二氢香豆素类衍生物及其制备方法和应用与流程

本发明涉及医药领域，具体为一类二氢香豆素类衍生物及其作为单胺氧化酶抑制剂和神经保护剂的应用。

背景技术：

香豆素是一类天然存在的活性物质，有着广泛的生物活性，如抗炎、抗肿瘤、肝脏保护、抗HIV、抗菌、抗糖尿病和抗哮喘等。

帕金森病又称特发性帕金森病(Parkinson’s disease，PD)，简称Parkinson病，也称为震颤麻痹(paralysis agitans，shaking palsy)，是中老年人常见的神经系统变性疾病，也是中老年人最常见的锥体外系疾病。65岁以上人群患病率为1000/10万，随年龄增高，男性稍多于女性。该病的主要临床特点：静止性震颤、动作迟缓及减少、肌张力增高、姿势不稳等为主要特征。

单胺氧化酶(monoamineoxidase,MAO,EC1141314)是一种类广泛分布在中枢和外周组织中的、调控单胺类神经递质类代谢和分布的重要酶，其作用为催化一些生物体产生的胺，使之氧化脱氨产生过氧化氢。根据酶对特定底物的反应性、氨基酸序列以及对抑制剂的敏感性将单胺氧化酶分为两种类型：单胺氧化酶A(MAO-A)和单胺氧化酶B(MAO-B)。单胺氧化酶A对底物血清素(5-HT)、去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)和抑制剂氯吉兰具有高亲和性；而单胺氧化酶B则对苯乙基胺(PEA)、苯甲胺和抑制剂司来吉兰具有高亲和性。由于其在调控中枢神经递质方面的重要性，单胺氧化酶抑制剂常常用于精神类疾病的治疗。其中，MAO-A多用于抗抑郁和抗焦虑治疗，而MAO-B则多用于抗帕金森和抗阿尔茨海默症治疗。单胺氧化酶抑制剂可分为可逆和不可逆抑制剂，像早期的不可逆抑制剂闷可乐、苯乙肼这些药物有很强的副作用。近些年来，MAO-B选择性抑制剂越来越受到关注，主要是MAO-B抑制剂可以降低脑内自由基生成，对中枢神经系统有保护作用，特别适用于PD、阿尔茨海默症等中枢神经系统退化性疾病的治疗。

本发明的目的是通过制备取代二氢香豆素类化合物，经生物活性检测发现它们具有极好的单胺氧化酶抑制活性，是一类高活性的选择性单胺氧化酶抑制剂，有潜力被开发为治疗中枢神经系统退化性疾病的药物。

技术实现要素：

本发明旨在提供一种二氢香豆素衍生物类的化合物及其制备方法。

本发明还提供了上述化合物作为药物的应用，药效学实验证明，本发明的化合物可作为单胺氧化酶抑制剂。

本发明的二氢香豆素衍生物类的化合物为式I的化合物，或者式I的化合物药学上可接受的盐：

其中R¹表示H、CH3、C2H5、OCH3、OC2H5、C6H5或NH2；R²表示H、CH3、C2H5、OCH3、OC2H5、C6H5或Br；R³表示H、CH3、C2H5、OCH3、OC2H5、F、Cl、Br或NO2；R⁴表示H、CH3、C2H5、OCH3、OC2H5、F、Cl、Br或NO2；R⁵表示H、CH3、C2H5、OCH3、OC2H5、F、Cl、Br或NO2；R⁶表示H、CH3、C2H5、OCH3、OC2H5、F、Cl、Br或NO2；R⁷表示H、CH3、C2H5、OCH3、OC2H5、F、Cl、Br或NO2；n＝1、2、3或4。

优选的，所述的R¹～R⁷为H，n＝1、2、3或4；或者，所述的R¹、R²为H，R³、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷中的至少一个为CH3、C2H5、OCH3、OC2H5、F、Cl、Br或NO2，其余为H，n＝1、2、3或4。

更进一步，所述的R¹～R⁷为H，n＝1、2、3或4；或者，所述的R¹、R²、R⁶、R⁷为H，R³、R⁴、R⁵中的一个为CH3、C2H5、OCH3、OC2H5、F、Cl、Br或NO2，其余为H，n＝1、2、3或4。

