棉酚希夫碱衍生物及制备和在抗植物烟草花叶病毒病方面的应用的制作方法

本发明涉及棉酚希夫碱衍生物及制备和在抗植物烟草花叶病毒病方面的应用。

背景技术：

手性是生命过程的基本特征，作为生命活动重要基础的大分子如核酸、蛋白质、多糖等均具有手性；当一个手性药物进入生命体时，它的两个对映异构体通常会表现出不同的生物活性。以前由于对此缺乏认识，人类曾经有过惨痛的教训。例如德国一家制药公司在上世纪五十年代开发的一种治疗孕妇早期不适的药物之——反应停，药效很好，但很快发现服用了反应停的孕妇生出的婴儿很多是四肢残缺。后来发现反应停中一种构型有致畸作用，另一种构型无致畸作用。手性药物的对映体进入生物体内的手性环境后其药效学、药动学和毒理学方面均存在对映体选择性作用，因此对手性药物的对映体进行研究对临床合理使用手性药物和开发研制单一异构体的新药具有深远的重要意义。

在农药领域，当今世界使用的商品化农药，大约有25％含有手性中心(pesticidescience，1996，46，3-9；董慧芬.[硕士研究生学位论文].浙江大学.2013)。在中国，由于拟除虫菊酯、有机磷等具有手性结构农药的大量使用，这一比例估计超过40％(chirality，2009，21，421-427)。在20世纪90年代以前，手性农药被当做单一化合物来研究。现在大量研究表明，手性农药的生物活性显现出显著的立体特异性，而且活性物质往往存在于一个或几个异构体中。同时，由于参与代谢的糖类、蛋白质等大分子均具有高度的立体专一性，所以说手性化合物进入生物体后，其利用度、代谢等均有较大的差异(toxicologicalsciences，2009，110，4-30)。

农药是国家农业和国民经济的重要支柱，中国的农药化学行业不断开发出新型的具有各种生物活性的化合物，旨在开发出具备高利用率、高选择性和高活性的新型农药。进入新世纪以来，国家越来越重视环境保护，更加提倡绿色化学和绿色农药，这就给农药化学家提出来一个问题。研究和开发手性农药是绿色农药发展的一条新路径(周珊珊.[博士研究生学位论文].浙江大学.2009)，因为每个对映体都有系统的熔点、沸点和溶解度等相似的特征，但是在生物学行为上却有不同的效应(刘一平.[硕士研究生学位论文].湖南农业大学.2011)。单一手性的农药立体选择性主要体现在对靶标生物的活性和对非靶标生物所造成的不利影响。同时，使用单一对映体的农药将会降低农药在环境中的残留浓度，以及改变异构体的残留组成等，进而减轻对环境的压力(生态环境，2008，17，1268-1275)。

棉酚(gossypol)是棉属植物中所特有的次生代谢物质，它对许多棉花病虫害具有一定的抑制活性，是棉花自身的抗生物质之一(liu，j.；benedict，c.r.；stipanovic，r.d.andbell，a.a.plantphysiol.1999，121，1017-1024)。它也具有广泛的生物活性(wang，x.；howell，c.p.；chen，f.；yin，j.andjiang，y.foodnutri.res.2009，58，215-263)，如杀精、抗癌、抗疟疾、抗寄生虫、抗病毒活性。

