人源化抗S100A9抗体及其用途的制作方法
本说明书涉及toll样受体2(tlr2)的抑制剂，其特异性阻断s100a9与toll样受体2(tlr2)之间的相互作用。
背景技术：
关节炎是一种以周围关节炎症为特征的慢性综合征。疾病的严重程度存在广谱性，并且许多患者经历间歇性复发和缓解的过程，具有缓慢地渐进性关节破坏和畸形的总体模式。持续性炎症产生症状并损害组织，导致软骨损失、骨质侵蚀和关节半脱位。这导致了高度的发病率，从而导致受影响的患者的日常生活。关节炎的诊断通常是通过测定血液中的类风湿因子和外周关节的放射学变化来进行的。
关节炎的一级治疗包括用于控制疼痛和炎症的一线药物，其被分类为非甾体类抗炎药(nsaid)，例如阿司匹林、布洛芬、萘普生、氨甲蝶呤等。二级治疗包括皮质类固醇、慢作用抗风湿药(saard)或疾病缓解药物(dm)，例如青霉胺、环磷酰胺、金盐、硫唑嘌呤、左旋咪唑、氨甲蝶呤等。
所有上述产品均具有多种毒副作用，并且大多为细胞毒性。这些药物的优势有限，并且其效果主要为短期持续时间。它们产生的副作用，如胃糜烂以及对肾脏和肝脏的副作用，决定了它们不能使用过度延长的时间。此外，主要使用的产品成本高并且具有低风险率(benefit-riskratio)。
仍然需要替代疗法、方法、组合物或化合物来调节炎症反应，其成本适中、安全、有效，并且消除了对传统产品的需求及其相关副作用，特别是在长期日常使用的情况下。
技术实现要素：
因此，提供了toll样受体2(tlr2)的抑制剂，其特异性阻断s100a9与toll样受体2(tlr2)之间的相互作用。
在一个实施方式中，该抑制剂为特异性结合s100a9蛋白表位的抗体。
在一个实施方式中，该抑制剂适于抑制所述s100a9蛋白与tlr2的结合。
在进一步的实施方式中，该tlr2的抑制剂为抗s100a9抗体。
在补充的实施方式中，该抗s100a9抗体为小鼠抗体。
在进一步的实施方式中，该抗s100a9抗体是人源化的。
在另一个实施方式中，该抗s100a9抗体包含选自由以下各项组成的组的表位结合片段：fv、f(ab')或f(ab')2。
在一个实施方式中，该抗体包含与s100a9蛋白的c端区(c-terminalregion)或铰链区结合的表位。
在进一步的实施方式中，该抗体包含与s100a9蛋白的c端区的最后10个氨基酸结合的表位。
在进一步的实施方式中，该抗体包含表位结合单链抗体。
在另一个实施方式中，该抗体识别s100a9分子上定义为lgxxtx的独特表位(seqidno:70)。
在另一个实施方式中，该表位定义为lgextp(seqidno:71)。
在另一个实施方式中，该表位定义为pglgextp(seqidno:72)。
在另一个实施方式中，该表位定义为pglgegtp(seqidno:67)。
在一个实施方式中，该抗体包含选自由以下各项组成的组的链：seqidno:2、21、22、23、25和41。
在一个实施方式中，该抗体包含选自seqidno:2和25组成的组。
在另一个实施方式中，该抗体包含选自seqidno:42、43、44、45、46、47和48组成的组的氨基酸序列。
还提供了一种抗体，其包含选自：seqidno:2、21、22、23、25和41组成的组的链。
在一个实施方式中，该抗体包含选自由以下各项组成的组的链：seqidno:2和25。
进一步提供了一种包含seqidno:42的氨基酸序列的抗体、包含seqidno:43的氨基酸序列的抗体、包含seqidno:44的氨基酸序列的抗体、包含seqidno:45的氨基酸序列的抗体、包含seqidno:46的氨基酸序列的抗体、包含seqidno:47的氨基酸序列的抗体和/或包含seqidno:48的氨基酸序列的抗体。
另外提供了一种包含本文所描述的抑制剂或本文所描述的抗体及生理学或药学上可接受的赋形剂的组合物。
在另一个实施方式中，该组合物用于治疗炎性病症。
还提供了本文所描述的抑制剂、本文所提供的抗体或本文所描述的组合物用于治疗炎性病症的用途。
另外提供了本文所描述的抑制剂、本文所描述的抗体或本文所描述的组合物在制备用于治疗炎性病症中的用途。
还提供了一种治疗炎性病症的方法，包括向有此需要的受试者施用有效量的本文所描述的抑制剂、本文所提供的抗体或本文所描述的组合物的步骤。
在一个实施方式中，炎性病症选自由以下各项组成的组：类风湿性关节炎、哮喘、痛风、i型糖尿病、克罗恩氏病、红斑狼疮、多发性硬化、炎症性肠病(ibd)、溃疡性结肠炎、慢性炎症、自身炎症综合征、牛皮癣和癌症转移。
在另一个实施方式中，炎性病症为慢性炎性疾病。慢性炎性疾病包括但不限于：化脓性关节炎、坏疽性脓皮病(pyodermagangrunosum)、痤疮综合征、成人型斯蒂尔病或全身型幼年特发性关节炎。
在另一个实施方式中，炎性病症为类风湿性关节炎。
在进一步的实施方式中，抗体被施用至哺乳动物。
在另一个实施方式中，哺乳动物是人。
在另一个实施方式中，抗体是皮下、静脉内、肌内、关节内或腹膜内施用的。
本文所使用的术语“抑制”(“inhibition”或“inhibiting”)意指减少反应，例如炎症反应或病症。抑制可以优选是治疗。
本文所使用的术语“炎性病症”是指但不限于：类风湿性关节炎、哮喘、痛风、i型糖尿病、克罗恩氏病、红斑狼疮、多发性硬化、炎症性肠病(ibd)、溃疡性结肠炎、慢性炎症和牛皮癣、自身炎症性疾病等。本文包括的炎性病症还意指慢性炎性疾病。慢性炎性疾病包括但不限于：化脓性关节炎、坏疽性脓皮病、痤疮综合征、成人型斯蒂尔病或全身型幼年特发性关节炎。
本文所使用的“治疗”包括用于缓解、改善或控制炎症(例如炎症性风湿病或类风湿病)、过程、病症、事件的全身应用。它还包括用于缓解、改善或控制炎症的后遗症或症状的干预，炎症的后遗症或症状例如变性(例如细胞、上皮细胞或组织的变性)，或者特别是肿胀、渗出(exudation)或泻出(effusion)，或者疼痛。关于这一点，术语“治疗”还应理解为包括逆转、限制或控制任何特定疾病、过程、病症、事件等的进展的应用，包括疾病改善效果的应用。如果任何所提及的疾病、过程、病症或事件与疼痛相关，则术语“治疗”优选包括缓解、改善或控制(包括暂时或永久消除)疼痛之外的至少一种其他后遗症或症状，如肿胀、泻出(effusion)、渗出(exsudation)、僵硬、关节缺乏柔韧性或变性，更优选所有症状，最优选各自疾病、刺激或表现的总临床表现(clinicalpicture)。
附图说明
图1示出单克隆6b4对人和小鼠s100a9蛋白的特异性。将重组人和鼠科动物s100a蛋白(100μl中，1至1000ng)和纯化的人钙网蛋白上样至高结合96孔板中以进行标准elisa。
图2示出单克隆6b4对人s100a8、s100a9和s100a12蛋白的特异性。将重组s100a8、s100a9、s100a12、ms100a8(鼠科动物s100a8)、ms100a9(鼠科动物s100a9)、纯化的人钙网蛋白和嗜中性粒细胞粗提物上样至sds-page(15％)上，转移至硝酸纤维素膜上，并使用6b4单抗通过蛋白质印迹检测。
图3示出6b4可变结构域的小鼠和人源化变体-1的分子模型。用球棍模型显示替换的框架残基。标记保留在人源化抗体中的小鼠残基并用球棍模型显示。在重链和轻链中标记cdr环(h1、h2、h3、l1、l2、l3)。
图4示出鼠科动物和人源化6b4可变结构域的重叠模型，突出了靶向回复突变的区域。在插图中，在棍模型中突出示出回复突变为鼠科动物残基的人框架残基。
图5示出小鼠和人源化6b4抗体的轻链的v结构域序列的比对。
图6示出小鼠和人源化6b4抗体的重链的v结构域序列的比对。
图7示出6b4识别s100a9的c端肽。将重组s100a8和s100a9(1μg)、pbs1x、n端(n)肽、铰链(h)肽和c端(c)肽(10和50μg)置于pvdf膜上，使用mab6b4进行点杂交(dotblot)分析。
图8示出6b4识别s100a9的c端区的最后10个氨基酸(肽c7)。将2.5μg重组s100a9、c端、c1至c7肽、重组小鼠s100a9和小鼠s100a9的c端置于pvdf膜上，使用mab6b4进行点杂交分析。
图9示出6b4和多克隆抗s100a9主要识别s100a9的c端区的最后10个氨基酸(肽c7)。用增加浓度的s100a9肽涂覆96孔高结合板。用pbs/0.1％吐温/2％bsa封闭非特异性结合位点，并然后向孔中加入含有(a)6b4(2μg/ml)或(b)paba-a9(1μg/ml)的溶液，并在室温下孵育1小时。充分洗涤后，将hrp结合的山羊抗小鼠加入板中，并在室温下孵育1小时。通过添加tmbs显示反应，并用h2so4终止反应。在450nm处读取光密度。3种其他针对s100a9的mab也与c7肽结合，如图10所示。
图10示出所有单克隆抗s100a9抗体与s100a9的c端区的最后10个氨基酸(肽c7)结合。用增加浓度的s100a9肽涂覆96孔高结合板。用pbs/0.1％吐温/2％bsa封闭非特异性结合位点，并然后将含有1μg/ml的6b4、2h11、4e8、4b6、2b4或1f8(抗s100a8用作阴性对照)的溶液加入孔中，并在室温下孵育1小时。充分洗涤后，将hrp结合的山羊抗小鼠加入板中，并在室温下孵育1小时。通过添加tmbs显示反应，并用h2so4终止反应。在450nm处读取光密度。
图11示出6b4识别的连续表位为pglgegtp(c7a)。用增加浓度的s100a9肽涂覆96孔高结合板。用pbs/0.1％吐温/2％bsa封闭非特异性结合位点，并然后向孔中加入含有6b4(1μg/ml)的溶液，并在室温下孵育1小时。作为阴性对照，一些孔仅用pbs孵育(2eab)。充分洗涤后，将hrp结合的山羊抗小鼠加入板中，并在室温下孵育1小时。通过添加tmbs显示反应，并用h2so4终止反应。在450nm处读取光密度。
图12示出l109、g110、t113和较小程度的e111和p114对于6b4与位于s100a9的c端区中的表位的结合是至关重要的。用增加浓度的s100a9肽涂覆96孔高结合板。用pbs/0.1％吐温/2％bsa封闭非特异性结合位点，并然后向孔中加入含有6b4(1μg/ml)的溶液，并在室温下孵育1小时。充分洗涤后，将hrp结合的山羊抗小鼠加入板中，并在室温下孵育1小时。通过添加tmbs显示反应，并用h2so4终止反应。在450nm处读取光密度。
图13示出人源化6b4识别s100a9的c端肽。将重组人(s100a9)、小鼠s100a9(mu14)(1μg)、pbs1x和c端s100a9肽(2μg)置于pvdf膜上，使用人源化6b4hh+lh或hc+lh进行点杂交分析。
图14示出s100a9为tlr2的配体。将thp-blue细胞(其含有在nf-kb和ap-1控制下表达分泌型胚胎碱性磷酸酶(seap)基因的报告子构建体)与中和抗tlr2(5μg/ml)、同种型匹配的抗体(5μg/ml)或pbs1x在37℃孵育1小时，然后在37℃下用指定浓度的s100a9活化24小时。然后收获上清液并如制造商所描述用quanti-blue底物孵育，并在650nm读取光密度。结果是一个实验的两次重复的平均值+/-sem，该实验代表代表了三个独立实验。
图15示出抗tlr2的封闭性抗体抑制thp-blue细胞中s100a9诱导的nf-κb活化。将thp-blue细胞(其含有在nf-kb和ap-1控制下表达分泌型胚胎碱性磷酸酶(seap)基因的报告子构建体)与中和抗tlr2(5μg/ml)、同种型匹配的ab(5μg/ml)或pbs1x在37℃孵育1小时，然后在37℃下用指定浓度的s100a9活化24小时。然后收获上清液并如制造商所描述用quanti-blue底物孵育，并在650nm读取光密度。结果是一个实验的两次重复的平均值+/-sem，该实验代表代表了三个独立实验。
图16示出封闭性兔单抗识别s100a9的铰链区或c端肽。将pbs1x、重组s100a9、n端肽、铰链肽和c端肽(50ng/孔)涂覆在96孔板中。将100μl11个封闭性兔抗s100a9的细胞培养上清液加入孔中。使用hrp标记的山羊抗兔igg抗体揭示单抗的结合。mab1b5和7a8与s100a9的c端区结合。mab6c1与铰链区结合。
图17示出mab1b5和7a8与s100a9的c端区的最后10个氨基酸(肽c7)结合。将pbs1x、重组s100a9、c端及c1至c7肽(50ng/孔)涂覆在96孔板中。将100μl的11个封闭性兔抗s100a9的细胞培养上清液加入孔中。使用hrp标记的山羊抗兔igg抗体揭示单抗的结合。两种mab均与c7肽结合。
