本发明属于天然产物提取技术领域，涉及一种采用土人参根和茎中提取齐墩果酸的方法。
背景技术：
土人参，又名：栌兰、土洋参、福参、申时花、煮饭花、假人参、参草、土高丽参，水人参，紫人参等，属中央种子目，马齿苋科一年生或多年生草本。株无毛，高30-100厘米。主根粗壮，圆锥形，有少数分枝，皮黑褐色，断面乳白色。茎直立，肉质，基部近木质，多少分枝，圆柱形，有时具槽。叶互生或近对生，具短柄或近无柄，叶片稍肉质，倒卵形或倒卵状长椭圆形，长5-10厘米，宽2.5-5厘米，顶端急尖，有时微凹，具短尖头，基部狭楔形，全缘。圆锥花序顶生或腋生，较大形，常二叉状分枝，具长花序梗；花小，直径约6毫米；总苞片绿色或近红色，圆形，顶端圆钝，长3-4毫米；苞片2，膜质，披针形，顶端急尖，长约1毫米；花梗长5-10毫米；萼片卵形，紫红色，早落；花瓣粉红色或淡紫红色，长椭圆形、倒卵形或椭圆形，长6-12毫米，顶端圆钝，稀微凹；雄蕊(10-)15-20，比花瓣短；花柱线形，长约2毫米，基部具关节；柱头3裂，稍开展；子房卵球形，长约2毫米。蒴果近球形，直径约4毫米，3瓣裂，坚纸质；种子多数，扁圆形，直径约1毫米，黑褐色或黑色，有光泽。花期6-7月，果期9-10月。根入药，滋补强壮。土人参栽培容易，繁殖迅速，病少虫微，根、叶均可食用，可炒、可做汤、可涮、可炖，药蔬兼用。作为蔬菜食用部分是不断生长的嫩茎叶为宾馆蔬菜。肉质根，是一种药用补品，具有滋补强壮作用，健脾润肺，止咳，调经。用于脾虚劳倦、泄泻，肺劳咳痰带血、眩晕潮热、盗汗自汗、月经不调、带下。补中益气，润肺生津。用于气虚乏力，体虚自汗，脾虚泄泻，肺燥咳嗽，乳汁稀少。在土人参根茎中含有齐墩果酸、十八酸单甘酯、β-谷甾醇等有效活性成份。齐墩果酸用于治疗传染性急性黄疸型肝炎，具有明显的降低谷丙转氨酶及退黄效果，改善病毒性和慢性迁延性肝炎患者的症状，体征和肝功能；还可用于银屑病，风湿性关节炎，肾炎水肿，肝硬化腹水，急慢性肝炎，胃痛淋浊，血崩，跌打损伤，痈肿，腰膝酸软，胎动不安等症。公开号为CN1045585中国专利公开了一种从植物中提取齐墩果酸的方法，其特征在于它由以下步骤完成：a，水提，含有是齐墩果酸的三萜皂甙的植物加水，用慢火煮，然后浓缩水溶液；b，水解：向浓缩的水溶液加浓硫酸，加热水解。c，酸性醇液重结晶；水不溶物用乙醇或甲醇溶解，过滤，用NaOH调PH10～11，去沉淀，取上清液，加Hcl至醇溶液的1/2～1/5或加1/5～1/2醇溶液体积的水和1/10～1/15醇溶液体积的浓H2SO4，回流加热，静置结晶，过滤，取滤物即为齐教果酸。公开号为CN101450962中国专利公开了一种从秋茄叶片中提取齐墩果酸的方法，包括如下步骤：将秋茄叶片清洗后阴干，加入二氯甲烷提取，过滤得提取液，干燥，得浸膏；将浸膏加入层析用硅胶吸附，研碎成粉，装柱，以石油醚/丙酮为洗脱剂，进行梯度洗脱，按质量比，以石油醚∶丙酮分别为30∶1，10∶1和4∶1，冲1～5个柱体积，最后以甲醇冲洗，共得18个组分，其中的第12～17组分为齐墩果酸粗品，再经硅胶柱层析，以氯仿/甲醇为洗脱剂进行洗脱，最后以甲醇冲洗，共得4个组分，其中的第3组分即为齐墩果酸纯品。公开号为CN101857625A中国专利公开了一种从沙棘中提取齐墩果酸的方法，包括如下步骤：(1)沙棘果实的前处理；(2)熊果酸和齐墩果酸的提取；(3)果酸和齐墩果酸的分离。本发明一种从沙棘中提取齐墩果酸的方法与现有技术相比较有如下有益效果：本发明利用超临界CO2萃取法从沙棘果皮中提取熊果酸和齐墩果酸，达到资源优化配置，提高沙棘类产品附加值的目的。