由于棉酚结构中1，1’位羟基和3，3’位的甲基的存在，导致了两个萘环绕c2-c2’的旋转受阻，使棉酚产生了一对阻转异构体。

光学纯棉酚的结构式

在海岛棉中，一般(-)-棉酚[(-)-gossypol]占主导，而在陆地棉中，(+)-棉酚[(+)-gossypol]含量较高；在热带树杨叶肖槿中，存在光学纯(+)-棉酚，而到目前为止光学纯的(-)-棉酚却未被从植物中直接分离得到。一般光学纯的(-)-棉酚是通过拆分消旋的棉酚获得的，如消旋棉酚与(+)-苯丙氨酸甲酯反应，形成希夫碱的非对映异构体，然后通过柱层析分离再分别水解得到光学纯的棉酚(matlin，s.a.；belenguer，a.；tyson，r.g.andbrookes，a.n.1987，10，86-91)。jiang报道了一系列的手性棉酚的希夫碱的衍生物，测试的他们对人宫颈癌(hela)，恶性胶质瘤(u87)和胃癌(m85)三种细胞的抗癌活性，发现部分(-)-棉酚的衍生物这对三种癌细胞均表现出了比母体化合物和cisplatin(顺铂)更好的抗癌活性。(zhang，l.；jiang，h.x.；cao，x.x.；zhao，h.y.；wang，f.；cui，y.x.andjiang，b.eur.j.med.chem.2009，44，3961-3972)。yang等在2012年合成了一系列氨基酸和氨基酸酯的棉酚衍生物，测试了它们的抗hiv-1和h5n1病毒活性(yang，j.；zhang，f.；li，j.r.；chen，g.；wu，s.w.；ouyang，w.j.；pan，w.；yu，r.；yang，j.x.andtien，p.bioorg.med.chem.lett.2012，22，1415-1420)。测试结果表明棉酚具有抗hiv-1活性，但是抑制性不强，且(+)-棉酚几乎没有活性。而对(-)-棉酚的氨基酸衍生物的抗hiv-1活性研究发现，脂肪的氨基酸(-)-棉酚衍生物具有更好的活性及更低的毒性。通过对丙氨酸衍生的(-)-棉酚的作用机制分析认为棉酚及其衍生物可能不是作用于逆转录酶而抑制hiv-1复制的，而是(-)-棉酚绑定到gp41的疏水口袋，堵塞gp41介导的hiv与cd4细胞融合，从而抑制hiv病毒进入细胞内(an，t.；ouyang，w.j.；pan，w.；guo，d.y.；li，j.r.；li，l.l.；chen，g.andyang，j.antivir.res.2012，94，276-287)。文献报道棉酚除了对hiv-1、h5n1具有活性[(a)yang，j.；chen，g.；li，l.l.；pan，w.；zhang，f.；yang，j.；wu，s.andtien，p.bioorg.med.chem.lett.2013，23，2619-2623；(b)yang，j.；zhang，f.；li，j.r.；chen，g.；wu，s.w.；ouyang，w.j.；pan，w.；yu，r.；yang，j.x.andtien，p.bioorg.med.chem.lett.2012，22，1415-1420；(c)田波；吴叔文；杨健。阻断人免疫缺陷病毒入侵的棉酚氨基酸衍生物及制备方法和应用。cn101844994a，2010.]，还对hsv-2[(a)wichmann，k；vaheri，a；luukkainen，t.am.j.obstet.gynecol.1982，142，593-594；(b)radloff，r.j.；deck，l.m.；royer，r.e.andvanderjagt，d.l.pharmacol.res.commun.1986，18，1063-1073]、流感病毒(vichkanova，s.a.；oifa，a.i.andgoryunova，l.v.antibiotiki1970，15，1071-1073)等包膜病毒具有活性，而对脊髓灰质炎等非包膜病毒不具有活性。因此有人曾经断言，棉酚对非包膜病毒没有作用。但是近年来，吴云峰在中国发明专利(吴云峰.多羟基双萘醛脂肪酸制剂及制备方法。cn1489904，2004-04-21)中首次报道了棉酚脂肪酸制剂有抗烟草花叶病活性，以棉酚和脂肪酸配比为2∶3时效果最为显著，而烟草花叶病毒就是一种典型的非包膜病毒。这激发了我们研究棉酚类化合物抗病毒活性的兴趣，随后我们(汪清民课题组)研究发现消旋棉酚芳香胺及脂肪胺希夫碱也具有非常高的抗tmv活性[(a)li，l.；li，z.andwang，q.m.j.agric.foodchem.，2014，62，11080-11088.(b)li，l.；li，z.；wang，k.l.；liu，y.x.andwang，q.m.bioorg.med.chem.，2016，24，474-483.(c)汪清民，李玲，刘玉秀，李永强，李铮，王开亮。棉酚的芳香胺希夫碱衍生物及其制备方法和抗植物病毒应用。cn104910041a，2015.(d)汪清民，李玲，刘玉秀，王兹稳，李永强。棉酚衍生物和它们的制备，在农药上的应用及抗癌活性。cn105884634a，2016]，但是对于光学纯的棉酚衍生物或者是在消旋棉酚中引入手性的取代基的之后的抗tmv活性的研究，目前仍然未见报道。

技术实现要素：

本发明的内容是关于棉酚希夫碱衍生物(通式i)的合成及在抗烟草花叶病毒病方面的应用。

通式i

本发明所述的通式i中棉酚希夫碱的构型为左旋(-)或右旋(+)时，r代表芳香基：苯，联苯，稠芳环，芳香杂环，各种给电子和吸电子芳环；脂肪基：各种烷烃、烯烃、二烯烃、炔烃，烷基磺酸；氨基酸：各种d构型和l构型的天然的和非天然的氨基酸；棉酚希夫碱的构型为消旋时，r代表各种d构型和l构型的天然的和非天然的氨基酸。本发明所述的化合物，包括但不限于图1和图2的化合物。

本发明的另一个目的在于提供消旋棉酚氨基酸类化合物的制备方法，其特点在于三点，第一点，操作简单。第二点，原料用比较便宜的醋酸棉酚而非比较贵的棉酚。第三点能够制备以往方法不能制备的纯的棉酚极性氨基酸化合物。

