本发明涉及医药领域，具体涉及2-[(1-(4-氯苯基)辛基)氧基]乙酸和其衍生物及制备与用途。
背景技术：
近年来，随着我国社会经济的发展，人民生活水平的提高，饮食结构和工作生活方式的改变，糖尿病的发病率在不断增高。2008年中华医学会糖尿病学分会(cds)组织的糖尿病流行病学调查结果显示，在我国20岁以上的人群中，年龄标化的患病率已达9.7％，成人患病总人数已达到9240万。而糖尿病患病前期的比例更高达15.5％，且该数据正在逐年攀升。据世界卫生组织统计，至2012年全球糖尿病患病总人数已达到3.47亿，而我国已成为世界上糖尿病患病人数最多的国家。在我国患病人群中，非胰岛素依赖的ii型糖尿病(t2dm)患者占据90％以上。糖尿病俨然已成为严重危害我国人民健康的流行病，给国家医疗保障造成了极大的经济负担，令患者个人及其家庭承受经济与精神的双重压力。
以文迪雅(avandia,gsk)和艾可托(actos,takeda)为代表的过氧化物酶体增殖物激活受体伽马(pparγ)完全激动剂噻唑烷二酮(tzd)类口服降糖药物给ii型糖尿病治疗带来了重大突破。
虽然tzds激活pparγ的能力与其调控胰岛素增敏性即抗糖尿病效应相吻合，然而近年来临床观察发现，长期服用tzd类药物会导致肥胖、体重增加、浮肿，心脏病以及引发心衰等副作用，这些副作用被认为主要是由tzds完全激活pparγ所导致，且这些副作用已经严重阻碍了tzd类药物在临床上的应用。因此，发展替代tzd类的低毒副作用的新型口服降糖药物已成为医疗界迫切的需要，也是当今学术界和制药工业界的研究热点之一。
考虑到完全激动剂tzd类药物强效激活pparγ能力而伴随而来的一些相关副作用，近年来人们将研究力量转向了发展选择性的pparγ调控剂，希望找到一类潜在的选择性调控剂，即能够保留它的胰岛素增敏性，又能降低甚至避免pparγ完全激动剂导致的副作用。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种新型pparγ选择性调控剂，在保证与pparγ具有强的结合能力的同时，也能选择性的调控pparγ而不会诱导脂肪细胞分化，从而具有潜在的降糖能力、降低相关副作用的潜力。
本发明的第一方面，提供一种式i化合物、其药学上可接受的盐、互变异构体或同分异构体，
式中，r为-oh、-o-(ch2)nch3、-o-(ch2)moh、-nr1r2、氨基酸、c1-c8烷基、c3-c6环烷基、c2-c8杂环烷基、c6-c10芳基、或c3-c8杂芳基，其中，-o-(ch2)nch3、-o-(ch2)moh、-nr1r2、氨基酸、c1-c8烷基、c3-c6环烷基、c2-c8杂环烷基、c6-c10芳基、或c3-c8杂芳基可以任选地被选自下组的基团取代：羟基、卤素、硝基、氰基、c1-c6烷基、c1-c6卤代烷基、c1-c6烷氧基、c6-c10芳基、c3-c8环烷基、c2-c8杂环烷基、c5-c8杂芳基；
各n独立地为1-6的整数；
各m独立地为1-6的整数；
r1、r2独立地为h、-oh、-ch((ch2)or3)((ch2)rr4)、c1-c8烷基、c3-c6环烷基、c2-c8杂环烷基、c6-c10芳基、或c3-c8杂芳基，
其中，o独立地为0-6的整数；r独立地为0-6的整数；
r3、r4独立地为-c(o)-o-(c1-c6)烷基或-c(o)-oh。
在另一优选例中，r为-oh、-o-(ch2)nch3、-o-(ch2)moh、或-nr1r2；
r1、r2独立地为h、或-ch((ch2)or3)((ch2)rr4)；
n、m、o、r、r3和r4的定义如前所述。
在另一优选例中，式i化合物为：
在另一优选例中，所述药学上可接受的盐为式i化合物与选自下组的酸形成的盐：氢氟酸、盐酸、氢溴酸、磷酸、乙酸、草酸、硫酸、甲磺酸、水杨酸、三氟甲磺酸、萘磺酸、马来酸、柠檬酸、醋酸、酒石酸、琥珀酸、酢浆草酸、苹果酸、谷氨酸。
本发明的第二方面，提供第一方面所述的式i化合物的制备方法，包括以下步骤：
(i)式1化合物与式2化合物反应生成反应得到式3化合物；
(ii)式3化合物与r5c(＝o)ch2x反应得到式a所示的式i化合物，其中，r5为-o-(ch2)nch3，x为卤素；以及任选地
(iii)式a化合物水解得到式vsp-77所示的式i化合物；以及任选地，
