一种盐酸左旋吗啉硝唑晶型及其制备方法和用途与流程

本发明属于化学药物结晶
技术领域：
，特别涉及一种盐酸左旋吗啉硝唑晶型及其制备方法。本发明还涉及一种盐酸左旋吗啉硝唑的晶型在药物组合物中的应用以及该晶型和组合物在治疗厌氧菌感染和各种其他疾病中的应用。
背景技术：
：硝基咪唑类抗菌药，传统的的化合物有甲硝唑、奥硝唑和塞克硝唑。甲硝唑(metronidazole)作为杀菌剂，其抗厌氧菌谱广，对脆弱拟杆菌、真杆菌、产气荚膜梭菌高度敏感，对消化球菌、消化链球菌、产黑素普雷活菌、卟啉单胞菌中度敏感，对无芽胞革兰阳性杆菌敏感性较差。替硝唑(tinidazole)的抗菌谱、抗菌作用与甲硝唑相同，半衰期比甲硝唑长(T1／212-14h)，可采用单次剂量治疗。吗啉硝唑，作为第三代硝基咪唑类衍生物，是豪森医药集团开发的1.1类新药，目前己上市销售。该药毒性小，活性好，抗厌氧菌、抗滴虫、抗阿米巴原虫，尤其适用于敏感细菌引起的成人（≥18岁）下列感染：l、妇科盆腔炎（包括子宫内膜炎、输卵管炎、输卵管卵巢脓肿、盆腔腹膜炎等）：由消化链球菌、脆弱拟杆菌、韦荣球菌、吉氏拟杆菌等引起。2、联合手术治疗化脓性阑尾炎、坏疽性阑尾炎：由拟杆菌属（脆弱拟杆菌、卵形／多型拟杆菌、单形拟杆菌、普通拟杆菌、拟杆菌属），梭菌属（产气荚膜梭菌、双酶梭菌、丁酸梭菌及其他梭菌），梭杆菌属（具核梭杆菌、可变梭杆菌），厌氧球菌（消化链球菌、韦荣球菌）等引起。左旋吗啉硝唑为吗啉硝唑的左旋体，我们将其成左旋吗啉硝唑盐酸盐，对于盐酸左旋吗啉硝唑的晶型没有相关文献报道，对于药品而言，不同的晶型可能存在不同的理化性质，如溶解度、熔点、稳定性等，这些性质直接会影响药物制剂的稳定性、溶解性，甚至影响最重的临床疗效。因此，对药物的晶型研究具有重大的意义。技术实现要素：盐酸左旋吗啉硝唑，中文化学名为R-(-)-1-(2-甲基-5-硝基咪唑-1-基)-3-吗啉基丙烷-2-醇盐酸盐，分子式为C11H19ClN4O4，分子量约为306.75，盐酸左旋吗啉硝唑结构式如下：本发明的目的在于提供一种新的盐酸左旋吗啉硝唑晶型，本发明的晶型性质稳定。本发明提供的盐酸左旋吗啉硝唑晶型，其X射线粉末衍射图在下述2θ±0.2处有特征峰：11.6、12.1、13.4、14.5、15.1、15.7、17.6、18.6、22.3、23.8、24.2、26.8、28.0、29.9、30.4。该晶型的XRPD图谱还可以进一步在上述2θ角位置有特征峰：11.6、12.1、13.4、18.6、23.8、24.2、26.8、28.0、29.9、30.4。本专利晶型特征峰的角度均采用本领域常规的表示方法，精确到0.1。时允许误差为±0.2。且通常结合四舍五入的原则。作为其他2θ精确度的示范，该晶型的XRPD图可包含有以下的衍射数据：2TdI/I011.5697.64310012.0787.32256.013.3946.60543.914.4776.1147.315.0935.86515.915.6665.65223.417.6055.03417.518.6334.75844.722.3063.98228.923.7873.73851.024.2183.67243.926.8073.32355.128.0233.18237.729.9292.98338.930.3792.94029.3优选的，该晶型的XRPD图基本如图1所示。