具体实施方式
本文提供了toll样受体2(tlr2)的抑制剂，其特异性阻断s1009a和toll样受体2(tlr2)之间的相互作用。
一方面是提供特异性阻断s100a9与toll样受体2(tlr2)之间的相互作用的抗体。
另一方面是提供特异性结合s100a9蛋白上的表位的抗体，所述表位参与与toll样受体2(tlr2)的相互作用。
在另一方面，提供了适于抑制s100a9蛋白与tlr2结合的抗体。
toll样受体2(tlr2)是toll样受体家族的成员，并且在免疫系统中起作用。tlr2是膜蛋白，其在某些细胞的表面上表达并识别外来物质。tlr2的参与导致nf-κb和ap-1的活化，有助于与自身免疫疾病(例如类风湿性关节炎、狼疮和克罗恩氏病)相关的细胞因子如il-1、tnf和il-6的分泌，仅举几例。
本文公开的治疗化合物包括但不限于：与s100a9蛋白(包括其片段、类似物和衍生物以及抗独特型抗体)结合的抗体(包括其片段、类似物和衍生物)。具体地，抗体特异性地阻断s100蛋白与toll样受体2(tlr2)之间的相互作用。更具体地，抗体与s100a9蛋白上的表位特异性结合，该表位参与与toll样受体2(tlr2)的相互作用。最具体地，抗体适于抑制s100蛋白与tlr2的结合。
具体地，抗体为抗s100a9抗体。
在可替代的实施方式中，抗体与s100蛋白的相互作用取决于s100蛋白中ca+2和/或zn+2的存在。
s100a9，也称为钙粒蛋白b和髓样相关蛋白-14(mrp-14)，为钙和锌结合蛋白，其属于s100蛋白家族。s100a9由骨髓细胞谱系高度表达，并且在炎性病症中在细胞外环境中发现。s100a9与s100a8(s100家族的另一成员)形成异质二聚体。然而，s100a9也可以形成执行特定功能的单体。人s100a9具有约13kda的分子量，并且由114个氨基酸残基组成。s100a8/a9蛋白可通过s100a9与硫酸乙酰肝素蛋白聚糖或s100a8/a9复合物与炎症激活后由内皮细胞排他表达的羧化n-聚糖的相互作用与内皮结合。
s100a9蛋白排列为非共价键合的同型二聚体。此外，在钙的存在下，s100a8和s100a9形成称为s100a8/a9或钙网蛋白的非共价异质二聚体，推测其参与钙浓度的细胞控制。
s100a9蛋白被分泌并存在于患有自身免疫疾病的患者的血清和炎症位点。s100a9通过激活β2整合素mac-1刺激嗜中性粒细胞和单核细胞迁移至炎症位点，使这些细胞粘附至内皮细胞并迁移穿过内皮细胞(anceriz等，2007，biochemicalandbiophysicalresearchcommunications，354：84-89)。s100a9还通过激活nf-κb和炎症小体诱导人单核细胞和致敏的嗜中性粒细胞分泌细胞因子，如tnfα、il-1和il-6(simard等，2013，plosone8：e72138)。
s100a9是吞噬作用、脱粒作用的有效诱导物，并且是由嗜中性粒细胞和单核细胞产生的活性氧物质的温和诱导物(simard等，2013，plosone8：e72138)。s100a9还通过激活nf-κb和炎症小体诱导单核细胞分泌细胞因子，如mip-1α、rantes、mcp-1、il-6和tnfα(simard等，2013，plosone8：e72138)。细胞因子(如tnfα)反过来刺激嗜中性粒细胞释放更多的s100a9，从而产生自我延续的循环。s100a9'a小鼠对佐剂诱导的关节炎和系统性红斑狼疮具有抗性，这至少部分是由于减少的cd8t细胞活化(loser等，2010，naturemedicine，16：713-717)。此外，针对s100a9的单抗预防胶原蛋白诱导的关节炎模型中的炎症和关节破坏(cesaro等，2012，plosone7：e45478)。这与白细胞向炎症位点的迁移减少及tnfα和il-6的分泌有关。鼠科动物s100a9诱导骨髓来源的树突状细胞(riva等，2012，immunology，137：172-182)和巨噬细胞(pouliot等，2008，jimmunol，181：3595-3601)释放一氧化氮(no)。这些数据表明s100a9通过增强吞噬细胞迁移和诱导促炎性细胞因子的分泌以及组织降解酶和ros的释放来促进炎症。
本文公开了施用针对s100a9蛋白的抗体可以是针对炎性病症特别是类风湿性关节炎的有效治疗。
在另一方面，本公开提供了一种组合物，包含本文所描述的抗体与生理学或药学上可接受的赋形剂的混合物。
另一方面，提供了治疗炎性病症的方法，包括向有此需要的受试者施用有效量的本文定义的抗体或本文定义的组合物的步骤。
在另一方面，提供了一种免疫疗法，包括向有此需要的受试者施用有效量的本文定义的抗体或本文定义的组合物的步骤。
在另一方面，提供了治疗tlr-2神经退行性疾病的方法，包括向有此需要的受试者施用有效量的本文定义的抗体或本文定义的组合物的步骤。
另一方面提供了诊断或治疗细胞、组织、器官或动物中tlr-2相关病症的方法，包括向有此需要的所述细胞、组织、器官或动物施用有效量的本文所定义的抗体或如本文所定义的组合物的步骤。
人源化抗体是来自非人物种的抗体，其蛋白质序列已被修饰以增加它们与人类中天然产生的抗体变体的相似性。当开发特异性抗体的过程涉及在非人免疫系统中(例如在小鼠中)产生时，人源化可以是必要的。设计抗体人源化方法以在应用于人时产生具有最小免疫原性的分子，同时保留亲本非人抗体的特异性和亲和力。以这种方式产生的抗体的蛋白质序列与人类中天然存在的同源抗体部分不同，并因此当施用至人类患者时其具有潜在的免疫原性。
人源化在抗体作为治疗试剂取得显著进展的过程中发挥重要作用。通过如噬菌体展示或携带人类抗体库(repertoire)的转基因小鼠免疫等富集技术在体外发现人类抗体已经为产生人类抗体提供了强有力的手段。
更具体地，抗体特异性结合s100a9上的表位，该表位阻断与toll样受体2(tlr2)的相互作用。最具体地，抗体抑制s100蛋白与tlr2的结合。最具体地，抗体阻断tlr2的活化。
在一个具体实施方式中，抗体包含选自以下各项的表位结合片段：fv和/或f(ab')和/或f(ab')2。具体地，抗体包含表位结合单链抗体。
在一个具体实施方式中，抗体带有与s100蛋白区域重叠的表位，该表位与tlr2相互作用。具体地，抗体识别s100a9分子上定义为lgxxtx(seqidno:70)的独特表位。更具体地，该表位定义为lgextp(seqidno:71)或pglgextp(seqidno:72)或pglgegtp(seqidno:67)。
在一个具体实施方式中，抗体包含选自以下各项的链：seqidno:2、21、22、23、25或41，更具体地，seqidno:2或25。
本文所描述的抗s100ab可以与合适的生理学或药学载体混合使用。此类组合物包含治疗有效量的抗体及生理学或药学上可接受的载体或赋形剂。这种载体包括但不限于盐水、缓冲盐水、右旋糖、水、甘油、乙醇及其组合。该制剂应适合给药方式。
本文定义的用作s100蛋白的抑制剂或拮抗剂的抗体可以单独施用或与针对其他互补靶的其他抗体组合施用，所述其他互补靶包括但不限于其他s100多核苷酸或多肽。
根据本发明，提供了用于治疗炎性病症的方法和组合物。
本文描述了髓样相关蛋白(mrp)在嗜中性粒细胞向炎症位点迁移的过程中起作用。
抗体可以用于治疗、抑制或预防与本文所涵盖的多肽的异常表达和/或活性相关的疾病、失调或病症(diseases,disordersorconditions)，其包括但不限于本文所描述的任何一种或多种炎性疾病、失调或病症。治疗和/或预防与抗s100蛋白的表达和/或活性相关的炎性疾病、失调或病症包括但不限于缓解与那些疾病、失调或病症相关的症状。可以在本领域已知的或如本文所描述的药学上可接受的组合物中提供抗s100抗体。
可以治疗地使用本文所描述的抗体的方式的概述包括在体内局部或全身结合s100多肽或通过抗体的直接细胞毒性，例如，由补体(cdc)或效应细胞(adcc)介导。下面更详细地描述这些方法中的一些。
本文涵盖的抗体可有利地与其他单克隆或嵌合抗体联合使用，或与淋巴因子联合使用。抗体可单独施用或与其他类型的治疗(例如，放射疗法、化学疗法、激素疗法、免疫疗法和抗肿瘤剂)组合施用。通常，优选施用物种来源或物种反应性(在抗体的情况下)与患者物种相同的产品。因此，在优选的实施方式中，将人抗体、片段、衍生物、类似物或核酸施用至人或动物患者用于治疗或预防。
优选使用针对本文包括的s100多肽或多核苷酸的高亲和力和/或有效的体内抑制和/或中和抗体、其片段或区域来治疗与s100多核苷酸或多肽(包括其片段)相关的病症。此类抗体、片段或区域优选针对本文包括的s100多核苷酸或多肽(包括其片段)具有亲和力。
通过抑制免疫细胞的增殖、分化或动员(趋化性)，抑制或降低s100多核苷酸或多肽的活性可以用于治疗免疫系统的疾病、失调和/或病症。这些免疫疾病、失调和/或病症的病因可能是遗传性的，体细胞的如癌症或一些自身免疫疾病、失调和/或病症，后天的(例如通过化学疗法或毒素)，或感染性的。此外，抗s100ab可用作特定免疫系统疾病或失调的标志物或检测物。
类似地，也可通过s100多核苷酸或多肽的抑制剂或s100多核苷酸或多肽的拮抗剂来治疗、预防和/或诊断过敏反应和病症，如哮喘(特别是过敏性哮喘)或其他呼吸问题。此外，这些分子可以用于治疗对抗原性分子的过敏反应、超敏反应或血型不相容。
可以通过使用结合或阻断s100蛋白进入结合位点或由其激活的任何活化位点的抗体来实现s100蛋白的抑制。具体地，该结合位点或活化位点是存在于许多细胞上的tlr-2(toll样受体2)。
针对s100(即s100a9)的抗体可以用于抑制自身免疫和慢性炎症和感染性疾病中的巨噬细胞及其前体细胞、嗜中性粒细胞、嗜碱性粒细胞、b淋巴细胞及一些t细胞亚群(例如活化的和cd8+细胞毒性t细胞和自然杀伤细胞)的趋化性和活化。自身免疫疾病的实例包括类风湿性关节炎、多发性硬化和胰岛素依赖型糖尿病。一些传染病包括由阻止单核吞噬细胞的募集和活化而引起的硅肺病、结节病、特发性肺纤维化；由阻止嗜酸性粒细胞产生和迁移引起的特发性嗜酸性粒细胞增多综合症；由阻止巨噬细胞的迁移及它们产生包含其中的趋化因子多肽而引起的内毒素性休克。慢性炎症的实例包括高钙调蛋白血症和自身炎症综合征。拮抗剂还可通过阻止动脉壁中的单核细胞浸润来治疗动脉粥样硬化。
抗s100ab也可以用于通过阻止单核细胞被吸引至伤口部位来治疗炎症。它们还可以用于调节正常的肺巨噬细胞群，因为急性和慢性炎性肺病与肺中单核吞噬细胞的隔离有关。
抗s100ab还可以用于通过防止单核细胞被吸引至患者关节中的滑液来治疗类风湿性关节炎。嗜中性粒细胞和单核细胞的流入和活化在退行性关节病和炎性关节病的发病机理中起重要作用。
抗s100抗体ab可以用于干扰主要归因于il-1和tnf的有害级联，其阻止其他炎性细胞因子的生物合成。以这种方式，拮抗剂可以用于预防炎症。拮抗剂也可以用于抑制由s100趋化因子引起的前列腺素非依赖性发热。
可替代地，抗s100抗体ab可以与il-10联合使用(il-10参与炎症位点处的嗜中性粒细胞迁移的下调)用于例如但不限于克罗恩氏病或溃疡性结肠炎。
抗s100抗体ab也可以用于治疗骨髓衰竭病例，例如再生障碍性贫血和骨髓异常增生综合症。抗s100抗体ab可以替代地用于治疗或预防移移植排斥。抗s100抗体ab也可以用于通过预防肺内嗜酸性粒细胞的积累来治疗哮喘和过敏。拮抗剂可以与药学上可接受的载体一起用于组合物中，例如，如下文所描述的。
具体地，提供了一种治疗炎性病症的方法，包括向有此需要的受试者施用有效量的本文定义的抗体或本文定义的组合物的步骤。
具体地，炎性病症可选自：类风湿性关节炎、哮喘、痛风、i型糖尿病、克罗恩氏病、红斑狼疮、多发性硬化、炎症性肠病(ibd)、溃疡性结肠炎、慢性炎症、牛皮癣或癌症转移。更具体地，炎性病症为类风湿性关节炎。在另一个实施方式中，炎性病症为慢性炎性疾病。慢性炎性疾病包括但不限于：化脓性关节炎、坏疽性脓皮病、痤疮综合征、成人型斯蒂尔病或全身型幼年特发性关节炎。
可替代地，提供了一种免疫疗法，包括向有此需要的受试者施用有效量的如下文所定义的抗体或如本文所定义的组合物的步骤。