本发明的优选方案为：

(1)n＝1或2，R¹～R⁷为H；或者，

(2)n＝1，R³为F或CH3，R¹、R²、R⁴～R⁷为H；或者，

(3)n＝1，R⁴为Br，R¹～R³、R⁵～R⁷为H。

本发明最优选的二氢香豆素衍生物化合物为结构如式I-4所示的化合物及其药学上可接受的盐，即n＝1，R³为F，R¹、R²、R⁴～R⁷为H。

所述药学上可接受的盐是式I化合物的盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、磷酸盐、甲磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐、萘磺酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、乳酸盐、丙酮酸盐、乙酸盐、马来酸盐、琥珀酸盐、富马酸盐、水杨酸盐、苯基乙酸盐、杏仁酸盐、碱性金属阳离子盐、碱土金属阳离子盐或铵阳离子盐。

本发明二氢香豆素衍生物化合物(式I)的制备方法如下：

R¹、R²、R³、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷和n的定义同前。化合物2为7-羟基二氢香豆素或取代7-羟基二氢香豆素。

具体步骤为：以7-羟基二氢香豆素或取代7-羟基二氢香豆素(化合物2)为原料，加入溴苄或取代溴苄(化合物3)，与有机溶剂混合后，回流反应6～12小时，取滤液去除溶剂，萃取、浓缩和纯化得到最终产物通式I化合物。

优选的，有机溶剂为乙腈、丙酮等。优选的，用体积比1:2～2:1的乙酸乙酯和水的混合液(优选为1:1)萃取，用柱层析纯化。优选的，所述的碱为无机碱碳酸盐如碳酸钾或碳酸钠。

本发明化合物都可以用上述或类似上述的制备方法制备得到，根据取代基的不同和取代基位置的不同选用相应的原料即可。

化合物2的合成工艺为：将原料不同取代的7-羟基香豆素(化合物1)溶解于醇(优选为无水乙醇)，加入催化剂(优选为Pd/C)，在H2气氛下室温反应6-8小时，监测反应结束后，抽滤除去Pd/C，乙醇重结晶得中间体2。

以7-羟基香豆素或取代的7-羟基香豆素为起始原料，经过加氢还原反应、亲核取代反应以及后处理各单元过程，可获得本发明式I二氢香豆素衍生物类的化合物。

本发明所述的二氢香豆素类衍生物对单胺氧化酶有强的抑制活性，且是选择性MAO-B的抑制剂，其IC50值在纳摩尔级别，选择性指数高；由动力学和可逆性实验证明此类二氢香豆素类衍生物对MAO-B是竞争性、可逆性抑制剂，故其可以作为单胺氧化酶抑制剂治疗相关神经性疾病。

本发明的二氢香豆素类衍生物可用于制备单胺氧化酶B抑制剂或治疗中枢神经系统退化性疾病的药物。

本发明的二氢香豆素类衍生物可用于制备治疗帕金森病或阿尔茨海默症的药物。

本发明还公开了一种药物组合物，其活性成分至少包括通式I的化合物或其药学上可接受的盐，还含有制剂学上可接受的载体。在治疗过程中，可制备成口服剂和注射剂等常用剂型，口服剂型包括口服液、颗粒剂、片剂(口腔崩解片、缓释片等)、胶囊剂等。