(iv)式vsp-77化合物与ho-(ch2)moh反应，生成式b所示的式i化合物，其中，r6为-o-(ch2)moh；或式vsp-77化合物与氨基酸酯反应生成式c所示的式i化合物，其中，r7为-nr1r2，r1、r2中一个为h，另一为-ch((ch2)or8)((ch2)rr9)，r8、r9独立地为-c(o)-o-(c1-c6)烷基；以及任选地，
(v)式c化合物水解生成式d所示的式i化合物，r7为-nr10r11，r10、r11中一个为h，另一为-ch((ch2)or12)((ch2)rr13)，r12、r13独立地为-c(o)-oh，
其中各n、m、o和r的定义如前所示。
本发明的第三方面，提供第一方面所述的式i化合物的用途，用于：
(i)制备pparγ选择性调控剂；
(ii)制备预防和/治疗受pparγ激动剂调节的疾病的药物；或
(iii)制备抑制脂肪细胞分化的药物。
在另一优选例中，所述受pparγ激动剂调节的疾病为糖尿病、高血压、高血脂和胆固醇水平的代谢综合征。
在另一优选例中，所述糖尿病为非胰岛素依赖型糖尿病。
在另一优选例中，所述脂肪细胞是指患有受pparγ激动剂调节的疾病的患者的脂肪细胞。
本发明的第四方面，提供一种药物组合物，包含第一方面所述的式i化合物或其药学上可接受的盐；和
药学上可接受的载体。
本发明的第五方面，提供第四方面所述的药物组合物的用途，用于：
(i)制备pparγ选择性调控剂；
(ii)制备预防和/治疗受pparγ激动剂调节的疾病的药物；或
(iii)制备抑制脂肪细胞分化的药物。
在另一优选例中，所述受pparγ激动剂调节的疾病为糖尿病、高血压、高血脂和胆固醇水平的代谢综合征。
在另一优选例中，所述糖尿病为非胰岛素依赖型糖尿病。
在另一优选例中，所述脂肪细胞是指患有受pparγ激动剂调节的疾病的患者的脂肪细胞。
本发明的第六方面，提供一种体外抑制脂肪细胞分化的方法，将式i化合物与脂肪细胞接触。
在另一优选例中，所述接触为培养接触。
本发明的第七方面，提供一种预防和/或治疗受pparγ激动剂调节的疾病的方法，对需要的对象给予安全有效量的第一方面所述的式i化合物或其药学上可接受的盐；或者
对需要的对象给予安全有效量的第四方面所述的药物组合物。
在另一优选例中，所述需要的对象为非人哺乳动物或人，较佳地，为人、小鼠或大鼠。
本发明的式i化合物，与pparγ具有强的结合能力，能选择性的调控pparγ而不会诱导脂肪细胞分化，具有潜在的降糖能力、降低相关副作用的潜力。
应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。
附图说明
图1为油红o及dapi染色后的显微镜图片。
图2为vsp-77降糖效果图。
具体实施方式
本申请的发明人经过广泛而深入地研究，首次意外研发出一种新型结构的pparγ选择性调控剂，结构如式i所示，与pparγ具有强的结合能力，能选择性的调控pparγ而不会诱导脂肪细胞分化，具有潜在的降糖能力、降低相关副作用的潜力。在此基础上，完成了本发明。
术语
过氧化物酶体增殖物激活受体(ppar)
ppars属于配体调控的转录因子核受体大家族，主要包括三个亚型pparα、pparδ和pparγ。当其与配体结合后，ppars与维甲酸受体x(rxr)形成二聚体，通过与ppars反应元件结合，激活下游基因表达。ppars在体内具有多种重要生理功能，对营养代谢、能量平衡和细胞分化等起到重要的调节作用。pparγ主要存在于脂肪细胞中，对调控体内脂肪生成、血糖和脂代谢、胰岛素敏感性和脂肪细胞激素/细胞激素分泌起关键作用。
式i化合物或其药学上可接受的盐
本发明从pparγ调控分子机制出发，设计合成了2-[(1-(4-氯苯基)辛基)氧基]乙酸(vsp-77)及其衍生物，结构如式i所示：
式中，r为-oh、-o-(ch2)nch3、-o-(ch2)moh、-nr1r2、氨基酸、c1-c8烷基、c3-c6环烷基、c2-c8杂环烷基、c6-c10芳基、或c3-c8杂芳基，其中，-o-(ch2)nch3、-o-(ch2)moh、-nr1r2、氨基酸、c1-c8烷基、c3-c6环烷基、c2-c8杂环烷基、c6-c10芳基、或c3-c8杂芳基可以任选地被选自下组的基团取代：羟基、卤素、硝基、氰基、c1-c6烷基、c1-c6卤代烷基、c1-c6烷氧基、c6-c10芳基、c3-c8环烷基、c2-c8杂环烷基、c5-c8杂芳基；
各n独立地为1-6的整数；
各m独立地为1-6的整数；