本发明的盐酸左旋吗啉硝唑的晶型还包括无定型。在有机化合物晶体领域，XRPD图谱分析是对晶体进行定性分析的常用方法，然而XRPD图谱中提供的信息量大，可能还会包括杂质峰等干扰信息。因此，为了准确鉴别晶体，本发明在XRPD图谱中选取了数个具有代表性的峰作为特征峰用以表征本发明的晶体结构。本发明在选择特征峰时综合考虑了d值、低角度、强度、特征线及峰形完整等多方面因素。本发明最优选的特征峰不仅属于图谱中相对低角度的峰，同时，本发明选择的吸收峰具有完整且明显的峰形、强度相对较高，非常易于作为特征峰被区别、鉴定。而X射线粉末衍射图中的其他峰，峰形不佳，峰强度极低，其中可能会包括杂质峰干扰信息，因此本发明中未将其作为本晶型的特征峰专名列出。另一方面，本发明提供了一种制备所述盐酸左旋吗啉硝唑晶型的方法，包括：使盐酸左旋吗啉硝唑粗品在醇水溶液中加热溶解，加入活性炭脱色，过滤；滤液冷却析晶，得所述盐酸左旋吗啉硝唑晶体。作为示例，所述醇可为甲醇、乙醇、异丙醇、正丙醇、正乙醇、2-丁醇、2-甲基-1-丙醇、2-甲基-2-丙醇。进一步地，所述盐酸左旋吗啉硝唑的析晶溶剂的质量体积比为1：1-50；需注意的是，此处质量体积比的单位量级可以是g/mL、kg/L或其他对等量级的单位。更进一步地，所述的醇水溶液中醇：水的体积比为50～95：50～5。所述析晶温度为-20～40℃，更优选为20℃。本发明第三个方面，提供了一种盐酸左旋吗啉硝唑晶胞，晶胞数据如下：元素配比为C11H19ClN4O4，该晶型为单斜晶系，空间群为P21，晶胞结构参数晶胞体积为1444.0(3)Å3，Z=4a=7.4007(7)Åalpha=90°.b=15.3552(16)Åbeta=96.144(3)°.c=12.7804(13)Ågamma=90°.本发明第四个方面，提供了一种药物组合物，包括根据本发明的前述的盐酸左旋吗啉硝唑的晶型。该组合物进一步包括一种或多种药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂。该组合物可用于口服或非肠胃给药，口服给药的组合物包括普通片剂、分散片、缓释片、控释片、胶囊。非肠胃给药的组合物包括无菌溶液或注射用无菌粉末形式、或适合用于制备非肠胃给药的无菌溶液或注射用无菌粉末形式的组合物。该组合物是包括含根据本发明的盐酸左旋吗啉硝唑的单位剂量，其量为1mg到1000mg。本发明第五个方面，本发明还公开了所述盐酸左旋吗啉硝唑晶型在制备抗厌氧菌、抗滴虫或抗阿米巴原虫的药物中的用途，优选的，所述晶型可以用于制备治疗妇科盆腔炎，或者用于联合手术治疗化脓性阑尾炎或坏疽性阑尾炎药物。另外，本发明的晶型在高温(60℃)、高湿(25℃lRH92.5%)、光照条件下放置时均表现出优越的稳定性。附图说明图l为本发明实施例l所得晶体的XRPD图谱，其横坐标表示2θ度数，纵坐标表示峰强，图上的2TH数据即表示2θ值，D值表示晶面间距，百分数表示衍射峰的相对强度。本发明X射线粉末衍射采用CuKα辐射源。本发明所述晶型的X射线粉末衍射图（XRPD）如图1所示。图2为本发明实施例1所得晶体的单晶X-射线衍射(SXRD)结构图。图3为本发明实施例14无定型晶型X射线粉末衍射图（XRPD）如图3所示。图4为盐酸左旋吗啉硝唑对拟杆菌的杀菌曲线。图5为吗啉硝唑对拟杆菌的杀菌曲线。图6为盐酸左旋吗啉硝唑对消化链球菌的杀菌曲线。