本发明的化合物临床所用剂量为0.001mg～1mg/kg/天，也可根据病情的轻重或剂型的不同偏离此范围。

与已有技术相比，本发明的有益效果体现在：

(1)本发明的合成路线的工艺简单易行，且反应收率高；

(2)本发明的化合物对单胺氧化酶具有良好的抑制活性及选择性；在制备单胺氧化酶B抑制剂、治疗中枢神经系统退化性疾病的药物等方面有良好的应用前景；

(3)本发明可对筛选得到的较优化合物结构进一步优化，从而提高其对单胺氧化酶的抑制活性及选择性。

附图说明

图1是化合物I-4抑制MAO-B的可逆性研究结果，为不同稀释倍数浓度下化合物I-4对MAO-B的活性抑制

图2是化合物I-4抑制MAO-B的动力学研究结果

具体实施方式

化合物I的制备步骤如下。

实施例1中间体7-羟基二氢香豆素(2)的制备

在100mL单颈瓶中加入7-羟基香豆素(5.0mmol)、10％Pd/C(0.15g)和乙酸溶液25mL，搅拌至固体全部溶解，充满氢气(3.4bar)，反应液于50℃搅拌17h。反应结束后，冷却，抽滤，滤饼用乙酸溶液洗涤，滤液减压蒸去溶剂得化合物2，收率96.5％。

¹H NMR(500MHz,DMSO):δ11.92(s,1H),10.97(s,1H),9.17(s,1H),7.42(d,J＝7.5Hz,1H),7.29(t,J＝8.0Hz,1H),7.10(t,J＝8.0Hz,1H),7.00(t,J＝7.5Hz,1H),4.22(q,J＝5.0Hz,1H),3.66(dd,J＝10.5Hz,J＝5.0Hz,1H),3.14(dd,J＝10.5Hz,J＝2.5Hz,1H),2.85(m,1H),1.56(d,J＝5.0Hz,3H).

实施例2

7-(苄氧基)二氢香豆素(I-1)的制备：即n＝1，R¹～R⁷为H。

在100mL单颈瓶中加入7-羟基二氢香豆素(5.0mmol)、K2CO3(0.15g)和乙腈溶液25mL，搅拌下加入溴苄，回流反应12h。反应结束后，冷却，抽滤，滤液减压蒸去溶剂，加入体积比1：1的乙酸乙酯/水的混合液萃取三次，乙酸乙酯层加无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，柱层析得油状物，收率85.5％。

¹H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.44–7.30(m,5H),7.08(d,J＝8.3Hz,1H),6.73(dd,J＝8.3,2.5Hz,1H),6.68(d,J＝2.5Hz,1H),5.05(s,2H),2.93(t,J＝7.2Hz,2H),2.77(dd,J＝8.4,6.2Hz,2H).¹³C-NMR(100MHz,CDCl3)δ168.60,158.77,152.67,136.49,128.67,128.67,128.57,128.48,128.14,128.14,127.46,114.69,111.36,103.58,70.31,29.46,23.03.

实施例3

7-(苯乙氧基)二氢香豆素(I-2)的制备：即n＝2，R¹～R⁷为H。

合成过程同实例2，区别在于，以(2-溴乙基)苯代替溴苄，收率80.9％。

¹H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.35–7.23(m,4H),7.06(d,J＝8.3Hz,1H),6.64(dd,J＝8.3,2.5Hz,1H),6.61(d,J＝2.5Hz,1H),6.44(td,J＝4.5,2.4Hz,1H),4.14(dd,J＝7.1,3.9Hz,2H),3.10–3.06(m,2H),2.93(t,J＝7.2Hz,2H),2.77(d,J＝7.8Hz,2H).¹³C-NMR(100MHz,CDCl3)δ168.64,158.87,152.78,138.00,128.99,128.99,128.54,128.54,128.47,126.60,114.48,111.02,103.27,68.95,35.36,29.71,23.02.

实施例4

7-(苯丙氧基)二氢香豆素(I-3)的制备：即n＝3，R¹～R⁷为H。

合成过程同实例2，区别在于以1-溴-3-苯基丙烷代替溴苄，收率87.3％。

¹H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.28(m,1H),7.22–7.19(m,3H),6.97(d,J＝8.2Hz,1H),6.68–6.57(m,1H),6.42(m,2H),3.92(dd,J＝6.3,3.8Hz,2H),2.77(m,6H),2.11–2.06(m,2H).¹³C-NMR(100MHz,CDCl3)δ179.13,159.04,154.88,141.54,128.52,128.52,128.46,128.42,128.42,126.02,111.04,107.40,103.15,67.27,34.76,29.51,23.92,23.01.