在另一个实施方式中，提供了一种治疗tlr-2神经退行性疾病的方法，包括向有此需要的受试者施用有效量的抗体或组合物(两者均如本文所定义)的步骤。特别地，tlr-2神经退行性疾病为：帕金森氏病或阿尔茨海默氏病。
可替代地，提供诊断或治疗细胞、组织、器官或动物中tlr-2相关病症的方法，包括向有此需要的所述细胞、组织、器官或动物施用有效量的抗体或组合物(两者均如本文所定义)的步骤。
在另一个实施方式中，提供了基于抗体的疗法，其涉及将特异针对s100蛋白的抗体施用至动物患者以治疗一种或多种所公开的疾病、病症或症状，动物优选是哺乳动物，并且最优选是人。
特别地，如本文所定义的抗体通过皮下、静脉内、肌内、关节内或腹膜内施用。
实施例
实施例1
小鼠单克隆抗体6b4的制备
通过腹腔内(i.p.)注射30μg纯化的重组s100a9免疫雌性balb/c小鼠(4周龄)，该重组s100a9在50μl无内毒素的pbs(sigma-aldrich)与等体积的完全弗氏佐剂的混合物中。14天后使用不完全弗氏佐剂注射s100a9增强抗体应答，并且在第28天单独使用蛋白质注射最终增强。在第31天，将免疫小鼠的脾细胞与sp2鼠科动物骨髓瘤细胞融合，并在次黄嘌呤/氨甲蝶呤/胸苷筛选培养基中培养。
使用涂覆有1μg/ml重组蛋白(在0.1m碳酸盐缓冲液(ph9.6)中)的板，通过elisa筛选杂交瘤的培养物上清。通过有限稀释克隆阳性杂交瘤细胞。mab克隆6b4显示出对重组蛋白s100a9的最独特识别，并且同种型识别(isotyped)为igg1κ。通过elisa和蛋白质印迹分析证实了6b4单抗的特异性(图1和图2)
实施例2
小鼠单克隆抗体6b4的人源化
使用在互补决定区(cdr)-移植范式(paradigm)的计算机建模使鼠科动物6b4mab人源化。执行以下步骤：
小鼠6b4单克隆抗体可变区的3d建模。
该任务通过同源建模完成。通过针对pdb(蛋白质数据库)的blast检索识别与鼠科动物6b4可变序列最相似的模板结构。为了构建小鼠6b4可变区的初始模型，使用以下模板结构(pdb编码)：1qok(链a)用于轻链，而1i3g(链h)用于重链。其他合适的模板可见于用于轻链的pdb条目1sy6、3ixy、2w9d、3ncy、3i50和1fig，以及在用于重链的pdb数据项1h8s、2ntf、1cic、1h8n和1z3g。根据鼠科动物6b4序列对这些模板结构进行所需的突变：1qok轻链中的15个突变和1个1i3g重链中的18个突变。通过叠加相应模板结构的重链和轻链，将对应于鼠科动物6b4可变区的重链和轻链的突变结构组装成双链抗体结构。将组装的6b4可变区得到的结构首先通过amber力场的能量最小化和约束的逐步释放来优化，约束范围从最先放松的cdr环到仅在最后阶段完全放松的框架区的骨架重原子。然后通过蒙特卡罗最小化(mcm)构象采样优化每个抗体可变区结构中的cdr-h3环，其中，在每个mcm循环中对cdr-h3区域中的双面角进行采样，然后进行围绕cdr-h3环的初始构象延伸10a的预定义区域的能量最小化。图3中给出了小鼠6b4抗体的建模可变区的表示(左图并参见图5中的比对)。还从pdb识别与每种6b4可变序列最相似的人或人源化可变序列的结构，然后将其叠加至鼠6b4可变区的建模结构上。这些结构包括用于轻链的pdb条目3nfp、1ad0、3l5x、2v7n和3giz以及用于重链的pdb条目1i9r、3nfp、1uj3、3gkw和1wt5。这些结构用于协助框架区中的突变的建模，以便从建模的鼠科动物3d结构开始构建人源化3d结构。
小鼠6b4氨基酸序列和建模结构的表征。
进行该步骤以估算人化指数、抗原接触倾向指数以描绘cdr、规范残基(canonicalresidue)、链间堆积(inter-chainpacking)(vh/vl界面残基)、可变区/恒定区堆积(vh/ch和vl/cl界面残基)、异常框架残基、潜在的n-和o-糖基化位点、隐蔽残基(buriedresidue)、游标区残基(vernierzoneresidues)及与cdr的邻近。使用互联网可用资源和本地软件来评估这些性能。
选择用于小鼠cdr的最佳人轻链和重链框架。
这是通过针对人类种系数据库(vbase)的本地拷贝、其他序列文库(genbank和swissprot)以及人框架共有序列的集合的标准序列同源性比对来完成的。进行blast检索以取回(retrieve)仅在框架区中具有最高同源性的序列匹配(因此排除cdr)，同时匹配cdr环的长度。识别的6b4抗体的轻链和重链的人框架分别对应于κ3和h1类。除了这些类别的人共有序列之外，保留了几个与6b4框架序列最相似的人种系框架序列(参见图5和图6中的比对)。
识别用于回复突变的框架残基和设计多种人源化变体。
这是一个重要步骤，特别小心地标记应突变为相应人序列的氨基酸残基。在亲和力丧失的情况下，这些残基代表回复突变至小鼠序列的主要候选者。其依赖于以下类别中的一类或多类中残基的识别：规范残基、cdr-h3残基、游标区残基、异常残基、与cdr相邻的残基(在
6b4轻(κ)链人源化变体1(seqidno:42)
6b4轻(κ)链人源化变体2(seqidno:43)
6b4轻(κ)链人源化变体3(seqidno:44)
6b4轻(κ)链人源化变体4(seqidno:45)
6b4重(igg4)链人源化变体1(seqidno:46)
6b4重(igg4)链人源化变体2(seqidno:47)
6b4重(igg4)链嵌合体(seqidno:48)
黑色为信号序列(人)
斜体为可变区(人源化的或小鼠)
加粗为恒定区(人)
6b4-vl_人源化-1(seqidno:2):6b4-vh_人源化-1(seqidno:25)对，通过从鼠科动物6b4可变区的3d模型开始的同源建模构建的，其分子模型描绘于图3中(右图)。
在轻链6b4-vl_人源化-2序列(seqidno:21)的情况下，从小鼠序列中另外保留了框架残基trp-l47、lys-l45和val-l58，这是由于残基trp-l47是支持cdr-l2的游标区的一部分，并且突变为leu可能对这个环的构象是有问题的，并且残基lys-l45和val-l58与trp-l47直接接触，可能必须与该残基一起突变。残基trp-l47和val-l58被隐蔽并且其不应具有免疫原性，而残基lys-l45靠近cdr-h3。此外，45位置处的lys和58位置处的val出现在人框架中。
轻链6b4-vl_人源化-3序列(seqidno:22)是基于6b4-vl_人源化-2序列的并添加两个回复突变以引入鼠科动物残基asn-l69和tyr-l71，其为支持cdr-l1的游标区的一部分，其中tyr-l71被部分隐蔽并具有抗原结合倾向。
轻链6b4-vl_人源化-4序列(seqidno:23)向6b4-vl_人源化-3添加另外两个回复突变，即ser-l43和asp-l70。70位置处的残基的突变改变了离cdr-l1不远的表面的净电荷。残基ser-l43与重链接触。43位置处的ser出现在人框架中。
在重链6b4-vh_人源化-2序列(seqidno:41)的情况下，在小鼠序列中另外保留了框架残基ile-h48、ala-h67、leu-h69和val-h71，这允许恢复支持cdr-h2的四个游标区残基，这些残基已被证明在某些情况下对保持人源化抗体的抗原结合亲和力是重要的。注意到所有这些残基都是被隐蔽的，并且71位置处的val出现在人框架中。
表1和图4给出了对应于所有人源化变体的回复突变的总结和全貌图(close-upview)。
表1
实施例3
定位由单克隆抗s100a9克隆6b4识别的表位
选择人s100a9蛋白的三(3)个区域开始表位作图(mapping)；n端、铰链和c端。序列表示如下：
人s100a9的完整序列
区域序列
s100a9n端(n)mtckmsqlerni(seqidno:50)
s100a9
s100a9c端(c)twashekmhegdegpghhhkpglgegtp(seqidno:52)
首先进行点杂交以验证mab6b4识别s100a9的这些区域的能力。简言之，将1μg重组s100a9或s100a8(阴性对照)及10μg和50μg的s100a9肽沉积在pvdf膜上。然后在室温下，在温和搅拌下，用tbs/0.1％吐温/乳5％将干燥后的膜封闭30分钟，并在室温下用1μg/ml的6b4mab标记1小时。将膜用tbs/0.1％吐温充分洗涤，然后在封闭缓冲液中在室温下轻轻搅拌1小时用山羊抗小鼠(1/20000)标记。然后充分洗涤膜并如制造商(perkinelmer)所描述的，通过增强化学发光法(ecl)使其可视化。
然后将c端区分成如下所列的7种肽。
如上所述进行点杂交以验证6b4识别c端部分的哪个区域(图7和图8)。
然后通过直接elisa确认点杂交试验的结果。简而言之，将增加浓度的肽在4℃下、在0.1mnahco3(ph9.6)中、在96孔高结合板中放置过夜。将板用pbs1x0.1％吐温充分洗涤，并在室温下用pbs1x/0.1％吐温12％bsa封闭1小时。洗涤三次后，将100μl含有2μg/ml的6b4的溶液在室温下加入孔中1小时。洗板，并将100μl含有hrp结合的山羊抗小鼠(1/10000)的溶液在室温下加入孔中1小时。洗板，并如制造商所描述的，通过添加hrp底物(tmbs)进行检测。通过加入h2so4终止反应，并使用分光荧光计在450nm下读取(图9)。
因此，针对s100a9的单抗与c7肽结合，如图10所示。如图16所示，封闭性兔mab识别s100a9的铰链区或c端肽。mab1b5和7a8与s100a9的c端区结合。mab6c1与铰链区结合。
更具体地，mab1b5和7a8与s100a9的c端区的最后10个氨基酸(肽c7，参见图17)结合。
然后将c6和c7区分成如下所列的较小肽，以确定6b4mab的结合表位。
然后测定对6b4mab结合必需的氨基酸。设计肽，其中选择的氨基酸被丙氨酸取代。如图11所示，l109、g110、t113和较小程度的e111和p114对于6b4与位于s100a9的c端区中的表位的结合是至关重要的。图12显示丙氨酸取代p107增加了6b的结合，而g108和g1212证明了6b4结合的非必需性。
因此，表位序列被确定为：pglgegtp(seqidno:67)，其中必需氨基酸以粗体表示，限制结合的氨基酸以斜体表示。基于此，可以确定人源化6b4抗体识别s100a9分子上的独特表位，其可以定义为：lgxxtx(seqidno:70)、lgextp(seqidno:71)或pglgextp(seqidno:72)。
如图13所示，人源化6b4具有识别s100a9及其c端区的相似能力。
实施例4
抗s100a9抗体阻断tlr-2受体的活化
将thp1-xbiuetm细胞(1×105)用fcblock(bdbiosciences)在37℃预处理10分钟。然后在存在或不存在10μg/ml抗tlr2、抗tlr4、抗rage或其各自的同位素对照的情况下，将细胞与递增浓度的s100a8或s100a9一起孵育24小时。然后将细胞离心，并收获上清液，并与quanti-bluetm一起孵育，quanti-bluetm在分泌型碱性磷酸酶存在下变为紫色。在650nm处通过分光光度法测定分泌型碱性磷酸酶水平。
首先将s100a9与tlr2的结合与tlr4和rage进行比较，tlr4和rage是这些蛋白质的两种推定受体。在存在或不存在针对tlr2、tlr4或rage的抗体(100μg/ml)的情况下，用10μg/ml的s100a9刺激thp1-xblue细胞。虽然抗rage不能抑制thp-1blue细胞的刺激，但抗tlr4适度抑制报告基因碱性磷酸酶的表达(图14)。相反，响应于s100a9，抗tlr2使碱性磷酸酶的分泌减少了约50％。当抗体与刺激物的比例增加至10:1时，该抑制增加至超过85％，并用于刺激细胞(1μg/ml的s100a9，图15)。正如所料，低于40μg/ml的s100a12浓度未能刺激thp1-xblue细胞。这些结果表明tlr2是s100a9的主要受体。
虽然本发明披露内容已结合其具体实施方式予以说明，但是应理解，还有其它改进，并且本申请旨在涵盖本发明的任意变化、使用或改编，其包括在本发明所属领域内的已知或惯常实践范围内的对本公开的偏离，并且可以应用于上文所述的基本特征，以及如下所述在所附权利要求的范围内。
序列表
<110>拉瓦尔大学(universitelaval)
