本发明涉及驯化成悬浮培养的粘附型细胞的制备方法。此外，本发明涉及粘附型上皮细胞的上皮间叶转化的诱导方法。
背景技术：
：近年来，代替由低分子化合物形成的医药品，副作用少的生物医药品的研究盛行。生物医药品为通过基因重组技术所制造的重组医药品。例如，作为重组医药品，已知将用于癌治疗、风湿治疗的抗体、作为用于增加红血球的激素的促红细胞生成素(epo)等蛋白质作为成分的重组医药品。然而，重组医药品有时用于治疗的给药量多且用于生产的费用高，还没有充分普及。因此，提高生产率成为一个问题。重组医药品可通过例如下述方法生产：以在cho(中国仓鼠的卵巢；chinesehamsterovary)细胞等粘附型细胞中导入目标蛋白质的基因、在悬浮状态下进行增殖的方式，制备重组cho细胞，在该重组cho细胞内使目标蛋白质生物合成。通常，细胞在悬浮培养系统中粘附型细胞的平均倍增时间变迟。因此，为了提高增殖能力需要驯化成适于悬浮培养环境的操作。作为使粘附型细胞驯化成悬浮培养的方法，例如专利文献1中记载了下述方法：通过将编码目标蛋白质的基因和具有二氢叶酸还原酶基因的质粒向cho细胞中进行基因导入，将得到的重组cho细胞在与通常相比细胞密度低的条件下反复进行培养，从而将重组cho细胞在悬浮状态下进行培养。然而，由于该方法为反复进行培养直到使cho细胞成为悬浮状态的方法，因此需要8周左右的长时间。此外，当传代培养时间变长时，会增加对基因的变异、细胞的变质等状态进行管理、确认的劳力和时间以及费用。此外，专利文献2中记载了通过在二氢叶酸还原酶基因缺陷型细胞株中重组人抗凝血酶基因和二氢叶酸还原酶基因，使用中空纤维型培养装置培养成为了悬浮状态的重组cho细胞，从而一边使该细胞悬浮一边制造人抗凝血酶的方法。然而，在该方法中，由于安装有中空纤维的装置复杂且价格昂贵，因此有费用方面的问题。此外，当为了大量培养而使中空纤维的尺寸变大时，在中空纤维两端的培养基交换不均等，培养基容易变得不均匀。结果，由于培养基的ph等发生变化、中空纤维内的细胞受到压力，因此目标蛋白质的生产率可能降低。此外，上皮间叶转化(epithelial-mesenchymaltransition(transformation)；emt)为在发育、创伤治愈以及癌的浸润、转移等生命现象中所观察到的上皮细胞的性质转化为间叶细胞的性质的过程。通过上皮间叶转化从而细胞表达的某种蛋白质发生变化。将这样的蛋白质称为上皮间叶转化标记，基于上皮间叶转化的诱导从而存在表达量增加的上皮间叶转化标记(上调，upregulation)和表达量减少的上皮间叶转化标记(下调，downregulation)。例如，作为表达量增加的上皮间叶转化标记，已知n-钙粘蛋白、波形蛋白，作为表达量减少的上皮间叶转化标记，已知e-钙粘蛋白、细胞角蛋白(专利文献3)。此外，由于上皮间叶转化会被tgf等生长因子诱导，因此tgf等生长因子作为上皮间叶转化诱导因子而为人所知(非专利文献1)。现有技术文献专利文献专利文献1：日本特开平2-009388号公报；专利文献2：日本特开2005-073509号公报；专利文献3：wo2006/101925号单行本。非专利文献非专利文献1：massaguej,cell,2008年7月，134卷，2号，215-230页。技术实现要素：发明要解决的问题如上所述，虽然此前提出了若干使粘附型细胞驯化成悬浮培养的技术，但现状期望可以更高效且更廉价地驯化的方法。本发明是鉴于这样的实际情况而完成的，目的在于提供：驯化成悬浮培养的粘附型细胞的制备方法，该方法不需要对粘附型细胞进行特殊的操作，在悬浮状态下也不会死亡；使用了以该方法制备的驯化成悬浮培养的粘附型细胞的、核酸或蛋白质的生产方法；由含脂环结构聚合物成型体形成的粘附型细胞的悬浮培养驯化促进剂；用于使粘附型细胞驯化成悬浮培养的含脂环结构聚合物成型体的使用；以及粘附型细胞的悬浮培养驯化用容器。