝剂的上述缺陷推动了新的抗凝血药物的深入研究。
在血液凝血级联系统中，凝血因子Xa在可以被内部路径(触点激活)和外部路径(组织因子)所激活的共同的交界处保持平衡，因此是一种独特的丝氨酸蛋白酶。与级联系统中凝血酶所发挥的多种作用相比，凝血因子Xa只将凝血酶原转化为凝血酶，但不影响现有的循环凝血酶水平。在临床前动物模型中，相对于凝血酶抑制剂，凝血因子Xa抑制剂降低了出血风险并提高了安全性/有效性。因此，在过去的十年中，在发现和开发选择性的和口服活性的小分子凝血因子Xa抑制剂作为治疗静脉或动脉血栓栓塞的抗凝血剂方面已经取得了巨大的进步，例如，预防术后深静脉血栓形成(DVT)和肺栓塞(PE)，预防在心房颤动时的中风，治疗急性冠脉综合征(ACS)，尤其是式(B-Ⅰ)所示利伐沙班(US2003/153610)和式(B-Ⅱ)所示阿哌沙班(WO2003/049681)分别于2011年和2013年经FDA批准上市。
目前，为了预防经历了择期全髋关节置换术或全膝关节置换手术的患者的静脉血栓栓塞(VTE)，利伐沙班的标准剂量是10毫克，每天一次。然而，利伐沙班的较高疗效伴随着较高的出血倾向，重大或致命性出血的风险也不容小觑，尤其是在病人长期服药的情况下。此外，利伐沙班水溶性差，因而难以开发静脉注射制剂。与利伐沙班不同，阿哌沙班的标准剂量为5毫克，一天两次。阿哌沙班在体内被迅速吸收，在给药后约1-3小时达到Cmax。达到初始的Cmax后，阿哌沙班的血浆浓度初始快速下降，然后经历一个平缓的终端阶段，半衰期为8–15小时，因此阿哌沙班是每天给药两次。阿哌沙班多个代谢途径被氧化成几种代谢物，包括肾和肠道代谢排出体外。使用阿哌沙班治疗的患者与CYP3A4的强效抑制剂联合治疗是存在高风险的。因此，提高这方面是相当需要更广泛地利用Xa因子抑制剂。
在这方面，从临床的观点来看，开发对凝血因子Xa具有高特异性和强效抑制作用并且具有较高水溶性、口服给药更有效、更适合静脉给药、具有更大的治疗窗口和较少的出血倾向的药物已经引起人们的极大关注。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供式(Ⅰ)所示的化合物或其药学上可接受的盐、水合物或者前药：
其中，
X选自3-9元碳环或其苯并环、4-10元杂环或其苯并环；
Y、Z分别独立地选自4-9元饱和杂环；
R1-3分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、CN、OH、SH、NH2、CHO、COOH，或选自任选被R01取代的C1-10烷基或杂烷基、C3-10环烃基或杂环烃基、被C3-10环烃基或杂环烃基取代的C1-10烷基或杂烷基；
R01选自F、Cl、Br、I、CN、OH、SH、NH2、CHO、COOH、R02；
R02选自C1-10烷基、C1-10烷氨基、N,N-二(C1-10烷基)氨基、C1-10烷氧基、C1-10烷酰基、C1-10烷氧羰基、C1-10烷基磺酰基、C1-10烷基亚磺酰基、C3-10环烷基、C3-10环烷氨基、C3-10杂环烷氨基、C3-10环烷氧基、C3-10环烷基酰基、C3-10环烷氧羰基、C3-10环烷基磺酰基、C3-10环烷基亚磺酰基；
杂原子或杂原子团分别独立地选自-C(＝O)N(Rd3)-、-N(Rd4)-、-C(＝NRd5)-、-S(＝O)2N(Rd6)-、-S(＝O)N(Rd7)-、-O-、-S-、＝O、＝S、-C(＝O)O-、-C(＝O)-、-C(＝S)-、-S(＝O)-和/或-S(＝O)2-；
Rd3-d7分别独立地选自H、R03；
R03选自C1-10烷基、C1-10烷基酰基、C1-10烷氧羰基、C1-10烷基磺酰基、C1-10烷基亚磺酰基、C3-10环烷基、C3-10环烷基酰基、C3-10环烷氧羰基、C3-10环烷基磺酰基、C3-10环烷基亚磺酰基；
R02、R03任选地被R001取代；
R001选自F、Cl、Br、I、CN、OH、N(CH3)2、NH(CH3)、NH2、CHO、COOH、三氟甲基、氨甲基、羟甲基、甲基、甲氧基、甲酰基、甲氧羰基、甲磺酰基、甲基亚磺酰基；
R01、R001、杂原子或杂原子团的数目分别独立地选自0、1、2或3；
任选地，R1与R2、R2与R3共同连接到同一个碳原子或杂原子上形成一个5-7元环。
本发明的一个方案中，上述X选自其中，
R11-16分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、CN、OH、SH、NH2、CHO、COOH，或选自任选被R01取代的C1-10烷基或杂烷基、C3-10环烃基或杂环烃基、被C3-10环烃基或杂环烃基取代的C1-10烷基或杂烷基；
D11选自-C(Rd1)(Rd2)-、-C(＝O)N(Rd3)-、-N(Rd4)-、-C(＝NRd5)-、-S(＝O)2N(Rd6)-、-S(＝O)N(Rd7)-、-O-、-S-、-C(＝O)O-、-C(＝O)-、-C(＝S)-、-S(＝O)-或-S(＝O)2-；
Rd1、Rd2分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、CN、OH、SH、NH2、CHO、COOH，或选自任选被R01取代的C1-10烷基或杂烷基、C3-10环烃基或杂环烃基、被C3-10环烃基或杂环烃基取代的C1-10烷基或杂烷基；
其他变量如权利要求1所定义。
本发明的一个方案中，上述X选自其中R101-107分别独立地选自CH3O-、F、Cl、CN、NH2、CF3O-、CHF2O-、-C(＝O)NH2、CH3S(＝O)2-，其他变量如权利要求1或2所定义。
本发明的一个方案中，上述X选自
本发明的一个方案中，上述结构单元选自R21-23分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、CN、OH、SH、NH2、CHO、COOH，或选自任选被R01取代的C1-10烷基或杂烷基、C3-10环烃基或杂环烃基、被C3-10环烃基或杂环烃基取代的C1-10烷基或杂烷基，其他变量如权利要求1所述。
本发明的一个方案中，上述R21-23分别独立地选自H、CN、CF3、CH3、CH3CH2、环丙基、-C(＝O)NH2、
本发明的一个方案中，上述结构单元选自
本发明的一个方案中，上述Y选自其中，T31-32分别独立地选自N或C(Rt)；
D31-32分别独立地选自单键、-C(Rd1)(Rd2)-、-C(＝O)N(Rd3)-、-N(Rd4)-、-C(＝NRd5)-、-S(＝O)2N(Rd6)-、-S(＝O)N(Rd7)-、-O-、-S-、-C(＝O)O-、-C(＝O)-、-C(＝S)-、-S(＝O)-或-S(＝O)2-，且两者不同时为单键；
Rt、Rd1、Rd2分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、CN、OH、SH、NH2、CHO、COOH，或选自任选被R01取代的C1-10烷基或杂烷基、C3-10环烃基或杂环烃基、被C3-10环烃基或杂环烃基取代的C1-10烷基或杂烷基；
当D31-32选自C(Rd1)(Rd2)时，D31与D32任选地共同连接到同一碳原子或杂原子上形成一个4-6元环；
其他变量如权利要求1所定义。
本发明的一个方案中，上述Y选自
本发明的一个方案中，上述Z选自其中，T41选自N或C(Rt)；
D41-45中0-3个分别独立地选自单键、-C(＝O)N(Rd3)-、-N(Rd4)-、-C(＝NRd5)-、-S(＝O)2N(Rd6)-、-S(＝O)N(Rd7)-、-O-、-S-、-C(＝O)O-、-C(＝O)-、-C(＝S)-、-S(＝O)-或-S(＝O)2-；；其余选自C(Rd1)(Rd2)；Rt、Rd1、Rd2分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、CN、OH、SH、NH2、CHO、COOH，或选自任选被R01取代的C1-10烷基或杂烷基、C3-10环烃基或杂环烃基、被C3-10环烃基或杂环烃基取代的C1-10烷基或杂烷基；
其他变量如权利要求1所定义。
本发明的一个方案中，上述Z选自
本发明的一个方案中，上述化合物或其药学上可接受的盐，其结构式如式(Ⅱ)或(Ⅲ)所示,
其中，Y1、Y2分别独立地代表含N的4-9元饱和杂环，Z1代表含酰胺键的4-9元饱和杂环，Z2代表4-9元饱和杂环，其他变量如权利要求1～11所定义。
本发明的一个方案中，上述化合物或其药学上可接受的盐选自：
1)4-(4-(1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-3-(三氟甲基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-基)哌啶-1-基)吗啡啉-3-酮；
2)1-(4-甲氧基苯基)-6-(2'-氧代-[1,1'-二哌啶基]-4-基)-3-(三氟甲基)-5,6-二氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-7(4H)-酮；
3)1-(4-甲氧基苯基)-6-(1-(2-氧代吡咯烷-1-基)-哌啶基-4-基)-3-(三氟甲基)-5,6-二氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-7(4H)-酮；
4)1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-6-(2'-氧代-[1,1'-二哌啶基]-4-基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-甲酰胺；
5)1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-6-(2'-氧代-[1,1'-二哌啶基]-4-基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-腈；
6)N'-氰基-1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-6-(2'-氧代-[1,1'-二哌啶基]-4-基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-甲脒；
7)1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-6-(1-(3-氧代吗啉代)哌啶-4-基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-甲酰胺；
8)1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-6-(1-(2-氧代吡咯烷-3-基)哌啶-4-基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-甲酰胺；
9)1-(4-氯代苯基)-7-氧代-6-(1-(3-氧代吗啉)哌啶-4-基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-甲酰胺；
10)7-氧代-6-(1-(3-氧代吗啉)哌啶-4-基)-1-(4-(三氟甲基)苯基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-甲酰胺；
11)1-(4-(二氟甲基)苯基)-7-氧代-6-(1-(3-氧代吗啉)哌啶-4-基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-甲酰胺；
12)1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-6-(3-(2-氧代哌啶-1-基)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-6-基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-甲酰胺；
13)1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-6-(3-(3-氧代吗啉)-3-氮杂双环[3.1.0]己-6-基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-甲酰胺；
14)1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-6-(2-甲氧基苯基-[1,4'-二哌啶]-1'-基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-甲酰胺；
15)1-(4-甲氧基苯基)-N5-(1-(3-氧代吗啉)哌啶-4-基)-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺；
16)1-(4-甲氧基苯基)-N5-甲基-N5-(1-(3-氧代吗啉)哌啶-4-基)-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺；
17)N5-乙基-1-(4-甲氧基苯基)-N5-(1-(3-氧代吗啉)哌啶-4-基)-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺；
18)N5-环丙基-1-(4-甲氧基苯基)-N5-(1-(3-氧代吗啉)哌啶-4-基)-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺；
19)1-(4-甲氧基苯基)-N5-(1-(3-氧代吗啉)吡咯烷-3-基)-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺；
20)N5-(1-(3-氧代吗啉)哌啶-4-基)-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺；
21)1-(1-(甲磺酰基)哌啶-4-基)-N5-(1-(氧代吗啉)哌啶-4-基)-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺；
22)1-(4-甲氧基环己基)-N5-(1-(3-氧代吗啉)哌啶-4-基)-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺；
23)4-(4-(1-(4-(二氟甲氧基)苯基)-7-氧代-3-(三氟甲基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-基)哌啶-1-基)吗啉-3-酮；
24)4-(4-(1-(6-氯代萘-2-基)-7-氧代-3-(三氟甲基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-基)哌啶-1-基)吗啉-3-酮；
25)2-氟-5-(7-氧代-6-(1-(3-氧代吗啉)哌啶-4-基)-3-(三氟甲基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-1-基)苯甲腈；
26)4-(4-(1-(3-氨基苯并[d]异恶唑-5-基)-7-氧代-3-(三氟甲基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-基)哌啶-1-基)吗啉-3-酮；
27)3-(7-氧代-6-(1-(3-氧代吗啉)哌啶-4-基)-3-(三氟甲基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-1-基)苯甲腈；
28)4-(4-(1-(3-氟-4-甲氧基苯基)-7-氧代-3-(3-(三氟甲基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-基)哌啶-1-基)吗啉-3-酮；
29)4-(4-(1-(3-氟代萘-2-基)-7-氧代-3-(3-(三氟甲基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-基)哌啶-1-基)吗啉-3-酮；
30)2-(二氟甲氧基)-5-(7-氧代-6-(1-(3-氧代吗啉)哌啶-4-基)-3-(三氟甲基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-1-基)苯甲腈；
31)3-(7-氧代-6-(1-(3-氧代吗啉)哌啶-4-基)-3-(三氟甲基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-1-基)苯甲酰胺；
32)2-氟-5-(7-氧代-6-(1-(3-氧代吗啉)哌啶-4-基)-3-(三氟甲基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-1-基)苯甲酰胺；和
33)2-(二氟甲氧基)-5-(7-氧代-6-(1-(3-氧代吗啉)哌啶-4-基)-3-(三氟甲基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-1-基)苯甲酰胺。
本发明的另一个目的在于提供上述的化合物的制备方法，其包括如下路线：
其中，R1、X、Y、Z如权利要求1～13所定义。
本发明的另一目的在于提供一种药物组合物，其包括治疗有效量的式(Ⅰ)化合物或其药学上可接受的盐、水合物或前药以及药学上可接受的载体。
本发明的另一目的在于提供上述化合物在制备治疗血栓栓塞性疾病的药物中的应用，其中，所述疾病优选自动脉心血管血栓栓塞性疾病、静脉心血管血栓栓塞性疾病、脑动脉血栓栓塞性疾病、静脉脑血管栓塞性疾病，进一步优选自不稳定型心绞痛、心肌梗死、再发心肌梗死、缺血性猝死、短暂性脑缺血发作、中风、动脉粥样硬化、静脉血栓形成、下肢深静脉血栓形成、血栓性静脉炎、动脉栓塞、冠状动脉血栓形成、脑动脉血栓形成、脑栓塞、肾栓塞、肺栓塞以及下述原因造成的血栓症：(a)人工心脏瓣膜或其他植入物；(b)留置导管；(c)支架；(d)心肺转流术；(e)血液透析；以及(f)将血液暴露于人工表面从而促进血栓形成的其他程序或操作。