<120>人源化抗s100a9抗体及其用途
<130>55553880-1pct1
<150>us62/191,733
<151>2015-07-13
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<170>适用于windows的fastseq4.0
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asnleualaserglyvalproalaargpheserglyserglysergly
505560
thrgluphethrleuthrileserserleuglnproaspasppheala
65707580
thrtyrtyrcyshisglnargserthrtyrproleuthrpheglygln
859095
glythrlysvalgluvallys
100
<210>17
<211>107
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>人源化抗6b4轻链的v结构域
<400>17
gluilevalleuthrglnserproalathrleuserleuserprogly
151015
gluargalathrleusercysargalaserlysserileserlystyr
202530
leualatrptyrglnglnlysproglyglnalaproargleuleuile
354045
tyrserglyserthrleuglnserglyileproalaargphesergly
505560
serglyserglythraspphethrleuthrileserserleuglupro
65707580
gluaspphealavaltyrtyrcysglnglnhisasnglutyrprotyr
859095
thrpheglyglnglythrlysleugluilelys
100105
<210>18
<211>106
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>人源化抗6b4轻链的v结构域
<400>18
valleuthrglnserproalathrleuserleuserproglygluarg
151015
alathrleusercysargalaserglnservalserserasntyrleu
202530
alatrptyrglnglnlysproglyglnalaproargleuleuiletyr
354045
aspserserserargalathrglyvalproalaargpheserglyser
505560
glyserglythraspphethrleuthrileserserleugluproglu
65707580
aspphealavaltyrtyrcyshisglntyrseraspileserprothr
859095
pheglyglnglythrlysvalgluilelys
100105
<210>19
<211>107
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>人源化抗6b4轻链的v结构域
<400>19
gluilevalleuthrglnserproalathrleuserleuserprogly
151015
gluargalathrleusercysargalaserglnservalsersertyr
202530
leualatrptyrglnglnlysproglyglnalaproargleuleuile
354045
tyraspalaserasnargalathrglyileproalaargphesergly
505560
serglyserglythraspphethrleuthrileserserleuglupro
65707580
gluaspphealavaltyrtyrcysglnglnargserasntrpproile
859095
thrpheglyglnglythrargleugluilelys
100105
<210>20
<211>106
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>人源化抗6b4轻链的v结构域
<400>20
glnthrvalleuthrglnserproserserleuservalservalgly
151015
aspargvalthrilethrcysargalaserserservalthrtyrile
202530
histrptyrglnglnlysproglyleualaprolysserleuiletyr
354045
alathrserasnleualaserglyvalproserargpheserglyser
505560
glyserglythrasptyrthrphethrileserserleuglnproglu
65707580
aspilealathrtyrtyrcysglnhistrpserserlysproprothr
859095
pheglyglnglythrlysvalgluvallys
100105
<210>21
<211>106
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>6b4-vl_人源化-2
<400>21
gluasnvalleuthrglnserproalathrleuserleuserprogly
151015
gluargalathrleusercysseralaargserservalsertyrval
202530
histrptyrglnglnlysproglyglnalaprolysleutrpiletyr
354045
aspthrserlysleualaserglyvalproalaargpheserglyser
505560
glyserglythraspphethrleuthrileserserleugluproglu
65707580
aspphealavaltyrtyrcyspheglnglyserglytyrproleuthr
859095
pheglyglnglythrlysleugluilelys
100105
<210>22
<211>106
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>6b4-vl_人源化-3
<400>22
gluasnvalleuthrglnserproalathrleuserleuserprogly
151015
gluargalathrleusercysseralaargserservalsertyrval
202530
histrptyrglnglnlysproglyglnalaprolysleutrpiletyr
354045
aspthrserlysleualaserglyvalproalaargpheserglyser
505560
glyserglyasnasptyrthrleuthrileserserleugluproglu
65707580
aspphealavaltyrtyrcyspheglnglyserglytyrproleuthr
859095
pheglyglnglythrlysleugluilelys
100105
<210>23
<211>106
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>6b4-vl_人源化-4
<400>23
gluasnvalleuthrglnserproalathrleuserleuserprogly
151015
gluargalathrleusercysseralaargserservalsertyrval
202530
histrptyrglnglnlysproglyglnserprolysleutrpiletyr
354045
aspthrserlysleualaserglyvalproalaargpheserglyser
505560
glyserglyasnsertyrthrleuthrileserserleugluproglu
65707580
aspphealavaltyrtyrcyspheglnglyserglytyrproleuthr
859095
pheglyglnglythrlysleugluilelys
100105
<210>24
<211>112
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>鼠抗6b4重链的v结构域
<400>24
glnvalglnleuglnglnproglysergluleuvalargproglyala
151015
servallysleusercyslysalaserglytyrthrphethrthrtyr
202530
trpilehistrpvalargglnargproglyglnglyleuglutrpile
354045
glyasniletyrproglyglyaspserserasntyraspglulysval
505560
lysserargalathrleuthrvalaspthrserserserthralatyr
65707580
metglnleuserserleuthrsergluaspseralavaltyrtyrcys
859095
serargtrpglyiletrpglyglnglythrleuvalthrvalserala
100105110
<210>25
<211>112
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>6b4-vh_人源化-1
<400>25
glnvalglnleuvalglnserglyalagluvallyslysproglyala
151015
servallysvalsercyslysalaserglytyrthrphethrthrtyr
202530
trpilehistrpvalargglnalaproglyglnglyleuglutrpmet
354045
glyasniletyrproglyglyaspserserasntyraspglulysval
505560
lysserargvalthrilethralaaspthrserthrserthralatyr
65707580
metgluleuserserleuargsergluaspthralavaltyrtyrcys
859095
serargtrpglyiletrpglyglnglythrleuvalthrvalserser
100105110
<210>26
<211>129
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>人源化抗6b4重链的v结构域
<220>
<221>变体
<222>115
<223>xaa=任意氨基酸
<400>26
glnvalglnleuvalglnserglyalagluvallyslysproglyala
151015
servallysvalsercyslysalaserglytyrthrphethrsertyr
202530
alailesertrpvalargglnalaproglyglnglyleuglutrpmet
354045
glytrpileasnprotyrglyasnglyaspthrasntyralaglnlys
505560
pheglnglyargvalthrilethralaaspthrserthrserthrala
65707580
tyrmetgluleuserserleuargsergluaspthralavaltyrtyr
859095
cysalaargalaproglytyrglyserglyglyglycystyrarggly
100105110
asptyrxaapheasptyrtrpglyglnglythrleuvalthrvalser
115120125
ser
<210>27
<211>115