此外，本发明的目的在于提供：仅以使粘附型上皮细胞接触的操作而诱导上皮间叶转化的方法；使用了以该方法被上皮间叶转化了的细胞的核酸或蛋白质的生产方法；由含脂环结构聚合物成型体形成的粘附型上皮细胞的上皮间叶转化诱导剂；用于对粘附型上皮细胞进行上皮间叶转化诱导的含脂环结构聚合物成型体的使用；以及粘附型上皮细胞的上皮间叶转化诱导用容器。用于解决问题的方案本发明人为了解决上述问题进行了深入的研究，结果发现，通过使粘附型培养细胞以与含脂环结构聚合物成型体接触的状态进行培养，从而能够使原本需要作为支架的细胞外基质的粘附型细胞在悬浮培养系统中增殖，即能够驯化粘附型细胞，从而完成了涉及粘附型细胞的悬浮驯化的本发明。进而，本发明人等发现该细胞通过与含脂环结构聚合物成型体接触而可转化为间叶系细胞那样的性质，以至完成了涉及粘附型上皮细胞的上皮间叶转化诱导的本发明。由此，根据本发明可提供：(1)～(5)的粘附型细胞的制备方法，(6)、(15)的由外来基因编码的核酸或蛋白质的生产方法，(7)的粘附型细胞的悬浮培养驯化促进剂，(8)、(17)的含脂环结构聚合物成型体的使用，(9)、(10)的悬浮培养驯化用容器，(11)～(14)的上皮间叶转化的诱导方法，(16)的粘附型上皮细胞的上皮间叶转化诱导剂，(18)、(19)的粘附型上皮细胞的上皮间叶转化诱导用容器。(1)一种驯化成悬浮培养的粘附型细胞的制备方法，具有将粘附型细胞在与含脂环结构聚合物成型体接触的状态下进行培养的工序。(2)根据(1)所述的粘附型细胞的制备方法，其中，上述粘附型细胞为表达外来基因的经基因重组的粘附型细胞。(3)根据(2)所述的粘附型细胞的制备方法，其中，上述外来基因为编码蛋白质的基因。(4)根据(1)～(3)中任一项所述的粘附型细胞的制备方法，其中，上述粘附型细胞为来自动物的细胞。(5)根据(4)所述的粘附型细胞的制备方法，其中，上述来自动物的细胞为cho细胞。(6)一种由外来基因编码的核酸或蛋白质的生产方法，基于以下方式进行：通过上述(1)～(5)中任一项所述的粘附型细胞的制备方法而培养上述驯化成悬浮培养的粘附型细胞。(7)一种悬浮培养驯化促进剂，由含脂环结构聚合物成型体形成。(8)一种含脂环结构聚合物成型体的使用，用于使粘附型细胞驯化成在液体培养基中悬浮培养。(9)一种粘附型细胞的悬浮培养驯化用容器，至少底面由含脂环结构聚合物成型体形成。(10)根据(9)所述的悬浮培养驯化用容器，其中，上述含脂环结构聚合物为饱和降冰片烯系聚合物。(11)一种上皮间叶转化的诱导方法，具有将粘附型上皮细胞在与含脂环结构聚合物成型体接触的状态下进行培养的工序。(12)根据(11)所述的上皮间叶转化的诱导方法，其中，上述粘附型上皮细胞为表达外来基因的经基因重组的粘附型细胞。(13)根据(11)或(12)所述的上皮间叶转化的诱导方法，其中，上述粘附型上皮细胞为来自动物的细胞。(14)根据(13)所述的上皮间叶转化的诱导方法，其中，上述来自动物的细胞为cho细胞。(15)一种由外来基因编码的核酸或蛋白质的生产方法，基于以下方式进行：通过上述(12)～(14)中任一项所述的上皮间叶转化的诱导方法而培养经上皮间叶转化的粘附型细胞。(16)一种粘附型上皮细胞的上皮间叶转化诱导剂，其由含脂环结构聚合物成型体形成。(17)一种含脂环结构聚合物成型体的使用，用于对粘附型上皮细胞进行上皮间叶转化诱导。(18)一种粘附型上皮细胞的上皮间叶转化诱导用容器，至少底面由含脂环结构聚合物成型体形成。(19)根据(18)所述的上皮间叶转化诱导用容器，其中，上述含脂环结构聚合物为饱和降冰片烯系聚合物。附图说明图1为表示根据本发明的方法进行了前培养的产生epo的cho细胞的细胞数计测结果的图。图2为表示将以根据本发明的方法制备的驯化成悬浮培养的cho细胞作为主成分的前培养后的全部的细胞在悬浮培养系统中进行培养时的、相对于经过天数的总细胞数的图。图3为表示根据使用本发明的方法在悬浮培养系统中培养的总细胞数据计算的、培养第1天～第3天(活细胞的增殖阶段)的、各前培养试样的平均倍增时间的图。