本发明可以通过不脱离其发明实质的其他具体方式实现，包括上述本发明优选方案的所有组合。本发明的所有具体实施方式可以与其他方式结合形成更加优选的实施方式，其中的特定技术特征可以与任何相关的其他技术特征相结合形成新的实施方式；当然，也可以认为每个优选实施方式是独立的，其中的特定技术特征仅限于本优选实施方式本身。
本发明涉及下述定义：
C1-10选自C1、C2、C3、C4、C5、C6、C7、C8、C9和C10；C3-10选自C3、C4、C5、C6、C7、C8、C9和C10。
C1-10烷基或杂烷基、C3-10环基或杂环烃基、被C3-10环烃基或杂环烃基取代的C1-10烷基或杂烷基包括但不限于：
C1-10烷基、C1-10烷氨基、N,N-二(C1-10烷基)氨基、C1-10烷氧基、C1-10烷酰基、C1-10烷氧羰基、C1-10烷基磺酰基、C1-10烷基亚磺酰基、C3-10环烷基、C3-10环烷氨基、C3-10杂环烷氨基、C3-10环烷氧基、C3-10环烷基酰基、C3-10环烷基氧羰基、C3-10环烷基磺酰基、C3-10环烷基亚磺酰基；
甲基、乙基、正丙基、异丙基、-CH2C(CH3)(CH3)(OH)、环丙基、环丁基、丙基亚甲基、环丙酰基、苄氧基、三氟甲基、氨甲基、羟甲基、甲氧基、甲酰基、甲氧羰基、甲磺酰基、甲基亚磺酰基、乙氧基、乙酰基、乙磺酰基、乙氧羰基、二甲基氨基、二乙基氨基、二甲基氨基羰基、二乙基氨基羰基；
N(CH3)2,NH(CH3),-CH2CF3,-CH2CH2CF3,-CH2CH2F,-CH2CH2S(＝O)2CH3,-CH2CH2CN,-CH2CH(OH)(CH3)2,-CH2CH(F)(CH3)2,-CH2CH2F,-CH2CF3,-CH2CH2CF3,-CH2CH2NH2,-CH2CH2OH,-CH2CH2OCH3,-CH2CH2CH2OCH3,-CH2CH2N(CH3)2,-S(＝O)2CH3，-CH2CH2S(＝O)2CH3,
和
苯基、噻唑基、联苯基、萘基、环戊基、呋喃基、3-吡咯啉基、吡咯烷基、1，3-氧五环基、吡唑基、2-吡唑啉基、吡唑烷基、咪唑基、恶唑基、噻唑基、1，2，3-唑基、1，2，3-三唑基、1，2，4-三唑基、1,3,4-噻二唑基、4H-吡喃基、吡啶基、哌啶基、1,4-二氧六环基、吗啉基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、哌嗪基、1,3,5-三噻烷基、1,3,5-三嗪基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、吲哚基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、嘌呤基、喹啉基、异喹啉基、噌啉基或喹喔啉基；
这里所采用的术语“药学上可接受的”，是针对那些化合物、材料、组合物和/或剂型而言，它们在可靠的医学判断的范围之内，适用于与人类和动物的组织接触使用，而没有过多的毒性、刺激性、过敏性反应或其它问题或并发症，与合理的利益/风险比相称。
术语“药学上可接受的盐”是指本发明化合物的盐，由本发明发现的具有特定取代基的化合物与相对无毒的酸或碱制备。当本发明的化合物中含有相对酸性的功能团时，可以通过在纯的溶液或合适的惰性溶剂中用足够量的碱与这类化合物的中性形式接触的方式获得碱加成盐。药学上可接受的碱加成盐包括钠、钾、钙、铵、有机氨或镁盐或类似的盐。当本发明的化合物中含有相对碱性的官能团时，可以通过在纯的溶液或合适的惰性溶剂中用足够量的酸与这类化合物的中性形式接触的方式获得酸加成盐。药学上可接受的酸加成盐的实例包括无机酸盐，所述无机酸包括例如盐酸、氢溴酸、硝酸、碳酸，碳酸氢根，磷酸、磷酸一氢根、磷酸二氢根、硫酸、硫酸氢根、氢碘酸、亚磷酸等；以及有机酸盐，所述有机酸包括如乙酸、丙酸、异丁酸、马来酸、丙二酸、苯甲酸、琥珀酸、辛二酸、反丁烯二酸、乳酸、扁桃酸、邻苯二甲酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、柠檬酸、酒石酸和甲磺酸等类似的酸；还包括氨基酸(如精氨酸等)的盐，以及如葡糖醛酸等有机酸的盐(参见Berge et al.,"Pharmaceutical Salts",Journal of Pharmaceutical Science66:1-19(1977))。本发明的某些特定的化合物含有碱性和酸性的官能团，从而可以被转换成任一碱或酸加成盐。
优选地，以常规方式使盐与碱或酸接触，再分离母体化合物，由此再生化合物的中性形式。化合物的母体形式与其各种盐的形式的不同之处在于某些物理性质，例如在极性溶剂中的溶解度不同。
本文所用的“药学上可接受的盐”属于本发明化合物的衍生物，其中，通过与酸成盐或与碱成盐的方式修饰所述母体化合物。药学上可接受的盐的实例包括但不限于：碱基比如胺的无机酸或有机酸盐、酸根比如羧酸的碱金属或有机盐等等。药学上可接受的盐包括常规的无毒性的盐或母体化合物的季铵盐，例如无毒的无机酸或有机酸所形成的盐。常规的无毒性的盐包括但不限于那些衍生自无机酸和有机酸的盐，所述的无机酸或有机酸选自2-乙酰氧基苯甲酸、2-羟基乙磺酸、乙酸、抗坏血酸、苯磺酸、苯甲酸、碳酸氢根、碳酸、柠檬酸、依地酸、乙烷二磺酸、乙烷磺酸、富马酸、葡庚糖、葡糖酸、谷氨酸、乙醇酸、氢溴酸、盐酸、氢碘酸盐、羟基、羟萘、羟乙磺酸、乳酸、乳糖、十二烷基磺酸、马来酸、苹果酸、扁桃酸、甲烷磺酸、硝酸、草酸、双羟萘酸、泛酸、苯乙酸、磷酸、多聚半乳糖醛、丙酸、水杨酸、硬脂酸、亚乙酸、琥珀酸、氨基磺酸、对氨基苯磺酸、硫酸、单宁、酒石酸和对甲苯磺酸。
本发明的药学上可接受的盐可由含有酸根或碱基的母体化合物通过常规化学方法合成。一般情况下，这样的盐的制备方法是：在水或有机溶剂或两者的混合物中，经由游离酸或碱形式的这些化合物与化学计量的适当的碱或酸反应来制备。一般地，优选醚、乙酸乙酯、乙醇、异丙醇或乙腈等非水介质。
除了盐的形式，本发明所提供的化合物还存在前药形式。本文所描述的化合物的前药容易地在生理条件下发生化学变化从而转化成本发明的化合物。此外，前体药物可以在体内环境中通过化学或生化方法被转换到本发明的化合物。
本发明的某些化合物可以以非溶剂化形式或者溶剂化形式存在，包括水合物形式。一般而言，溶剂化形式与非溶剂化的形式相当，都包含在本发明的范围之内。本发明的某些化合物可以以多晶或无定形形式存在。
本发明的某些化合物可以具有不对称碳原子(光学中心)或双键。外消旋体、非对映异构体、几何异构体和单个的异构体都包括在本发明的范围之内。
本文中消旋体、ambiscalemic and scalemic或者对映体纯的化合物的图示法来自Maehr,J.Chem.Ed.1985,62:114-120。1985年，62：114-120。除非另有说明，用楔形键和虚线键表示一个立体中心的绝对构型。当本文所述化合物含有烯属双键或其它几何不对称中心，除非另有规定，它们包括E、Z几何异构体。同样地，所有的互变异构形式均包括在本发明的范围之内。
本发明的化合物可以存在特定的几何或立体异构体形式。本发明设想所有的这类化合物，包括顺式和反式异构体、(-)-和(+)-对对映体、(R)-和(S)-对映体、非对映异构体、(D)-异构体、(L)-异构体，及其外消旋混合物和其他混合物，例如对映异构体或非对映体富集的混合物，所有这些混合物都属于本发明的范围之内。烷基等取代基中可存在另外的不对称碳原子。所有这些异构体以及它们的混合物，均包括在本发明的范围之内。
可以通过的手性合成或手性试剂或者其他常规技术制备光学活性的(R)-和(S)-异构体以及D和L异构体。如果想得到本发明某化合物的一种对映体，可以通过不对称合成或者具有手性助剂的衍生作用来制备，其中将所得非对映体混合物分离，并且辅助基团裂开以提供纯的所需对映异构体。或者，当分子中含有碱性官能团(如氨基)或酸性官能团(如羧基)时，与适当的光学活性的酸或碱形成非对映异构体的盐，然后通过本领域所公知的分步结晶法或色谱法进行非对映异构体拆分，然后回收得到纯的对映体。此外，对映异构体和非对映异构体的分离通常是通过使用色谱法完成的，所述色谱法采用手性固定相，并任选地与化学衍生法相结合(例如由胺生成氨基甲酸盐)。
本发明的化合物可以在一个或多个构成该化合物的原子上包含非天然比例的原子同位素。例如，可用放射性同位素标记化合物，比如氚(3H)，碘-125(125I)或C-14(14C)。本发明的化合物的所有同位素组成的变换，无论放射性与否，都包括在本发明的范围之内。
术语“药学上可接受的载体”是指能够递送本发明有效量活性物质、不干扰活性物质的生物活性并且对宿主或者患者无毒副作用的任何制剂或载体介质代表性的载体包括水、油、蔬菜和矿物质、膏基、洗剂基质、软膏基质等。这些基质包括悬浮剂、增粘剂、透皮促进剂等。它们的制剂为化妆品领域或局部药物领域的技术人员所周知。关于载体的其他信息，可以参考Remington:The Science and Practice of Pharmacy,21st Ed.,Lippincott,Williams&Wilkins(2005)，该文献的内容通过引用的方式并入本文。
术语“赋形剂”通常是指配制有效的药物组合物所需要载体、稀释剂和/或介质。
针对药物或药理学活性剂而言，术语“有效量”或“治疗有效量”是指无毒的但能达到预期效果的药物或药剂的足够用量。对于本发明中的口服剂型，组合物中一种活性物质的“有效量”是指与该组合物中另一种活性物质联用时为了达到预期效果所需要的用量。有效量的确定因人而异，取决于受体的年龄和一般情况，也取决于具体的活性物质，个案中合适的有效量可以由本领域技术人员根据常规试验确定。
术语“活性成分”、“治疗剂”，“活性物质”或“活性剂”是指一种化学实体，它可以有效地治疗目标紊乱、疾病或病症。
术语“被取代的”是指特定原子上的任意一个或多个氢原子被取代基取代，包括重氢和氢的变体，只要特定原子的价态是正常的并且取代后的化合物是稳定的。当取代基为酮基(即＝O)时，意味着两个氢原子被取代。酮取代不会发生在芳香基上。术语“任选被取代的”是指可以被取代，也可以不被取代，除非另有规定，取代基的种类和数目在化学上可以实现的基础上可以是任意的。
当任何变量(例如R)在化合物的组成或结构中出现一次以上时，其在每一种情况下的定义都是独立的。因此，例如，如果一个基团被0-2个R所取代，则所述基团可以任选地至多被两个R所取代，并且每种情况下的R都有独立的选项。此外，取代基和/或其变体的组合只有在这样的组合会产生稳定的化合物的情况下才是被允许的。
当一个取代基的键可以交叉连接到一个环上的两个原子时，这种取代基可以与这个环上的任意原子相键合。当所列举的取代基中没有指明其通过哪一个原子连接到化学结构通式中包括但未具体提及的化合物时，这种取代基可以通过其任何原子相键合。取代基和/或其变体的组合只有在这样的组合会产生稳定的化合物的情况下才是被允许的。
烷基和杂烷基原子团(包括通常被称为亚烷基、链烯基、亚杂烷基、杂烯基、炔基、环烷基、杂环烷基、环烯基和杂环烯基的那些基团)的取代基一般被称为“烷基取代基”，它们可以选自但不限于下列基团中的一个或多个：-R’、-OR’、＝O、＝NR’、＝N-OR’、-NR’R”、-SR’、卤素、-SiR’R”R”’、OC(O)R’、-C(O)R’、-CO2R’、-CONR’R”、-OC(O)NR’R”、-NR”C(O)R’、NR’C(O)NR”R”’、-NR”C(O)2R’、-NR””’-C(NR’R”R’”)＝NR””、NR””C(NR’R”)＝NR’”、-S(O)R’、-S(O)2R’、-S(O)2NR’R”、NR”SO2R’、-CN、–NO2、-N3、-CH(Ph)2和氟代(C1-C4)烷基,取代基的数目为0～(2m’+1),其中m’是这类原子团中碳原子的总数。R'、R”、R”'、R””和R””’各自独立地优选氢、被取代或未被取代的杂烷基、被取代或未被取代的芳基(例如被1～3个卤素取代芳基)、被取代或未被取代的烷基、烷氧基、硫代烷氧基基团或芳烷基。当本发明的化合物包括一个以上的R基团时，例如，每一个R基团是独立地加以选择的，如同当存在一个以上的R'、R”、R”'、R””和R””’基团时的每个这些基团。当R'和R”附着于同一个氮原子时，它们可与该氮原子结合形成5-，6-或7-元环。例如，-NR'R“意在包括但不仅限于1-吡咯烷基和4-吗啉基。根据上述关于取代基的讨论中，本领域技术人员可以理解，术语“烷基”意在包括碳原子键合于非氢基团所构成的基团，如卤代烷基(例如-CF3、-CH2CF3)和酰基(例如-C(O)CH3、-C(O)CF3、-C(O)CH2OCH3等)。
与烷基原子团所述取代基相似，芳基和杂芳基取代基一般统称为“芳基取代基”，选自例如-R’、-OR’、-NR’R”、-SR’、-卤素,-SiR’R”R”’、OC(O)R’、-C(O)R’、-CO2R’、-CONR’R”、-OC(O)NR’R”、-NR”C(O)R’、NR’C(O)NR”R”’、-NR”C(O)2R’、-NR””’-C(NR’R”R’”)＝NR””、NR””C(NR’R”)＝NR’”、-S(O)R’、-S(O)2R’、-S(O)2NR’R”、NR”SO2R’、-CN、–NO2、-N3、-CH(Ph)2、氟(C1-C4)烷氧基和氟(C1-C4)烷基等，取代基的数量为0到芳香环上开放化合价的总数之间；其中R’、R”、R”’、R””和R””’独立地优选自氢、被取代或未被取代的烷基、被取代或未被取代的杂烷基、被取代或未被取代的芳基和被取代或未被取代的杂芳基。当本发明的化合物包括一个以上的R基团时，例如，每个R基团是独立地加以选择的，如同当存在一个以上R’、R”、R”’、R””和R””’基团时的每个这些基团。
芳基或杂芳基环的相邻原子上的两个取代基可以任选地被通式为–T-C(O)-(CRR’)q-U-的取代基所取代，其中T和U独立地选自-NR-、-O-、CRR'-或单键，q是0到3的整数。作为替代选择，芳基或杂芳基环的相邻原子上的两个取代基可以任选地被通式为–A(CH2)r B-的取代基所取代，其中A和B独立的选自–CRR’-、-O-、-NR-、-S-、-S(O)-、S(O)2-、-S(O)2NR’-或单键，r是1～4的整数。任选地，由此形成的新环上的一个单键可以替换为双键。作为替代选择，芳基或杂芳基环的相邻原子上的两个取代基可以任选地被通式为–A(CH2)r B-的取代基所取代，其中s和d分别独立的选自0～3的整数，X是–O-、-NR’、-S-、-S(O)-、-S(O)2-或–S(O)2NR’-。取代基R、R’、R”和R”’分别独立地优选自氢和被取代或未被取代的(C1-C6)烷基。
除非另有规定，术语“卤代素”或“卤素”本身或作为另一取代基的一部分表示氟、氯、溴或碘原子。此外，术语“卤代烷基”意在包括单卤代烷基和多卤代烷基。例如，术语“卤代(C1-C4)烷基”意在包括但不仅限于三氟甲基、2，2，2-三氟乙基、4-氯丁基和3-溴丙基等等。
卤代烷基的实例包括但不仅限于：三氟甲基、三氯甲基、五氟乙基，和五氯乙基。“烷氧基”代表通过氧桥连接的具有特定数目碳原子的上述烷基。C1-6烷氧基包括C1、C2、C3、C4、C5和C6的烷氧基。烷氧基的例子包括但不限于：甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、正戊氧基和S-戊氧基。“环烷基”包括饱和环基，如环丙基、环丁基或环戊基。3-7环烷基包括C3、C4、C5、C6和C7环烷基。“链烯基”包括直链或支链构型的烃链，其中该链上任何的稳定位点上存在一个或多个碳-碳双键，例如乙烯基和丙烯基。
术语“卤”或“卤素”是指氟、氯、溴和碘。
除非另有规定，术语“杂”表示杂原子或杂原子团(即含有杂原子的原子团)，包括碳(C)和氢(H)以外的原子以及含有这些杂原子的原子团，例如包括氧(O)、氮(N)、硫(S)、硅(Si)、锗(Ge)、铝(Al)、硼(B)、-O-、-S-、＝O、＝S、-C(＝O)O-、-C(＝O)-、-C(＝S)-、-S(＝O)、-S(＝O)2-，以及任选被被取代的-C(＝O)N(H)-、-N(H)-、-C(＝NH)-、-S(＝O)2N(H)-或-S(＝O)N(H)-。
除非另有规定，“环”表示被取代或未被取代的环烷基、杂环烷基、环烯基、杂环烯基、环炔基、杂环炔基、芳基或杂芳基。所谓的环包括单环、联环、螺环、并环或桥环。环上原子的数目通常被定义为环的元数，例如，“5～7元环”是指环绕排列5～7个原子。除非另有规定，该环任选地包含1～3个杂原子。因此，“5～7元环”包括例如苯基吡啶和哌啶基；另一方面，术语“5～7元杂环烷基环”包括吡啶基和哌啶基，但不包括苯基。术语“环”还包括含有至少一个环的环系，其中的每一个“环”均独立地符合上述定义。
除非另有规定，术语“杂环”或“杂环基”意指稳定的含杂原子或杂原子团的单环、双环或三环，它们可以是饱和的、部分不饱和的或不饱和的(芳族的)，它们包含碳原子和1、2、3或4个独立地选自N、O和S的环杂原子，其中上述任意杂环可以稠合到一个苯环上形成双环。氮和硫杂原子可任选被氧化(即NO和S(O)p)。氮原子可以是被取代的或未取代的(即N或NR，其中R是H或本文已经定义过的其他取代基)。该杂环可以附着到任何杂原子或碳原子的侧基上从而形成稳定的结构。如果产生的化合物是稳定的，本文所述的杂环可以发生碳位或氮位上的取代。杂环中的氮原子任选地被季铵化。一个优选方案是，当杂环中S及O原子的总数超过1时，这些杂原子彼此不相邻。另一个优选方案是，杂环中S及O原子的总数不超过1。如本文所用，术语“芳族杂环基团”或“杂芳基”意指稳定的5、6、7元单环或双环或7、8、9或10元双环杂环基的芳香环，它包含碳原子和1、2、3或4个独立地选自N、O和S的环杂原子。氮原子可以是被取代的或未取代的(即N或NR，其中R是H或本文已经定义过的其他取代基)。氮和硫杂原子可任选被氧化(即NO和S(O)p)。值得注意的是，芳香杂环上S和O原子的总数不超过1。桥环也包含在杂环的定义中。当一个或多个原子(即C、O、N或S)连接两个不相邻的碳原子或氮原子时形成桥环。优选的桥环包括但不限于：一个碳原子、两个碳原子、一个氮原子、两个氮原子和一个碳-氮基。值得注意的是，一个桥总是将单环转换成三环。桥环中，环上的取代基也可以出现在桥上。