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>人源化抗6b4重链的v结构域
<400>27
gluvalglnleuvalglnserglyglygluvalarglysproglyala
151015
servallysvalsercyslysalaserglytyrthrphethrasntyr
202530
tyrleuhistrpvalargglnalaproglyglnglyleuglutrpval
354045
glyvalileasnproargglyglyalathrserhisalaglnlysphe
505560
glnglyargvalthrmetthrargaspthrserthrserthralatyr
65707580
metgluleuserserleuargsergluaspthralavaltyrtyrcys
859095
alaargthrglyleupheglnhistrpglyglnglythrleuvalthr
100105110
valserser
115
<210>28
<211>118
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>人源化抗6b4重链的v结构域
<400>28
gluvalglnleuvalglnserglyalaglumetlyslysproglyala
151015
servallysvalsercyslysalaserglytyrserpheseriletyr
202530
asnilehistrpvalargglnalaproglyglnglyleuglutrpmet
354045
glytrpilehisalaglythrglyasnarglystyrserglnvalphe
505560
glnaspargvalthrilethrargaspthrseralaserthrsertyr
65707580
metgluleuserserleuthrsergluaspthralavaltyrtyrcys
859095
alaargaspproasnpheglyasppheaspsertrpglyglnglythr
100105110
leuvalthrvalserser
115
<210>29
<211>115
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>人源化抗6b4重链的v结构域
<400>29
glnvalglnleuvalgluserglyalagluvallyslysproglyala
151015
servallysvalsercyslysalaserglytyrthrphethrsertyr
202530
alaileasntrpvalargglnalaproglyglnglyleuglutrpmet
354045
glyglyileileproilepheglythralaasntyralaglnlysphe
505560
glnglyargvalthrilethralaaspgluserthrserthralatyr
65707580
metgluleuserserleuargsergluaspthralavaltyrtyrcys
859095
alaargglyalaalavalalaglytrpglyglnglythrleuvalthr
100105110
valserser
115
<210>30
<211>118
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>人源化抗6b4重链的v结构域
<400>30
gluvalglnleuleugluserglyalaglualalyslysproglyala
151015
servallysleusercyslysalaserglytyrthrphesersertyr
202530
trpmethistrpvalhisglnalaproglyglnargleuglutrpmet
354045
glygluileasnproglyasnglyhisthrasntyrasnglulysphe
505560
lysserargvalthrilethrvalasplysseralaserthralatyr
65707580
metgluleuserserleuargsergluaspthralavaltyrtyrcys
859095
alalysgluglyglutrpglyserpheglutyrtrpglyglnglythr
100105110
leuvalthrvalserser
115
<210>31
<211>116
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>人源化抗6b4重链的v结构域
<400>31
glnvalglnleuvalglnserglyalagluvallyslysproglyala
151015
servallysvalsercyslysalaserglytyrthrphethrsertyr
202530
tyrmethistrpvalargglnalaproglyglnglyleuglutrpmet
354045
glyileileasnproserglyglyserthrsertyralaglnlysphe
505560
glnglyargvalthrmetthrargaspthrserthrserthrvaltyr
65707580
metgluleuserserleuargsergluaspthralavaltyrtyrcys
859095
alailethrhisaspalapheaspiletrpglyglnglythrmetval
100105110
thrvalserser
115
<210>32
<211>98
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>人源化抗6b4重链的v结构域
<400>32
glnvalglnleuvalglnserglyalagluvallyslysproglyala
151015
servallysvalsercyslysalaserglytyrthrphethrsertyr
202530
tyrmethistrpvalargglnalaproglyglnglyleuglutrpmet
354045
glyileileasnproserglyglyserthrsertyralaglnlysphe
505560
glnglyargvalthrmetthrargaspthrserthrserthrvaltyr
65707580
metgluleuserserleuargsergluaspthralavaltyrtyrcys
859095
alaarg
<210>33
<211>98
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>人源化抗6b4重链的v结构域
<400>33
glnvalglnleuvalglnserglyalagluvallyslysproglyala
151015
servallysvalsercyslysalaserglytyrthrphethrsertyr
202530
glyilesertrpvalargglnalaproglyglnglyleuglutrpmet
354045
glytrpileseralaserasnglyasnthrasntyralaglnlysleu
505560
glnglyargvalthrmetthrthraspthrserthrserthralatyr
65707580
metgluleuargserleuargseraspaspthralavaltyrtyrcys
859095
alaarg
<210>34
<211>98
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>人源化抗6b4重链的v结构域
<400>34
glnvalglnleuvalglnserglyalagluvallyslysproglyala
151015
servallysvalsercyslysalaserglytyrthrpheasnsertyr
202530
tyrmethistrpvalargglnalaproglyglnglyleuglutrpmet
354045
glyileileasnproserglyglyserthrsertyralaglnlysphe
505560
glnglyargvalthrmetthrargaspthrserthrserthrvaltyr
65707580
metgluleuserserleuargsergluaspthralavaltyrtyrcys
859095
alaarg
<210>35
<211>129
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>人源化抗6b4重链的v结构域
<220>
<221>变体
<222>115
<223>xaa=任意氨基酸
<400>35
glnvalglnleuvalglnserglyalagluvallyslysproglyala
151015
servallysvalsercyslysalaserglytyrthrphethrsertyr
202530
alailesertrpvalargglnalaproglyglnglyleuglutrpmet
354045
glytrpileasnprotyrglyasnglyaspthrasntyralaglnlys
505560
pheglnglyargvalthrilethralaaspthrserthrserthrala
65707580
tyrmetgluleuserserleuargsergluaspthralavaltyrtyr
859095
cysalaargalaproglytyrglyserglyglyglycystyrarggly
100105110
asptyrxaapheasptyrtrpglyglnglythrleuvalthrvalser
115120125
ser
<210>36
<211>118
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>人源化抗6b4重链的v结构域
<400>36
glnvalglnleuvalglnserglyalagluvalvallysproglyala
151015
servallysleusercyslysalaserglytyrilephethrsertyr
202530
tyrmettyrtrpvallysglnalaproglyglnglyleuglutrpile
354045
glygluileasnproserasnglyaspthrasnpheasnglulysphe
505560
lysserlysalathrleuthrvalasplysseralaserthralatyr
65707580
metgluleuserserleuargsergluaspthralavaltyrtyrcys
859095
thrargseraspglyargasnaspmetaspsertrpglyglnglythr
100105110
leuvalthrvalserser
115
<210>37
<211>116
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>人源化抗6b4重链的v结构域
<400>37
glnvalglnleuvalglnserglyalagluvallyslysproglyser
151015
servallysvalsercyslysalaserglytyrthrphethrsertyr
202530
argmethistrpvalargglnalaproglyglnglyleuglutrpile
354045
glytyrileasnproserthrglytyrthrglutyrasnglnlysphe
505560