本发明通式i所述的消旋棉酚氨基酸化合物，可以通过方法一制备：醋酸消旋棉酚和d或l的氨基酸，在碱的存在下，在甲醇溶液中发生缩合反应，

方法一

本发明的再一个目的在于提供光学纯棉酚希夫碱的的制备方法，其特点在于操作简单，反应条件温和，易于提纯。

本发明通式i所述的手性棉酚希夫碱化合物，可以通过方法二制备：左旋或右旋的棉酚和伯胺发生缩合反应，

方法二

本发明通式i所述的手性棉酚希夫碱化合物，可以通过方法三制备：左旋或右旋的棉酚和伯胺发生缩合反应，

方法三

本发明的还有一个目的在于提供消旋棉酚d或l氨基酸希夫碱及光学纯棉酚希夫碱衍生物在抗烟草花叶病毒中的应用。本发明通式i所述的化合物和病毒唑相比有显著的抗tmv的活性，能够有效的抑制烟草花叶病，可有效的防止烟草，水稻，辣椒，番茄，甘薯，瓜类，玉米等，尤其适合防止烟草花叶病毒病。

本化合物能够作为棉酚抗烟草花叶病毒制剂直接使用，也可以加载体使用，还可以作为抗烟草花叶病毒剂和其他的抗烟草花叶病毒制剂，如苯并噻二唑(bth)，噻酰菌胺(tdl)，4-甲基-1，2，3-噻二唑-5-甲酸(tdla)，d或l-β-氨基丁二酸，病毒唑，宁南霉素，苯并吲哚里西啶生物碱，联三唑类化合物xy-13和xy-30，病毒a，水杨酸，氨基寡糖，多聚寡糖形成互作组合物使用。这些组合物表现出争强或者叠加作用。

本发明具有很大的优点：其特征在于它们具有很好的水溶性，热稳定性，水溶性，有机溶剂溶解性和生物活性，易于合成，环境兼容性好，对非靶标生物安全。

附图说明：

图1棉酚氨基酸化合物的结构。

图2棉酚光学纯衍生物的结构。

具体实施方式

实施例1棉酚d-苯甘氨酸希夫碱的合成(方法一)

方法一

在100ml圆底瓶中，加入氢氧化钠0.069g(1.73mmol)，醋酸棉酚0.50g(0.86mmol)和无水甲醇40ml，全溶后再加入d-苯甘氨酸(1.73mmol)，反应液加热回流5小时。自然冷至室温后，将反应液过滤，母液旋干至原体积的1/3，再往母液中加入二氯甲烷，形成淡黄色固体，过滤后得到固体1，黄色固体；易吸潮，产率，53％；¹hnmr(400mhz，dmso-d6)，δ13.64(s，2h)，9.67(s，2h)，8.60(s，2h)，7.35-7.22(m，12h)，4.86(s，2h)，3.66(s，2h)，1.83(s，6h)，1.42(s，12h)；¹³cnmr(100mhz，dmso-d6)，δ171.8，170.4，162.3，160.5，146.6，142.0，135.5，131.3，129.2，128.8，128.6，128.4，127.4，127.3，126.5，116.9，104.3，68.7，64.4，27.0，20.9.hrms(esi)m/zcalcdforc46h43n2o10(m-2na+h)^-783.2923，found783.2916.

通常的合成方法：在100ml圆底瓶中，棉酚0.46g(0.86mmol)，氢氧化钠0.069g(1.73mmol)和无水乙醇40ml，全溶后再加入d-苯甘氨酸(1.73mmol)，反应液加热回流5h。自然冷至室温后，将反应液过滤，固体产物即为产物(田波；吴叔文；杨健。阻断人免疫缺陷病毒入侵的棉酚氨基酸衍生物及制备方法和应用)。本合成创新点在以下两个方面，通过将溶剂由乙醇变为甲醇再加入二氯甲烷析出产物的这种方法，得到了纯净的棉酚极性氨基酸希夫碱，而通常的方法则不能。比如棉酚丝氨酸的化合物用以往的方法，不能得到核磁谱图纯净的化合物，而用此方法则解决了这个问题。第二，从醋酸棉酚出发合成了棉酚的氨基酸类的化合物，而不是用以往的以比较贵的棉酚作为原料的，这为棉酚氨基酸类的制备提供了一种更加经济的方法。

实施例2

棉酚氨基酸希夫碱的衍生物(2-16)参照实施例1的操作步骤来完成

化合物2，黄色固体，易吸潮；产率，72％；¹hnmr(400mhz，dmso-d6)，δ13.19(m，2h)，9.62(d，j＝12.3hz，1h)，9.50(d，j＝12.3hz，1h)，8.45(s，2h)，7.38-7.09(m，14h)，3.96(s，2h)，3.68(m，2h)，3.09-2.85(m，4h)，1.92(s，3h)，1.89(s，3h)，1.43(m，12h)；¹³cnmr(100mhz，dmso-d6)，δ171.5，170.9，160.5，149.9，146.4，138.1，130.7，129.4，128.1，126.5，126.0，125.5，120.5，116.3，116.1，103.0，65.9，36.9，26.4，20.3.hrms(esi)m/zcalcdforc48h47n2o10(m-2na+h)^-811.3236，found811.3222.