杂环化合物的实例包括但不限于：吖啶基、吖辛因基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并巯基呋喃基、苯并巯基苯基、苯并恶唑基、苯并恶唑啉基、苯并噻唑基、苯并三唑基、苯并四唑基、苯并异恶唑基、苯并异噻唑基、苯并咪唑啉基、咔唑基、4aH-咔唑基、咔啉基、苯并二氢吡喃基、色烯、噌啉基十氢喹啉基、2H,6H-1,5,2-二噻嗪基、二氢呋喃并[2,3-b]四氢呋喃基、呋喃基、呋咱基、咪唑烷基、咪唑啉基、咪唑基、1H-吲唑基、吲哚烯基、二氢吲哚基、中氮茚基、吲哚基、3H-吲哚基、isatino基、异苯并呋喃基、吡喃、异吲哚基、异二氢吲哚基、异吲哚基、吲哚基、异喹啉基、异噻唑基、异恶唑基、亚甲二氧基苯基、吗啉基、萘啶基，八氢异喹啉基、恶二唑基、1,2,3-恶二唑基、1,2,4-恶二唑基、1,2,5-恶二唑基、1,3,4-恶二唑基、恶唑烷基、恶唑基、异恶唑基、羟吲哚基、嘧啶基、菲啶基、菲咯啉基、吩嗪、吩噻嗪、苯并黄嘌呤基、酚恶嗪基、酞嗪基、哌嗪基、哌啶基、哌啶酮基、4-哌啶酮基、胡椒基、蝶啶基、嘌呤基、吡喃基、吡嗪基、吡唑烷基、吡唑啉基、吡唑基、哒嗪基、吡啶并恶唑、吡啶并咪唑、吡啶并噻唑、吡啶基、嘧啶基、吡咯烷基、吡咯啉基、2H-吡咯基、吡咯基、吡唑基、喹唑啉基、喹啉基、4H-喹嗪基、喹喔啉基、奎宁环基、四氢呋喃基、四氢异喹啉基、四氢喹啉基、四唑基，6H-1,2,5-噻二嗪基、1,2,3-噻二唑基、1,2,4-噻二唑基、1,2,5-噻二唑基、1,3,4-噻二唑基、噻蒽基、噻唑基、异噻唑基噻吩基、噻吩基、噻吩并恶唑基、噻吩并噻唑基、噻吩并咪唑基、噻吩基、三嗪基、1,2,3-三唑基、1,2,4-三唑基、1,2,5-三唑基、1,3,4-三唑基和呫吨基。还包括稠环和螺环化合物。
除非另有规定，术语“烃基”或者其下位概念(比如烷基、烯基、炔基、苯基等等)本身或者作为另一取代基的一部分表示直链的、支链的或环状的烃原子团或其组合，可以是完全饱和的、单元或多元不饱和的，可以是单取代、二取代或多取代的，可以包括二价或多价原子团，具有指定数量的碳原子(如C1-C10表示1至10个碳)。“烃基”包括但不限于脂肪烃基和芳香烃基，所述脂肪烃基包括链状和环状，具体包括但不限于烷基、烯基、炔基，所述芳香烃基包括但不限于6-12元的芳香烃基，例如苯、萘等。在一些实施例中，术语“烷基”表示直链的或支链的原子团或它们的组合，可以是完全饱和的、单元或多元不饱和的，可以包括二价和多价原子团。饱和烃原子团的实例包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、异丁基、仲丁基、异丁基、环己基、(环己基)甲基、环丙基甲基，以及正戊基、正己基、正庚基、正辛基等原子团的同系物或异构体。不饱和烷基具有一个或多个双键或三键，其实例包括但不限于乙烯基、2-丙烯基、丁烯基、巴豆基、2-异戊烯基、2-(丁二烯基)、2，4-戊二烯基、3-(1，4-戊二烯基)、乙炔基、1-和3-丙炔基，3-丁炔基，以及更高级的同系物和异构体。
除非另有规定，术语“杂烃基”或者其下位概念(比如杂烷基、杂烯基、杂炔基、杂芳基等等)本身或者与另一术语联合表示稳定的直链的、支链的或环状的烃原子团或其组合，有一定数目的碳原子和至少一个杂原子组成。在一些实施例中，术语“杂烷基”本身或者与另一术语联合表示稳定的直链的、支链的烃原子团或其组合物，有一定数目的碳原子和至少一个杂原子组成。在一个典型实施例中，杂原子选自B、O、N和S，其中氮和硫原子任选地被氧化，氮杂原子任选地被季铵化。杂原子B、O、N和S可以位于杂烃基的任何内部位置(包括该烃基附着于分子其余部分的位置)。实例包括但不限于-CH2-CH2-O-CH3、-CH2-CH2-NH-CH3、-CH2-CH2-N(CH3)-CH3、-CH2-S-CH2-CH3、-CH2-CH2、-S(O)-CH3、-CH2-CH2-S(O)2-CH3、-CH＝CH-O-CH3、-CH2-CH＝N-OCH3和–CH＝CH-N(CH3)-CH3。至多两个杂原子可以是连续的，例如-CH2-NH-OCH3。
术语“烷氧基”、“烷氨基”和“烷硫基”(或硫代烷氧基)属于惯用表达，是指分别通过一个氧原子、氨基或硫原子连接到分子的其余部分的那些烷基基团。
除非另有规定，术语“环烃基”、“杂环烃基”或者其下位概念(比如芳基、杂芳基、环烷基、杂环烷基、环烯基、杂环烯基、环炔基、杂环炔基等等)本身或与其他术语联合分别表示环化的“烃基”、“杂烃基”。此外，就杂烃基或杂环烃基(比如杂烷基、杂环烷基)而言，杂原子可以占据该杂环附着于分子其余部分的位置。环烷基的实例包括但不限于环戊基、环己基、1-环己烯基、3-环己烯基、环庚基等。杂环基的非限制性实例包括1-(1,2,5,6-四氢吡啶基)、1-哌啶基、2-哌啶基，3-哌啶基、4-吗啉基、3-吗啉基、四氢呋喃-2-基、四氢呋喃吲哚-3-基、四氢噻吩-2-基、四氢噻吩-3-基，1-哌嗪基和2-哌嗪基。
除非另有规定，术语“芳基”表示多不饱和的芳族烃取代基，可以是单取代、二取代或多取代的，它可以是单环或多环(优选1至3个环)，它们稠合在一起或共价连接。术语“杂芳基”是指含有一至四个杂原子的芳基(或环)。在一个示范性实例中，杂原子选自B、N、O和S，其中氮和硫原子任选地被氧化，氮原子任选地被季铵化。杂芳基可通过杂原子连接到分子的其余部分。芳基或杂芳基的非限制性实施例包括苯基、1-萘基、2-萘基、4-联苯基、1-吡咯基、2-吡咯基、3-吡咯基、3-吡唑基、2-咪唑基、4-咪唑基、吡嗪基、2-恶唑基、4-恶唑基、2-苯基-4-恶唑基、5-恶唑基、3-异恶唑基、4-异恶唑基、5-异恶唑基、2-噻唑基、4-噻唑基、5-噻唑基、2-呋喃基、3-呋喃基、2-噻吩基、3-噻吩基、2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、2-嘧啶基、4-嘧啶基、5-苯并噻唑基、嘌呤基、2-苯并咪唑基、5-吲哚基、1-异喹啉基、5-异喹啉基、2-喹喔啉基、5-喹喔啉基、3-喹啉基和6-喹啉基。上述任意一个芳基和杂芳基环系的取代基选自下文所述的可接受的取代基。
为简便起见，芳基在与其他术语联合使用时(例如芳氧基、芳硫基、芳烷基)包括如上定义的芳基和杂芳基环。因此，术语“芳烷基”意在包括芳基附着于烷基的那些原子团(例如苄基、苯乙基、吡啶基甲基等)，包括其中碳原子(如亚甲基)已经被例如氧原子代替的那些烷基，例如苯氧基甲基、2-吡啶氧甲基3-(1-萘氧基)丙基等。
术语“离去基团”是指可以被另一种官能团或原子通过取代反应(例如亲和取代反应)所取代的官能团或原子。例如，代表性的离去基团包括三氟甲磺酸酯；氯、溴、碘；磺酸酯基，如甲磺酸酯、甲苯磺酸酯、对溴苯磺酸酯、对甲苯磺酸酯等；酰氧基，如乙酰氧基、三氟乙酰氧基等等。
术语“保护基”包括但不限于“氨基保护基”、“羟基保护基”或“巯基保护基”。术语“氨基保护基”是指适合用于阻止氨基氮位上副反应的保护基团。代表性的氨基保护基包括但不限于：甲酰基；酰基，例如链烷酰基(如乙酰基、三氯乙酰基或三氟乙酰基)；烷氧基羰基，如叔丁氧基羰基(Boc)；芳基甲氧羰基，如苄氧羰基(Cbz)和9-芴甲氧羰基(Fmoc)；芳基甲基，如苄基(Bn)、三苯甲基(Tr)、1,1-二-(4'-甲氧基苯基)甲基；甲硅烷基，如三甲基甲硅烷基(TMS)和叔丁基二甲基甲硅烷基(TBS)等等。术语“羟基保护基”是指适合用于阻止羟基副反应的保护基。代表性羟基保护基包括但不限于：烷基，如甲基、乙基和叔丁基；酰基，例如链烷酰基(如乙酰基)；芳基甲基，如苄基(Bn)，对甲氧基苄基(PMB)、9-芴基甲基(Fm)和二苯基甲基(二苯甲基，DPM)；甲硅烷基，如三甲基甲硅烷基(TMS)和叔丁基二甲基甲硅烷基(TBS)等等。
本发明的化合物可以通过本领域技术人员所熟知的多种合成方法来制备，包括下面列举的具体实施方式、其与其他化学合成方法的结合所形成的实施方式以及本领域技术上人员所熟知的等同替换方式，优选的实施方式包括但不限于本发明的实施例。
本发明所使用的所有溶剂是市售的，无需进一步纯化即可使用。反应一般是在惰性氮气下、无水溶剂中进行的。质子核磁共振数据记录在Bruker Avance III400(400MHz)分光仪上，化学位移以四甲基硅烷低场处的 (ppm)表示。质谱是在安捷伦1200系列加6110(&1956A)上测定。LC/MS或Shimadzu MS包含一个DAD：SPD-M20A(LC)和Shimadzu Micromass2020检测器。质谱仪配备有一个正或负模式下操作的电喷雾离子源(ESI)。
本发明采用下述缩略词：aq代表水；HATU代表O-7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N'，N'-四甲基脲六氟磷酸盐；EDC代表N-(3-二甲基氨基丙基)-N'-乙基碳二亚胺盐酸盐；m-CPBA代表3-氯过氧苯甲酸；eq代表当量、等量；CDI代表羰基二咪唑；DCM代表二氯甲烷；PE代表石油醚；DIAD代表偶氮二羧酸二异丙酯；DMF代表N，N-二甲基甲酰胺；DMSO代表二甲亚砜；EtOAc代表乙酸乙酯；EtOH代表乙醇；MeOH代表甲醇；CBz代表苄氧羰基，是一种胺保护基团；BOC代表叔丁基羰基是一种胺保护基团；HOAc代表乙酸；NaCNBH3代表氰基硼氢化钠；r.t.代表室温；O/N代表过夜；THF代表四氢呋喃；Boc2O代表二-叔丁基二碳酸酯；TFA代表三氟乙酸；DIPEA代表二异丙基乙基胺；SOCl2代表氯化亚砜；CS2代表二硫化碳；TsOH代表对甲苯磺酸；NFSI代表N-氟-N-(苯磺酰基)苯磺酰胺；NCS代表1-氯吡咯烷-2,5-二酮；n-Bu4NF代表氟化四丁基铵；iPrOH代表2-丙醇；mp代表熔点。
化合物经手工或者软件命名，市售化合物采用供应商目录名称。
用配有Shimadzu SIL-20A自动进样器和日本岛津DAD：SPD-M20A探测器的岛津LC20AB系统进行高效液相色谱分析，采用Xtimate C18(3μm填料，规格为2.1x300mm)色谱柱。0-60AB_6分钟的方法：应用线性梯度，以100％A(A为0.0675％TFA的水溶液)开始洗脱，并以60％B(B为0.0625％TFA的MeCN溶液)结束洗脱，整个过程为4.2分钟，然后以60％B洗脱1分钟。将色谱柱再平衡0.8分钟达到100:0，总运行时间为6分钟。10-80AB_6分钟的方法：应用线性梯度，以90％A(A为0.0675％TFA的水溶液)开始洗脱，并以80％B(B为0.0625％TFA的乙腈溶液)结束洗脱，整个过程为4.2分钟，然后以80％B洗脱1分钟。将色谱柱再平衡0.8分钟达到90:10，总运行时间为6分钟。柱温为50℃，流速为0.8mL/min。二极管阵列检测器扫描波长为200-400nm。
在Sanpont-group的硅胶GF254上进行薄层色谱分析(TLC)，常用紫外光灯照射检出斑点，在某些情况下也采用其他方法检视斑点，在这些情况下，用碘(10g硅胶中加入约1g碘并彻底混合而成)、香草醛(溶解大约1g香草醛于100mL10％H2SO4中制得)、茚三酮(从Aldrich购得)或特殊显色剂(彻底混合(NH4)6Mo7O24·4H2O、5g(NH4)2Ce(IV)(NO3)6、450mLH2O和50mL浓H2SO4而制得)展开薄层板，检视化合物。采用Still,W.C.；Kahn,M.；and Mitra,M.Journal of Organic Chemistry,1978,43,2923-2925.中所公开技术的类似方法，在Silicycle的40-63μm(230-400目)硅胶上进行快速柱色谱。快速柱色谱或薄层色谱的常用溶剂是二氯甲烷/甲醇、乙酸乙酯/甲醇和己烷/乙酸乙酯的混合物。
在Gilson-281Prep LC322系统上采用吉尔森UV/VIS-156探测器进行制备色谱分析,所采用的色谱柱是Agella Venusil ASB Prep C18,5 m、150x21.2mm；Phenomenex Gemini C18、5 m、150x30mm；Boston Symmetrix C18,5 m、150x30mm；或者Phenomenex Synergi C18、4 m、150x30mm。在流速约为25mL/min时，用低梯度的乙腈/水洗脱化合物，其中水中含有0.05％HCl、0.25％HCOOH或0.5％NH3·H2O，总运行时间为8-15分钟。
用带有Agilent1260自动进样器和Agilent DAD：1260检测器的Agilent1260Infinity SFC系统进行SFC分析。色谱柱采用Chiralcel OD-H250x4.6mm I.D.,5um或者Chiralpak AS-H250x4.6mm I.D.,5 m或者Chiralpak AD-H250x4.6mm I.D.,5m。OD-H_5_40_2.35ML的色谱条件：Chiralcel OD-H色谱柱(规格为250x4.6mm I.D.,5m填料)，流动相为40％乙醇(0.05％DEA)-CO2；流速为2.35mL/min；检测波长为220nm。AS-H_3_40_2.35ML色谱条件：Chiralpak AS-H色谱柱(规格为250x4.6mm I.D.,5m填料)；流动相为40％甲醇(0.05％DEA)-CO2；流速为2.35mL/min，检测波长为220nm。OD-H_3_40_2.35M色谱条件：Chiralcel OD-H色谱柱(规格为250x4.6mm I.D，5m填料)，流动相为40％甲醇(0.05％DEA)-CO2，流速为2.35mL/min，检测波长为220nm。AD-H_2_50_2.35ML色谱条件：Chiralpak AD-H色谱柱(规格为250x4.6mm I.D，5mm填料),流动相为50％甲醇(0.1％MEA)-CO2，流速为2.35mL/min，检测波长为220nm。
在使用Gilson UV检测器的Waters Thar80Pre-SFC系统上进行制备型SFC分析，所采用的色谱柱为Chiralcel OD-H(规格为250x4.6mm I.D，5m填料)或者Chiralpak AD-H(规格为250x4.6mm I.D，5m填料)。在流速约为40-80mL/min时，用低梯度的乙醇-二氧化碳或者甲醇-二氧化碳洗脱化合物，其中甲醇或乙醇含有0.05％NH3·H2O、0.05％DEA或者0.1％MEA，总运行时间为20-30分钟。
本发明部分化合物的制备方法：
本发明的化合物可以通过本领域技术人员所熟知的多种合成方法来制备，包括下面列举的具体实施方式、其与其他化学合成方法的结合所形成的实施方式以及本领域技术上人员所熟知的等同替换方式，优选的实施方式包括但不限于本发明的实施例。
本发明具体实施方式的化学反应是在合适的溶剂中完成的，所述的溶剂须适合于本发明的化学变化及其所需的试剂和物料。为了获得本发明的化合物，有时需要本领域技术人员在已有实施方式的基础上对合成步骤或者反应流程进行修改或选择。
本领域任何合成路线规划中的一个重要考量因素是为反应性官能团(如本发明中的氨基)选择合适的保护基。对于经过训练的从业者来说，Greene and Wuts的(Protective Groups In Organic Synthesis,Wiley and Sons,1991)是这方面的权威。本发明引用的所有参考文献整体上并入本发明。
本发明中式(IV)所示化合物可以通过反应流程1以及本领域技术人员所熟知的标准方法所制备。以戊内酰胺(1-1)为例，在有机溶剂(比如CHCl3)存在下用五氯化磷氯代，所得羰基邻位被二氯代的内酰胺经吗啉取代并消除，得到中间产物即被一个吗啉取代的二氢哌啶酮，其与芳香基卤代乙酰肼进行(3+2)成环反应并在酸性条件下消除一分子吗啉形成吡唑并吡啶环系，然后在钯催化下经Bulkwald反应引入吡啶基团。吡啶基团在二氧化箔催化下氢化还原为哌啶基团，哌啶基团上的氨基被氧化引入亚硝基，经锌粉还原后得到肼基化合物，肼基官能团经与卤代烷基羧酸的酰胺缩合反应、NaH处理成六元内酰胺环，最后通过氨气的胺酯交换反应形成甲酰胺官能团(1-6)，即本发明的凝血因子Xa抑制剂。
具体而言，本发明所提供的式(IV)化合物可以通过反应流程1以及本领域技术人员所熟知的标准方法所制备。从市售戊内酰胺(1-1)衍生物开始，也可以从其他具有不同官能团修饰的近似衍生物开始，比如，戊内酰胺的氨基被烷基化的中间体,化合物(1-3)环上的R可以为甲酰胺、羧酸乙酯、甲腈基、三氟甲基等，X、Y、Z选自各种芳香或饱和的碳环或杂环。所有这些变化、替换将在具体实施方式部分予以详述。本领域技术人员应该知道，为了制备本发明化合物，反应流程1中反应步骤的顺序可以是不同的，这也属于本发明的范围。
本发明的式(I)所示的一系列新的酰肼化合物是凝血因子Xa的选择性的和强效的抑制剂，因此可用作抗凝血剂使用。与现有技术相比，本发明化合物具有改进的水溶性、增强的疗效以及更低的出血倾向。因此，式(I)的化合物可以成为血栓栓塞性疾病的治疗或预防药物。
具体实施方式
下面通过实施例对本发明进行详细描述，但并不意味着对本发明任何不利限制。
实施例1
4-(4-(1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-3-(三氟甲基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-基)哌啶-1-基)吗啡啉-3-酮
反应流程：
步骤A：将(4-甲氧基苯基)肼盐酸盐(4.83克，27.7毫摩尔)溶解在乙醇(50毫升)中，加入1-乙氧基-2,2,2-三氟乙醇(4.8克，33.3毫摩尔)，然后将该混合物回流16小时。将反应物浓缩，然后将残余物溶解在DMF(50mL)中，并冷却至0℃。NBS(6.1克，27.7毫摩尔)缓慢加入到该溶液中。将反应混合物升温至25℃并搅拌16小时。反应混合物用水淬灭，用乙酸乙酯萃取。将合并的有机相用盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将粗残余物通过硅胶色谱法(PE到PE：EA＝20:1)纯化，得到(Z)-2,2,2-三氟-N'-(4-甲氧基苯基)溴代乙酰肼(3.3克，39％)，为黄色油状物。LCMS(ESI)m/z:296.0(M+23).