lysasplysalathrilethralaaspgluserthrasnthralatyr
65707580
metgluleuserserleuargsergluaspthralavaltyrtyrcys
859095
alaargglyglyglyvalpheasptyrtrpglyglnglythrleuval
100105110
thrvalserser
115
<210>38
<211>117
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>人源化抗6b4重链的v结构域
<400>38
glnvalglnleuleugluserglyalavalleualaargproglythr
151015
servallysilesercyslysalaserglypheasnilelysasptyr
202530
tyrmethistrpvallysglnargproglyglnglyleuglutrpile
354045
glyglyasnaspproalaasnglyhissermettyraspprolysphe
505560
glnglyargvalthrilethralaaspthrserthrserthrvalphe
65707580
metgluleuserserleuargsergluaspthralavaltyrtyrcys
859095
alaargaspserglytyralametasptyrtrpglyglnglythrleu
100105110
valthrvalserser
115
<210>39
<211>123
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>人源化抗6b4重链的v结构域
<400>39
glnvalglnleuglnglnserglyalagluvallyslysproglyser
151015
servallysvalsercyslysalaserglytyrthrphethrasntyr
202530
tyriletyrtrpvalargglnalaproglyglnglyleuglutrpile
354045
glyglyileasnprothrserglyglyserasnpheasnglulysphe
505560
lysthrargvalthrilethralaaspgluserserthrthralatyr
65707580
metgluleuserserleuargsergluaspthralaphetyrphecys
859095
thrargglnglyleutrppheaspseraspglyargglypheaspphe
100105110
trpglyglnglythrthrvalthrvalserser
115120
<210>40
<211>118
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>人源化抗6b4重链的v结构域
<400>40
glnvalglnleuvalglnserglyalagluvallyslysproglyala
151015
servallysvalsercyslysalaserglytyrthrphethrsertyr
202530
trpmethistrpvalargglnalaproglyglnglyleuglutrpmet
354045
glyasniletyrproglyserglyglythrasntyralaglulysphe
505560
lysasnargvalthrmetthrargaspthrserileserthralatyr
65707580
metgluleuserargleuargseraspaspthralavaltyrtyrcys
859095
alaargserglyglyprotyrphepheasptyrtrpglyglnglythr
100105110
leuvalthrvalserser
115
<210>41
<211>112
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>6b4-vh_人源化-2
<400>41
glnvalglnleuvalglnserglyalagluvallyslysproglyala
151015
servallysvalsercyslysalaserglytyrthrphethrthrtyr
202530
trpilehistrpvalargglnalaproglyglnglyleuglutrpile
354045
glyasniletyrproglyglyaspserserasntyraspglulysval
505560
lysserargalathrleuthrvalaspthrserthrserthralatyr
65707580
metgluleuserserleuargsergluaspthralavaltyrtyrcys
859095
serargtrpglyiletrpglyglnglythrleuvalthrvalserser
100105110
<210>42
<211>233
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>6b4轻(kappa)链人源化变体1
<400>42
metvalleuglnthrglnvalpheileserleuleuleutrpileser
151015
glyalatyrglygluasnvalleuthrglnserproalathrleuser
202530
leuserproglygluargalathrleusercysseralaargserser
354045
valsertyrvalhistrptyrglnglnlysproglyglnalaproarg
505560
leuleuiletyraspthrserlysleualaserglyileproalaarg
65707580
pheserglyserglyserglythraspphethrleuthrileserser
859095
leugluprogluaspphealavaltyrtyrcyspheglnglysergly
100105110
tyrproleuthrpheglyglnglythrlysleugluilelysargthr
115120125
valalaalaproservalpheilepheproproseraspgluglnleu
130135140
lysserglythralaservalvalcysleuleuasnasnphetyrpro
145150155160
argglualalysvalglntrplysvalaspasnalaleuglnsergly
165170175
asnserglngluservalthrgluglnaspserlysaspserthrtyr
180185190
serleuserserthrleuthrleuserlysalaasptyrglulyshis
195200205
lysvaltyralacysgluvalthrhisglnglyleuserserproval
210215220
thrlysserpheasnargglyglucys
225230
<210>43
<211>233
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>6b4轻(kappa)链人源化变体2
<400>43
metvalleuglnthrglnvalpheileserleuleuleutrpileser
151015
glyalatyrglygluasnvalleuthrglnserproalathrleuser
202530
leuserproglygluargalathrleusercysseralaargserser
354045
valsertyrvalhistrptyrglnglnlysproglyglnalaprolys
505560
leutrpiletyraspthrserlysleualaserglyvalproalaarg
65707580
pheserglyserglyserglythraspphethrleuthrileserser
859095
leugluprogluaspphealavaltyrtyrcyspheglnglysergly
100105110
tyrproleuthrpheglyglnglythrlysleugluilelysargthr
115120125
valalaalaproservalpheilepheproproseraspgluglnleu
130135140
lysserglythralaservalvalcysleuleuasnasnphetyrpro
145150155160
argglualalysvalglntrplysvalaspasnalaleuglnsergly
165170175
asnserglngluservalthrgluglnaspserlysaspserthrtyr
180185190
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lysvaltyralacysgluvalthrhisglnglyleuserserproval
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thrlysserpheasnargglyglucys
225230
<210>44
<211>233
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>6b4轻(kappa)链人源化变体3
<400>44
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151015
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202530
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180185190
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225230
<210>45
<211>233
<212>prt
<213>人工序列
<220>
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<400>45
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151015
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202530
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leutrpiletyraspthrserlysleualaserglyvalproalaarg
65707580
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859095
leugluprogluaspphealavaltyrtyrcyspheglnglysergly
100105110
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115120125
valalaalaproservalpheilepheproproseraspgluglnleu
130135140
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145150155160
argglualalysvalglntrplysvalaspasnalaleuglnsergly
165170175
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180185190