具体实施方式本发明的方法是粘附型细胞的制备方法，其特征在于通过将粘附型细胞在与含脂环结构聚合物成型体接触的状态下进行培养，从而使该粘附型细胞驯化成在液体培养基中悬浮培养。由于当粘附型细胞驯化成悬浮培养时，粘附型细胞适于培养环境，因此与将没有悬浮驯化的粘附型细胞进行悬浮培养时的平均倍增时间相比，驯化成悬浮培养的粘附型细胞的平均倍增时间变短。本发明的粘附型细胞没有特别限定，能够根据目的任意地进行选择。在本发明中，粘附型细胞是指在通常的培养条件下，通过粘附在细胞外基质从而能够生存和增殖的细胞。作为粘附型细胞可举出上皮细胞、成纤维细胞。此外，也可以是在这些细胞中插入有外来基因的经基因重组的粘附型细胞等实施了基因工程处理的细胞。作为粘附细胞的具体例子可举出cho细胞、vero细胞、nih3t3细胞、hek293细胞等。在这些中，从悬浮驯化的难易出发，优选cho细胞。在本发明中，可使用通过对该粘附型细胞进行使用了噬菌体、质粒的载体等的转导等，从而能够表达外来基因的粘附型细胞。另外，本发明的上皮间叶转化的诱导方法中使用的细胞为在上述粘附细胞之内分类为单层扁平上皮细胞、复层扁平上皮细胞、柱状上皮细胞、纤毛(多列纤毛)上皮细胞、移行上皮细胞、立方上皮细胞等的上皮细胞、具有与它们同样的形态的类上皮细胞。上述具体例子中，cho细胞、hek293细胞为上皮细胞的例子。外来基因能够根据目的任意地进行选择。具体而言，可举出：编码促红细胞生成素(以下称为“epo”)、干扰素(α，β，γ)、粒细胞集落刺激因子g-csf、白细胞介素、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子gm-csf、人生长激素、胰岛素、胰高血糖素hgf、凝血因子viii、人型抗体等细胞因子、激素这样的生理活性蛋白质等蛋白质的基因；编码例如mir-369等、阻碍特定的靶细胞(例如癌细胞)的rna合成、作为下一代核酸医疗的候补而备受期待的mirna及其前体等核酸(rna)的基因等。当在这样的重组细胞的培养中使含脂环结构聚合物成型体接触时，生理活性蛋白质的生产量会增大。培养细胞时可使用液体培养基。作为液体培养基，通常可以使用具有ph缓冲作用、对细胞的渗透压合适、包含细胞的营养成分并且对细胞没有毒性的液体培养基。作为显示ph缓冲作用的成分，可举出tris-hcl、各种磷酸盐、各种碳酸盐等。液体培养基的渗透压调节通常使用调节了钾离子、钠离子、钙离子、葡萄糖等的浓度的水溶液来进行，以使其与细胞的渗透压大致相同。作为该水溶液，具体而言，可举出磷酸缓冲生理盐水、tris缓冲生理盐水、hepes缓冲生理盐水等生理盐水；乳酸林格氏液、醋酸林格氏液、碳酸氢林格氏液等林格氏液；等。作为细胞的营养成分，可举出氨基酸、核酸、维生素类、矿物质类等。作为液体培养基，能够利用rpmi-1640、ham、α-mem、dmem、emem、f-12、f-10、m-199等各种市售品。液体培养基中也能够配合添加剂。作为添加剂，可举出蛋白质等的诱导因子、具有分化诱导活性的低分子化合物、矿物质、金属、维生素成分等。作为使用的添加剂，可举出作用于细胞表面受体的配体、激动剂、拮抗剂；作用于核内受体的配体、激动剂、拮抗剂；胶原蛋白、纤连蛋白等细胞外基质；细胞外基质的一部分或模拟的化合物；作用于与细胞内的信息传导通路相关的蛋白质的成分；作用于细胞内的初级代谢或次级代谢的酶的成分；影响细胞内的核内或线粒体内的基因的表达的成分；能够与病毒载体等组合而导入细胞内的dna、rna；等。这些添加剂能够单独使用一种或组合两种以上使用。细胞的培养条件没有特别限定，能够根据使用的细胞、目的而适当确定。例如，能够使用固定维持在二氧化碳浓度为5％左右、温度为20℃～37℃的范围的、经加湿的恒温器，对细胞进行培养。在本发明中使用的含脂环结构聚合物成型体是将含脂环结构聚合物成型成任意的形状而成的含脂环结构聚合物成型体。含脂环结构聚合物为在主链和/或侧链中具有脂环结构的树脂。其中，从机械强度、耐热性等观点出发，优选在主链中含有脂环式结构。