实施例5

7-(2-氟苄氧基)二氢香豆素(I-4)的制备：即n＝1，R³为F，R¹、R²、R⁴～R⁷为H。合成过程同实例2，区别在于以2-氟溴苄代替溴苄，收率84.3％。

¹H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.48(m,1H),7.32(m,1H),7.17(td,J＝7.5,1.0Hz,1H),7.10(dt,J＝8.6,1.8Hz,2H),6.74(dd,J＝8.3,2.5Hz,1H),6.70(d,J＝2.5Hz,1H),5.11(s,2H),2.94(t,J＝7.2Hz,2H),2.77(dd,J＝8.2,6.0Hz,2H).¹³C-NMR(100MHz,CDCl3)δ168.50,160.47(d,¹JCF＝245.38Hz),158.54,152.71,129.91(d,³JCF＝8.61Hz),129.70,128.53,124.33,123.61,115.45(d,²JCF＝21.58Hz),114.95,111.16,103.66,64.07,29.44,23.04.

实施例6

7-(3-氟苄氧基)二氢香豆素(I-5)的制备：即n＝1，R⁴为F，R¹～R³、R⁵～R⁷为H。合成过程同实例2，区别在于以3-氟溴苄代替溴苄，收率80.9％。

¹H-NMR(400MHz,CDCl3)δ7.35(td,J＝7.9,5.9Hz,1H),7.16(dd,J＝17.4,8.6Hz,2H),7.09(d,J＝8.4Hz,1H),7.04–6.97(m,1H),6.72(dd,J＝8.3,2.5Hz,1H),6.66(d,J＝2.5Hz,1H),5.04(s,2H),2.94(t,J＝7.2Hz,2H),2.77(dd,J＝8.3,6.3Hz,2H).¹³C-NMR(100MHz,CDCl3)δ168.51,163.02(d,¹JCF＝245.32Hz),158.45,152.70,139.13(d,³JCF＝7.86Hz),130.23(d,³JCF＝8.28Hz),128.57,122.70,115.09,114.92(d,³JCF＝9.03Hz),114.19(d,²JCF＝22.58Hz),111.32,103.56,69.46,29.42,23.02.

实施例7

7-(4-氟苄氧基)二氢香豆素(I-6)的制备：即n＝1，R⁵为F，R¹～R⁴、R⁶、R⁷为H。合成过程同实例2，区别在于以4-氟溴苄代替溴苄，收率80.5％。

¹H-NMR(400MHz,CDCl3)δ7.39(dd,J＝8.7,5.4Hz,2H),7.07(t,J＝8.6Hz,3H),6.71(dd,J＝8.3,2.5Hz,1H),6.66(d,J＝2.5Hz,1H),5.00(s,2H),2.94(t,J＝7.2Hz,2H),2.77(dd,J＝8.4,6.2Hz,2H).¹³C-NMR(100MHz,CDCl3)δ168.50,162.56(d,¹JCF＝245.62Hz),158.58,152.69,132.26,129.34,129.34(d,³JCF＝9.17Hz),128.53,115.59,115.59(d,²JCF＝22.57Hz),114.85,111.33,103.55,69.64,29.44,23.03.

实施例8

7-(2-溴苄氧基)二氢香豆素(I-7)的制备：即n＝1，R³为Br，R¹、R²、R⁴～R⁷为H。合成过程同实例2，区别在于以2-溴溴苄代替溴苄，收率84.7％。

¹H-NMR(400MHz,CDCl3)δ7.51(d,J＝8.4Hz,2H),7.29(d,J＝8.4Hz,2H),7.08(d,J＝8.3Hz,1H),6.70(dd,J＝8.3,2.5Hz,1H),6.65(d,J＝2.5Hz,1H),5.00(s,2H),2.94(t,J＝7.2Hz,2H),2.77(dd,J＝8.4,6.2Hz,2H).¹³C-NMR(100MHz,CDCl3)δ168.46,158.46,152.70,135.53,131.80,131.80,129.05,129.05,128.55,122.06,114.94,111.31,103.58,69.53,29.42,23.03.