步骤B：向(Z)-2,2,2-三氟-N'-(4-甲氧基苯基)溴代乙酰肼(3.3克，11.1毫摩尔)的甲苯溶液(35毫升)中加入3-吗啉代-5,6-二氢哌啶-2(1H)-酮(2.43克，13.3毫摩尔)和TEA(2.25克，22.2毫摩尔)，将混合物加热至回流16小时。反应混合物倒入水(80毫升)中，用EA(80毫升×2)萃取，盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将粗残余物通过硅胶色谱纯化(PE到PE：EA＝5:1至1:1)，得到1-(4-甲氧基苯基)-7α-吗啉代-3-(三氟甲基)-3α,4,5,6-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-7(7αH)-酮(1.38克，30％)，为黄色固体。LCMS(ESI)M/Z：421.1(M+23)。
步骤C：向1-(4-甲氧基苯基)-7α-吗啉代-3-(三氟甲基)-3α,4,5,6-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-7(7αH)-酮(1.38克，3.46毫摩尔)的DCM(15mL)溶液中加入TFA(1.5mL)。混合物在25℃下搅拌2小时后倒入水(50mL)中，用DCM(50毫升×2)萃取。合并的有机相用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，浓缩，得到1-(4-甲氧基苯基)-3-(三氟甲基基)-5,6-二氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-7(4H)-酮(1.08克，粗品)，为黄色固体。LCMS(ESI)M/Z：312.2(M+1)。
步骤D：将1-(4-甲氧基苯基)-3-(三氟甲基基)-5,6-二氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-7(4H)-酮(1.08克，3.47毫摩尔)，4-溴吡啶盐酸盐(1.01克，5.2毫摩尔)，Pd2(dba)3(318毫克，8.67毫摩尔)，Xantphos(200毫克，0.347毫摩尔)和碳酸铯(2.83克，8.67毫摩尔)加入甲苯(15mL)中。混合物加热至80℃，持续16小时。混合物冷却至室温，过滤。将滤液浓缩，粗品残余物通过硅胶色谱法(PE：EA＝10:1至1:1)纯化，得到1-(4-甲氧基苯基)-6-(吡啶-4-基)-3-(三氟甲基)-5,6-二氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-7(4H)-酮(800毫克，59％)，为黄色固体。LCMS(ESI)M/Z：389.1(M+1)。
步骤E：将1-(4-甲氧基苯基)-6-(吡啶-4-基)-3-(三氟甲基)-5,6-二氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-7(4H)-酮(800毫克，2.06毫摩尔)和二氧化铂(50毫克)加入AcOH(10mL)溶液中，50psi压力的H2下，25℃搅拌16小时。将混合物过滤，并将滤液浓缩，得到1-(4-甲氧基苯基)-6-(哌啶-4-基)-3-(三氟甲基)-5,6-二氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-7(4H)-酮(900毫克，粗产物)，为黄色油状物，直接用于下一步骤。LCMS(ESI)M/Z：395.2(M+1)。
步骤F：在0℃下向1-(4-甲氧基苯基)-6-(哌啶-4-基)-3-(三氟甲基)-5,6-二氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-7(4H)-酮(900毫克粗品，2.06mmol)的AcOH(8mL)溶液中加入亚硝酸钠(711毫克，10.3毫摩尔，4毫升水)溶液。将混合物升温至25℃下并搅拌16小时。将混合物倒入水(30mL)中，用DCM(30毫升×2)萃取。合并的有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩，得1-(4-甲氧基苯基)-6-(1-亚硝基哌啶-4-基)-3-(三氟甲基)-5,6-二氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-7(4H)-酮(900毫克，粗产物)，为黄色固体。LCMS(ESI)M/Z：424.2(M+1)。
步骤G：向1-(4-甲氧基苯基)-6-(1-亚硝基哌啶-4-基)-3-(三氟甲基)-5,6-二氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-7(4H)-酮(900毫克粗，2.06毫摩尔)的AcOH(10毫升)溶液中加入锌粉(670毫克，10.3毫摩尔)。混合物在25℃下搅拌3小时后过滤，将滤液浓缩，少量的AcOH冻干除去。粗残余物6-(1-氨基哌啶-4-基)-1-(4-甲氧基苯基)-3-(三氟甲基)-5,6-二氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-7(4H)-酮(900毫克粗品，2.06毫摩尔)直接用于下一步骤。LCMS(ESI)M/Z：410.2(M+1)。
步骤H：向2-(2-氯乙氧基)乙酸(342毫克2.47毫摩尔)的DMF(10mL)溶液中加入HATU(939毫克，2.47毫摩尔)，DIEA(532毫克，4.12毫摩尔)和6-(1-氨基哌啶-4-基)-1-(4-甲氧基苯基)-3-(三氟甲基)-5,6-二氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-7(4H)-酮(900毫克粗品，2.06毫摩尔)。混合物在25℃下搅拌16小时。将混合物倒入水(80毫升)中，用EA(60毫升×2)萃取。合并的有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩。粗残余物通过硅胶色谱纯化(PE：EA＝1:1至EA)，得到2-(2-氯乙氧基)-N-(4-(1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-3-(三氟甲基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-基)哌啶-1-基)乙酰胺(900毫克，82％)，为黄色固体。LCMS(ESI)M/Z：530.2(M+1)。
步骤I：在0℃下，向2-(2-氯乙氧基)-N-(4-(1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-3-(三氟甲基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-基)哌啶-1-基)乙酰胺(900毫克，1.7毫摩尔)的DMF(10mL)溶液中加入NaH(74.8毫克，1.87毫摩尔)。混合物在25℃下搅拌2小时后倒入水(80mL)中，用EA(80毫升)萃取，无水硫酸钠干燥，浓缩。粗残余物通过制备型HPLC(甲酸)纯化，得到4-(4-(1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-3-(三氟甲基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-基)哌啶-1-基)吗啡啉-3-酮(303毫克，36％)，为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.45(m,2H),7.02(m,2H),4.24(m,1H),3.97(s,2H),3.82-3.78(m,5H),3.60(t,J＝6.4Hz,2H),3.42-3.39(m,4H),3.02-2.99(m,2H),2.90-2.88(m,2H),1.82-1.77(m,2H),1.59-1.56(m,2H).LCMS(ESI)m/z:494.2(M+1).
实施例2
1-(4-甲氧基苯基)-6-(2'-氧代-[1,1'-二哌啶基]-4-基)-3-(三氟甲基)-5,6-二氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-7(4H)-酮
步骤A:将6-(1-氨基哌啶-4-基)-1-(4-甲氧基苯基)-3-(三氟甲基)-5,6-二氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-7(4H)-酮(500毫克，1.22毫摩尔)溶解在DMF(8毫升)中,溶液中加入DIEA(315毫克，2.44毫摩尔)和5–溴戊酰氯(267毫克，1.34毫摩尔)。混合物在25℃搅拌3小时后倒入水(30毫升)中，用EA(30毫升×2)萃取，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。粗残余物用薄层色谱法纯化(EA)得到5-溴-N-(4-(1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-3-(三氟甲基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-基)哌啶-1-基)戊酰胺(180毫克，25％)，为黄色固体。LCMS(ESI)m/z:528.2(M+1),530.2(M+3).
步骤B:在0℃下,向5-溴-N-(4-(1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-3-(三氟甲基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-基)哌啶-1-基)戊酰胺(180毫克，0.315毫摩尔)的DMF(3mL)溶液中加入NaH(14毫克，0.346毫摩尔)。混合物在25℃下搅拌3小时后倒入水(30mL)中，用EtOAc(30毫升×2)萃取，无水硫酸钠干燥并浓缩。粗残余物通过制备级HPLC纯化(甲酸)，得到1-(4-甲氧基苯基)-6-(2'-氧代-[1,1'-二哌啶基]-4-基)-3-(三氟甲基)-5,6-二氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-7(4H)-酮(32毫克，20％)，为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.46-7.44(m,2H),7.03-7.01(m,2H),4.23-4.21(m,1H),3.82(s,3H),3.61-3.57(m,4H),3.31-3.29(m,2H),2.88-2.67(m,4H),2.32-2.16(m,2H),1.74-1.71(m,4H),1.59-1.56(m,4H).LCMS(ESI)m/z:492.2(M+1).
实施例3
1-(4-甲氧基苯基)-6-(1-(2-氧代吡咯烷-1-基)-哌啶基-4-基)-3-(三氟甲基)-5,6-二氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-7(4H)-酮
步骤A:向6-(1-氨基哌啶-4-基)-1-(4-甲氧基苯基)-3-(三氟甲基)-5,6-二氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-7(4H)-酮(250毫克，0.611毫摩尔)的DCM(8mL)溶液中加入Et3N(62毫克，0.611毫摩尔)和4-氯丁酰氯(86毫克，0.611毫摩尔)。将混合物在25℃下搅拌16小时,所得混合物倒入水(30mL)中，用DCM(30毫升×2)萃取，无水硫酸钠干燥并浓缩.粗产物用TLC(EA)纯化，得到4-氯-N-(4-(1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-3-(三氟甲基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-基)哌啶-1-基)丁酰胺(100毫克，32％)，为黄色固体。LCMS(ESI)m/z:514.2(M+1),516.2(M+3).
步骤B:在0℃下，向4-氯-N-(4-(1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-3-(三氟甲基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-基)哌啶-1-基)丁酰胺(180毫克，0.351毫摩尔)的DMF(3mL)溶液中加入NaH(15.4毫克，0.385毫摩尔)。混合物在25℃下搅拌16小时后倒入水(30mL)中，用EA(30毫升×2)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，并浓缩。粗残余物通过制备级HPLC纯化(甲酸)，得到1-(4-甲氧基苯基)-6-(1-(2-氧代吡咯烷-1-基)-哌啶基-4-基)-3-(三氟甲基)-5,6-二氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-7(4H)-酮(39毫克，23％)，为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.46-7.43(m,2H),7.03-7.00(m,2H),4.27-4.21(m,1H),3.81(s,3H),3.59(t,J＝6.8Hz,2H),3.36(t,J＝6.8Hz,2H),3.05-3.03(m,2H),2.90-2.86(m,4H),2.15-2.11(m,2H),1.88-1.84(m,4H),1.58-1.54(m,2H).LCMS(ESI)m/z:478.2(M+1).
实施例4
1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-6-(2'-氧代-[1,1'-二哌啶基]-4-基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-甲酰胺
反应流程：
步骤A:向哌啶-2-酮(30.0克，0.3摩尔)的氯仿(1升)溶液中加入五氯化磷(246.0克，1.2摩尔)，将混合物回流5小时。冷却至室温后，将混合物缓慢倒入冰水中，用二氯甲烷萃取两次。合并的有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩，得到3,3–二氯哌啶-2-酮(31克，粗品)，其直接用于下一步骤。
步骤B:将3,3–二氯哌啶-2-酮(31克，粗品)溶于吗啉(300毫升)后，混合物加热至130摄氏度过夜。溶剂浓缩除去，然后用二氯甲烷洗涤。固体过滤掉，将有机层浓缩，并且将粗品通过色谱柱纯化，得到3-吗啉代-5,6-二氢吡啶-2(1H)-酮(23克)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ＝6.58-6.50(m,1H),5.55(t,J＝4.8Hz,1H),3.85-3.79(m,4H),3.32(td,J＝6.8,3.2Hz,2H),2.87(t,J＝4.8Hz,4H),2.35(td,J＝6.8,4.8Hz,2H).
步骤C:在0摄氏度下，向(Z)-乙基-2-氯-2-(2-(4-甲氧基苯基)亚肼基)甲酸乙酯(32克，0.126摩尔)的EtOAc(300毫升)溶液中加入3-吗啉代-5,6-二氢吡啶2(1H)-酮(23克，0.126摩尔，溶解于EA)和三乙胺(31克，0.315摩尔)。将反应混合物升至室温后搅拌30分钟，之后加热至回流过夜。冷却至室温后，将反应液过滤，收集固体，并用水和乙酸乙酯洗涤，然后在真空中干燥，得到1-(4-甲氧基苯基)-7a-吗啉代-7-氧代-3a,4,5,6,7,7a-六氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-甲酸乙酯(40克，粗品)。LCMS(ESI)m/z:403(M+1).
步骤D:在0摄氏度下，向1-(4-甲氧基苯基)-7a-吗啉代-7-氧代-3a,4,5,6,7,7a-六氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-甲酸乙酯(40克，粗品)的二氯甲烷(400毫升)溶液中缓慢地加入2,2,2-三氟乙酸(30mL)，然后将反应物在25℃下搅拌5小时。混合物用饱和的NaHCO3水溶液和盐水洗涤，无水硫酸钠干燥并浓缩，得到1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3，4-c]吡啶-3-甲酸乙酯，为黄色固体(20克，50％)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ7.50(d,J＝9.2Hz,1H),6.95(d,J＝8.8Hz,1H),5.69(brs,1H),4.45(q,J＝7.2Hz,2H),3.85(s,3H),3.66-3.61(m,2H),3.20(t,J＝6.8,2H),1.43(t,J＝6.8,3H).
步骤E:将1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-甲酸乙酯(3.00克，9.52毫摩尔)，4-溴吡啶盐酸盐(3.71毫克，19.0毫摩尔)，Pd2(dba)3(872毫克，0.952毫摩尔)，Xantphos(1.10克，1.90毫摩尔)和碳酸铯(15.5克，14.6毫摩尔)在甲苯(150mL)溶液中一起加热回流12小时。冷却至室温后，将混合物过滤。将滤渣用EA(50毫升×3)洗涤。合并的有机相浓缩，得到粗产物，其通过硅胶色谱纯化(PE：EA＝5:1至PE：EA＝1:4)，得到1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-6-(吡啶基-4-基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-甲酸乙酯(3.30毫克，88.5％)，为黄色固体。LCMS(ESI)m/z:393.4(M+1).
步骤F:将PtO2(500毫克)加入1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-6-(吡啶基-4-基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-甲酸乙酯(3.30克，8.42毫摩尔)的AcOH(150mL)溶液中。将混合物在50psi H2压力下室温搅拌12小时。混合物过滤并浓缩，得到1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-6-(哌啶基-4-基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-甲酸乙酯(4.60克，粗品)，为黄色油状物。LCMS(ESI)m/z:399.4(M+1).
步骤G:将亚硝酸钠(3.47克，50.3毫摩尔)溶在10mL水中，在0摄氏度下将该水溶液加入到1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-6-(哌啶基-4-基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-羧酸甲酯(4.00克，10.1毫摩尔)的AcOH(80mL)溶液中。反应混合物在室温下搅拌3小时，用水(200毫升)稀释，并用DCM(40毫升×3)萃取。将合并的有机层用无水硫酸钠干燥并过滤。将滤液浓缩，得到1-(4-甲氧基苯基)-6-1-亚硝基哌啶基-4-基)-7-氧代-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-甲酸乙酯(4.50克，粗品)，为白色固体。LCMS(ESI)m/z:428.4(M+1).
步骤H:锌粉(6.54克，0.100毫摩尔)缓慢加入到1-(4-甲氧基苯基)-6-1-亚硝基哌啶基-4-基)-7-氧代-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-甲酸乙酯(4.29克，10.0毫摩尔)的AcOH(150mL)溶液中。将反应混合物在室温下搅拌5小时。混合物过滤后滤液浓缩，得到6-(1-氨基哌啶-4-基)-1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-甲酸乙酯(4.00克，粗品)，为黄色固体。LCMS(ESI)m/z:414.4(M+1).
步骤I:将6-(1-氨基哌啶-4-基)-1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-甲酸乙酯(2.00克，0.484毫摩尔)，5–溴代戊酰氯(1.16克，5.81毫摩尔)和DIPEA(2.5毫升，14.5毫摩尔)假如DCM(20mL)中，混合物在室温下搅拌12小时。将混合物加入水(40mL)中并用DCM(20毫升×3)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并过滤。滤液浓缩后得到6-(1-(5-溴代戊酰胺)哌啶-4-基)-1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-甲酸乙酯(3.00克，粗品)，为黄色固体。LCMS(ESI)m/z:576.2[M+1].
步骤J:在冰浴冷却下，将NaH(138毫克，3.44毫摩尔)缓慢加入到6-(1-(5-溴代戊酰胺)哌啶-4-基)-1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-甲酸乙酯(1.80克，3.13毫摩尔)的THF(50mL)溶液中。反应混合物在室温下搅拌12小时，然后在真空下除去溶剂。残余物加入水(100毫升)中，并用DCM(40毫升×4)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并过滤。将滤液浓缩，得到粗产物，通过硅胶色谱纯化(DCM：甲醇＝100:1至10:1)，得到1-(4-甲氧基苯基)-7-氧-6-(2'-氧-[1,1'-二哌啶基]-4-基)-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-甲酸乙酯(1.00克，64％)，为黄色固体。LCMS(ESI)m/z:496.2[M+1].
步骤K:将1-(4-甲氧基苯基)-7-氧-6-(2'-氧-[1,1'-二哌啶基]-4-基)-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-甲酸乙酯(500毫克，1.01毫摩尔)加入通有氨气的乙二醇(20mL)中。混合物在闷罐中于80℃搅拌3小时。冷却后，加入水(100毫升)到混合物中，并过滤。将固体用水(5毫升×3)洗涤并干燥，得到1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-6-(2'-氧代-[1,1'-二哌啶基]-4-基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-甲酰胺(370毫克，79％)，为黄色固体。1HNMR(DMSO-d6,400MHz)δ7.66(s,1H),7.46(d,J＝8.8Hz,2H),7.39(s,1H),7.01(d,J＝9.2Hz,2H),4.26-4.20(m,1H),3.82(s,3H),3.55-3.52(m,3H),3.31-3.30(m,3H),3.00-2.92(m,4H),2.20-2.17(m,2H),1.75-1.72(m,2H),1.60-1.56(m,4H).LCMS(ESI)m/z:467.2[M+1].
实施例5
1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-6-(2'-氧代-[1,1'-二哌啶基]-4-基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-腈
步骤A:在冰浴冷却下，TFAA(406毫克，1.93毫摩尔)逐滴加入到1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-6-(2'-氧代-[1,1'-二哌啶基]-4-基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-甲酰胺(300毫克，0.644毫摩尔)和Et3N(0.36毫升，2.58毫摩尔)的DCM(20mL)溶液中。反应混合物在30℃下搅拌2小时。混合物用饱和NaHCO3水溶液调节pH值至9，，再用DCM(20毫升×2)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并过滤。将滤液浓缩，得到1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-6-(2'-氧代-[1,1'-二哌啶基]-4-基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-腈(288毫克，99％)，为白色固体。1HNMR(DMSO-d6,400MHz)δ7.49-7.46(m,2H),7.05-7.02(m,2H),4.26-4.16(m,1H),3.83(s,3H),3.60(t,J＝6.8Hz,2H),3.33-3.30(m,4H),2.95-2.89(m,4H),2.19(t,J＝6.4Hz,2H),1.83-1.69(m,4H),1.61-1.53(m,4H).LCMS(ESI)m/z:449.2[M+1].
实施例6
N'-氰基-1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-6-(2'-氧代-[1,1'-二哌啶基]-4-基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-甲脒
步骤A:向1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-6-(2'-氧代-[1,1'-二哌啶基]-4-基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-腈(288毫克，0.642毫摩尔)的MeOH(20毫升)溶液中加入甲醇钠(69毫克，1.28毫摩尔)。将反应混合物在室温下搅拌3小时后，氰胺(270毫克，6.42毫摩尔)加入到混合物中，混合物在室温下继续搅拌12小时。将混合物浓缩，得到粗产物，其通过制备型HPLC纯化(甲酸)，得到N'-氰基-1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-6-(2'-氧代-[1,1'-二哌啶基]-4-基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-甲脒(120毫克，38％)，为白色固体。1HNMR(DMSO-d6,400MHz)δ8.90(brs,1H),8.66(brs,1H),7.52-7.49(m,2H),7.04-7.01(m,2H),4.26-4.20(m,1H),3.83(s,3H),3.54(t,J＝6.8Hz,3H),3.33-3.30(m,3H),3.00-2.92(m,4H),2.19(t,J＝6.8Hz,2H),1.81-1.69(m,4H),1.62-1.53(m,4H).LCMS(ESI)m/z:491.2[M+1].
实施例7
1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-6-(1-(3-氧代吗啉代)哌啶-4-基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-甲酰胺
步骤A:将6-(1-氨基哌啶-4-基)-1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-甲酸乙酯(1.00克，2.42毫摩尔)，2-(2-氯代乙氧基)乙酸(0.40克，2.91毫摩尔)加入DCM(20mL)中，溶液中加入DIPEA(1.2毫升，7.2毫摩尔)和HATU(0.95克，2.5毫摩尔)。混合物在室温下搅拌12小时。将混合物加入水(40mL)中，并用DCM(20毫升×3)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并过滤。将滤液浓缩，得到6-(1-(2-(氯代甲氧基)乙酰胺)哌啶-4-基)-1-(4-甲氧基苯基)-氧代-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-甲酸乙酯(1.00克，粗品)，为黄色固体。LCMS(ESI)m/z:534(M+1).