图7为吗啉硝唑对消化链球菌的杀菌曲线。具体实施方式下面结合实施例对本发明作进一步详细说明，但应理解本发明的范围非仅限于这些实施例的范围。实施例1：盐酸左旋吗啉硝唑晶型的制备取盐酸左旋吗啉硝唑10g，加入95%（v/v）乙醇水溶液60ml，加热至60℃搅拌至溶解，再加入0.6g活性炭脱色，保温搅拌30分钟过滤，滤液置20℃析晶，过滤，干燥，得8.8g盐酸左旋吗啉硝唑，经检测，盐酸左旋吗啉硝唑晶体的XRPD图如图l所示，SXRD结构图如图2所示。实施例2：盐酸左旋吗啉硝唑晶型的制备取盐酸左旋吗啉硝唑10g，加入90%（v/v）甲醇水溶液50ml，加热至60℃搅拌至溶解，再加入0.1g活性炭脱色，保温搅拌60分钟过滤，滤液置30℃析晶，过滤，干燥，得9.2g盐酸左旋吗啉硝唑，经检测，盐酸左旋吗啉硝唑晶体的XRPD图如图l所示，SXRD结构图如图2所示。实施例3：盐酸左旋吗啉硝唑晶型的制备取盐酸左旋吗啉硝唑10g，加入90%（v/v）异丙醇水300ml，加热至60℃搅拌至溶解，再加入3.0g活性炭，保温搅拌20分钟过滤，滤液静置30℃析晶，过滤，干燥，即得8.9g盐酸左旋吗啉硝唑，经检测，盐酸左旋吗啉硝唑晶体的XRPD图如图l所示，SXRD结构图如图2所示。实施例4：盐酸左旋吗啉硝唑的制备取盐酸左旋吗啉硝唑30g，加入50%（v/v）正丁醇水溶液210ml，加热至60℃搅拌至溶解，再加入1.0g活性炭，保温搅拌40分钟过滤，滤液静置-20℃析晶，过滤，干燥，即得25.2g盐酸左旋吗啉硝唑，经检测，盐酸左旋吗啉硝唑晶体的XRPD图如图l所示，SXRD结构图如图2所示。实施例5：盐酸左旋吗啉硝唑的制备取盐酸左旋吗啉硝唑20g，加入80%（v/v）正丙醇水溶液400ml，加热至60℃搅拌至溶解，再加入4.0g活性炭，保温搅拌10分钟过滤，滤液静置40℃析晶，过滤，干燥，即得13.6g盐酸左旋吗啉硝唑，经检测，盐酸左旋吗啉硝唑晶体的XRPD图如图l所示，SXRD结构图如图2所示。实施例6：盐酸左旋吗啉硝唑晶型的制备取盐酸左旋吗啉硝唑20g，加入60%（v/v）2-丁醇水溶液300ml，加热至60℃搅拌至溶解，再加入1.5g活性炭，保温搅拌15分钟过滤，滤液静置30℃析晶，过滤，干燥，即得16.6g盐酸左旋吗啉硝唑，经检测，盐酸左旋吗啉硝唑晶体的XRPD图如图l所示，SXRD结构图如图2所示。实施例7：盐酸左旋吗啉硝唑晶型的制备取盐酸左旋吗啉硝唑20g，加入乙醇甲醇水溶液(v:v:v=45:45:10)400ml，加热至60℃搅拌至溶解，再加入2.0g活性炭，保温搅拌30分钟过滤，滤液静置30℃析晶，过滤，干燥，即得17.3g盐酸左旋吗啉硝唑，经检测，盐酸左旋吗啉硝唑晶体的XRPD图如图l所示，SXRD结构图如图2所示。实施例8：盐酸左旋吗啉硝唑晶型的制备取盐酸左旋吗啉硝唑20g，加入乙醇异丙醇水溶液(v:v:v=45:45:10)400ml，加热至60℃搅拌至溶解，再加入2.0g活性炭，保温搅拌30分钟过滤，滤液静置30℃析晶，过滤，干燥，即得13.2g盐酸左旋吗啉硝唑，经检测，盐酸左旋吗啉硝唑晶体的XRPD图如图l所示，SXRD结构图如图2所示。实施例9：富马酸左旋吗啉硝唑的制备取富马酸左旋吗啉硝唑20g，加入95%（v/v）乙醇水溶液200ml，加热至60℃搅拌至溶解，再加入1.5g活性炭，保温搅拌15分钟过滤，滤液静置30℃析晶，过滤，干燥，即得12.4g富马酸左旋吗啉硝唑。