本发明涉及一种肽的分离方法，，特别是涉及一种从牛胸腺组织中运用生物酶解技术进行小分子活性肽的提取方法。
背景技术：
胸腺为机体的重要淋巴器官。其功能与免疫紧密相关，是T细胞分化、发育、成熟的场所，还可以分泌胸腺激素及激素类物质，具内分泌机能的器官。胸腺肽是胸腺组织分泌的具有生理活性的一组多肽，能促使有丝分裂原激活后的外周血中的T淋巴细胞成熟，增加T细胞在各种抗原或致有丝分裂原激活后各种淋巴因子的分泌，增加T细胞上淋巴因子受体的水平。它同时通过对T4辅助细胞的激活作用来增强淋巴细胞反应，具有调节和增强人体细胞免疫功能的作用。
目前上市场流通的胸腺肽产品均为肽类药物，广泛应用于医药学领域：如胸腺肽肠溶片、胸腺肽注射液等。医药用胸腺肽提纯度高，肽的种类单一，专门针对性治疗某一种疾病，其制作工艺为以氨基酸为原材料，用化学试剂进行人工嫁接合成出来的单一肽类物质。因有化学试剂残留，不可避免的会对人体有一定的毒副作用和不良反应。
技术实现要素：
本发明是为了解决以上技术问题，而提供了一种胸腺肽的提取方法，该方法能够通过安全而先进的生物提取技术，将牛胸腺中其丰富的组织蛋白经过生物酶解定向酶切成小分子活性肽，即胸腺肽。其结构和功能与人体非常接近，而且分子小，可被肠道直接吸收，快捷参与人体的正常代谢与调节，在药理学上，具有更高的生化机制合理性和特异治疗有效性。胸腺肽具有针对性强、无毒副作用、疗效显著、营养价值高、易被人体吸收等特点。
本发明涉及一种胸腺肽的提取方法，所述提取方法包括以下步骤：
一、清洗：将牛胸腺用醋酸溶液进行酸洗，时间0.5～1.5h；然后用水洗一次，再用醋酸溶液酸洗一次，时间0.5～1.5h，再水洗一次，得到清洗过的牛胸腺；。
二、蒸煮：向蒸煮罐中加入水，边搅拌边升温，同时加入步骤一中清洗过的牛胸腺与食用醋酸，升温至蒸煮罐下部55℃上部65℃，保温60min；停止搅拌，静置0.5～1.5h，上清即为一次汤；
三、除渣：静置结束立即用真空抽提罐将一次汤泵入灭菌后的一次汤储罐；此时汤温在55℃左右；
四、水解：将一次汤泵入灭菌后的水解罐，升温至100℃保持15min灭菌，降温至55～65℃并保持，加入配置碱液调整pH值至中性，投入酶制剂水解7～9h，然后升温至90℃保温15min灭酶活；
五、过滤：按比例投入硅藻土、活性炭搅拌，静置，粗过滤后，利用板框过滤器循环过滤0.5～1.5h，得到清液；
六、浓缩：利用真空浓缩器将清液浓缩至浓度18～22°Bé，得到浓缩液；
七、喷雾干燥：当浓缩液澄清时，进行喷雾干燥，即制得胸腺肽；
当浓缩液浑浊时，先将浓缩液进行板框过滤或用管式离心机分离，然后再进行喷雾干燥，即制得胸腺肽；
所述步骤一中醋酸溶液为食用醋酸与水的混合溶液，醋酸溶液中食用醋酸的量为10～40vol％。
优选地，所述步骤一中牛胸腺与醋酸溶液的质量比为1:2～10；步骤二中的蒸煮罐为常温蒸煮罐。
优选地，所述步骤一中清洗过的牛胸腺在30min内加入步骤二中的蒸煮罐。
优选地，所述步骤四中碱液为NaOH溶液。
优选地，所述步骤五中粗过滤为依次采用桶式过滤器和两级板框过滤器过滤。
优选地，所述步骤七中喷雾干燥的参数为：进风温度200℃，出风温度95℃。
本发明的方法是采用以下技术方案：胸腺肽是采用天然放养的小牛体内新鲜的胸腺组织，经过低温处理、组织捣碎、灭菌、生物酶解、提纯、浓缩、高温瞬时干燥而制成的高纯度小分子肽。胸腺肽的分子量分布在500道尔顿以下，是分子极小的功能肽，活性超强，极易被人体或肌肤吸收，能够快捷参与细胞生理活动，具有超强的提高人体免疫的功能。
本发明胸腺肽的提取方法与现有技术不同之处在于：
1.本发明的方法制备得到的胸腺肽能连续诱导T细胞分化发育的各个阶段。
2.本发明的方法制备得到的胸腺肽具有调节机体的免疫平衡的作用。
3.本发明的方法制备得到的胸腺肽能增强成熟T细胞对抗原或其它刺激的反应。
4.本发明的方法制备得到的胸腺肽对全身性红斑狼疮、类风湿性关节炎等自身免疫性疾病有疗效；应用于复发性口疮、麻风、重症感染、慢性肾炎等伴有细胞免疫功能低下的患者，对病毒性肝炎、恶性肿瘤、某些眼病也有特殊疗效。
5.本发明的方法制备得到的胸腺肽纯度高，不含任何化学成分与激素，对人体没有任何毒副作用，是十分纯净的营养物质，无需搅拌即可迅速溶于水，水溶液清亮透明，为淡黄色透明液体，不会析出任何杂质和沉淀物，因此本发明的方法制备得到的胸腺肽利用率可达到95％。。