步骤B:在0℃下，NaH(100毫克，4.16毫摩尔)缓慢加入到6-(1-(2-(氯代甲氧基)乙酰胺)哌啶-4-基)-1-(4-甲氧基苯基)-氧代-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-甲酸乙酯(0.70克，1.31毫摩尔)的THF(20mL)溶液中。将反应混合物在室温下搅拌12小时，浓缩除去溶剂。将残余物用水(100毫升)稀释，并用DCM(40毫升×4)萃取。将合并的有机层，用无水硫酸钠干燥并过滤。将滤液浓缩，得到粗产物，其通过硅胶色谱纯化(DCM：甲醇＝100:1～50:1)，得到1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-6-(1-(3-氧代吗啉代)哌啶-4-基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-甲酸乙酯(4.00克，粗品)，为黄色固体。LCMS(ESI)m/z:498(M+1)。
步骤C:将1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-6-(1-(3-氧代吗啉代)哌啶-4-基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-甲酸乙酯(500毫克，1.01毫摩尔)加入通有氨气的乙二醇(20mL)中。混合物于闷罐中在80℃下搅拌3小时。冷却后，加入水(100毫升)加入到混合物中，并过滤。将残余物用水(5毫升×3)洗涤并干燥，得到1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-6-(1-(3-氧代吗啉代)哌啶-4-基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-甲酰胺(370毫克，79％)，为黄色固体。1HNMR(DMSO-d6,400MHz)δ7.71(s,1H),7.46(d,J＝8.8Hz,2H),7.39(s,1H),7.01(d,J＝9.2Hz,2H),4.26-4.20(m,1H),3.82(s,3H),3.55-3.52(m,3H),3.31-3.30(m,3H),3.00-2.92(m,4H),1.85-1.79(m,2H),1.58(d,J＝10.4Hz,2H).
实施例8
1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-6-(1-(2-氧代吡咯烷-3-基)哌啶-4-基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-甲酰胺
步骤A:在-15℃下，向吡咯烷-2-酮(4.32克，48毫摩尔)的DCM(120mL)溶液中加入NEt3(24.29克，240毫摩尔)，随后加入TMSCl(15.64克，144毫摩尔)。混合物在-15℃下搅拌0.5小时后，加入溶有I2(24.36克，96毫摩尔)的DCM(180毫升)溶液。混合物升温至0℃，并在0℃下搅拌2小时。将所得混合物用饱和亚硫酸钠溶液(600毫升×3)洗涤。有机相用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。粗的残余物通过硅胶层析法(EtOAc＝1:1至1:3PE)进行纯化，得到3–碘吡咯烷-2-酮(1.60克，16％)，为浅黄色固体。
步骤B:在室温下，向1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-6-(哌啶基-4-基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-羧酸甲酯(598毫克，1.5毫摩尔)的DMF(5mL)溶液中加入NEt3(304毫克，3.0毫摩尔)，接着加入3–碘吡咯烷-2-酮(317毫克，1.5毫摩尔)。混合物在室温下搅拌16小时。将反应混合物浓缩，得到粗品，通过硅胶色谱纯化(DCM：甲醇＝50：1至20：1)，得到1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-6-(1-(2-氧代吡咯烷-3-基)哌啶-4-基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-甲酸乙酯(680毫克，94％)，为浅黄色固体。LCMS(ESI)m/z:479(M+1).
步骤C:闷罐中加入1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-6-(1-(2-氧代吡咯烷-3-基)哌啶-4-基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-甲酸乙酯(674毫克，1.4毫摩尔)和通有氨气的乙二醇(10mL)溶液，混合物在120摄氏度下搅拌16小时。将混合物冷却至室温，并用水(50mL)稀释。混合液用EtOAc(50毫升×3)萃取。将合并的有机层干燥及浓缩。粗残余物通过硅胶色谱纯化(PE：乙酸乙酯＝1:3至1:1)，得到1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-6-(1-(2-氧代吡咯烷-3-基)哌啶-4-基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-甲酰胺(400毫克，44％)，为灰白色固体。标题化合物为手性化合物，异构体通过制备级SFC和制备HPLC进一步纯化，得到两个馏分，一个得到18.5毫克，另一个得到23.6毫克。馏分1:1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.50(brs,2H),7.54(d,J＝8.0Hz,2H),7.34(d,J＝8.0Hz,2H),7.28(d,J＝8.0Hz,2H),7.01(d,J＝8.0Hz,2H),4.06(t,J＝6.0Hz,2H),3.81(s,3H),3.62-3.59(m,2H),3.23(t,J＝6.0Hz,2H),2.42-2.38(m,2H),1.88-1.84(m,4H).LCMS(ESI)m/z:484.2(M+1).馏分2:1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.50(br s,2H),7.54(d,J＝8.0Hz,2H),7.34(d,J＝8.0Hz,2H),7.28(d,J＝8.0Hz,2H),7.01(d,J＝8.0Hz,2H),4.06(t,J＝6.0Hz,2H),3.81(s,3H),3.62-3.59(m,2H),3.23(t,J＝6.0Hz,2H),2.42-2.38(m,2H),1.88-1.84(m,4H).MS(ESI)m/z:484.2(M+1).
实施例9
1-(4-氯代苯基)-7-氧代-6-(1-(3-氧代吗啉)哌啶-4-基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-甲酰胺
步骤A:1-(4-氯代苯基)-7-氧代-6-(1-(3-氧代吗啉)哌啶-4-基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-甲酰胺根据用于实施例4的制备方法制备，从步骤A～K序列。其中在步骤B中用(Z)-乙基-2-氯-2-(2-(4-氯苯基)亚肼基)乙酸叔丁酯替代(Z)-2-氯-2-(2-(4-甲氧基苯基)亚肼基)乙酸甲酯。标题化合物为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.73(brs,1H),7.62(d,J＝8.8Hz,2H),7.56(d,J＝8.8Hz,2H),7.45(brs,1H),4.29-4.25(m,1H),3.97(s,2H),3.81-3.78(m,2H),3.56-3.53(m,2H),3.42-3.37(m,4H),3.02-2.98(m,4H),1.84-1.76(m,2H),1.60-1.56(m,2H).LCMS(ESI)m/z:473(M+1).
实施例10
7-氧代-6-(1-(3-氧代吗啉)哌啶-4-基)-1-(4-(三氟甲基)苯基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-甲酰胺
步骤A:7-氧代-6-(1-(3-氧代吗啉)哌啶-4-基)-1-(4-(三氟甲基)苯基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-甲酰胺根据用于实施例4的制备方法制备，从步骤A～K序列。其中在步骤B中用(Z)-乙基-2-氯-2-(2-(4-(三氟甲氧基)苯基)亚肼基)乙酸甲酯替代(Z)-乙基2-氯-2-(2-(4-甲氧基苯基)亚肼基)乙酸甲酯。标题化合物为白色固体。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.74-7.72(m,3H),7.52-7.50(m,2H),7.46(s,1H),4.27(t,J＝12.0Hz,1H),3.98(s,2H),3.82-3.80(m,2H),3.57(t,J＝6.4Hz,2H),3.43-3.40(m,4H),3.01-2.98(m,4H),1.82-1.77(m,2H),1.59(d,J＝12.0Hz,2H).
实施例11
1-(4-(二氟甲基)苯基)-7-氧代-6-(1-(3-氧代吗啉)哌啶-4-基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-甲酰胺
步骤A:1-(4-(二氟甲基)苯基)-7-氧代-6-(1-(3-氧代吗啉)哌啶-4-基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-甲酰胺根据用于实施例4的制备方法制备，从步骤A～K序列。其中在步骤B中用(Z)-乙基-2-氯-2-(2-(4-(二氟甲氧基)苯基)亚肼基)乙酸叔丁酯替代(Z)-乙基-2-氯-2-(2-(4-甲氧基苯基)亚肼基)乙酸甲酯。标题化合物为白色固体。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.71(s,1H),7.65(d,J＝8.8Hz,2H),7.44(s,1H),7.34(t,J＝74Hz,1H),7.29(d,J＝8.8Hz,2H),4.27-4.22(m,1H),3.98(s,2H),3.77-3.75(m,2H),3.60-3.55(m,2H),3.50-3.40(m,4H),3.02-2.95(m,4H),1.82-1.75(m,2H),1.60-1.55(m,2H).
实施例12
1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-6-(3-(2-氧代哌啶-1-基)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-6-基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-甲酰胺
反应流程：
步骤A:在0℃下，向NaOH(12.00克，300毫摩尔)水溶液(300毫升)中逐滴加入硝基甲烷(18.30克，300毫摩尔)，加完后在0℃下继续搅拌0.5小时。随后溶有液溴(47.94克，300毫摩尔)的水(100毫升)溶液在5分钟内加入反应液中，加完后继续在0℃下搅拌10分钟。反应混合物中加入过量的饱和亚硫酸钠水溶液，在0℃下搅拌0.5小时。将反应混合物用DCM(200毫升×2)萃取。将合并的有机层干燥，过滤，在25℃下浓缩，，得到溴(硝基)甲烷(28.00克，粗品)，为黄色油状物，直接用于下一步骤。
步骤B:向1-苄基-1H-吡咯-2,5-二酮(15.08克，81毫摩尔)的CH3CN(810毫升)溶液中加入溴(硝基)甲烷(11.33克，81毫摩尔)，接着加入K2CO3(11.19克，81毫摩尔)。混合物在25℃下搅拌4小时，然后分批次每4小时加入溴(硝基甲基)甲烷(1.13克，8毫摩尔)×5次，反应温度控制在25℃。加完后继续在25℃下搅拌4小时。将混合物真空浓缩，得到粗品。粗产物通过硅胶柱色谱纯化(EA：PE＝1:10至1:5)，得到3-苄基-6-硝基-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-2,4-二酮(8.00克，粗品)，为黄色固体，直接用于下一步骤。LCMS(ESI)m/z:247(M+1).
步骤C:在-20℃下，向3-苄基-6-硝基-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-2,4-二酮(8.12克，33毫摩尔)的THF(100mL)溶液中加入硼氢化钠(3.74克，99毫摩尔)，加完后在-20℃下搅拌0.5小时。接着在-20℃下缓慢加入三氟化硼乙醚(14.05克，99毫摩尔)溶液，0.5小时加完，加完后在-20℃下继续搅拌1小时。混合物升至25℃下并搅拌16小时。向反应混合物中缓慢加入MeOH(25mL)，加完后在25℃下搅拌0.5小时。将混合物在减压浓缩，得到粗品。将粗品加入水(50mL)中，并用EA(50毫升×3)萃取。将合并的有机层干燥，过滤，浓缩，得到粗品。将粗品加入MeOH(80mL)中，并在80℃下搅拌2小时后浓缩。粗残余物通过硅胶柱色谱纯化(EA：PE＝1:50至1:30)，得到3-苄基-6-硝基-3-氮杂双环[3.1.0]己烷(4.70克，65％)，为无色油状物。LCMS(ESI)m/z:219(M+1).
步骤D:在25℃下，向3-苄基-6-硝基-3-氮杂双环[3.1.0]己烷(4.80克，22毫摩尔)的异丙醇溶液(220毫升)溶液中加入2M的盐酸水溶液(110毫升，220毫摩尔)，随后在25℃下加入锌粉(28.78克，440毫摩尔)。混合物并在25℃下搅拌2小时后，碳酸氢钠(18.48克，220毫摩尔)加入到反应混合物中，并在25℃下继续搅拌0.5小时。将混合物在硅藻土上过滤，滤液用DCM(200毫升×3)萃取。将合并的有机层干燥，过滤，并浓缩。将粗残余物通过硅胶柱色谱纯化(DCM：甲醇＝30:1～10:1)，得到3-苄基-3-氮杂双环[3.1.0]己-6-胺(3.25克，78％)，为黄色固体。LCMS(ESI)m/z:189(M+1).
步骤E:在0℃下，向3-苄基-3-氮杂双环[3.1.0]己-6-胺(3.20克，17毫摩尔)的THF(150mL)溶液中加入NEt3(3.78克，37毫摩尔)，接着加入溶有5–溴代戊酰氯(4.07克，20毫摩尔)的THF(20mL)溶液，加完后在0℃下搅拌2小时。将混合物倒入饱和的NaHCO3水溶液(150mL)中，用EtOAc(150毫升×3)萃取。将合并的有机层干燥，过滤，浓缩。得到的粗产物通过硅胶柱色谱纯化(DCM：甲醇＝50:1～30:1)，得到中间体粗品。粗品溶解在THF(130毫升)溶液中，在0℃分批加入叔丁醇钾(1.90克，17毫摩尔)，加完后在0℃下继续搅拌2小时。混合物倒入饱和NH4Cl溶液(100mL)中，用EtOAc(100毫升×3)萃取。将合并的有机层干燥，过滤，并浓缩。粗残余物通过硅胶柱色谱纯化(DCM：甲醇＝50:1～30:1)，得到1-(3-苄基-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-6-基)哌啶-2–酮(2.80克，79％)，为白色固体。LCMS(ESI)m/z:271(M+1).
步骤F:在25℃下，向溶有1-(3-苄基-3-氮杂双环[3.1.0]己-6-基)哌啶-2-酮(2.03克，7.5毫摩尔)的CHCl3(24毫升)溶液加入五氯化磷(6.25克，30.0毫摩尔)。混合物升温至85℃下搅拌16小时。反应液冷却至0℃后，将混合物倒入冰水(25mL)中并用CHCl3(25毫升×2)萃取。将合并的有机层干燥，过滤，并浓缩，得到1-(3-苄基-3-氮杂双环[3.1.0]己-6-基)-3,3–二氯哌啶-2-酮(2.60克，粗品)，为暗棕色固体。该粗品直接用于下一步骤。LCMS(ESI)m/z:339(M+1).
步骤G:1-(3-苄基-3-氮杂双环[3.1.0]己-6-基)-3,3–二氯哌啶-2-酮(2.54克，7.5毫摩尔)溶在吗啉(35毫升)中，在130℃下加热搅拌16小时。将混合物浓缩，得到的粗品溶于水(20mL)中,并用EtOAc(20毫升×3)萃取。将合并的有机层干燥，过滤，并浓缩。粗残余物通过硅胶柱色谱法纯化(DCM：甲醇＝40:1)，得到1-(3-苄基-3-氮杂双环[3.1.0]己-6-基)-3-吗啉代-5,6-二氢吡啶-2(1H)-酮(1.70克，粗产物)，为棕色油状物。LCMS(ESI)m/z:271(M+1).
步骤H:向4-甲氧基苯胺(19.71克，160毫摩尔)的EtOH(40mL)中的溶液中加入HCl溶液(40毫升，12M),随后在-5℃下缓慢加入60mL亚硝酸钠(12.14克，176毫摩尔)水溶液，历时20分钟.反应物在0℃下搅拌1小时,然后按顺序加入2-氯-3-氧代丁酸乙酯(26.34克，160毫摩尔)，EtOH/H2O(400毫升，9:1)和醋酸钠(20.99256毫摩尔),加完后在0℃下搅拌0.5小时，然后升温至25℃搅拌2小时。过滤收集固体，用H2O(50毫升×3)洗涤，干燥，得到(Z)-乙基-2-氯-2-(2-(4-甲氧基苯基)亚肼基)乙酸甲酯(15克，36％)，为黄绿色固体。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.29(br s,1H),7.17(d,J＝8.8Hz,2H),6.89(d,J＝8.8Hz,2H),4.38(q,J＝6.4Hz,2H),3.80(s,3H),1.40(t,J＝6.4Hz,3H).
步骤I:1-(3-苄基-3-氮杂双环[3.1.0]己-6-基)-3-吗啉代-5,6-二氢吡啶-2(1H)-酮和(Z)-乙基-2-氯-2-(2-(4-甲氧基苯基)亚肼基)乙酸甲酯溶在EtOAc(40mL)中，向混合中加入NEt3(1.26克，12.5毫摩尔)后升温至85℃下搅拌16小时。将混合物冷却至25℃，倒入水(30mL)中，用EtOAc(30毫升×3)萃取。将合并的有机层用饱和NaHCO3溶液洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤，浓缩，得到中间体(3.00克，粗品)，为黄色固体。MS(ESI)M/Z：574(M+1)。该中间体溶在DCM(25mL)溶液中,加入TFA(2.5mL)中，并在25℃下搅拌16小时。NaHCO3(10克，0.12摩尔)在25℃下加入到反应混合物中，并在25℃下搅拌1小时。将混合物过滤并浓缩。粗残余物通过硅胶柱色谱法纯化(DCM：甲醇＝50:1～20:1)，得到6-(3-苄基-3-氮杂双环[3.1.0]己-6-基)-1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-甲酸乙酯(800毫克，粗产物)，为棕色油状物，其直接用于下一步骤。LCMS(ESI)m/z:487(M+1).
步骤J:6-(3-苄基-3-氮杂双环[3.1.0]己-6-基)-1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-甲酸乙酯(779毫克，1.6毫摩尔)和10％的Pd/C(500毫克)的MeOH(20ml)溶液在50psi的H2压力下，在25℃下搅拌16小时。将混合物过滤，滤液浓缩，得到6-(3-氮杂双环[3.1.0]己-6-基)-1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-甲酸乙酯(700毫克，粗产物)，为黄色固体，将其直接用于下一步骤。LCMS(ESI)m/z:397(M+1).
步骤K:在0℃下,向6-(3-氮杂双环[3.1.0]己-6-基)-1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-甲酸乙酯(674毫克，1.7毫摩尔)的AcOH(10mL)溶液中加入2mL亚硝酸钠(704毫克，10.2毫摩尔)水溶液,加完后在0℃下搅拌1小时。将混合物倒入水(30mL)中并用EtOAc(30毫升×2)萃取。将合并的有机层用饱和NaHCO3溶液洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤，浓缩。得到中间体(520毫克，71％)，为黄色固体：将粗残留物通过硅胶柱层析(PE＝1:2至1:1，EA)纯化。LCMS(ESI)m/z:426(M+1).
步骤L:向中间体(510毫克，1.2毫摩尔)在MeOH(20毫升)的溶液中加入氯化铵(386毫克，7.2毫摩尔)，随后在0℃下分批加入锌粉(471毫克，7.2毫摩尔)，并在0℃下搅拌1小时。将混合物过滤,滤液浓缩。粗残余物通过硅胶柱色谱纯化(DCM：甲醇＝30:1～10:1)，得到6-(3-氨基-3-氮杂双环[3.1.0]己-6-基)-1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-甲酸乙酯(370毫克，74％)，为白色固体。LCMS(ESI)m/z:412(M+1).
步骤M:在0℃下,向6-(3-氨基-3-氮杂双环[3.1.0]己-6-基)-1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-甲酸乙酯(206毫克，0.5毫摩尔)的DCM(5mL)溶液中加入NEt3(111毫克，1.1毫摩尔)，接着加入5–溴代戊酰氯(120毫克0.6毫摩尔)的DCM(1毫升)溶液.混合物在0℃搅拌1小时后倒入饱和NaHCO3溶液(10mL)中，用DCM(10毫升×2)萃取。将合并的有机层干燥，过滤，浓缩。将粗残余物通过硅胶柱色谱(DCM：EA＝1:1至1:3)纯化，得到中间体(235毫克，81％)，为白色固体。LCMS(ESI)m/z:574(M+1).