作为脂环结构，可举出饱和环状烃(环烷烃)结构、不饱和环状烃(环烯烃)结构等。从机械强度、耐热性等观点出发，优选为环烷烃结构、环烯烃结构，其中最优选具有环烷烃结构。构成脂环结构的碳原子数没有特别限制，通常为4～30个，优选为5～20个，更优选为5～15个。当构成脂环结构的碳原子数在该范围内时，机械强度、耐热性以及成型性的特性高度平衡，因此优选。含脂环结构聚合物中的具有脂环结构的重复单元的比例根据使用目的适当选择即可，通常为30重量％以上，优选为50重量％以上，更优选为70重量％。当含脂环结构聚合物中的具有脂环结构的重复单元的比例过少时，耐热性差，因此不优选。含脂环结构聚合物中的除具有脂环结构的重复单元以外的剩余部分没有特别限定，可根据使用目的而适当选择。作为含脂环结构聚合物的具体例子，可举出(1)降冰片烯系聚合物、(2)单环的环状烯烃系聚合物、(3)环状共轭二烯系聚合物、(4)乙烯基脂环式烃聚合物以及(1)～(4)的氢化物等。这些中，从耐热性、机械强度等观点出发，优选降冰片烯系聚合物的氢化物。(1)冰片烯系聚合物及其氢化物降冰片烯系聚合物是将作为具有降冰片烯骨架的单体的降冰片烯系单体进行聚合而成的，大致分为通过开环聚合而得到的降冰片烯系聚合物与通过加成聚合而得到的降冰片烯系聚合物。作为通过开环聚合而得到的降冰片烯系聚合物，可举出降冰片烯系单体的开环聚合物、降冰片烯单体与能够与其开环共聚的其它单体的开环聚合物、以及它们的氢化物等。作为通过加成聚合而得到的降冰片烯系聚合物，可举出降冰片烯系单体的加成聚合物、降冰片烯单体与能够与其共聚的其它单体的加成聚合物等。在这些中，从耐热性、机械强度等观点出发，优选降冰片烯系单体的开环聚合物氢化物、降冰片烯系单体与能够与其共聚的其它单体的加成聚合物、以及该加成聚合物的加氢物等饱和降冰片烯系聚合物，从细胞易于悬浮的方面出发，特别优选不具有极性基团的降冰片烯系聚合物。作为降冰片烯系单体，可举出：双环[2.2.1]庚-2-烯(常用名：降冰片烯)、5-甲基-双环[2.2.1]庚-2-烯、5,5-二甲基-双环[2.2.1]庚-2-烯、5-乙基-双环[2.2.1]庚-2-烯、5-乙叉基-双环[2.2.1]庚-2-烯、5-乙烯基-双环[2.2.1]庚-2-烯、5-丙烯基双环[2.2.1]庚-2-烯、5-甲氧羰基-双环[2.2.1]庚-2-烯、5-氰基双环[2.2.1]庚-2-烯、5-甲基-5-甲氧羰基-双环[2.2.1]庚-2-烯等2环式单体；三环[4.3.01,6.12,5]癸-3,7-二烯(常用名：二环戊二烯)、2-甲基二环戊二烯、2,3-二甲基二环戊二烯、2,3-二羟基二环戊二烯等3环式单体；四环[4.4.0.12,5.17,10]-3-十二碳烯(四环十二碳烯)、四环[4.4.0.12,5.17,10]-3-十二碳烯、8-甲基四环[4.4.0.12,5.17,10]-3-十二碳烯、8-乙基四环[4.4.0.12,5.17,10]-3-十二碳烯、8-亚乙基四环[4.4.0.12,5.17,10]-3-十二碳烯、8,9-二甲基四环[4.4.0.12,5.17,10]-3-十二碳烯、8-乙基-9-甲基四环[4.4.0.12,5.17,10]-3-十二碳烯、8-亚乙基-9-甲基四环[4.4.0.12,5.17,10]-3-十二碳烯、8-甲基-8-羧甲基四环[4.4.0.12,5.17,10]-3-十二碳烯、7,8-苯并三环[4.3.0.12,5]癸-3-烯(常用名：桥亚甲基四氢芴：也称为1,4-桥亚甲基-1,4,4a,9a-四氢芴)、1,4-桥亚甲基-8-甲基-1,4,4a,9a-四氢芴、1,4-桥亚甲基-8-氯-1,4,4a,9a-四氢芴、1,4-桥亚甲基-8-溴-1,4,4a,9a-四氢芴等4环式单体等。作为能够与降冰片烯系单体开环共聚的其它单体，可举出环己烯、环庚烯、环辛烯、1,4-环己二烯、1,5-环辛二烯、1,5-环癸二烯、1,5,9-环十二碳三烯、1,5,9,13-环十六碳四烯等单环的环烯烃系单体。这些单体也可以具有1种或2种以上的取代基。