r1、r2独立地为h、-oh、-ch((ch2)or3)((ch2)rr4)、c1-c8烷基、c3-c6环烷基、c2-c8杂环烷基、c6-c10芳基、或c3-c8杂芳基，
其中，o独立地为0-6的整数；r独立地为0-6的整数；
r3、r4独立地为-c(o)-o-(c1-c6)烷基或-c(o)-oh。
较佳地，r为-oh、-o-(ch2)nch3、-o-(ch2)moh、或-nr1r2；
r1、r2独立地为h、或-ch((ch2)or3)((ch2)rr4)；
n、m、o、r、r3和r4的定义如前所述。
优选地，式i化合物为：
所述药学上可接受的盐为式i化合物与选自下组的酸形成的盐：氢氟酸、盐酸、氢溴酸、磷酸、乙酸、草酸、硫酸、甲磺酸、水杨酸、三氟甲磺酸、萘磺酸、马来酸、柠檬酸、醋酸、酒石酸、琥珀酸、酢浆草酸、苹果酸、谷氨酸。
制备方法
本发明式1所示化合物可通过如下的方法制得，然而该方法的条件，例如反应物、溶剂、碱、所用化合物的量、反应温度、反应所需时间等不限于下面的说明。
通常，本发明方法包括在合适的惰性溶剂中，在合适的反应温度(如-80℃至回流温度，较佳地-20至回流温度)下，反应一段时间(如0.1-72小时，较佳地0.2-24小时)。此外，本发明化合物可以任选将在本说明书中描述的或本领域已知的各种合成方法组合起来而方便的制得。
式i化合物的制备方法，包括以下步骤：
(i)式1化合物与式2化合物反应生成反应得到式3化合物；
(ii)式3化合物与r5c(＝o)ch2x反应得到式a所示的式i化合物，其中，r5为-o-(ch2)nch3，x为卤素；以及任选地
(iii)式a化合物水解得到式vsp-77所示的式i化合物；以及任选地，
(iv)式vsp-77化合物与ho-(ch2)moh反应，生成式b所示的式i化合物，其中，r6为-o-(ch2)moh；或式vsp-77化合物与氨基酸酯反应生成式c所示的式i化合物，其中，r7为-nr1r2，r1、r2中一个为h，另一为-ch((ch2)or8)((ch2)rr9)，r8、r9独立地为-c(o)-o-(c1-c6)烷基；以及任选地，
(v)式c化合物水解生成式d所示的式i化合物，r7为-nr10r11，r10、r11中一个为h，另一为-ch((ch2)or12)((ch2)rr13)，r12、r13独立地为-c(o)-oh，
其中各n、m、o和r的定义如前所示，
步骤(i)中，在惰性气体保护下，在有机溶剂中，式1化合物与式2化合物反应，反应温度为0-25℃。
步骤(ii)中，在碱存在下，在有机溶剂中，式3化合物与r5c(＝o)ch2x反应，反应温度为40-50℃，反应时间为24-48h。
步骤(iii)中，式a化合物在碱存在下水解。水解温度为15-25℃。
步骤(iv)中，在有机溶剂中，在碱存在下，式vsp-77化合物与ho-(ch2)moh反应；或者在有机溶剂中，在碱存在下，式vsp-77化合物与氨基酸酯反应。
步骤(v)中，式c化合物水解发生在在碱存在下。水解温度为15-25℃。
本发明中，所述有机溶剂选自无水四氢呋喃、乙醇、甲醇、二氯亚砜、二氯甲烷、苯、甲苯、二甲苯、氯仿、四氯化碳、1,2-二氯乙烷、乙醚、n,n-二甲基甲酰胺或二甲基亚砜中的一种或两种以上的组合。
本发明中，所述碱选自氢化钠、水合氢氧化锂、三乙胺、氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钾、磷酸钾、碳酸铯、二异丙基乙基胺、n,o-双(三甲基硅烷基)乙酰胺(bsa)、四正丁基铵二氟代三苯基硅酸盐(tbat)、正丁基锂、叔丁基锂、环己基锂、甲基锂、异丙基锂、双(三甲基硅基)氨基锂、双(三甲基硅基)氨基钠、双(三甲基硅基)氨基钾、乙基氯化镁、乙基溴化镁、苯基氯化镁、苯基溴化镁中的至少一种或两种以上的组合。
用途
本发明以抗糖尿病药物罗格列酮作为阳性对照，依次采用pparγ荧光激活实验方法对式i化合物vsp-77进行了激动pparγ活性等级的评价、采用tr-fret测试手段对式i化合物与pparγlbd的结合能力进行了测试、并对式i化合物诱导老鼠成纤维细胞3t3-l1致脂肪细胞分化能力进行了评价，最后使用dio小鼠模型对该化合物的降糖能力进行了评价，结果表明式i化合物vsp-77对pparγ具有弱的激活能力，与pparγ具有强的结合力，且不会引起脂肪细胞分化。
本发明的vsp-77衍生物，在进入人体后可水解为vsp-77，因此，可知本发明的vsp-77衍生物对pparγ也具有弱的激活能力，与pparγ具有强的结合力，且不会引起脂肪细胞分化。