公开号为CN103059092A中国专利公开了一种从木瓜中提取齐墩果酸的方法，(1)取榨汁后的木瓜渣烘干后，按质量比1:2的比例放入温水中浸泡浸泡2小时后压榨；烘干后的滤饼渣再按质量比1:2的比例放入温水中浸泡，同时分别加入果胶酶、纤维素酶及半纤维素酶的复合酶，质量比为1:2:3，加入量为1000u/100g滤饼渣，酶解3小时后滤饼渣烘干备用；(2)将干燥的木瓜滤饼渣按质量比1:3的比例放入95％vol的乙醇中减压萃取2小时，分别重复萃取2次，萃取液真空浓缩，得到膏状物；(3)将膏状物加纯净水，进行碱溶酸沉，喷雾干燥、重结晶，即得齐墩果酸纯品。本发明工艺更简单，齐墩果酸提取率和纯度更高。公开号为CN103483412A中国专利公开了一种从女贞子中提取齐墩果酸的新方法，具体涉及一种酶解与加压技术相结合的方法，在粉碎的女贞子中加入10～15倍的70～90％的乙醇溶液，加盐酸调PH值为3～5，继续加入0.03～0.05％的纤维素酶酶解，加碱调PH值为中性，放入密闭容器内，在压力为20～30MPa条件下提取10～15min，提取液过滤，加入活性炭脱色后过滤，滤液浓缩为原溶剂体积的1/10～15，浓缩液上预处理的大孔吸附树脂，用90～100％的乙醇洗脱，洗脱液减压浓缩得粗品，甲醇重结晶得针状结晶齐墩果酸。本发明反应条件温和、提取率高、提取时间短、提取成本低，适用于工业化生产。公开号为CN104478985A中国专利公开了一种从日本楤木叶片中提取齐墩果酸的方法，步骤如下：将日本楤木叶片碎料加入提取液中加热到90-95℃，直至混合液体积减少到五分之一，分离提取后的液体，然后在日本楤木叶片粉料中重新加入提取液并加热到90-95℃，直至混合液体积减少到五分之一，重复上述提取过程3-4次；合并提取后的液体，冷却至室温，经滤膜过滤得到滤液；将滤液与去离子水混合，90℃水浴使乙醇挥发直至出现浅棕色浆液；将浆液用乙醚萃取,然后70℃水浴直至乙醚挥发完全，得到齐墩果酸提取物。本发明的的优点是：该从日本楤木叶片中提取齐墩果酸的方法工艺简单、耗时短、提取的效率高，检测结果表明：经3次提取、用时2小时，提取率可达到99.81％。公开号为CN104592343A中国专利公开了一种从夏枯草中提取齐墩果酸的方法，包括以下步骤：将干燥的夏枯草粉碎，加入乙醇回流提取，减压浓缩得浸膏A；加入石油醚淋洗，乙醇溶解过滤，经模拟移动床色谱进行分离，得到富含齐墩果酸的组分B；干燥得纯度95％以上的齐墩果酸。本发明所述的齐墩果酸提取方法，采用微波辅助提取和模拟移动床色谱法分离提纯结合的工艺，确定了相关工艺参数，步骤简单，产品纯度较高，提取分离时间较短，生产效率得到提高。目前，已有从山楂、木瓜、夏枯草和女贞子等植物中提取出高纯度的齐墩果酸，但在土人参提取分离齐墩果酸的方法未见文献资料报道。
技术实现要素：
本发明提供一种从土人参根茎中提取齐墩果酸的方法，包括如下步骤：(1)粉碎后土人参根茎与两倍至四倍重量的石油醚进行室温浸提，过滤去除石油醚浸提液，得土人参残渣。(2)土人参残渣加入乙醇进行50～70℃回流提取1～4h，过滤除渣得滤液Ⅰ，取滤液Ⅰ在50℃～65℃下进行真空或减压浓缩至原有体积的1/10～1/25，获得浓缩液Ⅰ。(3)将浓缩液Ⅰ用乙酸乙酯进行萃取，得到萃取液Ⅰ，其中浓缩液Ⅰ的体积L与乙酸乙酯的体积L比例为1：1～4。(4)将萃取液Ⅰ上LSA-20大孔树脂柱进行吸附，用三倍至五倍柱体积的乙醇水溶液进行柱洗脱，得到洗脱液Ⅰ。(5)将洗脱液Ⅰ在50℃～65℃下进行真空或减压浓缩至原有体积的1/5～1/15，室温静置15～50min，过滤，得滤渣即为齐墩果酸粗品。