作为取代基，可举出烷基、亚烷基、芳基、甲硅烷基、烷氧基羰基、烷叉基等。作为能够与降冰片烯系单体加成共聚的其它单体，可举出乙烯、丙烯、1-丁烯、1-戊烯、1-己烯等碳原子数为2～20的α-烯烃系单体；环丁烯、环戊烯、环己烯、环辛烯、四环[9.2.1.02,10.03,8]十四碳-3,5,7,12-四烯(也称为3a,5,6,7a-四氢-4,7-桥亚甲基-1h-茚)等环烯烃系单体；1,4-己二烯、4-甲基-1,4-己二烯、5-甲基-1,4-己二烯、1,7-辛二烯等非共轭二烯系单体；等。在这些中，作为能够与降冰片烯单体加成共聚的其它单体，优选α-烯烃系单体，更优选乙烯。这些单体也可以具有1种或2种以上的取代基。作为取代基，可举出烷基、亚烷基、芳基、甲硅烷基、烷氧基羰基、烷叉基等。降冰片烯系单体的开环聚合物、或降冰片烯系单体与能够与其开环共聚的其它单体的开环聚合物能够在公知的开环聚合催化剂的存在下聚合单体成分而得到。作为开环聚合催化剂，能够使用例如由钌、锇等金属的卤化物和硝酸盐或乙酰丙酮化合物、以及还原剂形成的催化剂；或者，由钛、锆、钨、钼等金属的卤化物或乙酰丙酮化合物、以及有机铝化合物形成的催化剂。降冰片烯系单体的开环聚合物氢化物通常能够通过在上述开环聚合物的聚合溶液中添加包含镍、钯等过渡金属的公知的氢化催化剂，对碳-碳不饱和键进行氢化，从而得到。降冰片烯系单体的加成聚合物、或降冰片烯系单体与能够与其开环共聚的其它单体的加成聚合物可以在公知的加成聚合催化剂的存在下聚合单体成分而得到。作为加成聚合催化剂，能够使用例如由钛、锆或钒化合物以及有机铝化合物形成的催化剂。(2)单环的环状烯烃聚合物作为单环的环状烯烃系聚合物，能够使用例如环己烯、环庚烯、环辛烯等单环的环状烯烃系单体的加成聚合物。(3)环状共轭二烯系聚合物及其氢化物作为环状共轭二烯系聚合物及其氢化物，可举出例如将环戊二烯、环己二烯等环状共轭二烯系单体进行1,2-或1,4-加成聚合的聚合物及其氢化物等。(4)乙烯基脂环式烃聚合物及其氢化物作为乙烯基脂环式烃聚合物及其氢化物，可举出例如：乙烯基环己烯、乙烯基环己烷等乙烯基脂环式烃系单体的聚合物及其氢化物；苯乙烯、α-甲基苯乙烯等乙烯基芳香族系单体的聚合物的芳香环部分的氢化物；等。乙烯基脂环式烃聚合物也可以是这些单体和能够共聚的其它单体的共聚物。这些含脂环结构聚合物能够各自单独使用或组合2种以上使用。含脂环结构聚合物的分子量没有特别限制，以用环己烷溶液(聚合物不溶解的情况下使用甲苯溶液)的凝胶渗透色谱法测定的聚苯乙烯换算的重均分子量计，通常为5000以上，优选为5000～500000，更优选为8000～200000，特别优选为10000～100000。当重均分子量为该范围内时，机械强度和成型加工性高度平衡，因此优选。含脂环结构聚合物的玻璃化转变温度根据使用目的进行适当选择即可，通常为50～300℃，优选为100～280℃，特别优选为115～250℃，进一步优选为130～200℃。当玻璃化转变温度在该范围内时，耐热性和成型加工性高度平衡，因此优选。本发明中玻璃化转变温度基于jisk7121进行测定。此外，在含脂环结构聚合物中能够以通常采用的量添加通常用于热塑性树脂材料的配合剂，例如，软质聚合物，抗氧化剂，紫外线吸收剂，光稳定剂，近红外线吸收剂，脱模剂，染料、颜料等着色剂，增塑剂，防静电剂，荧光增白剂等配合剂。此外，在含脂环结构聚合物中也可以混合除软质聚合物以外的其它聚合物(以下，简称为“其它聚合物”)。相对于100重量份的含脂环结构聚合物，混合在含脂环结构聚合物中的其它聚合物的量通常为200重量份以下，优选为150重量份以下、更优选为100重量份以下。对含脂环结构聚合物配合的各种配合剂、其它聚合物的比例过多时细胞变得难以悬浮，因此优选均在不损害含脂环结构聚合物的性质的范围进行配合。与配合剂、其它聚合物的混合方法只要是配合剂在聚合物中充分分散的方法则没有特别限定。此外，配合顺序没有特别限制。