本发明式i化合物作为pparγ选择性调控剂，可用于制备预防和/治疗受pparγ激动剂调节的疾病的药物，具有高效、低副作用的特点。
药物组合物
本发明还提供了一种药物组合物，它包含安全有效量范围内的活性成分，以及药学上可接受的载体。
本发明所述的“活性成分”是指本发明所述的式i化合物。
本发明所述的“活性成分”和药物组合物可用作pparγ选择性调控剂。在另一优选例中，用于制备预防和/治疗受pparγ激动剂调节的疾病的药物。
“安全有效量”指的是：活性成分的量足以明显改善病情，而不至于产生严重的副作用。通常，药物组合物含有1-2000mg活性成分/剂，更佳地，含有10-200mg活性成分/剂。较佳地，所述的“一剂”为一个药片。
“药学上可接受的载体”指的是：一种或多种相容性固体或液体填料或凝胶物质，它们适合于人使用，而且必须有足够的纯度和足够低的毒性。
“相容性”在此指的是组合物中各组份能和本发明的活性成分以及它们之间相互掺和，而不明显降低活性成分的药效。
药学上可以接受的载体部分例子有纤维素及其衍生物(如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素钠、纤维素乙酸酯等)、明胶、滑石、固体润滑剂(如硬脂酸、硬脂酸镁)、硫酸钙、植物油(如豆油、芝麻油、花生油、橄榄油等)、多元醇(如丙二醇、甘油、甘露醇、山梨醇等)、乳化剂(如吐温
在另一优选例中，本发明式i化合物可与大分子化合物或高分子通过非键合作用形成复合物。在另一优选例中，本发明式i化合物作为小分子还可通过化学键与大分子化合物或高分子相连接。所述大分子化合物可以是生物大分子如高聚糖、蛋白、核酸、多肽等。
本发明的活性成分或药物组合物的施用方式没有特别限制，代表性的施用方式包括(但并不限于)：口服、瘤内、直肠、肠胃外(静脉内、肌肉内或皮下)等。
用于口服给药的固体剂型包括胶囊剂、片剂、丸剂、散剂和颗粒剂。
在这些固体剂型中，活性成分与至少一种常规惰性赋形剂(或载体)混合，如柠檬酸钠或磷酸二钙，或与下述成分混合：
(a)填料或增容剂，例如，淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸；
(b)粘合剂，例如，羟甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯基吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯胶；
(c)保湿剂，例如，甘油；
(d)崩解剂，例如，琼脂、碳酸钙、马铃薯淀粉或木薯淀粉、藻酸、某些复合硅酸盐、和碳酸钠；
(e)缓溶剂，例如石蜡；
(f)吸收加速剂，例如，季胺化合物；
(g)润湿剂，例如鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯；
(h)吸附剂，例如，高岭土；和
(i)润滑剂，例如，滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、十二烷基硫酸钠，或其混合物。胶囊剂、片剂和丸剂中，剂型也可包含缓冲剂。
所述的固体剂型还可采用包衣和壳材制备，如肠衣和其它本领域公知的材料。它们可包含不透明剂，并且，这种组合物中活性成分的释放可以延迟的方式在消化道内的某一部分中释放。可采用的包埋组分的实例是聚合物质和蜡类物质。
用于口服给药的液体剂型包括药学上可接受的乳液、溶液、悬浮液、糖浆或酊剂。除了活性成分外，液体剂型可包含本领域中常规采用的惰性稀释剂，如水或其它溶剂，增溶剂和乳化剂，例知，乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺以及油，特别是棉籽油、花生油、玉米胚油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油或这些物质的混合物等。除了这些惰性稀释剂外，组合物也可包含助剂，如润湿剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、矫味剂和香料。
除了活性成分外，悬浮液可包含悬浮剂，例如，乙氧基化异十八烷醇、聚氧乙烯山梨醇和脱水山梨醇酯、微晶纤维素、甲醇铝和琼脂或这些物质的混合物等。