化合物3，黄色固体，易吸潮；产率，43％；¹hnmr(400mhz，dmso-d6)，δ13.28-13.19(m，2h)，10.91(s，1h)，10.75(s，1h)，9.63(s，1h)，9.44(s，1h)，8.47(s，2h)，7.53-6.84(m，12h)，4.04(s，2h)，3.66(m，2h)，3.15-3.06(m，4h)，1.91(s，3h)，1.86(s，3h)，1.42(s，12h)；¹³cnmr(100mhz，dmso-d6)，δ172.3，171.1，161.1，146.9，136.6，131.0，127.8，127.0，125.7，124.4，124.2，121.0，118.8，118.6，116.6，111.6，110.7，103.27，65.3，55.1，31.2，26.9，20.9.hrms(esi)m/zcalcdforc52h49n4o10(m-2na+h)^-889.3454，found889.3477.

化合物4，黄色固体，易吸潮；产率，39％；¹hnmr(400mhz，dmso-d6)，δ13.16(s，2h)，9.69-9.65(m，2h)，8.51(s，2h)，7.40-7.39(m，2h)，3.89-3.88(m，2h)，3.68-3.62(m，4h)，1.92-1.90(m，6h)，1.43-1.41(m，12h)，1.05-1.02(m，6h)；¹³cnmr(100mhz，dmso-d6)，δ172.0，171.3，161.7，151.8，146.7，131.2，126.8，126.2，122.7，117.1，115.9，103.9，70.1，67.7，55.5，27.0，22.7，20.9，20.2.hrms(esi)m/zcalcdforc38h49n2o12(m-2na+h)^-719.2821，found719.2804.

化合物5，黄色固体，易吸潮；产率，67％；¹hnmr(400mhz，dmso-d6)，δ13.25(s，2h)，9.76-9.72(m，2h)，8.52(s，2h)，7.39(d，j＝6.1hz，2h)，3.81-3.51(m，10h)，1.92-1.90(m，6h)，1.43-1.42(m，12h)；¹³cnmr(100mhz，dmso-d6)，δ170.8，169.8，161.0，149.9，146.4，130.6，126.5，125.4，120.2，116.5，116.1，103.2，66.4，63.8，60.7，26.4，20.4，20.2.hrms(esi)m/zcalcdforc36h39n2o12(m-2na+h)^-691.2508，found691.2479.

化合物6，黄色固体，易吸潮；产率，86％；¹hnmr(400mhz，dmso-d6)，δ13.25(s，2h)，9.74(s，2h)，8.47(s，2h)，7.37(d，j＝12.0hz，2h)，4.18-4.09(m，2h)，3.80-3.78(m，4h)，3.00-2.90(m，2h)，1.89-1.86(m-，6h)，1.42-1.38(m，12h)，0.83(s，2h).c36h39n2o10s2(m-2na+h)^-723.2054，found723.1992.

化合物7，黄色固体，易吸潮；产率，83％；¹hnmr(400mhz，dmso-d6)，δ13.20(s，2h)，9.68(d，j＝12.5hz，2h)，8.52(s，2h)，7.39(s，2h)，3.68(m，2h)，3.51(s，2h)，2.21(m，2h)，1.94-1.91(m，6h)，1.45-1.41(m，12h)，0.88-0.84(m，12h)；¹³cnmr(100mhz，dmso-d6)，δ172.4，171.4，161.3，150.7，146.9，131.1，126.9，126.1，121.3，117.0，116.6，103.5，71.2，32.1，27.0，20.9，20.1，17.7.hrms(esi)m/zcalcdforc40h47n2o10(m-2na+h)^-715.3236，found715.3231.

化合物8，黄色固体，易吸潮；产率，82％；¹hnmr(400mhz，dmso-d6)，δ13.27(s，2h)，9.77(s，2h)，8.51(s，2h)，7.39(s，2h)，3.77(s，2h)，3.69(s，2h)，1.92(s，6h)，1.65-1.57(m，6h)，1.43(s，12h)，0.86(s，12h)；¹³cnmr(100mhz，dmso-d6)，δ172.9，171.3，160.9，151.0，146.9，131.3，127.0，126.1，121.9，117.3，116.6，103.6，64.0，43.8，26.9，24.6，23.6，22.13，20.8.hrms(esi)m/zcalcdforc42h51n2o10(m-2na+h)^-743.3549，found743.3535.