作为配合方法，可举出例如：使用混合机、单轴混炼机、双轴混炼机、辊式混炼机、布拉本德混炼机、挤出机等将树脂在熔融状态下混炼的方法；使其溶解分散在适当的溶剂中后，通过凝固法、浇铸法、或直接干燥法而除去溶剂的方法等。在使用双轴混炼机的情况下，在混炼后，通常以熔融状态挤出为棒状，用线料切粒机切成适当的长度，使其颗粒化而使用。含脂环结构聚合物的成型方法，能够根据与细胞接触时使用的含脂环结构聚合物成型体的形状而任意地进行选择。作为成型方法，可举出例如：注塑成型法、挤出成型法、浇铸成型法、吹胀成型法、吹塑成型法、真空成型法、压制成型法、压缩成型法、旋转成型法、calender成型法、压延成型法、切削成型法、纺丝等，能够组合这些成型法，也能够在成型后根据需要进行延伸等后处理。细胞接触的含脂环结构聚合物成型体的形状没有特别限制，可举出板状、片状等，此外其表面可以是平坦的也可以具有凹凸形状。进而，可以是包含这样的形状的成型体作为构成部件的一部分的容器，也可以是整个由含脂环结构聚合物成型体构成的容器，还可以是由含脂环结构聚合物成型体与其它聚合物成型体的层叠体构成的容器。作为具体的容器的形状，可举出皿、板、袋、管、支架(scaffold)、杯、发酵缸(jarfermentor)等培养容器。而且，这样进行而得到的含脂环结构聚合物成型体为本发明的悬浮培养驯化促进剂，其具有促进粘附细胞驯化成悬浮培养的功能。在本发明中，在使成型体与培养细胞接触时，通常会对成型体进行灭菌处理。灭菌处理的方法没有特别限制，能够根据成型体的形状、使用的细胞而选择公知的灭菌处理法。例如可举出：高压蒸汽法、干热法等加热法；辐照γ射线、电子束等放射线的放射线法、辐照高频波的辐照法；接触氧化乙烯气体(eog)等气体的气体法；使用灭菌滤器的过滤法；等医疗领域通常采用的方法。这些中，从表面状态变化少的方面出发，优选气体法。本发明中使用的含脂环结构聚合物成型体只要至少细胞接触的面为含脂环结构聚合物形成即可，可以不是整个由含脂环结构聚合物形成的成型体。该含脂环结构聚合物成型体的与细胞接触的面的水接触角通常为85°以上且110°以下，优选为85°以上且105°以下，特别优选为85°以上且100°以下。在此，水接触角为如下的角：使用公知的全自动接触角计(在本申请实施例中使用协和界面科学公司制造“lcd-400s”)，用的圆形切割刀切取皿的底面，将试样的中心和以其为中央的边长为20mm的正方形的4个顶点共5处作为测定点，求出液滴的半径r和高度h，根据tanθ1＝h/r、θ＝2arctan(h/r)求得的θ(θ/2法)。此外，对于这些成型体表面，也能够进行等离子体处理、电晕放电处理、臭氧处理、紫外线照射处理等对培养容器实施的除灭菌目的以外的通常的表面处理。但是，从能够抑制实施这些表面处理操作而产生的费用；伴随表面处理的成型体表面的部分分解可能导致损害清洁性；细胞的悬浮化能或上皮间叶转化能可能降低；等理由出发，优选实质上不进行这些表面处理操作。在此，“实质上不进行这些表面处理操作”的意思是不进行这些表面处理操作，或者即使在进行表面处理操作的情况下，用下述式所定义的表面处理操作后的成型体表面(含环结构聚合物成型体的与细胞接触的面)的水接触角的变化比例[x(％)]为±20％、优选为±10％的范围内。[数学式1]x(％)＝[(表面处理操作后的水接触角)-(表面处理前的水接触角)]/(表面处理前的水接触角)×100将培养细胞在与含脂环结构聚合物成型体接触的状态下进行培养的方法只要根据含脂环结构聚合物成型体的形状采用任意的方法即可。通常使用培养皿状、袋状、瓶状等容器且至少一面由含脂环结构聚合物形成的容器，以细胞粘附在由含脂环结构聚合物形成的面的方式进行培养。接种初始时，粘附在由含脂环结构聚合物形成的面的细胞几天后自然剥离而以悬浮状态生存。即，该以悬浮状态生存的细胞为驯化成悬浮培养的粘附型细胞。根据本发明的方法而驯化成悬浮培养的粘附型细胞在直接继续进行静置培养时，有时会形成细胞块，但在通常的悬浮培养型系统中能够通过摇动进行解离而用作单独的驯化成悬浮培养的粘附型细胞。