实施例10：枸橼酸左旋吗啉硝唑的制备取枸橼酸左旋吗啉硝唑50g，加入90%（v/v）异丙醇水溶液1000ml，加热至60℃搅拌至溶解，再加入10.0g活性炭，保温搅拌20分钟过滤，滤液静置30℃析晶，过滤，干燥，即得44.3g枸橼酸左旋吗啉硝唑。实施例11：丁二酸左旋吗啉硝唑的制备取丁二酸左旋吗啉硝唑10g，加入90%（v/v）异丙醇水溶液150ml，加热至60℃搅拌至溶解，再加入1.5g活性炭，保温搅拌20分钟过滤，滤液静置30℃析晶，过滤，干燥，即得7.4g丁二酸左旋吗啉硝唑。实施例12：盐酸左旋吗啉硝唑晶型的稳定性实施例l所得晶型样品分别在高温(60℃)、高湿(25℃lRH92.5%)、光照条件下放置30天，晶型检测结果详见下表：在高温、高湿和光照条件下放置30天，本品X-射线衍射图谱与初始数据一致，没有发生转晶现象，表明本发明所提供的晶型稳定性良好。实施例13：盐酸左旋吗啉硝唑与实施例9、10、11制备的其他左旋吗啉硝唑盐稳定性比较上述实施例制备的盐酸左旋吗啉硝唑晶型与枸橼酸左旋吗啉硝唑、丁二酸左旋吗啉硝唑、富马酸左旋吗啉硝唑在60℃放置10天稳定性比较结果如下：色谱柱：C18柱（250mm×4.6mm5μm）流动相：50mmol/l磷酸二氢钾（三乙胺调节pH=6.5）：甲醇=75:25柱温：25℃流速：1.0ml/min检测波长：260注：样1为盐酸左旋吗啉硝唑样2为富马酸左旋吗啉硝唑样3为丁二酸左旋吗啉硝唑样4为枸橼酸左旋吗啉硝唑样5为盐酸左旋吗啉硝唑无定型粉末上述结果表明，盐酸左旋吗啉硝唑的稳定性优于其他三种盐。实施例14：盐酸左旋吗啉硝唑无定型晶型的制备取盐酸左旋吗啉硝唑10g在加入50ml水溶解，放置冷冻干燥机中降温至-60℃冷冻5h，然后抽真空干燥，得盐酸左旋吗啉硝唑无定型晶体。实施例15：盐酸左旋吗啉硝唑晶型体外药效试验与吗啉硝唑体外药效学试验对比结果试验方法一最低抑菌浓度（MIC）的测定采用琼脂平板稀释法测定最低抑菌浓度（MIC）。1．含药平板的制备1.1：精密称取试验药物适量，分别于无菌试管中用适量溶解后，无菌水稀释，各试管中药液的单位分别为1280、640、320、160、80、40、20、10、5、2.5、1.25、0.625、0.3125（mg/L）。放置于厌氧培养箱过夜备用。1.2：厌氧培养箱系统内操作，取各浓度药液2ml，分别加入无菌平皿中，再加入融化并恒温于55℃的强化布氏琼脂培养基（临用前加5%脱纤维羊血）18ml，充分混匀，冷凝，放置于厌氧培养箱内24小时除氧后备用。各含药平板中药物的最终浓度依次为：128、64、32、16、8、4、2、1、0.5、0.25、0.125、0.0625、0.03125（mg/L）。2.菌液制备及接种：厌氧培养箱操作，取试验用厌氧菌株接种到强化布氏肉汤培养液（5ml）中，37℃厌氧培养36~48小时，再用预除氧的强化布氏肉汤适当稀释至约相当于0.5号麦氏比浊管浓度，菌液浓度约为108CFU/ml。加各菌悬液至96孔板相应位置，用多点接种仪点种各试验菌液于含药平板上，每点最终接种菌量约105CFU。37℃厌氧培养36~48小时，观察并记录各菌的MIC值，统计MIC50、MIC90，试验结果见表1。二、最低杀菌浓度（MBC）的测定1．