化合物9，黄色固体，易吸潮；产率，43％；¹hnmr(400mhz，dmso-d6)，δ13.22(s，2h)，9.71(s，2h)，8.47(s，2h)，7.56(s，2h)，7.37(s，2h)，6.86(d，j＝32.5hz，2h)，4.05(m，2h)，3.69-3.66(m，2h)，2.75-2.71(m，2h)，2.44-2.38(m，2h)，1.94-1.90(m，6h)，1.45-1.41(m，12h).¹³cnmr(100mhz，dmso-d6)，δ172.0，171.8，170.7，161.1，151.2，146.5，130.6，126.4，125.5，120.7，116.4，115.8，103.0，61.354.8，26.4，21.8，20.3，20.2.hrms(esi)m/zcalcdforc38h43n4o12(m-2na+3h)⁺747.2877，found747.2871.

化合物10，黄色固体，易吸潮；产率，42％；¹hnmr(400mhz，dmso-d6)，δ13.22(s，2h)，9.74(s，2h)，8.48(s，2h)，7.38(d，j＝10.4hz，4h)，6.89(s，2h)，3.78-3.68(m，4h)，2.09-1.92(m，14h)，1.45-1.42(m，6h)；¹³cnmr(100mhz，dmso-d6)，δ174.3，172.3，171.4，160.5，151.0，146.9，131.2，127.0，126.1，121.0116.9，109.9，103.6，64.5，64.3，56.49，31.8，30.8，27.0，20.9，20.7.hrms(esi)m/zcalcdforc40h45n4o12(m-2na+3h)⁺775.3190，found775.3192.

化合物11，黄色固体，易吸潮；产率，70％；¹hnmr(400mhz，dmso-d6)，δ13.16(m，2h)，9.62(d，j＝12.3hz，1h)，9.58(d，j＝12.3hz，1h)，8.46(s，2h)，7.38-7.09(m，14h)，3.96(s，2h)，3.68(m，2h)，3.09-2.85(m，4h)，1.90-1.87(d，j＝13.6h，6h)，1.42(t，j＝5.6hz，12h).

化合物12，黄色固体，易吸潮；产率，41％；¹hnmr(400mhz，dmso-d6)，δ13.12(s，2h)，9.73-9.66(m，2h)，8.51(s，2h)，7.40-7.38(m，2h)，3.89-3.88(m，2h)，3.68-3.62(m，4h)，1.92(s，6h)，1.43-1.41(m，12h)，1.04-1.00(m，6h).

化合物13，黄色固体，易吸潮；产率，71％；¹hnmr(400mhz，dmso-d6)，δ13.25(s，2h)，9.70(m，2h)，8.50(s，2h)，7.39(d，j＝6.1hz，2h)，3.76-3.50(m，10h)，1.94-1.89(m，j＝10.8hz，6h)，1.45-1.42(m，12h).

化合物14，黄色固体，易吸潮；产率，46％；¹hnmr(400mhz，dmso-d6)，δ13.22(s，2h)，9.71(s，2h)，8.48(s，2h)，7.56(s，2h)，7.37(s，2h)，6.86(d，j＝32.5hz，2h)，4.05(m，2h)，3.71-3.64(m，2h)，2.74-2.71(m，2h)，2.44-2.38(m，2h)，1.92-1.90(m，6h)，1.43(m，12h).

化合物15，黄色固体，易吸潮；产率，47％；¹hnmr(400mhz，dmso-d6)，δ13.28-13.19(m，2h)，10.91(s，1h)，10.75(s，1h)，9.63(s，1h)，9.42(s，1h)，8.47(s，2h)，7.53-6.82(m，12h)，4.04(s，2h)，3.69-3.63(m，2h)，3.39(m，2h)，3.16-3.06(m，4h)，1.89-1.85(m，6h)，1.42(s，12h).

化合物16，黄色固体，易吸潮；产率，88％；¹hnmr(400mhz，dmso-d6)，δ13.25-13.18(s，2h)，9.75(t，j＝12.8hz，2h)，8.50(s，2h)，7.39(s，2h)，3.88-3.79(m，2h)，3.72-3.65(m，2h)，2.08-1.81(m，20h)，1.45-1.38(m，12h).