如上所述，本发明的培养方法由于即使是粘附型细胞也能够以悬浮状态高密度地进行培养，因此在使该细胞产生核酸、蛋白质时可优选利用。例如，在能够表达编码蛋白质的外来基因的重组细胞的培养中，通过使该细胞与含脂环式结构聚合物成型体接触，从而能够大量地产生蛋白质。像这样，在与含脂环结构聚合物成型体接触的粘附型细胞中，确认了tgf、hgf和fgf等上皮间叶转化因子的转录量增强且e-钙粘蛋白减少、n-钙粘蛋白与波形蛋白增加这样的上皮间叶转化标记的转录量的变化。即，如上所述，通过将粘附型上皮细胞在与含脂环结构聚合物成型体接触的状态下进行培养，从而能够对粘附细胞诱导上皮间叶转化。即，含脂环结构聚合物成型体作为上皮间叶转化剂发挥功能。在含脂环结构聚合物成型体为培养容器的情况下，能够不需要特别的操作而仅使用本容器进行培养来引发上皮间叶转化。实施例以下，举出实施例对本发明具体地说明，但是本发明并不限定于这些实施例。[制造例1]产生重组epo的cho细胞的制作在内含抗生素g418的耐性基因的载体plxrn(chlontech公司制造)的表达基因的插入位点插入epo基因序列，构建质粒plxrn-epo。构建的质粒中的epo基因通过分析其碱基序列从而进行确认。接着，通过将构建的质粒plxrn-epo和质粒pvsv-g(clontech公司制造)转导到作为包装细胞的gp293t细胞(clontech公司制造)中，从而制备含有epo基因的病毒粒子。另外，作为用于质粒plxrn-epo向细胞的导入操作的基因导入试剂，使用lipofectamine(invitorogen公司制造)，基因导入操作遵循厂商的手册。培养进行了基因导入操作的gp293t细胞，取出其培养上清液，用滤器过滤，加入8μg/ml的聚凝胺(santacruz公司制造)，由此制备包含保持epo基因的病毒粒子的培养上清液试样。接着，除去预先培养的cho细胞试样的培养液，添加上述的包含保持epo基因的病毒粒子的培养上清液试样，维持8小时培养，由此使保持epo基因的病毒粒子感染cho细胞。8小时的孵育之后，与cho细胞的培养基进行交换，进行产生重组epo的cho细胞的培养操作。病毒的感染是如下所述通过基因组pcr进行确认的。首先，使用instagene(biorad公司制造)从进行了感染操作的cho细胞提取出基因组，用pcr确认plxrn-epo序列被导入到基因组中。pcr中使用的引物(primer)设为plxrn-seq-f(5’-cgcctccgtctgaattttt)和plxrn-seq-r(tccctatgcaaaagcgaaac)。为了选出感染了病毒且基因组中插入了epo基因的cho细胞，通过在培养基中添加抗生素g418，维持培养，对抗生素g418耐性的cho细胞进行药剂选择，从而选出产生重组epo的cho细胞(以下，称为产生epo的cho细胞。)。[实施例1]作为含脂环结构聚合物，使用降冰片烯系开环聚合物氢化物[zeonex(注册商标)790r，日本瑞翁公司制造；以下简称为“790r”]，通过注塑成型法从而制作直径为3cm的皿。以下，将该皿称为“790r制皿”。790r制皿的底面(与细胞接触的侧)的水接触角为90°。作为培养容器使用790r制皿，作为液体培养基，使用包含10％胎牛血清的ham培养基，以0.624×104cells/cm2接种产生epo的cho细胞，在5％co2环境、37℃的条件下培养7天。(细胞数的计测)通过以下的方法，计测悬浮的细胞和粘附的细胞的数量。悬浮的细胞：从取出培养上清液而进行了离心处理的试样中仅除去培养基上清液，使台盼蓝作用于得到的细胞成分。使之反应3分钟左右后对试样进行台盼蓝染色，计测活细胞和死细胞的数量。计测使用细胞数计测装置。粘附的细胞：除去培养上清液，用生理盐水清洗后，通过胰蛋白酶处理从皿剥离细胞。剥离后，在含血清培养基中对这些细胞试样进行台盼蓝染色，计测活细胞和死细胞的数量。计测使用同样的装置。