采用试管稀释法测定MIC值厌氧培养箱内操作，取各试验药物稀释液0.5ml与4.5ml强化布氏肉汤培养液混匀于无菌试管内，取上述制备的厌氧菌悬液稀释10倍后，吸取50μl加入，每管菌浓度约为105CFU/ml，37℃厌氧培养36小时。2.平板法测定MBC将试管法测定MIC中无菌生长的各管培养物分别吸取0.1ml加入无菌平皿中，加入冷却至50℃左右的强化布氏琼脂培养基，迅速混匀。待凝固后，37℃厌氧培养36~48小时，取出观察结果。选择平板上生长菌落数小于5个的最小药物浓度记为MBC，结果见表2。三、pH值变化对体外抗菌活性的影响该试验方法与“体外测定MIC”的测定方法相同，但培养基选择三种不同的pH值（pH6、pH7、pH8）。目的是考察pH值的变化对盐酸左旋吗啉硝唑体外抗菌活性的影响，结果见表3。四、接种量变化对体外抗菌活性的影响采用“体外测定MIC”同样的方法进行试验，但接种量分别为103、105、107CFU/点，结果见表4。五、血清结合蛋白试验试验方法与MBC测定中试管双倍稀释法测定MIC相同，但培养基采用含不同浓度马血清的液体培养基进行测定，培养基中马血清浓度分别为25%、50%、75%。另设不含马血清的空白对照，试验结果见表5。六、杀菌曲线（KCs）的测定从MBC的测定菌中选择拟杆菌、消化链球菌各1株，进行杀菌效率测定。根据各试验菌株对盐酸左旋吗啉硝唑的敏感性，选择1×MBC、2×MBC、4×MBC和8×MBC浓度，平行测定。分别于0、4、8、12、24、36、48小时取样进行平板活菌计数，用细菌菌数的对数与时间点绘制杀菌曲线，并以不含药组进行平行对照测定。结果见说明书附图4～7。表1222株厌氧菌的MIC（mg/L）测定结果注：A：盐酸左旋吗啉硝唑；B：吗啉硝唑；表2对30株临床分离菌的MBC（mg/L）测定结果注：A：盐酸左旋吗啉硝唑；B：吗啉硝唑；表3细菌接种量变化对MIC(mg/L)影响测定结果注：A：盐酸左旋吗啉硝唑；B：吗啉硝唑；表4培养基pH变化变化对MIC(mg/L)影响测定结果注：A：盐酸左旋吗啉硝唑；B：吗啉硝唑；表5血清结合蛋白对MIC的影响结果（mg/L）注：A：盐酸左旋吗啉硝唑；B：吗啉硝唑；体外抗菌试验结果表明，盐酸左旋吗啉硝唑对244株临床分离厌氧菌具有较好的抗菌活性。MIC50结果表明：对拟杆菌、韦荣氏球菌、梭杆菌、卟啉单胞菌、普沃氏菌、消化链球菌、优杆菌、放线菌属等均显现出较强的抗菌效果，其MIC50值小于或等于1mg/L；对产气荚膜梭菌、丙酸杆菌也具有较强的抗菌活性，其MIC50值在1~2mg/L，与吗啉硝唑基本一致。MBC测定结果表明，盐酸左旋吗啉硝唑在体外具有较强的杀菌能力，其MBC50值一般为MIC50值的4倍，与吗啉硝唑相比基本一致。接种量变化测定结果表明，当菌数从103增加至107CFU/点时，其MIC值一般增加2~4倍，与吗啉硝唑基本一致。pH值变化测定结果表明，盐酸左旋吗啉硝唑随pH值升高抗菌活性基本不变，少数菌株MIC值增加2倍，与吗啉硝唑相近。血清结合蛋白试验结果表明，盐酸左旋吗啉硝唑随血清浓度的增加其总体抗菌活性有下降的趋势，MIC50值升高2~4倍，与吗啉硝唑一致。杀菌曲线测定结果表明，当药物浓度从1×MIC增加至8×MIC时，随着药物浓度的增加其杀菌速度加快，杀菌时间缩短，表明盐酸左旋吗啉硝唑杀菌类型为浓度依赖型，其结果与吗啉硝唑基本一致。当前第1页1 2 3