实施例9

7-(3-溴苄氧基)二氢香豆素(I-8)的制备：即n＝1，R⁴为Br，R¹～R³、R⁵～R⁷为H。合成过程同实例2，区别在于以3-溴溴苄代替溴苄，收率85.9％。

¹H NMR(400MHz,CDC l3)δ7.57(dd,J＝8.0,0.9Hz,1H),7.52(d,J＝6.5Hz,1H),7.32(t,J＝7.0Hz,1H),7.20–7.14(m,1H),7.02–6.97(m,1H),6.57–6.50(m,2H),5.08(s,2H),2.84(t,J＝6.3Hz,2H),2.73(t,J＝6.3Hz,2H).¹³C-NMR(100MHz,CDCl3)δ167.66,158.47,155.00,136.34,132.60,131.11,129.19,128.87,127.56,119.69,111.22,107.62,103.65,69.47,29.71,23.91.

实施例10

7-(4-溴苄氧基)二氢香豆素(I-9)的制备：即n＝1，R⁵为Br，R¹～R⁴、R⁶、R⁷为H。合成过程同实例2，区别在于以4-溴溴苄代替溴苄，收率88.4％。

¹H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.58(s,1H),7.46(d,J＝7.9Hz,1H),7.34(d,J＝7.9Hz,1H),7.27(d,J＝5.4Hz,1H),7.09(d,J＝8.3Hz,1H),6.71(dd,J＝8.3,2.5Hz,1H),6.66(d,J＝2.5Hz,1H),5.01(s,2H),2.94(t,J＝7.2Hz,2H),2.77(dd,J＝8.4,6.2Hz,2H).¹³C-NMR(100MHz,CDCl3)δ168.47,158.43,152.71,138.84,131.20,130.30,130.22,128.58,125.81,122.77,115.01,111.30,103.56,69.37,29.42,23.03.

实施例11

7-(2-甲基苄氧基)二氢香豆素(I-10)的制备：即n＝1，R³为CH3，R¹、R²、R⁴～R⁷为H。合成过程同实例2，区别在于以2-甲基溴苄代替溴苄，收率84.6％。

¹H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.38(d,J＝7.0Hz,1H),7.24(m,2H),7.09(d,J＝8.3Hz,1H),6.74(dd,J＝8.3,2.5Hz,1H),6.70(d,J＝2.5Hz,1H),5.01(s,2H),2.94(t,J＝7.2Hz,2H),2.77(dd,J＝8.2,6.0Hz,2H),2.37(s,3H).¹³C-NMR(100MHz,CDCl3)δ168.02,158.38,152.15,136.15,133.75,129.96,128.06,127.95,125.55,114.15,110.74,102.95,68.40,28.93,22.50,18.33.

实施例12

7-(3-甲基苄氧基)二氢香豆素(I-11)的制备：即n＝1，R⁴为CH3，R¹～R³、R⁵～R⁷为H。合成过程同实例2，区别在于以3-甲基溴苄代替溴苄，收率88.9％。

¹H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.30–7.19(m,4H),7.14(d,J＝7.4Hz,1H),7.08(d,J＝8.3Hz,1H),6.73(dd,J＝8.3,2.5Hz,1H),6.68(d,J＝2.5Hz,1H),5.00(s,2H),2.93(t,J＝7.2Hz,2H),2.77(dd,J＝8.1,5.9Hz,2H),2.37(s,3H).¹³C-NMR(100MHz,CDCl3)δ168.60,158.84,152.66,138.39,136.39,128.91,128.57,128.46,128.21,124.57,114.62,111.36,103.56,70.39,29.47,23.03,21.42.

实施例13

7-(4-甲基苄氧基)二氢香豆素(I-12)的制备：即n＝1，R⁵为CH3，R¹～R⁴、R⁶、R⁷为H。合成过程同实例2，区别在于以4-甲基溴苄代替溴苄，收率85.8％。

¹H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.30(d,J＝8.0Hz,2H),7.19(d,J＝7.9Hz,2H),7.07(d,J＝8.3Hz,1H),6.72(dd,J＝8.3,2.5Hz,1H),6.67(d,J＝2.5Hz,1H),5.00(s,2H),2.93(t,J＝7.2Hz,2H),2.76(dd,J＝8.2,6.0Hz,2H),2.36(s,3H).¹³C-NMR(100MHz,CDCl3)δ168.59,158.83,152.65,137.96,133.44,129.34,129.34,128.43,127.60,127.60,114.57,111.37,103.58,70.26,29.48,23.04,21.21.