实施例3左旋棉酚和右旋棉酚邻三氟苯胺希夫碱的合成(方法二)

方法二

在100ml圆底瓶中，将左旋或右旋棉酚0.46g(0.86mmol)加入到无水40ml乙醇中，全溶后再加入邻三氟苯胺(1.73mmol)，反应液加热回流5小时。自然冷至室温后，将反应液过滤，固体用吡啶重结晶后，即得到目标化合物。化合物21，黄色固体；产率，67％；¹hnmr(400mhz，dmso-d6)δ15.38(d，j＝8.4hz，2h)，10.38(d，j＝8.4hz，2h)，8.79(s，2h)，8.35(s，2h)，7.81(d，j＝7.6hz，2h)，7.75(t，j＝7.2hz，2h)，7.57(j＝8.4hz，2h)，7.42(t，j＝7.6hz，2h)，3.81-3.74(m，2h)，2.01(s，6h)，1.43(m，12h).¹³cnmr(100mhz，dmso-d6)δ171.4，157.2，151.0，147.8，146.2，140.4，134.9，133.6，131.0，128.8，127.3，126.1，125.7，123.0，121.7，119.7，117.6，115.8，108.1，27.1，20.6.hrms(esi)m/zcalcdforc44h37f6n2o6(m-h)^-803.2561，found803.2541.(c0.105，ch3oh).

化合物22，黄色固体；产率，85％；¹hnmr(400mhz，dmso-d6)δ15.38(d，j＝8.4hz，2h)，10.38(d，j＝8.4hz，2h)，8.78(s，2h)，8.35(s，2h)，7.82(d，j＝7.6hz，2h)，7.74(t，j＝7.2hz，2h)，7.57(s，2h)，7.42(t，j＝7.6hz，2h)，3.81-3.74(m，2h)，2.01(s，6h)，1.45(d，4h).¹³cnmr(101mhz，dmso-d6)δ171.4，157.2，150.9，146.2，140.4，134.8，133.5，130.9，128.8，127.4，126.1，123.0，121.7，119.7，119.3，117.6，115.8，108.0，27.1，20.6.hrms(esi)m/zcalcdforc44h37f6n2o6(m-h)^-803.2561，found803.2537.(c0.105，ch3oh).

实施例4

棉酚希夫碱衍生物17-20，23-24，29-30参照实施例3的操作步骤来完成

化合物17，黄色固体，产率，84％；¹hnmr(300mhz，dmso-d6)，δ13.48(dd，j＝4.8，12.5hz，2h)，10.92(s，2h)，9.64(d，j＝12.6hz，2h)，8.44(s，2h)，7.61(s，2h)，7.48-6.89(m，12h)，4.82-4.76(m，2h)，3.67(s，8h)，3.43-3.35(m，4h)，1.92(s，6h)，1.42(d，j＝6.4hz，12h)；¹³cnmr(100mhz，dmso-d6)，δ238.3，173.1，171.4，170.3，169.0，161.8，150.2，146.7，136.6，132.0，127.6，127.4，124.7，121.5，121.0，119.0，118.5，117.1，116.2，111.0，108.2，104.4，62.5，53.0，29.4，27.0，20.8，20.7.

化合物18，黄色固体，产率，75％；¹hnmr(300mhz，dmso-d6)，δ13.47(dd，j＝4.8，12.5hz，2h)，10.92(s，2h)，9.76(d，j＝12.6hz，2h)，8.44(s，2h)，7.81(s，2h)，7.48-6.91(m，12h)，4.82-4.76(m，2h)，3.66(s，8h)，3.46-3.35(m，4h)，1.93(s，6h)，1.43(d，j＝6.4hz，12h).¹³cnmr(100mhz，dmso-d6)，δ238.34，173.12，171.35，170.3，161.8，150.2，146.7，136.6，132.0，127.6，127.4，124.7，121.5，121.0，119.0，118.5，117.1，116.2，112.0，108.2，104.4，62.5，53.0，29.4，27.0，20.8，20.7.

化合物19，黄色固体，产率，84％；¹hnmr(300mhz，dmso-d6)，δ13.51-13.45(m，2h)，10.92(s，2h)，9.77(d，j＝12.6hz，2h)，8.44(s，2h)，7.81(s，2h)，7.48-6.93(m，12h)，4.82-4.76(m，2h)，3.66(s，8h)，3.46-3.35(m，4h)，1.93(s，6h)，1.43(d，j＝6.4hz，12h).

化合物20，黄色固体，产率，84％；¹hnmr(400mhz，dmso-d6)，δ13.48-13.43(m，2h)，10.92(s，2h)，9.64(d，j＝12.6hz，2h)，8.43(s，2h)，7.61(s，2h)，7.48-6.89(m，12h)，4.82-4.76(m，2h)，3.67(s，8h)，3.43-3.35(m，4h)，1.92(s，6h)，1.42(d，j＝6.4hz，12h).

化合物23，黄色固体；产率，88％；¹hnmr(400mhz，dmso-d6)δ13.29(d，j＝12hz，2h)，9.76(d，j＝12hz，2h)，8.41(s，2h)，7.84(s，2h)，7.44(s，2h)，3.72-3.68(m，2h)，3.52-3.45(m，4h)，1.93(s，6h)，1.66-1.63(m，4h)，1.45-1.42(m，12h)，0.96-0.92(m，6h).¹³cnmr(100mhz，dmso-d6)δ171.6，162.5，149.6，146.2，131.1，126.8，126.3，120.1，116.5，115.9，103.0，51.5，26.5，23.2，20.3，20.3，20.2，10.9.hrms(esi)m/zcalcdforc36h43n2o6(m-h)^-599.3127，found599.3117.(c0.105，ch3oh).