serleuserserthrleuthrleuserlysalaasptyrglulyshis
195200205
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210215220
thrlysserpheasnargglyglucys
225230
<210>46
<211>458
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>6b4重(igg4)链人源化变体1
<400>46
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151015
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202530
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<210>47
<211>458
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>6b4重(igg4)链人源化变体2
<400>47
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151015
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202530
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354045
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505560
glutrpileglyasniletyrproglyglyaspserserasntyrasp
65707580
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859095
thralatyrmetgluleuserserleuargsergluaspthralaval
100105110
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115120125
valserseralaserthrlysglyproservalpheproleualapro
130135140
cysserargserthrsergluserthralaalaleuglycysleuval
145150155160
lysasptyrpheprogluprovalthrvalsertrpasnserglyala
165170175
leuthrserglyvalhisthrpheproalavalleuglnsersergly
180185190
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195200205
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225230235240
proalaproglupheleuglyglyproservalpheleuphepropro
245250255
lysprolysaspthrleumetileserargthrprogluvalthrcys
260265270
valvalvalaspvalserglngluaspprogluvalglnpheasntrp
275280285
tyrvalaspglyvalgluvalhisasnalalysthrlysproargglu
290295300
gluglnpheasnserthrtyrargvalvalservalleuthrvalleu
305310315320
hisglnasptrpleuasnglylysglutyrlyscyslysvalserasn
325330335
lysglyleuproserserileglulysthrileserlysalalysgly
340345350
glnproarggluproglnvaltyrthrleuproproserglngluglu
355360365
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370375380
proseraspilealavalglutrpgluserasnglyglnprogluasn
385390395400
asntyrlysthrthrproprovalleuaspseraspglyserphephe
405410415
leutyrserargleuthrvalasplysserargtrpglngluglyasn
420425430
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435440445
glnlysserleuserleuserleuglylys
450455
<210>48
<211>458
<212>prt
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<220>
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<400>48
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202530
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354045
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505560
glutrpileglyasniletyrproglyglyaspserserasntyrasp
65707580
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859095
thralatyrmetglnleuserserleuthrsergluaspseralaval
100105110
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115120125
valseralaalaserthrlysglyproservalpheproleualapro
130135140
cysserargserthrsergluserthralaalaleuglycysleuval
145150155160
lysasptyrpheprogluprovalthrvalsertrpasnserglyala
165170175
leuthrserglyvalhisthrpheproalavalleuglnsersergly
180185190
leutyrserleuserservalvalthrvalproserserserleugly
195200205
thrlysthrtyrthrcysasnvalasphislysproserasnthrlys
210215220
valasplysargvalgluserlystyrglyproprocysprosercys
225230235240
proalaproglupheleuglyglyproservalpheleuphepropro
245250255
lysprolysaspthrleumetileserargthrprogluvalthrcys
260265270
valvalvalaspvalserglngluaspprogluvalglnpheasntrp
275280285
tyrvalaspglyvalgluvalhisasnalalysthrlysproargglu
290295300
gluglnpheasnserthrtyrargvalvalservalleuthrvalleu
305310315320
hisglnasptrpleuasnglylysglutyrlyscyslysvalserasn
325330335
lysglyleuproserserileglulysthrileserlysalalysgly
340345350
glnproarggluproglnvaltyrthrleuproproserglngluglu
355360365
metthrlysasnglnvalserleuthrcysleuvallysglyphetyr
370375380
proseraspilealavalglutrpgluserasnglyglnprogluasn
385390395400
asntyrlysthrthrproprovalleuaspseraspglyserphephe
405410415
leutyrserargleuthrvalasplysserargtrpglngluglyasn
420425430
valphesercysservalmethisglualaleuhisasnhistyrthr
435440445
glnlysserleuserleuserleuglylys
450455
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<213>人工序列
<220>
<223>s100a9n端
<400>49
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1510
<210>50
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<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>s100a9铰链
<400>50
aspleuglnasnpheleulyslysgluasnlysasnglulys
1510
<210>51
<211>28
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>s100a9c端
<400>51
thrtrpalaserhisglulysmethisgluglyaspgluglyprogly
151015
hishishislysproglyleuglygluglythrpro
2025
<210>52
<211>28
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>s100a9c端
<400>52
thrtrpalaserhisglulysmethisgluglyaspgluglyprogly
151015
hishishislysproglyleuglygluglythrpro
2025
<210>53
<211>9
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>s100a9c1
<400>53
thrtrpalaserhisglulysmethis
15
<210>54
<211>9
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>s100a9c2
<400>54
serhisglulysmethisgluglyasp
15
<210>55
<211>9
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>s100a9c3
<400>55
lysmethisgluglyaspgluglypro
15
<210>56
<211>9
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>s100a9c4
<400>56
gluglyaspgluglyproglyhishis
15
<210>57
<211>9
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>s100a9c5
<400>57
gluglyproglyhishishislyspro