实施例14

7-(3-硝基基苄氧基)二氢香豆素(I-13)的制备：即n＝1，R⁴为NO2，R¹～R³、R⁵～R⁷为H。合成过程同实例2，区别在于以3-硝基溴苄代替溴苄，收率85.2％。

¹H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.31(s,1H),8.20(d,J＝8.2Hz,1H),7.76(d,J＝7.7Hz,1H),7.58(t,J＝7.9Hz,1H),7.12(d,J＝8.4Hz,1H),6.74(dd,J＝8.4,2.5Hz,1H),6.67(d,J＝2.5Hz,1H),5.14(s,2H),2.95(t,J＝7.2Hz,2H),2.78(dd,J＝8.3,6.2Hz,2H).¹³C-NMR(100MHz,CDCl3)δ168.34,158.10,152.76,148.51,138.73,133.08,129.68,128.73,123.08,122.14,115.38,111.28,103.54,68.94,29.37,23.04.

实施例15

7-(4-硝基基苄氧基)二氢香豆素(I-14)的制备：即n＝1，R⁵为NO2，R¹～R⁴、R⁶、R⁷为H。合成过程同实例2，区别在于以4-硝基溴苄代替溴苄，收率86.8％。

¹H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.25(d,J＝8.8Hz,2H),7.60(d,J＝8.8Hz,2H),7.11(d,J＝8.4Hz,1H),6.72(dd,J＝8.3,2.5Hz,1H),6.66(d,J＝2.5Hz,1H),5.16(s,2H),2.95(t,J＝7.2Hz,2H),2.78(dd,J＝8.4,6.2Hz,2H).¹³C-NMR(100MHz,CDCl3)δ168.30,158.06,152.77,147.68,143.95,128.73,127.62,127.62,123.90,123.90,115.40,111.20,103.56,68.93,29.36,23.03.

实施例16

下面是本发明化合物的部分药理学实验及数据：

一、单胺氧化酶抑制活性

实验方法：按照文献报道的方法测试单胺氧化酶抑制活性。将化合物溶解于DMSO中，依次用缓冲液稀释至所需浓度(控制所配制溶液中的DMSO含量低于1％)。在黑色96孔酶标板中依次加入80μl酶(用缓冲液稀释至0.8mg/ml)，20μl不同浓度化合物，37℃孵育15分钟后，加入终浓度为200μM Amplex Red溶液、1U/mL辣根过氧化物酶、1mM酪胺溶液。在激发光波长545nm和吸收光波长590nm下测定荧光吸收。抑制率的计算为:[1-F实验组/F空白组]*100％。选择化合物的五至七个浓度测定酶的抑制率(0.001-100μM)并以该化合物摩尔浓度的负对数与酶抑制率进行线性回归，求得50％抑制时的摩尔浓度即为该化合物的IC50值。每个实验重复三次，实验结果表达为平均值±SEM。

表1本发明化合物单胺氧化酶抑制活性和选择性指数

^a选择性指数＝IC50(MAO-A)/IC50(MAO-B)

^b100μM下抑制率

从表1可知，本发明化合物对MAO-B具有显著地选择性抑制作用，活性数值在纳摩尔到亚纳摩尔级别；而优选的化合物I-4对单胺氧化酶-B的抑制活性(IC50＝0.37nM)，约为阳性药异丙烟肼(IC50＝8540nM)的23081倍，对单胺氧化酶-B有显著选择性(选择性指数>270270)。说明本发明所公开的化合物对单胺氧化酶B具有好的选择性抑制作用。