化合物24，黄色固体；产率，77％；¹hnmr(400mhz，dmso-d6)13.29(d，j＝12.8hz，2h)，9.77(d，j＝12.8hz，2h)，8.41(s，2h)，7.84(s，2h)，7.44(s，2h)，3.721(m，2h)，3.47(m，4h)，1.93(s，6h)，1.66(m，4h)，1.44(m，12h)，0.93(m，6h).¹³cnmr(100mhz，dmso-d6)δ171.5，162.4，149.5，146.2，131.1，126.7，125.3，120.1，116.4，115.8，103.5，51.4，26.4，23.2，20.8，20.8，20.7.hrms(esi)m/zcalcdforc36h43n2o6(m-h)^-599.3127，found599.3103.(c0.105，ch3oh).

化合物29，黄色固体；产率，94％；¹hnmr(400mhz，cdcl3)δ14.84(d，j＝12hz，2h)，10.13(d，j＝12hz，2h)，8.62(s，2h)，8.25-8.23(m，4h)，7.69(s，2h)，7.38-7.35(m，4h)，5.84(s，2h)，3.73-3.70(m，2h)，2.17(s，6h)，1.55-1.51(m，12h).¹³cnmr(101mhz，dmso-d6)δ155.7，152.8，147.2，139.7，138.6，136.0，126.3，125.9，124.2，121.3，117.0，115.0，113.6，113.2，108.9，90.1，26.6，21.4，21.3.hrms(esi)m/zcalcdforc42h37n4o10(m-h)^-757.2515，found757.2486.(c0.109，dmf).

化合物30，黄色固体；产率，83％；¹hnmr(400mhz，cdcl3)δ14.84(d，j＝12hz，2h)，10.12(d，j＝12hz，2h)，8.62(s，2h)，8.25-8.23(m，4h)，7.69(s，2h)，7.38-7.35(m，4h)，5.81(s，2h)，3.73-3.70(m，2h)，2.17(s，6h)，1.55-1.51(m，12h).¹³cnmr(101mhz，dmso-d6).δ155.3，152.3，146.7，139.1，138.1，138.0，135.7，125.8，125.6，123.7，120.9，114.6，113.2，112.7，108.4，89.7，26.1，20.8，20.7.hrms(esi)m/zcalcdforc42h37n4o10(m-h)^-757.2515，found757.2426.(c0.109，dmf).

实施例5左旋棉酚和右旋棉酚氨基甲磺酸希夫碱的合成(方法三)

方法三

在100ml圆底瓶中，加入氢氧化钠0.069g(1.73mmol)，左旋或右旋棉酚0.46g(0.86mmol)和无水乙醇40ml，全溶后再加入氨基甲磺酸(1.73mmol)，反应液加热回流5小时。自然冷至室温后，将反应液过滤，固体用适当吡啶溶剂重结晶后，即得到目标化合物。化合物25，黄色固体；易潮解，产率，81％；¹hnmr(400mhz，dmso-d6)δ13.37(s，2h)，9.68(d，j＝8hz)，8.42(s，2h)，7.43(s，2h)，4.22(s，4h)，3.71-3.64(m，2h)，1.93(s，6h)，1.44(s，12h)¹³cnmr(100mhz，dmso-d6)δ172.3，162.8，149.8，146.3，131.3，127.0，126.7，120.2，116.5，115.8，103.7，65.5，26.5，20.3.hrms(esi)m/zcalcdforc32h35n2o12s2(m-2na+h)^-703.1637，found703.1607.(c0.112，ch3oh).化合物26，黄色固体；易潮解，产率，79％；¹hnmr(400mhz，dmso-d6)δ13.38(d，j＝12hz，2h)，9.69(d，j＝12hz，2h)，8.44(s，2h)，7.43(s，2h)，4.20(s，4h)，3.73-3.68(m，2h)，1.92(s，6h)，1.43(s，12h).¹³cnmr(101mhz，dmso-d6)δ172.3，162.8，149.9，146.2，131.3，126.9，126.7，120.2，116.4，115.8，103.7，65.6，26.5，20.2.hrms(esi)m/zcalcdforc32h35n2o12s2(m-2na+h)^-703.1637，found703.1620.(c0.112，ch3oh).