(6)向齐墩果酸粗品加入丙酮在40℃下加热10～20min，趁热陶瓷膜过滤，滤液放置冰箱中过夜，结晶，重结晶一次，得齐墩果酸。在一个实施方案中，所述过滤是纱布过滤、陶瓷膜过滤，其中，优选是三层纱布过滤2次、陶瓷膜过滤1次。在一个具体实施方案中，步骤(2)中所述乙醇使用量，按体积/土人参根茎重量比为2～6L:1kg。在一个具体实施方案中，步骤(4)中所述乙醇水溶液为含有70～90％乙醇的水溶液；如70％乙醇水溶液的配制方法为70mL无水乙醇加入30mL的水混合即可。在一个具体实施方案中，步骤(6)中所述丙酮体积与齐墩果酸粗品重量比为1～3L:1kg。上述所用LSA-20大孔树脂从郑州勤实科技有限公司购买的。技术效果1、本发明能使土人参根茎中齐墩果酸得到充分利用，有效降低其生产成本，充分利用了土人参根茎中主要活性成份。2、通过柱层析与结晶相结合，减少化学试剂的过度使用，保证了产品的纯天然性，可以安全的提供给食品、化妆品和制药等行业。具体实施方式下面，本发明将用实施例进行进一步的说明，但是它并不限于这些实施例的任一个或类似实例。实施例1：粉碎后土人参根茎100kg与石油醚300kg进行室温浸提，过滤去除石油醚浸提液，得土人参残渣。土人参残渣加入400L乙醇进行50～70℃回流提取2h，过滤除渣得350L滤液Ⅰ，取滤液Ⅰ在60℃下进行真空或减压浓缩，获得20L浓缩液Ⅰ。将浓缩液Ⅰ用40L乙酸乙酯进行萃取，得到萃取液Ⅰ。将萃取液Ⅰ上LSA-20大孔树脂柱进行吸附，用三倍至五倍柱体积的85％乙醇水溶液进行柱洗脱，得到140L洗脱液Ⅰ。将洗脱液Ⅰ在60℃下进行真空或减压浓缩至15L，室温静置40min，过滤，得滤渣即为齐墩果酸粗品1.84kg。向齐墩果酸粗品加入3L丙酮在40℃下加热15min，趁热陶瓷膜过滤，滤液放置冰箱中过夜，结晶，重结晶一次，得齐墩果酸1.46kg，经HPLC检测，齐墩果酸样品的纯度为97.25％。实施例2粉碎后土人参根茎200kg与石油醚500kg进行室温浸提，过滤去除石油醚浸提液，得土人参残渣。土人参残渣加入700L乙醇进行50～70℃回流提取1～4h，过滤除渣得660L滤液Ⅰ，取滤液Ⅰ在55℃下进行真空或减压浓缩，获得35L浓缩液Ⅰ。将浓缩液Ⅰ用50L乙酸乙酯进行萃取，得到萃取液Ⅰ。将萃取液Ⅰ上LSA-20大孔树脂柱进行吸附，用三倍至五倍柱体积的80％乙醇水溶液进行柱洗脱，得到180L洗脱液Ⅰ。将洗脱液Ⅰ在55℃下进行真空或减压浓缩至20L，室温静置50min，过滤，得滤渣即为齐墩果酸粗品3.98kg。向齐墩果酸粗品加入6L丙酮在40℃下加热20min，趁热陶瓷膜过滤，滤液放置冰箱中过夜，结晶，重结晶一次，得齐墩果酸2.94kg，经HPLC检测，齐墩果酸样品的纯度为97.46％。实施例3粉碎后土人参根茎400kg与石油醚1000kg进行室温浸提，过滤去除石油醚浸提液，得土人参残渣。土人参残渣加入1000L乙醇进行50～70℃回流提取3h，过滤除渣得900L滤液Ⅰ，取滤液Ⅰ在60℃下进行真空或减压浓缩，获得50L浓缩液Ⅰ。将浓缩液Ⅰ用80L乙酸乙酯进行萃取，得到萃取液Ⅰ。将萃取液Ⅰ上LSA-20大孔树脂柱进行吸附，用三倍至五倍柱体积的85％乙醇水溶液进行柱洗脱，得到250L洗脱液Ⅰ。将洗脱液Ⅰ在55℃下进行真空或减压浓缩至20L，室温静置40min，过滤，得滤渣即为齐墩果酸粗品8.45kg。向齐墩果酸粗品加入15L丙酮在40℃下加热15min，趁热陶瓷膜过滤，滤液放置冰箱中过夜，结晶，重结晶一次，得齐墩果酸6.28kg，经HPLC检测，齐墩果酸样品的纯度为97.58％。