用于肠胃外注射的组合物可包含生理上可接受的无菌含水或无水溶液、分散液、悬浮液或乳液，和用于重新溶解成无菌的可注射溶液或分散液的无菌粉末。适宜的含水和非水载体、稀释剂、溶剂或赋形剂包括水、乙醇、多元醇及其适宜的混合物。
本发明化合物可以单独给药，或者与其他治疗药物(如降糖药)联合给药。
使用药物组合物时，是将安全有效量的本发明化合物适用于需要治疗的哺乳动物(如人)，其中施用时剂量为药学上认为的有效给药剂量，对于60kg体重的人而言，日给药剂量通常为1～2000mg，优选20～500mg。当然，具体剂量还应考虑给药途径、病人健康状况等因素，这些都是熟练医师技能范围之内的。
本发明提到的上述特征，或实施例提到的特征可以任意组合。本案说明书所揭示的所有特征可与任何组合物形式并用，说明书中所揭示的各个特征，可以被任何提供相同、均等或相似目的的替代性特征取代。因此除有特别说明，所揭示的特征仅为均等或相似特征的一般性例子。
本发明的有益之处在于：
(1)提供一种结构新颖的pparγ选择性调控剂，可用于制备预防和/治疗受pparγ激动剂调节的疾病的药物；
(2)与罗格列酮相比，具有抑制脂肪细胞分化能力，从而降低或甚至规避了一些相关的副作用，如：肥胖、体重增加、浮肿，心脏肿大；
(3)制备方法简单，易于推广应用。
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件如sambrook等人，分子克隆：实验室手册(newyork:coldspringharborlaboratorypress,1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数按重量计算。
除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明方法中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。
实施例1
2-[(1-(4-氯苯基)辛基)氧基]乙酸(vsp-77)的制备
氮气保护下，向反应瓶中加入4-氯苯甲醛(1.40g,10mmol)，无水四氢呋喃(30ml)，冰浴下，边搅拌边缓慢滴加庚基溴化镁(2.03g,10mmol)，滴完后，恢复至室温，继续搅拌24h，tlc检测反应完全。
向反应瓶中加入饱和氯化铵溶液(20ml)，乙酸乙酯萃取3次，合并有机相，用饱和nacl洗1次，无水硫酸钠干燥。抽滤除去干燥剂，旋干得粗产品。再经硅胶柱色谱分离纯化，得1-(4-氯苯基)-1-辛醇(2.04g,8.5mmol)，产率85％。
1hnmr(400mhz,)δ7.32(d,j＝8.6hz,2h,arh),7.27(d,j＝8.5hz,2h,arh),4.63(t,j＝6.6hz,1h,arch),1.98,1.98,1.80-1.71(m,1h,ch2),1.69-1.61(m,1h,ch2),1.43-1.35(m,1h,ch2),1.34-1.26(m,9h,ch2),0.87(t,j＝6.7hz,3h,ch3).
将所得1-(4-氯苯基)-1-辛醇(1.20g,5mmol)溶于无水四氢呋喃(30ml)中，于45℃，分批加入氢化钠(0.30g,7.5mmol)，搅拌4h后，缓慢滴加溴乙酸乙酯(1.00g,6mmol)的无水四氢呋喃(10ml)溶液，继续反应24h，tlc检测反应完全。
向反应瓶中小心加入40g碎冰，分离有机相，再用饱和nacl洗有机相1次。无水硫酸钠干燥过夜。抽滤除去干燥剂，旋干得粗产品。再经硅胶柱色谱分离纯化，得2-[(1-(4-氯苯基)辛基)氧基]乙酸乙酯(a-1)(0.75g,2.3mmol)，产率45％。
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.32(d,j＝8.4hz,2h,arh),7.24(d,j＝8.4hz,2h,arh),4.32(t,j＝6.6hz,1h,ochch2),4.17(qd,j＝7.2,1.9hz,2h,co2ch2),3.98(d,j＝16.3hz,1h,och2co2),3.83(d,j＝16.3hz,1h,och2co2),1.93-1.84(m,1h,ch2),1.67-1.59(m,2h,ch2),1.44-1.36(m,1h,ch2),1.32-1.16(m,8h,ch2),1.25(t,j＝7.2,3h,ch3),0.85(t,j＝6.6hz,3h,ch3).