步骤N:在0℃下,向中间体(230毫克，0.4毫摩尔)的DMF溶液(5mL)中加入NaH(21毫克，0.5毫摩尔)，随后在0℃下搅拌2小时。混合物倒入饱和NH4Cl水溶液(20mL)中，用EtOAc(20毫升×2)萃取。将合并的有机层干燥，过滤，浓缩。粗残余物通过硅胶柱色谱纯化(DCM：EA＝1:1至1:2)，得到1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-6-(3-(2-氧代哌啶-1-基)-3-氮杂双环[3.1.0]己-6-基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-甲酸乙酯(110毫克，55％)，为白色固体。LCMS(ESI)m/z:494(M+1).
步骤O:闷罐中将1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-6-(3-(2-氧代哌啶-1-基)-3-氮杂双环[3.1.0]己-6-基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-甲酸乙酯(109毫克，0.2毫摩尔)加入通有氨气的乙二醇溶液(6mL)中,混合物在80℃下搅拌16小时。冷却至室温后,将混合物倒入H2O(30mL)中，用EA(25毫升×3)萃取。将合并的有机层干燥，过滤，并浓缩。将粗残余物通过制备型HPLC(HCOOH)纯化，得到标题产物(45mg，44％)，为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.65(br s,1H),7.45(d,J＝8.8Hz,2H),7.38(br s,1H),7.01(d,J＝8.8Hz,2H),3.82(s,3H),3.61-3.53(m,4H),3.28-3.26(m,2H),3.03-2.98(m,4H),2.74-2.72(m,1H),2.19-2.16(m,2H),1.74-1.68(m,4H),1.60-1.57(m,2H).LCMS(ESI)m/z:465(M+1).
实施例13
1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-6-(3-(3-氧代吗啉)-3-氮杂双环[3.1.0]己-6-基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-甲酰胺
步骤A:将2-(2-氯乙氧基)乙酸(46毫克，0.33毫摩尔)的DCM(0.5毫升)溶液,HATU(125毫克，0.33毫摩尔)，加入DCM(2.0mL)中,随后加入DIPEA(76毫克0.60毫摩尔)，混合物在25℃搅拌0.5小时。然后将溶有6-(3-氨基-3-氮杂双环[3.1.0]己-6-基)-1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-甲酸乙酯(123毫克，0.30毫摩尔)的DCM(0.5毫升)溶液在25℃下加入到反应混合物中，并在25℃下搅拌16小时。将混合物倒入饱和NaHCO3溶液(10mL)中，用DCM(10毫升×2)萃取。将合并的有机层干燥，过滤，浓缩。将粗残余物通过硅胶柱色谱纯化(DCM：EA＝1:1至0:1)，得到6-(3-(2-(2-氯代乙氧基)乙酰胺)-3-氮杂双环[3.1.0]己-6-基)-1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-甲酸乙酯(80毫克，50％)，为黄色油状物。LCMS(ESI)m/z:532(M+1).
步骤B:将6-(3-(2-(2-氯代乙氧基)乙酰胺)-3-氮杂双环[3.1.0]己-6-基)-1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-甲酸乙酯(80毫克，0.15毫摩尔)溶在DMF(5mL)溶液中,在0℃向溶液中加入NaH(6毫克，0.15毫摩尔)，加完后在0℃下继续搅拌2小时。混合物倒入饱和NH4Cl溶液(20mL)中，用EtOAc(20毫升×2)萃取。将合并的有机层干燥，过滤并浓缩，得到粗品1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-6-(3-(3-氧代吗啉)-3-氮杂双环[3.1.0]己-6-基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-甲酸乙酯为黄色油状物，其直接用于下一步骤。LCMS(ESI)m/z:496(M+1).
步骤C:在闷罐中,将1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-6-(3-(3-氧代吗啉)-3-氮杂双环[3.1.0]己-6-基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-甲酸乙酯(15毫克，0.03毫摩尔)加入通有氨气的乙二醇溶液(5mL)中，混合物在80℃下搅拌16小时。将混合物倒入H2O(30mL)中，用EA(230毫升×3)萃取。将合并的有机层干燥，过滤，并浓缩。将粗残余物通过制备型HPLC纯化(HCOOH)，得到1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-6-(3-(3-氧代吗啉)-3-氮杂双环[3.1.0]己-6-基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-甲酰胺(6毫克，42％)，为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.65(br s,1H),7.45(d,J＝8.8Hz,2H),7.38(br s,1H),7.01(d,J＝8.8Hz,2H),3.97(s,2H),3.82(s,3H),3.81-3.78(m,2H),3.61-3.57(m,2H),3.55-3.52(m,2H),3.36-3.32(m,2H),3.11-3.08(m,2H),3.01-2.97(m,2H),2.76-2.74(m,1H),1.79-1.76(m,2H).LCMS(ESI)m/z:465(M+1).
实施例14
1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-6-(2-甲氧基苯基-[1,4'-二哌啶]-1'-基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-甲酰胺
反应流程：
步骤A:在-10℃下,将LiHMDS(17.4毫升，17.4毫摩尔)缓慢加入到乙基1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-羧酸乙酯(5.00克，15.8毫摩尔)的DMF(50mL)溶液中后，将混合物搅拌10分钟，在0℃下将P，P-二苯基次膦酰胺(4.4克，19.1毫摩尔)的DMF(20mL)溶液中逐滴加入其中.混合物随后在18℃下搅拌16小时。将混合物倒入水(150毫升)中，用EA(150毫升×3)萃取。合并的有机相用无水Na2SO4干燥，浓缩。粗残余物用二氧化硅凝胶色谱法纯化(PE：EA＝4:1至1:2)纯化，得到6-氨基-1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-羧酸甲酯(3.3克，63％)，为白色固体。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.45(dd,J＝6.8,2.0Hz,2H),7.01(dd,J＝6.8,2.0Hz,2H),5.04(brs,2H),4.31(q,J＝7.2Hz,2H),3.82(s,3H),3.75(t,J＝7.2Hz,2H),3.09(t,J＝7.2Hz,2H),1.31(t,J＝7.2Hz,3H).
步骤B:6-氨基-1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-羧酸甲酯(3.3克，0.01摩尔)的DMF(35mL)溶液中加入2,2-双(2-溴乙基)-1,3-二氧戊环(2.86克，0.01摩尔)和K2CO3(1.38，0.01摩尔)。将混合物加热至100℃持续16小时。冷却至18℃后，将混合物倾入水(100mL)中，用EtOAc(100毫升×2)萃取.有机相用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，浓缩。粗残余物用二氧化硅凝胶色谱法纯化(PE：EA＝1:1)纯化，得到1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-6-(1,4-二氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-羧酸甲酯(0.9克，20％)，为白色固体。
步骤C:1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-6-(1,4-二氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-羧酸甲酯(700毫克，1.54毫摩尔)加入丙酮(10mL)和水(1mL)的混合溶液中,随后加入加入TsOH·H2O(132毫克，0.77毫摩尔)。将混合物加热至50℃搅拌20小时。反应液冷却后倾入饱和NaHCO3溶液，用EtOAc(30毫升×2)萃取，无水硫酸钠干燥，浓缩。将粗残余物用薄层色谱法(PE：EA＝1:2)纯化，得到1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-6-(4-氧代哌啶-1-基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-羧酸甲酯(250毫克，39％)，为白色固体。
步骤D:1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-6-(4-氧代哌啶-1-基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-羧酸甲酯(350毫克，0.849毫摩尔)的甲醇(6毫升)溶液中加入乙酸铵(77毫克，1.27毫摩尔)和NaBH3CN(107毫克，1.69毫摩尔)。将混合物在20℃下搅拌15小时。混合物倒入水(50毫升)中，用DCM(50mL)萃取分液,收集水层，然后通过冷冻干燥除去溶剂，，得到6-(4-氨基哌啶-1-基)-1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-羧酸甲酯(300毫克，粗品)，为白色固体。LCMS(ESI)m/z:414(M+1).
步骤E:6-(4-氨基哌啶-1-基)-1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-羧酸甲酯(300毫克，0.726毫摩尔，粗品)溶在DMF(5mL)中,溶液中加入DIPEA(112毫克，0.871毫摩尔)和5–溴代戊酰氯(158毫克，0.799毫摩尔)。将混合物在20℃下搅拌16小时。将混合物倾入NH4Cl水溶液，用EtOAc(300毫升×2)萃取，无水硫酸钠干燥，浓缩。将粗制残余物经TLC(EA)纯化，得到6-(4-(5–溴代戊酰胺)哌啶-1-基)-1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-羧酸甲酯(200毫克，48％)，为黄色固体。LCMS(ESI)m/z:576(M+1),578(M+3).
步骤F:在0℃下,向6-(4-(5–溴代戊酰胺)哌啶-1-基)-1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-羧酸甲酯(200毫克，0.347毫摩尔)的DMF(3mL)溶液中加入NaH(14毫克，0.347毫摩尔)，然后将反应物在20℃下搅拌16小时.将混合物倾入NH4Cl水溶液(30mL)中，用EA(30毫升×2)洗涤，用无水Na2SO4干燥，并浓缩萃取粗品残留物通过TLC纯化(EA：甲醇＝30:1)，得到1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-6-(2-氧代-[1,4'-联哌啶]-1'-基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-羧酸甲酯(120毫克，69％)，为白色固体。LCMS(ESI)m/z:596(M+1).
步骤G:在闷罐中,1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-6-(2-氧代-[1,4'-联哌啶]-1'-基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-羧酸甲酯(150毫克，0.303毫摩尔)加入通有氨气的乙二醇(8mL)溶液中。混合物加热至80℃持续16小时。将混合物倒入水(30mL)中，用DCM(30毫升×2)萃取，用盐水洗涤有机相.有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩。粗残余物通过制备型HPLC(盐酸)纯化，得到1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-6-(2-氧代-[1,4'-联哌啶]-1'-基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3–甲酰胺(10毫克，7％)，为白色固体。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.67(brs,1H),7.46(dd,J＝6.8Hz,2.0Hz,2H),7.40(brs,1H),7.31(dd,J＝6.8Hz,2.0Hz,2H),4.25(s,1H),3.83(s,3H),3.76-3.72(m,2H),3.70-3.65(m,2H),3.16-3.13(m,2H),3.09-2.89(m,4H),2.22(t,J＝6.0Hz,2H),1.67-1.63(m,6H),1.50-1.47(m,2H).LCMS(ESI)m/z:567(M+1).
实施例15
1-(4-甲氧基苯基)-N5-(1-(3-氧代吗啉)哌啶-4-基)-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺
反应流程：
步骤A:3-(甲氧基羰基)-1-(4-甲氧基苯基)-1H-吡唑-5-羧酸(1克，3.62毫摩尔)的DMF(10mL)溶液中加入HATU(1.65克，4.34毫摩尔)，DIEA(0.93克，7.24毫摩尔)和叔丁基4-氨基哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.87克，4.34毫摩尔)。将混合物在20℃搅拌16小时后倒入水(60mL)中，用EtOAc(60毫升×2)萃取，合并的有机相用无水无水硫酸钠干燥，并浓缩。将粗残余物用硅胶色谱法(PE：EA＝3:1至1:2)纯化，得到4-(3-(甲氧基羰基)-1-(4-甲氧基苯基)-1H-吡唑-5-甲酰氨基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.1克，68％)，为白色固体。
步骤B:在0℃下,向4-(3-(甲氧基羰基)-1-(4-甲氧基苯基)-1H-吡唑-5-甲酰氨基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(1克，2.18毫摩尔)的DMF(10mL)中溶液中加入NaH(0.131克，3.27毫摩尔)，随后加入烯丙基碳酰氯(0.524克，4.36毫摩尔)。将混合物在20℃下搅拌16小时。将混合物倒入水(50mL)中，用EtOAc(50毫升×2)萃取，用盐水洗涤，并浓缩。粗残留物用硅胶色谱法(EA＝8:1至3:1PE)纯化,得到4-(N-((烯丙氧基)羰基)-3-(甲氧羰基)-1-(4-甲氧基苯基)-1H-吡唑-5-甲酰氨基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(700毫克，59％)，为无色液体。LCMS(ESI)m/z:543(M+1).
步骤C:向4M的HCl/乙酸乙酯(15ml)溶液中加入4-(N-((烯丙氧基)羰基)-3-(甲氧羰基)-1-(4-甲氧基苯基)-1H-吡唑-5-甲酰氨基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(770毫克，1.42毫摩尔)。反应液在25℃下搅拌3小时。将混合物浓缩，得到甲基5-(((烯丙氧基)羰基)(哌啶-4-基)氨基甲酰基)-1-(4-甲氧基苯基)-1H-吡唑-3-羧酸乙酯(600毫克，95％)，为白色固体。
步骤D:在0℃下,向5-(((烯丙氧基)羰基)(哌啶-4-基)氨基甲酰基)-1-(4-甲氧基苯基)-1H-吡唑-3-羧酸乙酯(100毫克，0.226毫摩尔)的AcOH(4mL)溶液中加入2mL亚硝酸钠(78毫克，1.13毫摩尔)水溶液.将混合物在25℃下搅拌3小时后倒入水(10毫升)中，用EA(20毫升×2)萃取，用无水硫酸钠干燥，浓缩，得到甲基5-(((烯丙氧基)羰基)(1-亚硝基哌啶-4-基)氨基甲酰)-1-(4-甲氧基苯基)-1H-吡唑-3-羧酸乙酯(90毫克，粗产物)，为黄色固体。LCMS(ESI)m/z:472(M+1).
步骤E:向甲基5-(((烯丙氧基)羰基)(1-亚硝基哌啶-4-基)氨基甲酰)-1-(4-甲氧基苯基)-1H-吡唑-3-羧酸乙酯(450毫克，0.849毫摩尔)的AcOH(6mL)溶液中加入锌粉(276毫克，4.24毫摩尔)。将混合物在25℃下搅拌3小时后倒入水(20mL)中，用EtOAc(30毫升×2)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩。少量的AcOH通过冷冻干燥除去，得到甲基5-(((烯丙氧基)羰基)(1-氨基哌啶-4-基)氨基甲酰)-1-(4-甲氧基苯基)-1H-吡唑-3-羧酸乙酯(400毫克，91％)，为黄色固体。LCMS(ESI)m/z:458(M+1).
步骤F:向2-(2-氯乙氧基)乙酸(181毫克，1.31毫摩尔)的DCM(5mL)溶液中加入HATU(399毫克，1.05毫摩尔)和DIEA(225毫克，1.75毫摩尔)。将混合物搅拌30分钟后加入甲基5-(((烯丙氧基)羰基)(1-氨基哌啶-4-基)氨基甲酰)-1-(4-甲氧基苯基)-1H-吡唑-3-羧酸乙酯(400毫克，0.875毫摩尔)。反应混合物在25℃下搅拌16小时。将混合物倒入水(20mL)中，用DCM(30毫升×2)萃取，用无水硫酸钠干燥，浓缩。粗残余物用硅胶色谱法纯化(PE：EA＝5:1至1:1)纯化，得到甲基5-(((烯丙氧基)羰基)(1-(2-(2-氯代乙氧基)乙酰胺)哌啶-4-基)氨基甲酰)-1-(4-甲氧基苯基)-1H-吡唑-3-羧酸乙酯(400毫克，79％)，为黄色固体。LCMS(ESI)m/z:578(M+1).
步骤G:在0℃下,向甲基5-(((烯丙氧基)羰基)(1-(2-(2-氯代乙氧基)乙酰胺)哌啶-4-基)氨基甲酰)-1-(4-甲氧基苯基)-1H-吡唑-3-羧酸乙酯(350毫克，0.606毫摩尔)的DMF(5mL)溶液中加入NaH(29毫克，0.727毫摩尔)。混合物在25℃下搅拌1小时后倒入水(20mL)中，用DCM(30毫升×2)萃取，用无水硫酸钠干燥，并浓缩，得到甲基5-(((烯丙氧基)羰基)(1-(3-氧代吗啉)哌啶-4-基)氨基甲酰)-1-(4-甲氧基苯基)-1H-吡唑-3-羧酸乙酯(300毫克，91％)，为白色固体。LCMS(ESI)m/z:542(M+1).
步骤H:甲基5-(((烯丙氧基)羰基)(1-(3-氧代吗啉)哌啶-4-基)氨基甲酰)-1-(4-甲氧基苯基)-1H-吡唑-3-羧酸乙酯(360毫克，0.664毫摩尔)的DCM(4mL)溶液中加入四(三苯基膦)钯(76毫克，0.066毫摩尔)和吗啉(200微升)。将混合物在25℃下搅拌16小时后倒入水(20mL)中，用DCM(30毫升×2)萃取。合并的有机相用无水Na2SO4干燥，浓缩。粗制残余物经TLC(EA)纯化，得到甲基1-(4-甲氧基苯基)-5-((1-(3-氧代吗啉)哌啶-4-基)氨基甲酰基)-1H-吡唑-3-羧酸乙酯(200毫克，65％)，为白色固体。LCMS(ESI)m/z:458(M+1).
步骤I:闷罐中,通有氨气的乙二醇溶液(5mL)中加入甲基1-(4-甲氧基苯基)-5-((1-(3-氧代吗啉)哌啶-4-基)氨基甲酰基)-1H-吡唑-3-羧酸乙酯(200毫克，0.452毫摩尔)，将混合物在80℃下搅拌16小时。将混合物倒入水(50mL)中，用DCM(50毫升×3)萃取，用无水硫酸钠干燥，浓缩。粗残余物通过制备型HPLC(HCOOH)纯化，得到1-(4-甲氧基苯基)-N5-(1-(3-氧代吗啉)哌啶-4-基)-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺(42毫克，21％)，为白色固体。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.56(d,J＝8.0Hz,1H),7.72(s,1H),7.39-7.35(m,3H),7.20(s,1H),7.02(dd,J＝7.2,2.0Hz,2H),3.96(s,2H),3.81-3.78(m,5H),3.59-3.56(m,1H),3.41-3.34(m,4H),2.98-2.96(m,2H),1.78-1.75(m,2H),1.57-1.52(m,2H).
实施例16
1-(4-甲氧基苯基)-N5-甲基-N5-(1-(3-氧代吗啉)哌啶-4-基)-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺
步骤A:1-(4-甲氧基苯基)-5-((1-(3–氧代吗啉)哌啶-4-基)氨基甲酰基)-1H-吡唑-3-羧酸乙酯(100毫克，0.219毫摩尔)溶在DMF(2mL)中。，然后在0℃下分批加入钠氢(13毫克，0.329毫摩尔)和碘甲烷(62毫克，0.438毫摩尔).加完后将混合物在0℃下搅拌2小时。反应完成后，倒入水(10毫升)中，并用DCM(15毫升×3)萃取，将合并的有机相用无水Na2SO4干燥，过滤，浓缩得到粗产物，将其直接用于在下一个步骤。LCMS(ESI)m/z:472.1(M+1).