15
<210>58
<211>9
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>s100a9c6
<400>58
glyhishishislysproglyleugly
15
<210>59
<211>10
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>s100a9c7
<400>59
hislysproglyleuglygluglythrpro
1510
<210>60
<211>8
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>s100a9c6a
<400>60
glyproglyhishishislyspro
15
<210>61
<211>8
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>s100a9c6b
<400>61
proglyhishishislysprogly
15
<210>62
<211>8
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>s100a9c6c
<400>62
glyhishishislysproglyleu
15
<210>63
<211>8
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>s100a9c6d
<400>63
hishishislysproglyleugly
15
<210>64
<211>8
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>s100a9c6e
<400>64
hishislysproglyleuglyglu
15
<210>65
<211>8
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>s100a9c6f
<400>65
hislysproglyleuglyglugly
15
<210>66
<211>8
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>s100a9c6g
<400>66
lysproglyleuglygluglythr
15
<210>67
<211>8
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>s100a9c7a
<400>67
proglyleuglygluglythrpro
15
<210>68
<211>6
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>s100a9c7b
<400>68
leuglygluglythrpro
15
<210>69
<211>4
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>s100a9c7c
<400>69
gluglythrpro
1
<210>70
<211>6
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>被人源化6b4抗体识别的表位
<220>
<221>变体
<222>3,4,6
<223>xaa=任意氨基酸
<400>70
leuglyxaaxaathrxaa
15
<210>71
<211>6
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>被人源化6b4抗体识别的表位
<220>
<221>变体
<222>4
<223>xaa=任意氨基酸
<400>71
leuglygluxaathrpro
15
<210>72
<211>8
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>被人源化6b4抗体识别的表位
<220>
<221>变体
<222>6
<223>xaa=任意氨基酸
<400>72
proglyleuglygluxaathrpro
15
<210>73
<211>113
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>鼠s100a9
<400>73
metalaasnlysalaproserglnmetgluargserilethrthrile
151015
ileaspthrphehisglntyrserarglysgluglyhisproaspthr
202530
leuserlyslysglupheargglnmetvalglualaglnleualathr
354045
phemetlyslysglulysargasnglualaleuileasnaspilemet
505560
gluaspleuaspthrasnglnaspasnglnleuserphegluglucys
65707580
metmetleumetalalysleuilephealacyshisglulysleuhis
859095
gluasnasnproargglyhisglyhisserhisglylysglycysgly
100105110
lys
<210>74
<211>114
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>人s100a9
<400>74
metthrcyslysmetserglnleugluargasnilegluthrileile
151015
asnthrphehisglntyrservallysleuglyhisproaspthrleu
202530
asnglnglygluphelysgluleuvalarglysaspleuglnasnphe
354045
leulyslysgluasnlysasnglulysvalilegluhisilemetglu
505560
aspleuaspthrasnalaasplysglnleuserphegluglupheile
65707580
metleumetalaargleuthrtrpalaserhisglulysmethisglu
859095
glyaspgluglyproglyhishishislysproglyleuglyglugly
100105110
thrpro
<210>75
<211>784
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>鼠tlr2
<400>75
metleuargalaleutrpleuphetrpileleuvalalailethrval
151015
leupheserlysargcysseralaglngluserleusercysaspala
202530
serglyvalcysaspglyargserargserphethrserileproser
354045
glyleuthralaalametlysserleuaspleuserpheasnlysile
505560
thrtyrileglyhisglyaspleuargalacysalaasnleuglnval
65707580
leumetleulysserserargileasnthrilegluglyaspalaphe
859095
tyrserleuglyserleugluhisleuaspleuseraspasnhisleu
100105110
serserleusersersertrppheglyproleuserserleulystyr
115120125
leuasnleumetglyasnprotyrglnthrleuglyvalthrserleu
130135140
pheproasnleuthrasnleuglnthrleuargileglyasnvalglu
145150155160
thrphesergluileargargileaspphealaglyleuthrserleu
165170175
asngluleugluilelysalaleuserleuargasntyrglnsergln
180185190
serleulysserileargaspilehishisleuthrleuhisleuser
195200205
gluseralapheleuleugluilephealaaspileleuserserval
210215220
argtyrleugluleuargaspthrasnleualaargpheglnpheser
225230235240
proleuprovalaspgluvalserserprometlyslysleualaphe
245250255
argglyservalleuthraspgluserpheasngluleuleulysleu
260265270
leuargtyrileleugluleusergluvalglupheaspaspcysthr
275280285
leuasnglyleuglyasppheasnprosergluseraspvalvalser
290295300
gluleuglylysvalgluthrvalthrileargargleuhisilepro
305310315320
glnphetyrleuphetyraspleuserthrvaltyrserleuleuglu
325330335
lysvallysargilethrvalgluasnserlysvalpheleuvalpro
340345350
cysserpheserglnhisleulysserleuglupheleuaspleuser
355360365
gluasnleumetvalgluglutyrleulysasnseralacyslysgly
370375380
alatrpproserleuglnthrleuvalleuserglnasnhisleuarg
385390395400
sermetglnlysthrglygluileleuleuthrleulysasnleuthr
405410415
serleuaspileserargasnthrphehisprometproaspsercys
420425430
glntrpproglulysmetargpheleuasnleuserserthrglyile
435440445
argvalvallysthrcysileproglnthrleugluvalleuaspval
450455460
serasnasnasnleuaspserpheserleupheleuproargleugln
465470475480
gluleutyrileserargasnlysleulysthrleuproaspalaser
485490495
leupheprovalleuleuvalmetlysilearggluasnalavalser
500505510
thrpheserlysaspglnleuglyserpheprolysleugluthrleu
515520525
glualaglyaspasnhisphevalcyssercysgluleuleuserphe
530535540
thrmetgluthrproalaleualaglnileleuvalasptrpproasp
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aspalaargproservalleuglucyshisglnalaalaleuvalser
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glyvalcyscysalaleuleuleuleuileleuleuvalglyalaleu
595600605
cyshishisphehisglyleutrptyrleuargmetmettrpalatrp
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