再将所得2-((1-(4-氯苯基)辛氧基)乙酸乙酯(a-1)(0.33g,1mmol)溶于2ml乙醇中，并加入水合氢氧化锂(0.10g,2.5mmol)，室温搅拌，tlc检测反应完全。
向反应瓶中加入20ml水，用1mol/l盐酸调ph值1～2，乙酸乙酯萃取3次，合并有机相。再用饱和nacl洗有机相1次。无水硫酸钠干燥过夜。抽滤除去干燥剂，旋干得粗产品。再经硅胶柱色谱分离纯化，得2-[(1-(4-氯苯基)辛基)氧基]乙酸(vsp-77)(0.24g,0.8mmol)，产率80％。
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.34(d,j＝8.3hz,2h,arh),7.21(d,j＝8.3hz,2h,arh),4.33(t,j＝6.7hz,1h,arch),3.92(q,j＝16.4hz,2h,chco2),1.95–1.84(m,1h,ch2),1.73–1.59(m,2h,ch2),1.42–1.32(m,1h,ch2),1.25(s,9h,ch2),0.86(t,j＝6.8hz,3h,ch3).
13cnmr(101mhz,cdcl3)δ175.7,139.6,133.9,128.9,128.3,82.7,65.5,37.9,31.9,29.5,29.3,25.7,22.7,14.2.hrms(esi)[m-h]-:计算c16h22clo3:297.1257；实测：297.1264.
实施例2
2-[(1-(4-氯苯基)辛基)氧基)]乙酸甲酯(a-2)的制备
将实施例1所得1-(4-氯苯基)-1-辛醇(1.20g,5mmol)溶于无水四氢呋喃(30ml)中，于45℃，分批加入氢化钠(0.30g,7.5mmol)，搅拌4h后，缓慢滴加溴乙酸甲酯(1.00g,6mmol)的无水四氢呋喃(10ml)溶液，继续反应24h，tlc检测反应完全。
向反应瓶中小心加入40g碎冰，分离有机相，再用饱和nacl洗有机相1次。无水硫酸钠干燥过夜。抽滤除去干燥剂，旋干得粗产品。再经硅胶柱色谱分离纯化，得2-[(1-(4-氯苯基)辛基)氧基)]乙酸甲酯(a-2)(0.62g,2.0mmol)，产率40％。
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.31(dd,j＝8.6,2.1hz,2h),7.24–7.19(m,2h),4.32(t,j＝6.7hz,1h),3.97(d,j＝16.3hz,1h),3.83(d,j＝16.3hz,1h),3.71(s,3h),1.93-1.84(m,1h),1.67-1.60(m,2h),1.43-1.35(m,1h),1.28-1.23(m,8h),0.85(t,j＝6.9hz,3h).
实施例3
2-[(1-(4-氯苯基)辛基)氧基)]乙酸(2-羟基)乙酯(a-3)的制备
将实施例1所得2-[(1-(4-氯苯基)辛氧基]乙酸(vsp-77)(0.30g,1mmol)，溶于2ml乙二醇中，加入二氯亚砜(0.24g,2mmol)，三乙胺(0.20g,2mmol)，室温搅拌，tlc检测反应完全。旋蒸，残液加入20ml水，乙酸乙酯萃取3次，合并有机相。再用1mol/l盐酸、饱和nacl各洗有机相1次。无水硫酸钠干燥过夜。抽滤除去干燥剂，旋干得粗产品。再经硅胶柱色谱分离纯化，得2-[(1-(4-氯苯基)辛基)氧基]乙酸(2-羟基)乙酯(a-3)(0.30g,0.9mmol)，产率90％。
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.32(d,j＝8.4hz,2h),7.23(d,j＝8.4hz,2h),4.33(t,j＝6.7hz,1h),4.28–4.22(m,2h),4.01(d,j＝16.4hz,1h),3.88(d,j＝16.4hz,1h),1.93-1.85(m,2h),1.68–1.59(m,4h),1.43-1.35(m,1h),1.33-1.16(m,8h),0.86(t,j＝6.8hz,3h).