实施例6

棉酚希夫碱衍生物27-28参照实施例5的操作步骤来完成

化合物27，黄色固体；易潮解，产率，87％；¹hnmr(400mhz，dmso-d6)¹hnmr(400mhz，dmso-d6)δ13.03(d，j＝9.6hz，2h)，9.76(d，j＝9.6hz，2h)，8.54(s，2h)，7.42(s，2h)，3.78-3.77(m，4h)，3.71-3.69(m，2h)，2.80-2.84(m，4h)，1.93(s，6h)，1.44(s，12h).¹³cnmr(101mhz，dmso-d6)δ171.6，168.9，149.8，146.5，131.0，126.8，126.4，120.4，116.1，103.2，9.6，50.9，47.7，26.2，20.2，19.7.hrms(esi)m/zcalcdforc34h39n2o12s2(m-2na+h)^-731.1950，found731.1915.(c0.111，ch3oh).

化合物28，黄色固体；易潮解，产率，89％；¹hnmr(400mhz，dmso-d6)δ13.03(d，j＝9.6hz，2h)，9.76(d，j＝9.6hz，2h)，8.50(s，2h)，7.41(s，2h)，3.77-3.76(m，4h)，3.71-3.67(m，2h)，2.80-2.84(m，4h)，1.93(s，6h)，1.44(s，12h).¹³cnmr(101mhz，dmso-d6)δ172.1，162.2，150.0，147.1，131.5，127.4，126.9，120.7，116.9，116.6，103.7，51.3，48.1，27.0，20.8.hrms(esi)m/zcalcdforc34h39n2o12s2(m-2na+h)^-731.1950，found731.1929.(c0.111，ch3oh).

实施例7：常规活体生测法测抗烟草花叶病毒的活性

1、活体保护作用：

选长势均匀一致的3-5叶期珊西烟，全株喷雾施药，每处理3次重复，并设1‰吐温80水溶液对照。24h后，叶面撒布金刚砂(500目)，用毛笔蘸取病毒液，在全叶面沿支脉方向轻擦2次，叶片下方用手掌支撑，病毒浓度10μg/ml，接种后用流水冲洗。3d后记录病斑数，计算防效。

2、活体治疗作用：

选长势均匀一致的3-5叶期珊西烟，用毛笔全叶接种病毒，病毒浓度为10μg/ml，接种后用流水冲洗。叶面收干后，全株喷雾施药，每处理3次重复，并设1‰吐温80水溶液对照。3d后记录病斑数，计算防效。

3、活体钝化作用：

选长势均匀一致的3-5叶期珊西烟，将药剂与等体积的病毒汁液混合钝化30min后，摩擦接种，病毒浓度20μg/ml，接种后即用流水冲洗，重复3次，设1‰吐温80水溶液对照。3d后数病斑数，计算防效。

抑制率(％)＝[(对照枯斑数-处理枯斑数)/对照枯斑数]×100％

表1为部分化合物抗烟草花叶病毒的活性测试结果。

从表1可以看出，消旋棉酚引入手性的l-或d-型氨基酸得到的消旋棉酚希夫碱化合物的抗烟草花叶病毒的活性(钝化，诱导，保护)明显的要高于消旋棉酚本体及病毒唑的活性。尤其是消旋棉酚天冬氨酸的希夫碱(化合物9和14)，其活性即使在100μg/ml的条件下，也已经接近棉酚本体在500μg/ml的活性。同时我们也发现棉酚d-氨基酸的希夫碱的活性也普遍高于棉酚l-氨基酸的希夫碱，比如化合物2＞化合物11，化合物4＞化合物12，化合物5＞化合物13等，所以在棉酚中引入d-氨基酸的化合物对于棉酚活性的提高有更加重要的作用。通过表中的数据也可以看出，左旋棉酚希夫碱的三种抗烟草花叶病毒活性(钝化，诱导，保护)普遍高于右旋棉酚希夫碱的活性，比如化合物23＞化合物24，化合物25＞化合物26(钝化活性除外)，化合物27＞化合物28，化合物29＞化合物30，而同时这两种希夫碱的活性又都高于棉酚本体或者病毒唑的活性。进一步将左、右旋棉酚分别和d-色氨酸甲酯及l-色氨酸甲酯反应的产物(化合物17，18，19和20)对比发现，左旋棉酚d-色氨酸甲酯的希夫碱化合物21具有最好的活性。

然而由于右旋的棉酚毒性和活性都远远小于左旋的棉酚，所以往往右旋棉酚都被视作为一种无用但也无害的构型，而从上表中可以看出，右旋棉酚的希夫碱和棉酚本体相比，也具有不错的抗烟草花叶病毒的活性，尤其是化合物26和28。所以右旋棉酚希夫碱也是一种非常有潜力的抗病毒的制剂。通过以上的数据，我们可以得出一个结论，消旋棉酚希夫碱引入手性的基团或者光学纯棉酚引入非手性的基团都能够改善棉酚的抗烟草花叶病毒的活性。这一类的化合物能够是非常有潜力的抗烟草花叶病毒的药物。