[比较例1]在实施例1中，代替790r制皿而使用聚苯乙烯皿[falcon(注册商标)皿(型号为353001，bectondickinson公司制造)]，除此以外，与实施例1同样地进行培养，计测细胞数。作为前培养工序的实施例1和比较例1的结果如图1所示。前培养(接种后7天)期间，在790r制皿中观察到相对于总细胞数8成左右的悬浮的产生epo的cho细胞的出现，大部分为活细胞。另一方面，在聚苯乙烯制皿中大部分为粘附在底面的细胞，悬浮的细胞以1个细胞单独存在且大部分处于死亡状态。[实施例2]将在790r制皿前培养工序中出现的悬浮的产生epo的cho细胞和还粘附着的产生epo的cho细胞回收到管中。另外，在此对于粘附的细胞，除去皿中的培养上清液，用生理盐水清洗后，通过胰蛋白酶处理而将细胞从皿剥离、回收。将各细胞在灭菌管中进行混合，在离心分离操作后除去培养基，仅将细胞成分悬浮在新的培养基中。将细胞被悬浮的培养基添加到悬浮培养装置(able公司制造)的培养容器中，开始悬浮培养。[比较例2]在实施例2中，在前培养工序中使用了聚苯乙烯制皿，除此以外，与实施例2同样地进行操作，开始悬浮培养。作为悬浮培养工序的实施例2和比较例2的结果如图2所示。在790r制皿中进行了前培养的产生epo的cho细胞与在聚苯乙烯制皿中进行了前培养的产生epo的cho细胞相比，更加增殖，从而可以认为在790r制皿中进行了前培养的细胞试样为适于悬浮细胞系统的试样。进而，根据由悬浮培养系统的试验得到的细胞数计测结果，关于实施例2和比较例2的悬浮培养系统中的细胞的增殖阶段的培养第1天～第3天(day1-3)，算出各细胞试样的平均倍增时间。结果如图3所示。进而，为了比较，也测定在聚苯乙烯制皿中静置培养了的、即以粘附状态进行了培养的细胞的平均倍增时间。如图3所示，在聚苯乙烯制皿中静置培养了的粘附的细胞的平均倍增时间为15.6小时，经比较最快。与在聚苯乙烯制皿中前培养了的细胞试样相比，在790r制皿中进行了前培养的细胞试样的平均倍增时间快，从而可以认为在790r制皿中进行了前培养的细胞试样被转化成了驯化成悬浮培养的状态。[实施例3]回收根据与实施例1同样的方法培养8天后的培养容器中的cho细胞和根据与比较例1同样的方法培养8天后的培养容器中的cho细胞，用trizol(invitrogen公司制造)溶解回收的全部细胞。从溶解的试样中提取rna。提取方法遵循产品手册。接着，将回收的rna用(hiseq(注册商标)，illumina公司制造)进行分析。变更ngs分析条件而实施2次实验。两次分析都用paired-end法来实施。各read数为3000万或5000万左右。使用公开信息(gcf_000223135.1_crigri_1.0_ma.fa.fai)作为参照。用(clcgenomicsworkbench，clcbio公司制造)对得到的转录量的数据进行rna-seq分析，将mrna的转录量数值化为rpkm值。用(clcgenomicsworkbench，clcbio公司制造)对得到的rpkm值进行edge分析，将在聚苯乙烯制皿中培养了的细胞群的转录量与在790r制皿中培养了的细胞群的转录量进行比较，得到差异倍数(foldchange)值(在790r制皿的转录量相对于在聚苯乙烯制皿的转录量的比率)。在此，如果差异倍数值为正整数则在790r制皿的转录量多，如果差异倍数值为负整数则在聚苯乙烯制皿的转录量多，其绝对值越大则两者间的差越大。得到的结果如表1和2所示。[表1]诱导因子差异倍数tgf-α4.938tgf-β群2.195hgf4.301fgf群37.334根据表1的结果，可知在790r制皿中培养了的细胞试样与在聚苯乙烯制皿中培养的细胞试样相比，作为上皮间叶转化诱导因子的tgf、hgf和fgf的转录量增强。[表2]根据表2的结果，可知在790r制皿中培养了的细胞试样与在聚苯乙烯制皿中培养了的细胞试样相比，作为上皮间叶转化标记的e-钙粘蛋白、细胞角蛋白减少，n-钙粘蛋白、波形蛋白及纤连蛋白增加。表1和表2的结果启示根据本发明的方法培养的细胞经过了上皮间叶转化诱导。当前第1页12