实施例4
(2s)-2-[2-((1-(4-氯苯基)辛基)氧基)乙酰氨基]戊二酸二乙酯(a-4)的制备
将实施例1所得2-[(1-(4-氯苯基)辛氧基]乙酸(vsp-77)(0.30g,1mmol)，溶于二氯亚砜中(5ml)，加热回流4h，旋除过量的二氯亚砜，加干燥二氯甲烷2ml，冰浴下，滴入盛有谷氨酸二乙酯(0.19g,1mmol)，二氯甲烷5ml，三乙胺(0.20g,2mmol)的25ml圆底烧瓶中，室温搅拌，tlc检测反应完全。
旋蒸，残液加入20ml水，乙酸乙酯萃取3次，合并有机相。再用1mol/l盐酸、饱和nacl各洗有机相1次。无水硫酸钠干燥过夜。抽滤除去干燥剂，旋干得粗产品。再经硅胶柱色谱分离纯化，得(2s)-2-[2-((1-(4-氯苯基)辛基)氧基)乙酰氨基]戊二酸二乙酯(a-4)(0.38g,0.8mmol)，产率80％。
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.35–7.29(m,2h),7.24(s,1h),7.22-7.19(m,2h),4.66-4.60(m,1h),4.27-4.19(m,3h),4.17–4.09(m,2h),3.80-3.76(m,2h),2.45-2.32(m,2h),2.29-2.19(m,1h),2.08-1.96(m,1h),1.94-1.84(m,1h),1.72–1.61(m,3h),1.45-1.35(m,1h),1.32–1.23(m,13h),0.86(t,j＝6.8hz,3h).
实施例5
(2s)-2-[2-((1-(4-氯苯基)辛基)氧基)乙酰氨基]戊二酸(a-5)的制备
将实施例4所得(2s)-2-(2-((1-(4-氯苯基)辛基)氧基)乙酰氨基)戊二酸二乙酯(0.24g,0.5mmol)溶于2ml乙醇中，并加入水合氢氧化锂(0.05g,1.25mmol)，室温搅拌，tlc检测反应完全。
向反应瓶中加入20ml水，用1mol/l盐酸调ph值1～2，抽滤，用水充分洗涤，烘干，得(2s)-2-[2-((1-(4-氯苯基)辛基)氧基)乙酰氨基]戊二酸(a-5)(0.17g,0.4mmol)，产率80％。
1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ12.53(s,1h),7.85(dd,j＝10.3,8.5hz,1h),7.41(d,j＝8.1hz,2h),7.38–7.29(m,2h),4.37(t,j＝6.3hz,1h),4.28-4.23(m,1h),3.70(s,2h),2.24(dd,j＝17.2,7.7hz,1h),2.00-1.94(m,1h),1.90–1.74(m,2h),1.64-1.49(m,1h),1.37-1.20(m,10h),0.83(t,j＝6.7hz,3h).
实施例6
化合物对pparγ激活能力评估(荧光素酶活性测定法)
cos-7细胞购自atcc，培养于10％fbs无抗生素dmem，37℃，5％co2孵育箱中。待细胞进入对数生长期接种于24孔板中，细胞融合约70％时，按照lipofectamine2000(invitrogen)操作说明进行质粒共转染(50ng全长hpparγ，100ngpparγ，5ng海肾荧光素酶质粒)。
24h后，用100μm实施例1制备的化合物vsp-77干预转染细胞，采用10μm罗格列酮做阳性对照，采用dmso做阴性对照。
干预24h后按reporterluciferaseassaykits(promega)操作说明测定荧光素酶活性，每组设定3个独立测试孔。
以抗糖尿病药物罗格列酮为阳性对照(规定为100％)，所合成化合物vsp-77具有对pparγ弱的激活能力，测试结果表明2-[(1-(4-氯苯基)辛基)氧基]乙酸(vsp-77)在100μm浓度下激活pparγ值为32％。
实施例7
tr-fret方法测试化合物与pparγ结合能力
1.将实施例1制备的化合物vsp-77用dmso稀释到1mm。dmso做阴性对照，罗格列酮阳性对照。
2.将稀释好的化合物(实施例1制备的化合物vsp-77，罗格列酮)用tr-fretbuffer再次稀释到100μm。