步骤B:甲基1-(4-甲氧基苯基)-5-(甲基(1-(3-氧代吗啉)哌啶-4-基)氨基甲酰基)-1H-吡唑-3-羧酸乙酯(100毫克，0.212毫摩尔)加入通有氨气的乙二醇(5毫升)溶液中。将混合物倒入100mlL高压釜中，在80℃下搅拌15小时。反应完成后，加入水(10毫升)，用EtOAc(20毫升×3)萃取，用无水硫酸钠干燥，浓缩。粗残余物用制备型HPLC(HCOOH)纯化，得到标题化合物，为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.44(d,J＝5.2Hz,2H),7.28(br.s.,1H),7.06(d,J＝5.2Hz2H),6.90(s,1H),3.95(s,2H),3.83(s,3H),3.80(t,J＝4.8Hz,2H),3.39(t,J＝4.8Hz,3H),2.96(brs,4H),2.74(s,3H),1.76(qd,J＝12.4,4.0Hz,2H),1.18-1.64(m,2H).LCMS(ESI)m/z:457.2(M+1).
实施例17
N5-乙基-1-(4-甲氧基苯基)-N5-(1-(3-氧代吗啉)哌啶-4-基)-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺
步骤A:N5-乙基-1-(4-甲氧基苯基)-N5-(1-(3-氧代吗啉)哌啶-4-基)-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺按照用于实施例16的制备方法制备，自A～K的步骤序列，在步骤A中溴乙烷代替碘甲烷.1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ1.03(t,J＝6.4Hz,3H),1.35(s,2H),1.80(s,2H),2.53(d,J＝1.6Hz,2H),2.94(brs,2H),3.38(t,J＝5.2Hz,3H),3.79(t,J＝5.2Hz,2H),3.83(s,3H),3.97(brs,2H),6.90(s,1H),7.03-7.11(m,2H),7.14-7.39(m,2H),7.41-7.51(m,2H).LCMS(ESI)m/z:471.2(M+1).
实施例18
N5-环丙基-1-(4-甲氧基苯基)-N5-(1-(3-氧代吗啉)哌啶-4-基)-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺
步骤A:叔丁基4-氧代哌啶-1-甲酸叔丁酯(8克，40.2毫摩尔),环丙胺(2.52克，44.2毫摩尔)和AcOH(2.41克，40.2毫摩尔)加入MeOH(15mL)中，在30℃下搅拌5小时。在0℃,下,向溶液中分批加入NaBH3CN(3.53克，56.2毫摩尔),加完后将反应在30℃下搅拌16小时。将混合物浓缩,粗品用硅胶色谱法纯化(PE：EA＝3:1至1:1)，得到叔丁基4-(环丙基氨基)哌啶-1-羧酸乙酯(5克，52％)，为无色油状物。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ3.90-4.16(m,2H),2.66-2.89(m,3H),2.13(s,1H),1.82-1.97(m,2H),1.45(s,10H),1.15-1.33(m,2H),0.42-0.49(m,2H),0.30-0.36(m,2H).
步骤B:N5-环丙基-1-(4-甲氧基苯基)-N5-(1-(3-氧代吗啉)哌啶-4-基)-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺按照用于实施例15的制备方法制备，自步骤A～I序列，在步骤A中环丙胺替代氨基.将粗产物通过制备型HPLC(HCOOH)纯化，得到标题化合物(34mg，35％)，为白色固体。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.68-7.73(m,1H),7.36-7.43(m,3H),7.04-7.10(m,2H),6.98-7.01(m,1H),3.97(s,2H),3.80(s,6H),3.37-3.50(m,4H),2.91-3.04(m,2H),2.05-2.15(m,1H),1.84-1.99(m,2H),1.54-1.68(m,2H),0.38-0.63(m,4H).
实施例19
1-(4-甲氧基苯基)-N5-(1-(3-氧代吗啉)吡咯烷-3-基)-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺
步骤A:1-(4-甲氧基苯基)-N5-(1-(3-氧代吗啉)吡咯烷-3-基)-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺按照用于实施例15的制备方法制备，从步骤A～I序列.其中，在步骤A中叔丁基4-氨基哌啶-1-羧酸替代叔丁基-3-氨基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯.粗产物通过制备型HPLC(HCOOH)纯化，得到标题化合物(11.5毫克，17％)为灰白色固体。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.89(d,J＝7.2Hz,1H),8.44(s,1H),7.70(s,1H),7.37(d,J＝8.4Hz,3H),7.24(s,1H),7.02(d,J＝8.8Hz,2H),4.30(t,J＝6.0Hz,1H),4.03(s,2H),3.84(d,J＝5.2Hz,1H),3.82(s,3H),3.46-3.45(m,3H),3.27-3.25(m,1H),3.21-3.17(m,1H),3.07-3.05(m,1H),2.08-2.01(m,1H),1.80-1.75(m,1H).
实施例20
N5-(1-(3-氧代吗啉)哌啶-4-基)-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺
反应流程：
步骤A:在0摄氏度下，向叔丁基4-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(100克，0.5摩尔)的DCM(1L)溶液中加入三乙胺(101克，1.0摩尔).将混合物在0℃搅拌10分钟,然后在0摄氏度逐滴加入甲磺酰氯(62.7克，0.55摩尔)。加完后混合物在室温下搅拌15小时,，将混合物依次用饱和NaHCO3溶液(200毫升×2)和水(200毫升×3)洗涤。有机相用无水硫酸钠干燥，并过滤。将滤液浓缩，得到叔丁基4-((甲基磺酰基)氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(130克，92.2％)，为白色固体。
步骤B:向叔丁基4-((甲基磺酰基)氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(130克，0.466摩尔)的DMF(1L)溶液中，加入邻苯二甲酰亚胺钾盐(92.3克，0.699摩尔)。将混合物在80℃下搅拌16小时。将混合物倾入水中，白色固体析出并过滤。将所得白色固体溶于DCM中，用无水硫酸钠干燥，过滤。将滤液浓缩，得到所需产物(55克，36％)，为白色固体。
步骤C:在0摄氏度下，向叔丁基4-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(55克，0.167摩尔)的DCM(500毫升)溶液中，加入TFA(100mL)。该混合物在0摄氏度下搅拌2小时后减压除去溶剂，得到粗产物，将其直接用于下一步骤。
步骤D:在0摄氏度下，向2-(哌啶-4-基)异吲哚啉-1,3-二酮(30克，0.13摩尔)的AcOH(350毫升)溶液中加入亚硝酸钠(18克，0.26摩尔)的水溶液(150毫升)加完后将混合物在30摄氏度下搅拌3小时后，将混合物倒入水(500毫升)中，白色固体析出来，并过滤。将白色固体溶于DCM中，用饱和NaHCO3溶液(300毫升×4)洗涤，有机相用无水Na2SO4干燥，过滤。将滤液浓缩，得到所需产物(248克，73.4％)，为白色固体。
步骤E:在0摄氏度下，向2-(1-亚硝基哌啶-4-基)异吲哚啉-1,3-二酮(6.5克，0.025摩尔)的DCM(75毫升)和MeOH(250毫升)混合溶液中加入锌粉(6.5克，0.1摩尔)和氯化铵(5.4克，0.1摩尔)该混合物在0摄氏度下搅拌30分钟，然后在15摄氏度下搅拌1小时.混合物过滤，滤液用DCM(300毫升×6)萃取，合并的有机相用无水硫酸钠干燥，过滤。将粗残余物通过硅胶色谱纯化(DCM：甲醇＝20:1)，得到2-(1-氨基哌啶-4-基)异吲哚啉-1,3-二酮，为黄色固体。
步骤F:将2-(2-氯乙氧基)乙酸(6.2克，0.0449摩尔)，HATU(18.6克，0.049摩尔)和DIEA(6.8克，0.049摩尔)加入DMF(150ml)中。将混合物在30摄氏度下搅拌20分钟，然后加入2-(1-氨基哌啶-4-基)异吲哚啉-1,3-二酮(10.0克，0.0408摩尔)。将混合物在30摄氏度下搅拌16小时。反应完成后，将混合物倒入水(200毫升)中，白色固体析出来，过滤。将固体溶解于DCM(300ml)中，用无水硫酸钠干燥，过滤。将滤液浓缩，得到2-(2-氯乙氧基)-N-(4-(1,3--多林-2-基)哌啶-1-基)乙酰胺(12.5克，83.9％)，为白色固体。
步骤G:在0摄氏度下，向2-(2-氯乙氧基)-N-(4-(二氧代异吲哚啉-2-基)-哌啶-1-基)乙酰胺(12.5克，0.038摩尔)的DMF(300mL)溶液中加入钠氢(1.5克，0.042摩尔),持续1小时加完.混合物在0摄氏度下搅拌30分钟。反应完成后，将混合物倒入水(300毫升)中。白色固体析出来，过滤。将白色固体溶解于DCM(300毫升)中,用水洗涤，无水Na2SO4干燥，过滤。将滤液浓缩,得到产物(9.0克，79.6％)，为白色固体。
步骤H:向2-(1-(3–氧代吗啉)哌啶-4-基)异吲哚啉-1,3-二酮(9.0克，0.027摩尔)的MeOH(300毫升)溶液中加入甲胺(10.6毫升，0.136摩尔)。混合物于70℃搅拌3小时,反应完成后，减压除去溶剂，得到粗产物。通过硅胶色谱法纯化，得到产物(2.0g，37％)，为白色固体。
步骤I:向二氢-2H-吡喃-4(3H)-酮(5克，0.05摩尔)的MeOH(60mL)溶液中加入叔丁基肼甲酸叔丁酯(7.92mmol克，0.06摩尔)，乙酸(500微升)，和NaBH3CN(6.3克，0.1摩尔)。将混合物在25℃下搅拌16小时，然后浓缩。将残余物溶解在DCM(100mL)中，用水(80mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩。将粗残留物用硅胶色谱法纯化(PE:EA＝5:1-1:1)纯化,得到叔丁基2-(四氢-2H-吡喃-4-基)肼甲酸叔丁酯(10克，92％)，为白色固体。
步骤J:向叔丁基2-(四氢-2H-吡喃-4-基)肼甲酸叔丁酯(11克，0.05摩尔)的DCM(100毫升)溶液中加入三氟乙酸(10mL)。将混合物在25℃下搅拌16小时，然后浓缩，粗品(四氢-2H-吡喃-4-基)肼三氟乙酸盐(6克，粗品)，其直接用于下一步骤。
步骤K:向(四氢-2H-吡喃-4-基)肼三氟乙酸盐(6克，粗品)的MeOH(80毫升)溶液中加入甲基3-(呋喃-2-基)-3-氧代丙酸乙酯(10克，51.7毫摩尔)和TsOH·H2O(9.8克，51.7毫摩尔)。将混合物在60℃搅拌16小时。将混合物倒入水(100mL)中，用EtOAc(100毫升×2)萃取，无水硫酸钠干燥，浓缩。将粗产物通过硅胶色谱法纯化(PE：EA＝10:1至1:1)纯化得到甲基5-(呋喃-2-基)-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-吡唑-3-羧酸乙酯(3.7克，26％)，为黄色固体。LCMS(ESI)m/z:277(M+1).
步骤L:向甲基5-(呋喃-2-基)-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-吡唑-3-羧酸乙酯(1克，3.62毫摩尔)的MeCN(12mL)和H2O(6毫升)混合溶液中加入磷酸二氢钠(2.17克，18.1毫摩尔)和NaClO2(3.27克，36.2毫摩尔)。将混合物在25℃下搅拌16小时后将混合物倾入饱和的亚硫酸氢钠水溶液(50mL)中，用EtOAc(50毫升×2)萃取，用盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，得到3-(甲氧基羰基)-1-(四氢-2H-吡喃唑-4-基)-1H-吡唑-5-羧酸(500毫克，粗品)，为黄色固体。
步骤M:向3-(甲氧基羰基)-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-吡唑-5-羧酸(150毫克，0.59毫摩尔)的DMF(4mL)溶液中加入HATU(269毫克，0.707毫摩尔)，DIEA(152毫克，1.18毫摩尔)和4-(4-氨基哌啶-1-基)吗啉-3-酮(117毫克，0.59毫摩尔)。将混合物在25℃下搅拌16小时后倒入水(30mL)中，用EtOAc(40毫升×2)萃取，用无水硫酸钠干燥，浓缩。将粗产物用TLC(EA)纯化，得到甲基5-((1-(3-氧代吗啉)哌啶-4-基)氨基甲酰)-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-吡唑-3-甲酸乙酯(170毫克，粗产物)，为黄色油状物。LCMS(ESI)m/z:436(M+1).
步骤N:闷罐中,向通有氨气的乙二醇(10毫升)溶液中加入甲基5-((1-(3-氧代吗啉)哌啶-4-基)氨基甲酰)-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-吡唑-3-甲酸乙酯(170毫克，粗品)，将混合物在80℃下搅拌8小时。冷却后将混合物倒入水(30mL)中，用DCM(30毫升×2)萃取.有机相用无水Na2SO4干燥，并浓缩。将粗残余物通过制备型HPLC纯化，得到N5-(1-(3-氧代吗啉)哌啶-4-基)-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺(9.1毫克，5％)，为白色固体。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.48-8.43(m,2H),7.53(s,1H),7.31(s,1H),7.24(m,1H),5.35-5.29(m,1H),3.97-3.94(m,4H),3.80-3.79(m,2H),3.55-3.53(m,1H),3.45-3.41(m,6H),3.01-3.98(m,2H),2.12-2.07(m,2H),1.87-1.80(m,4H),1.61-1.60(m,2H).
实施例21
1-(1-(甲磺酰基)哌啶-4-基)-N5-(1-(氧代吗啉)哌啶-4-基)-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺
步骤A:1-(1-(甲磺酰基)哌啶-4-基)-N5-(1-(氧代吗啉)哌啶-4-基)-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺按照用于实施例20的制备中的程序，按顺序的步骤I～N，在步骤I中苄基-4-氧代哌啶-1-羧酸叔丁酯替代二氢-2H-吡喃-4(3H)-酮.将粗产物通过制备型HPLC(HCOOH)纯化制备，得到标题化合物(15mg，17％)，为白色固体。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.44(d,J＝7.6Hz,1H),7.56(s,1H),7.31(s,1H),7.25(s,1H),5.27-5.22(m,1H),3.97(s,2H),3.81-3.79(m,2H),3.69-3.66(m,3H),3.41(t,J＝5.2Hz,3H),3.02-2.99(m,2H),2.92-2.90(m,6H),2.12-2.09(m,4H),2.04-1.82(m,2H),1.80-1.61(m,2H).
实施例22
1-(4-甲氧基环己基)-N5-(1-(3-氧代吗啉)哌啶-4-基)-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺
步骤A:1-(4-甲氧基环己基)-N5-(1-(3-氧代吗啉)哌啶-4-基)-1H-吡唑-3,5-二甲酰胺按照用于实施例20的制备方法制备，自步骤A-I序列，在步骤Ａ中用4–甲氧基环己酮代替二氢-2H-吡喃-4(3H)-酮.1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.41(d,J＝7.6Hz,1H),7.46(brs,1H),7.30(brs,1H),7.22(s,1H),5.08(m,1H),3.98(s,2H),3.71(m,2H),3.69(m,1H),3.43-3.37(m,4H),3.26(s,3H),3.18(m,1H),3.00(m,2H),2.13-2.10(m,2H),1.95-1.80(m,6H),1.62-1.57(m,2H),1.26-1.23(m,2H).