二、可逆性

为了研究目标化合物同MAO-B的作用模式，用稀释法对活性较好的化合物I-4进行了可逆性研究。酶的可逆性抑制剂与酶孵育后，酶的活性降低，而当抑制剂与酶的复合物成倍稀释后，酶的活性会相应恢复；不可逆抑制剂与酶的复合物稀释后，酶的活性不会相应恢复。化合物I-4在10*IC50和100*IC50浓度时与MAO-B在30min内孵育，然后将化合物稀释100倍，相应地得到0.1*IC50和1*IC50浓度化合物，再按照上述单胺氧化酶的测定方法进行酶的活性测定。结果如图1所示：化合物I-4对MAO-B的活性抑制与稀释倍数有关，是可逆性抑制剂。

三、化合物I-4抑制单胺氧化酶-B的动力学研究

对化合物I-4进行酶动力学研究。化合物I-4的三个不同浓度选作动力学研究分别为0.75、0.50和0.25nM。往96空黑板中依次加入80μl酶(用缓冲液稀释至)，20μl不同浓度化合物，37℃孵育15分钟后，加入终浓度为200μMAmplex Red溶液、1U/mL辣根过氧化物酶以及五个不同浓度(0.05-1.5mM)酪胺溶液。在激发光波长545nm和吸收光波长590nm下测定荧光吸收。以浓度的倒数为X轴和吸光度变化速率为Y轴作图，做出第一条双倒数曲线。依此方法，加入0.25nM、0.50nM、0.75nM和0浓度的化合物，做出第二、三、四双倒数曲线，以双倒数曲线的交点判断化合物同酶的作用模式。

结果见图2，图2表明：本发明所公开的化合物随着浓度的增加，Lineweaver-Burk的双倒数曲线的斜率和截距也不断增加，同时相交于x-轴。这种模式显示，化合物为非竞争性抑制剂，说明化合物I-4不但结合于酶的催化中心，还能同时结合于酶的催化亚活性位点。

实施例19

化合物I-4颗粒剂的制备：按处方量称取2g化合物I-4、加适量75％的乙醇溶解，搅匀，静止过夜，过滤，滤液减压回收乙醇，浓缩至膏状，加入10倍量的糖粉，混合均匀，假日70％乙醇少许，制成软材，过14目筛制粒，湿颗粒于60℃干燥，干颗粒过65目筛去细粉，分装，密封，包装即得。

实施例20

化合物I-4口腔崩解片的制备：

将2.5g微晶纤维素、5g甘露醇、2g化合物I-4混合均匀，以80％乙醇制软材，用30目筛制粒，60℃烘干，20目筛整粒，加入交联聚乙烯吡咯烷酮5g、低取代羟丙基甲基纤维素2g、阿司帕坦4g混匀，加入硬脂酸镁1g混合压片，即可。

实施例21

化合物I-4缓释片的制备：

按处方量称取2g化合物I-4、3.8g丙烯酸树脂L30D-55、乳糖2.5g、2.5g羟丙甲纤维素K100M。混匀后加入80％乙醇适量制软材。过18目筛制粒，40℃干燥1h后过16目筛整粒。加入硬脂酸镁，混匀，采用直径6.5mm的浅凹冲压片，即可。

实施例22

化合物I-4胶囊的制备：

按处方量称取2g化合物I-4，淀粉5g，微晶纤维素5g，混合后过筛，以10％的羧甲基淀粉钠为粘合剂制湿颗粒，过20目筛，干燥。用18目筛整粒，装入胶囊。

实施例23

化合物I-4口服液的制备：

在60℃水浴温度条件下，30g羟丙级-β-环糊精的水溶液与24ml 1,2-丙二醇搅拌混合均匀，加入1.0g化合物I-4，滴加稀盐酸磁力搅拌至完全透明澄清，继续搅拌1.5小时，按处方量加入6.0g山梨醇、0.02g糖精钠、0.05g红果香精，适宜浓度的氢氧化钠溶液调节pH值至1.5-2.5，灌装，灭菌。

实施例24

化合物I-4注射剂的制备：

按处方量称取Solutol HS 15 16g与无水乙醇6g混合均匀，再加入油酸乙酯混匀，精密称取化合物I-4 2g置容器中，加入以上混合乳化剂和油相混合物定容，超声，充分混匀，过滤分装至棕色西林瓶，充氮密封即得。