3.以tr-fretbuffer为溶剂准备fluormonetmpan-ppargreensolution(20nm)。
4.以tr-fretbuffer为溶剂准备20nmtbanti-gstantibody和4μmpparγ-lbdprotein。
5.将100μl步骤2准备的溶液、10μl步骤3准备的溶液和10μl步骤4准备的溶液混合在384孔板中，震荡6小时。
6.在酶标仪上读数。
结果表明，所合成化合物与pparγ具有强的结合力，以抗糖尿病药物罗格列酮为阳性对照(规定为1)，测试结果表明合成化合物vsp-7710μm浓度下与pparγ结合力值在0.01，为癸酸(da)的11倍。
实施例8
化合物致脂肪分化能力测试
3t3-l1前脂肪细胞购自atcc，培养于含青霉素-链霉素双抗的10％fbsdmem，37℃，5％co2孵育箱中。
将3t3-l1接种于培养板，汇合后2天加入诱导液dmi(1μmol/l地塞米松dex,0.5mmol/l3-异丁基-1-甲基黄嘌呤ibmx,167nmol/l胰岛素insulin,10％fbsdmem)，以及各组实验化合物(a)10μm罗格列酮；b)dmi；c)100μmvsp-77；d)10μm罗格列酮和100μmvsp-77；e)dmi和100μmvsp-77；f)dmso)。
72h后换成10％fbs高糖dmem，含167nmol/l胰岛素以及各组实验化合物(同上)，每2d换一次。
诱导开始第12天进行油红o染色及dapi染色，显微镜(olympus)拍照。
结果如图1所示，其中，
a)为采用10μm罗格列酮(标记为rosi)诱导；
b)为采用dmi(1μm地塞米松(d)、0.5mm3-异丁基-1-甲基黄嘌呤(m)和167nm胰岛素(i))诱导；
c)为采用100μmvsp-77诱导；
d)为采用10μm罗格列酮和100μmvsp-77诱导；
e)为采用dmi和100μmvsp-77诱导；
f)为采用dmso作为对照。
从图1中可以看出，在上述给出的浓度中，dmi和罗格列酮明显的刺激了脂肪分化；vsp-77类似于对照组dmso，并没有刺激脂肪分化；同时，从图d和e中可以看出，vsp-77也明显地抑制了dmi和罗格列酮诱导的脂肪细胞分化。
以上结果表明，所合成化合物2-[(1-(4-氯苯基)辛基)氧基]乙酸(vsp-77)不仅不会引起脂肪细胞分化，而且能够抑制一些药物诱导(如dmi和罗格列酮)的脂肪细胞的生成。
实施例9
采用dio小鼠模型评价化合物降糖能力
(1)c57/b6l鼠分别给予高脂饲料和正常饲料(动物及相关饲料均购买于上海斯莱克实验动物有限责任公司)，饲养8-12周；
(2)采用正常饲料喂养的鼠标记为正常饮食组，按体重将dio鼠分为三组：高脂对照组、罗格列酮组、vsp-77组；
(3)对于dio鼠，空白对照组按照0.1ml/10g给药标准腹腔注射(i.p.)0.5wt％mc(甲基纤维素，包含1vol％dsmo和2vol％蓖麻油)；罗格列酮组按照5mg/kg给药标准腹腔注射罗格列酮；vsp-77组按照20mg/kg给药标准腹腔注射vsp-77；
正常饮食组腹腔注射0.5％mc，0.1ml/10g。
一天腹腔注射两次，一共十天，每天记录体重和进食量；
(4)第十天所有小鼠饥饿6h，测定葡萄糖耐受(参考文献：fu,y.y.et.al.diabetologia2013,56,2297–2307.)，葡萄糖浓度为2g/kg。
(5)测定结束后，所有小鼠脱颈处死，提取小鼠肝脏、肾脏、骨骼肌、腹部脂肪、皮下脂肪、肾周脂肪，并称重记录，各组织放于液氮保存。
结果如图2所示，其中，
a)为各组的体重；
b)为各组的器官重量；
c)为各组注射后不同时间的血浆葡萄糖浓度；
d)为经测试各组的曲线下面积(n＝5-6,±sem)，
与高脂对照组相比，*p<0.05,**p<0.01,***p<0.001。
从图2中可以看出，所合成的化合物vsp-77具有显著的清除血液中葡萄糖的能力，并优于罗格列酮组。同时，此化合物相对于罗格列酮组，并没有导致相关脂肪组织的增加。
以上结果表明，化合物vsp-77在没有导致相关副作用的基础上，具有潜在的抗糖尿病效果。
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