实施例23
4-(4-(1-(4-(二氟甲氧基)苯基)-7-氧代-3-(三氟甲基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-基)哌啶-1-基)吗啉-3-酮
反应流程：
步骤A:在0摄氏度下，向6-(1-苄基哌啶-4-基)-1-(4-甲氧基苯基)-3-(三氟甲基)-5,6-二氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-7(4H)-酮(7.5克，15.5毫摩尔)的CH3CN(250毫升)溶液中逐滴加入CAN(60克，0.11摩尔)的水溶液(150毫升)。将混合物在2摄氏度下搅拌16小时。混合物浓缩，并加入水,该混合物通过饱和NaHCO3溶液调节到pH＝9，然后过滤。将滤液分离，将有机层浓缩，用硅胶柱色谱(DCM：甲醇＝200:1～20:1)，得到6-(1-苄基哌啶-4-基)-3-(三氟甲基)-5,6-二氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-7(4H)-酮(13.5克，60％)，为油状物。
步骤B:在0摄氏度下，向6-(1-苄基哌啶-4-基)-3-(三氟甲基)-5,6-二氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-7(4H)-酮(3.5克，9.25毫摩尔)的DCM(50毫升)中加入Et3N(5.5毫升，37毫摩尔)和(2-(氯甲氧基)乙基)三甲基硅烷(3.1克，18.5毫摩尔)，将混合物于50尔下搅拌16小时。加入水后，将混合物用DCM(100毫升×升)萃取。合并的有机层用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并浓缩。粗残余物通过硅胶柱色谱法(PE：EA＝3:1)纯化，得到6-(1-苄基哌啶-4-基)-3-(三氟甲基)-1-((2-(三甲硅基)乙氧基)甲基)-5,6-二氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-7(4H)-酮(2.0克，40％)，为黄色油状物。
步骤C:将6-(1-苄基哌啶-4-基)-3-(三氟甲基)-1-((2-(三甲硅基)乙氧基)甲基)-5,6-二氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-7(4H)-酮(4.0克，7.86毫摩尔)和Pd/C(0.8克，10％)的甲醇(50mL)溶液在50psi的氢气压力下于60摄氏度搅拌16小时。将混合物过滤，然后将滤液浓缩，得到6-(哌啶-4-基)-3-(三氟甲基)-1-((2-(三甲硅基)乙氧基)甲基)-5,6-二氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-7(4H)-酮(3.0克，90％)，不经过进一步纯化直接用于下一步骤。
步骤D:在15～20摄氏度下,将6-(哌啶-4-基)-3-(三氟甲基)-1-((2-(三甲硅基)乙氧基)甲基)-5,6-二氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-7(4H)-酮(3.0克，90％)(3.0克，7.2毫摩尔)的乙酸(30mL)溶液中加入亚硝酸钠(2.5克，35.8毫摩尔)的水(5mL)溶液。将混合物在15摄氏度下搅拌0.5小时，然后在40摄氏度搅拌2小时。将混合物用乙酸乙酯(60毫升×升)萃取，将合并的有机层用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，浓缩，并通过硅胶柱色谱法(PE：EA＝5:1至2:1)纯化，得到6-(1-亚硝基哌啶-4-基)-3-(三氟甲基)-1-((2-(三甲硅基)乙氧基)甲基)-5,6-二氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-7(4H)-酮(3.0克，94％)，为黄色固体。
步骤E:在0摄氏度下，向溶有6-(1-亚硝基哌啶-4-基)-3-(三氟甲基)-1-((2-(三甲硅基)乙氧基)甲基)-5,6-二氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-7(4H)-酮(2.5克，5.6毫摩尔)和氯化铵(1.5克，27.9毫摩尔)的MeOH(40毫升)溶液中加入锌粉(1.8克，27.9毫摩尔)。将混合物在10尔下搅拌2小时后过滤，将滤液浓缩，得到6-(1-氨基哌啶-4-基)-3-(三氟甲基)-1-((2-(三甲硅基)乙氧基)甲基)-5,6-二氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-7(4H)-酮(2.4克，100％)，为粗产物，其不经进一步纯化直接用于下一步骤。
步骤F:在12摄氏度下，将2-(2-氯乙氧基)乙酸(0.93克，6.7毫摩尔)，HATU(2.6克，6.7毫摩尔)和DIPEA(2.6毫升)加入DMF(30mL)溶液中,然后加入溶有6-(1-氨基哌啶-4-基)-3-(三氟甲基)-1-((2-(三甲硅基)乙氧基)甲基)-5,6-二氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-7(4H)-酮(2.4克，5.6毫摩尔)的DMF(10mL)溶液。将混合物在12摄氏度下搅拌16小时。溶液中加入水后，混合物用EtOAc(100毫升×升)萃取。将合并的有机层用碳酸氢钠水溶液洗涤，用无水硫酸钠干燥，浓缩，并通过硅胶柱色谱纯化(PE：EA＝1:1至0:1)，得到2-(2-氯乙氧基)-N-(4-(7-氧代-3-(三氟甲基l)-1-((2-(三甲硅基)乙氧基)甲基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-基)哌啶-1-基l)乙酰胺(2.8克，92％)，为油状物。
步骤G:将2-(2-氯乙氧基)-N-(4-(7-氧代-3-(三氟甲基l)-1-((2-(三甲硅基)乙氧基)甲基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-基)哌啶-1-基)乙酰胺(2.8克，5.1毫摩尔)溶在DMF(30mL)溶液中,在0摄氏度向溶液中加入NaH(305毫克，7.6毫摩尔)。加完后将混合物在10摄氏度下搅拌1小时。混合物加入饱和NH4Cl溶液中，并用EtOAc(200毫升×升)萃取。合并的有机层用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，浓缩，得到4-(4-(7-氧代-3-(三氟甲基l)-1-((2-(三甲硅基)乙氧基)甲基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-基)哌啶-1-基)吗啉-3-酮(2.2克，84％)，为白色固体。
步骤H:在0摄氏度下，将4-(4-(7-氧代-3-(三氟甲基)-1-((2-(三甲硅基)乙氧基)甲基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-基)哌啶-1-基)吗啉-3-酮(2.3克，4.4毫摩尔)加入DCM(30mL)和2,2,2-三氟乙酸(8mL)的混合溶液中。该混合物在0摄氏度下搅拌16小时。将混合物浓缩，并用硅胶柱层析(PE：乙酸乙酯＝1:1至0:1)，得到4-(4-(1-(羟基甲基)-7-氧代-3-(三氟甲基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-基)哌啶-1-基)吗啉-3-酮(1.6克，93％)，为粘稠固体。
步骤I:将4-(4-(1-(羟基甲基)-7-氧代-3-(三氟甲基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-基)哌啶-1-基)吗啉-3-酮(1.5克，3.6毫摩尔)和氨水(2.0毫升)加入MeOH(20毫升)中,混合物在2摄氏度下搅拌20分钟。将混合物浓缩，得到4-(4-(7-氧代-3-(三氟甲基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-基)哌啶-1-基)吗啉-3-酮(1.2克，82％)，为白色固体。
步骤J:在2摄氏度下，将4-(4-(7-氧代-3-(三氟甲基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-基)哌啶-1-基)吗啉-3-酮(60毫克，0.2毫摩尔)，(4-(二氟甲氧基)苯基)硼酸(60毫克，0.4毫摩尔)，分子筛(1克)和三乙胺(0.5mL)加入二氯甲烷(2.0毫升)中，随后在氮气保护下加入醋酸铜(28毫克，0.2毫摩尔)。O2氛围下,将混合物在2摄氏度下搅拌12小时。将反应混合物过滤，将滤液浓缩并通过制备型HPLC(HCOOH)纯化，得到4-(4-(1-(4-(二氟甲氧基)苯基)-7-氧代-3-(三氟甲基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-基)哌啶-1-基)吗啉-3-酮(30毫克，37％)，为白色固体。1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ7.64(dd,J1＝8.0Hz,J2＝3.2Hz,2H),7.30(dd,J1＝8.0Hz,J2＝3.2Hz,2H),7.36(t,J＝74.0Hz,1H),4.25-4.22(m,1H),3.98(s,2H),3.82-3.79(m,2H),3.64-3.61(m,2H),3.43-3.40(m,4H),3.00-3.05(m,2H),2.91-2.86(m,2H),1.83-1.79(m,2H),1.61-1.58(m,2H).
实施例24
4-(4-(1-(6-氯代萘-2-基)-7-氧代-3-(三氟甲基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-基)哌啶-1-基)吗啉-3-酮
步骤A:4-(4-(1-(6-氯代萘-2-基)-7-氧代-3-(三氟甲基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-基)哌啶-1-基)吗啉-3-酮按照用于实施例24的制备方法步骤J制备,其中(6-氯萘-2-基)硼酸替代(4-(二氟甲氧基)苯基)硼酸。将粗产物通过制备型HPLC(FA)进行纯化，得到标题化合物，为白色固体。1HNMR(DMSO-d6,400MHz)δ8.22-8.19(m,2H),8.11(d,J＝8.8Hz,1H),8.03(d,J＝8.8Hz,1H),7.76(d,J＝8.8Hz,1H),7.63(d,J＝8.8Hz,1H),4.26-4.23(m,1H),3.97(s,2H),3.81-3.78(m,2H),3.66-3.62(m,2H),3.43-3.40(m,4H),3.08-3.05(m,2H),2.98-2.90(m,2H),1.83-1.79(m,2H),1.62-1.58(m,2H).
实施例25
2-氟-5-(7-氧代-6-(1-(3-氧代吗啉)哌啶-4-基)-3-(三氟甲基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-1-基)苯甲腈
步骤A:2-氟-5-(7-氧代-6-(1-(3-氧代吗啉)哌啶-4-基)-3-(三氟甲基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-1-基)苯甲腈按照用于实施例24的制备方法步骤J制备,其中(3-氰基-4-氟苯基)硼酸替代(4-(二氟甲氧基)苯基)硼酸。1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ8.32(dd,J1＝6.4Hz,J2＝2.4Hz,1H),8.05(dd,J1＝7.2Hz,J2＝4.4Hz,1H),7.71(d,J＝8.8Hz,1H),4.26-4.23(m,1H),3.98(s,2H),3.82-3.80(m,2H),3.66-3.62(m,2H),3.43-3.40(m,4H),3.08-3.05(m,2H),2.98-2.90(m,2H),1.83-1.80(m,2H),1.62-1.59(m,2H).
实施例26
4-(4-(1-(3-氨基苯并[d]异恶唑-5-基)-7-氧代-3-(三氟甲基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-基)哌啶-1-基)吗啉-3-酮
步骤A:4-(4-(1-(3-氨基苯并[d]异恶唑-5-基)-7-氧代-3-(三氟甲基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-基)哌啶-1-基)吗啉-3-酮按照用于实施例24的制备方法步骤J制备,其中(3-氨基苯并[d]异恶唑-5-基)硼酸替代(4-(二氟甲氧基)苯基)硼酸。1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ8.05(d,J＝2.0Hz,1H),7.71(d,J＝9.2Hz,1H),7.56(d,J＝8.8Hz,1H),6.59(s,2H),4.25-4.23(m,1H),3.98(s,2H),3.82-3.80(m,2H),3.66-3.62(m,2H),3.43-3.40(m,4H),3.08-3.05(m,2H),2.98-2.90(m,2H),1.84-1.81(m,2H),1.60-1.58(m,2H).
实施例27
3-(7-氧代-6-(1-(3-氧代吗啉)哌啶-4-基)-3-(三氟甲基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-1-基)苯甲腈
步骤A:3-(7-氧代-6-(1-(3-氧代吗啉)哌啶-4-基)-3-(三氟甲基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-1-基)苯甲腈按照用于实施例24的制备方法步骤J制备,其中(3-氰基苯基)硼酸替代(4-(二氟甲氧基)苯基)硼酸。1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ8.19(s,1H),8.00-7.95(m,2H),7.75-7.72(m,1H),4.25-4.23(m,1H),3.98(s,2H),3.82-3.80(m,2H),3.66-3.62(m,2H),3.43-3.40(m,4H),3.08-3.05(m,2H),2.98-2.90(m,2H),1.84-1.81(m,2H),1.60-1.58(m,2H).
实施例28
4-(4-(1-(3-氟-4-甲氧基苯基)-7-氧代-3-(3-(三氟甲基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-基)哌啶-1-基)吗啉-3-酮
步骤A:4-(4-(1-(3-氟-4-甲氧基苯基)-7-氧代-3-(3-(三氟甲基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-基)哌啶-1-基)吗啉-3-酮按照用于实施例24的制备方法步骤J制备,其中(3-氟-4-甲氧基苯基)硼酸替代(4-(二氟甲氧基)苯基)硼酸。1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ7.55(d,J＝11.6Hz,1H),7.38-7.36(m,1H),7.27(t,J＝8.8Hz,1H),4.26-4.23(m,1H),3.98(s,2H),3.92(s,3H),3.81-3.80(m,2H),3.61-3.60(m,2H),3.43-3.40(m,4H),3.03-3.01(m,2H),2.91-2.90(m,2H),1.84-1.79(m,2H),1.61-1.58(m,2H).
实施例29
4-(4-(1-(3-氟代萘-2-基)-7-氧代-3-(3-(三氟甲基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-基)哌啶-1-基)吗啉-3-酮
步骤A:4-(4-(1-(3-氟代萘-2-基)-7-氧代-3-(3-(三氟甲基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-基)哌啶-1-基)吗啉-3-酮按照用于实施例24的制备方法步骤J制备,其中(3-氟萘-2-基)硼酸替代(4-(二氟甲氧基)苯基)硼酸。1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ8.29(d,J＝7.6Hz,1H),8.09-7.02(m,3H),7.78(d,J＝7.6Hz,1H),7.62(d,J＝8.0Hz,1H),4.25-4.20(m,1H),3.96(s,2H),3.80-3.79(m,2H),3.66-3.62(m,2H),3.43-3.40(m,4H),3.00-2.98(m,4H),1.84-1.78(m,2H),1.58-1.56(m,2H).
实施例30
2-(二氟甲氧基)-5-(7-氧代-6-(1-(3-氧代吗啉)哌啶-4-基)-3-(三氟甲基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-1-基)苯甲腈
步骤A:2-(二氟甲氧基)-5-(7-氧代-6-(1-(3-氧代吗啉)哌啶-4-基)-3-(三氟甲基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-1-基)苯甲腈按照用于实施例24的制备方法步骤J制备,其中(3-氰基-4-(二氟甲氧基)苯基)硼酸替代(4-(二氟甲氧基)苯基)硼酸。1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ8.31(d,J＝2.8Hz,1H),8.04(dd,J1＝9.2Hz,J2＝2.8Hz,1H),7.62(d,J＝9.2Hz,1H),7.56(t,J＝72.0Hz,1H),4.28-4.20(m,1H),3.98(s,2H),3.81-3.79(m,2H),3.65-3.62(m,2H),3.43-3.40(m,4H),3.00-2.98(m,4H),1.83-1.78(m,2H),1.62-1.59(m,2H).
实施例31
3-(7-氧代-6-(1-(3-氧代吗啉)哌啶-4-基)-3-(三氟甲基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-1-基)苯甲酰胺
步骤A:将3-(7-氧代-6-(1-(3-氧代吗啉)哌啶-4-基)-3-(三氟甲基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-1-基)苯甲腈(100毫克，0.205毫摩尔)和K2CO3(57毫克，0.41毫摩尔)溶解于DMSO(2mL)中，然后H2O2(21毫克，0.615毫摩尔)加入到混合物中，将所得混合物在20摄氏度下搅拌3小时。混合物用饱和硫代硫酸钠(5mL)水溶液洗涤，用EtOAc(10毫升×升)萃取，并浓缩。将粗残余物通过制备型HPLC纯化(HCOOH)，得到3-(7-氧代-6-(1-(3-氧代吗啉)哌啶-4-基)-3-(三氟甲基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-1-基)苯甲酰胺(10.2毫克，10％产率)，为白色固体。1HNMR(DMSO-d6,400MHz)δ8.12(s,1H),8.04-7.99(m,2H),7.72(d,J＝2.8Hz,1H),7.21(d,J＝4.0Hz,1H),7.61-7.56(m,2H),4.28-4.25(m,1H),3.98(s,2H),3.81-3.79(m,2H),3.65-3.62(m,2H),3.43-3.40(m,4H),3.00-2.98(m,4H),1.83-1.78(m,2H),1.61-1.59(m,2H).
实施例32
2-氟-5-(7-氧代-6-(1-(3-氧代吗啉)哌啶-4-基)-3-(三氟甲基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-1-基)苯甲酰胺
步骤A:2-氟-5-(7-氧代-6-(1-(3-氧代吗啉)哌啶-4-基)-3-(三氟甲基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-1-基)苯甲酰胺按照用于实施例31的制备所述的方法，步骤A制备.1HNMR(DMSO-d6,400MHz)δ7.90(s,1H),7.85-7.82(m,2H),7.79-7.85(m,1H),7.45(t,J＝8.8Hz,1H),4.28-4.25(m,1H),3.98(s,2H),3.81-3.79(m,2H),3.65-3.62(m,2H),3.43-3.40(m,4H),3.00-2.98(m,4H),1.83-1.78(m,2H),1.61-1.53(m,2H).
实施例33
2-(二氟甲氧基)-5-(7-氧代-6-(1-(3-氧代吗啉)哌啶-4-基)-3-(三氟甲基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-1-基)苯甲酰胺
步骤A:2-(二氟甲氧基)-5-(7-氧代-6-(1-(3-氧代吗啉)哌啶-4-基)-3-(三氟甲基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-1-基)苯甲酰胺按照用于实施例31的制备所述的方法，步骤A制备1HNMR(DMSO-d6,400MHz)δ7.83(s,1H),7.76-7.70(m,3H),7.35(d,J＝8.8Hz,1H),7.27(t,J＝72Hz,1H),4.28-4.25(m,1H),3.98(s,2H),3.81-3.79(m,2H),3.65-3.62(m,2H),3.43-3.40(m,4H),3.00-2.98(m,4H),1.83-1.78(m,2H),1.61-1.55(m,2H).
实验例1：体外评价
通过测定IC50值来评价受试化合物对人或大鼠的Ⅹa因子或其他酶如凝血酶或胰蛋白酶的抑制能力，其中IC50值与抑制常数Ki相关联。在显色测定中使用纯化的酶。使用FlexStationIII(美国分子仪器公司)测定37℃下时间进程中线性部分(通常是加入底物2～10分钟后)在405nm处的吸光度的变化来测量发色底物水解的初始速度。通过绘制水解的相对速度(与未受抑制的对照组相比)对受试化合物浓度的对数曲线后，通过线性回归计算，测定导致底物水解的速率降低50％的抑制剂的浓度。根据Cheng-Prusoff equation:Ki＝IC50/(1+[S]/Km)计算酶抑制常数(Ki)，其中[S]为底物浓度，Km为通过双倒数作图法确定的米-曼二氏常数。通过GraphPad Prism软件得到受试化合物的IC50值。使用"形剂量效应(可变斜率)"拟合曲线。
人/大鼠凝血因子Xa试验：
采用Tris-HCl缓冲液(50mM,pH8.3,150mM NaCl)测定人或大鼠的凝血因子Xa活性抑制作用。通过将50μL人凝血因子Xa(Enzyme Research Laboratories,Inc；终浓度为8.36nM)或50μL大鼠凝血因子Xa(Enzyme Research Laboratories,Inc；终浓度为57.5nM)的缓冲液滴加到Greiner384微量滴定板的合适孔中的方法测定IC50。含2μL2％(V/V)DMSO的测定缓冲液(未受抑制的对照组)或各种浓度的待测化合物稀释在含有2％(V/V)DMSO的测定缓冲液中，并添加48μL衬底S-2222(Chromogenix；化学式：Bz-IIe-Glu(γ-OR)-Gly-Arg-pNA·HCl R＝H(50％)，其中R＝CH3(50％))的测定缓冲液，终浓度为0.172mM。该试验中将受试化合物与酶预培养10分钟，然后加入底物S-2222得到100μL终体积以开始试验。
Ki<10μM的受试化合物被认为是积极的，本发明优选Ki<1μM的化合物，更优选Ki<0.1μM的化合物，更优选Ki<0.01μM的化合物，进一步优选Ki<0.001μM的化合物。经上述试验方法测定，本发明的一些化合物Ki<0.1μM，因此本发明的化合物可作为有效的Ⅹa因子抑制剂。
人凝血酶试验：
采用缓冲液(10mM的HEPES缓冲液，pH7.4,2mM CaCl2)测定人凝血酶活性抑制作用。选择Greiner384微量滴定板中合适的孔测定IC50，含有50μL人凝血酶(Sigma公司；T8885)的缓冲液，终浓度为0.05NIH单位/mL，含2μL2％(V/V)DMSO的测定缓冲液(未受抑制的对照组)或各种浓度的待测化合物稀释在含有2％(V/V)DMSO的测定缓冲液中；加入含有48μL底物S-2238(Chromogenix；化学式：H-D-Phe-Pip-Arg-pNA·2HCl)的缓冲液，终浓度为30μM。该试验中将受试化合物与酶预培养10分钟，然后加入底物得到100μL终体积以开始试验。
人胰蛋白酶试验：
采用缓冲液(50mM Tris,pH8.2,and20mM CaCl2)测定人胰蛋白酶活性抑制作用。选择Greiner384微量滴定板中合适的孔测定IC50，含有50μL人胰蛋白酶(Sigma公司；T6424)的缓冲液，终浓度为0.39BAEE单位/mL，含2μL2％(V/V)DMSO的测定缓冲液(未受抑制的对照组)或各种浓度的待测化合物稀释在含有2％(V/V)DMSO的测定缓冲液中；含有底物S-2222(Chromogenix)的缓冲液，终浓度为30μM。该试验中将受试化合物与酶预培养10分钟，然后加入底物48μL，得到终体积100μL以开始试验。
凝血酶原试验：
通过凝血酶的生成测量受试化合物对凝血酶原酶的活性。简单地说，在10mM HEPES缓冲液和pH7.4,2mM CaCl2中温育12.5μL人因子Xa，终浓度为0.5nM，并在37℃加入12.5μL人血小板(1×107mL-1)10分钟。加入25μL凝血酶原以开始反应，终浓度为0.5μM，含2μL2％(V/V)DMSO的测定缓冲液(未受抑制的对照组)或各种浓度的待测化合物稀释在含有2％(V/V)DMSO的测定缓冲液中。20分钟后，加入48μL底物S-2238(Chromogenix)至终浓度为50μM以测定凝血酶活性。
表1：本发明化合物体外筛选试验结果
备注：1.“a”和“b”分别代表经SFC分离后的馏分1和馏分2；
2.上面的通过酶活性测试的化合物按照活性的大小范围分为A～D四个区间，其中A≤10nm；10nm<B≤50nm；C≥50nm；D≥1000nm；N/A表示该数据未测试。
结论：与已知抗凝剂阿派沙班相比，本发明化合物通过其特定的抗凝血因子Xa活性表现出很强的抗凝血活性。