具体实施方式
通过以下实施例对本发明的胸腺肽的提取方法作进一步的说明。
实施例1
本实施例的胸腺肽的提取方法按以下步骤进行：
一、清洗：将牛胸腺用醋酸溶液进行酸洗，时间0.5h；然后用水洗一次，再用醋酸溶液酸洗一次，时间1.5h，再水洗一次，得到清洗过的牛胸腺；。
二、蒸煮：向常温蒸煮罐中加入水，边搅拌边升温，同时加入步骤一中清洗过的牛胸腺(洗净的牛胸腺组织应不超过30min投入常温蒸煮罐)与食用醋酸，升温至蒸煮罐下部55℃上部65℃，保温60min；停止搅拌，静置0.5h，上清即为一次汤；
三、除渣：静置结束立即用真空抽提罐将一次汤泵入灭菌后的一次汤储罐；此时汤温在55℃左右；
四、水解：将一次汤泵入灭菌后的水解罐，升温至100℃保持15min灭菌，降温至55℃并保持，加入配置NaOH溶液调整pH值至中性，投入酶制剂水解8h，然后升温至90℃保温15min灭酶活；
五、过滤：按比例投入硅藻土、活性炭搅拌，静置，依次采用桶式过滤器和两级板框过滤器过滤后，利用板框过滤器循环过滤1.5h，得到清液；
六、浓缩：利用真空浓缩器将清液浓缩至浓度18°Bé，得到浓缩液；
七、喷雾干燥：此时浓缩液澄清，进行喷雾干燥，即制得胸腺肽；
步骤一中醋酸溶液为食用醋酸与水的混合溶液，醋酸溶液中食用醋酸的量为10～40vol％；
步骤一中牛胸腺与醋酸溶液的质量比为1:2～10；步骤二中的蒸煮罐为常温蒸煮罐；
进风温度200℃，出风温度95℃。
实施例2
本实施例的胸腺肽的提取方法按以下步骤进行：
一、清洗：将牛胸腺用醋酸溶液进行酸洗，时间1.5h；然后用水洗一次，再用醋酸溶液酸洗一次，时间0.5h，再水洗一次，得到清洗过的牛胸腺；。
二、蒸煮：向常温蒸煮罐中加入水，边搅拌边升温，同时加入步骤一中清洗过的牛胸腺(洗净的牛胸腺组织应不超过30min投入常温蒸煮罐)与食用醋酸，升温至蒸煮罐下部55℃上部65℃，保温60min；停止搅拌，静置1.5h，上清即为一次汤；
三、除渣：静置结束立即用真空抽提罐将一次汤泵入灭菌后的一次汤储罐；此时汤温在55℃左右；
四、水解：将一次汤泵入灭菌后的水解罐，升温至100℃保持15min灭菌，降温至60℃并保持，加入配置NaOH溶液调整pH值至中性，投入酶制剂水解8h，然后升温至90℃保温15min灭酶活；
五、过滤：按比例投入硅藻土、活性炭搅拌，静置，依次采用桶式过滤器和两级板框过滤器过滤后，利用板框过滤器循环过滤0.5h，得到清液；
六、浓缩：利用真空浓缩器将清液浓缩至浓度22°Bé，得到浓缩液；
七、喷雾干燥：此时浓缩液浑浊，先将浓缩液进行板框过滤或用管式离心机分离，然后再进行喷雾干燥，即制得胸腺肽；
步骤一中醋酸溶液为食用醋酸与水的混合溶液，醋酸溶液中食用醋酸的量为10～40vol％；
步骤一中牛胸腺与醋酸溶液的质量比为1:2～10；步骤二中的蒸煮罐为常温蒸煮罐；
进风温度200℃，出风温度95℃。
实施例3
本实施例的胸腺肽的提取方法按以下步骤进行：
一、清洗：将牛胸腺用醋酸溶液进行酸洗，时间1h；然后用水洗一次，再用醋酸溶液酸洗一次，时间1h，再水洗一次，得到清洗过的牛胸腺；。
二、蒸煮：向常温蒸煮罐中加入水，边搅拌边升温，同时加入步骤一中清洗过的牛胸腺(洗净的牛胸腺组织应不超过30min投入常温蒸煮罐)与食用醋酸，升温至蒸煮罐下部55℃上部65℃，保温60min；停止搅拌，静置1h，上清即为一次汤；
三、除渣：静置结束立即用真空抽提罐将一次汤泵入灭菌后的一次汤储罐；此时汤温在55℃左右；
四、水解：将一次汤泵入灭菌后的水解罐，升温至100℃保持15min灭菌，降温至65℃并保持，加入配置NaOH溶液调整pH值至中性，投入酶制剂水解7h，然后升温至90℃保温15min灭酶活；
五、过滤：按比例投入硅藻土、活性炭搅拌，静置，依次采用桶式过滤器和两级板框过滤器过滤后，利用板框过滤器循环过滤1h，得到清液；
六、浓缩：利用真空浓缩器将清液浓缩至浓度22°Bé，得到浓缩液；
七、喷雾干燥：此时浓缩液澄清，进行喷雾干燥，即制得胸腺肽；
步骤一中醋酸溶液为食用醋酸与水的混合溶液，醋酸溶液中食用醋酸的量为10～40vol％；
步骤一中牛胸腺与醋酸溶液的质量比为1:2～10；步骤二中的蒸煮罐为常温蒸煮罐；
进风温度200℃，出风温度95℃。
实施例4
本实施例的胸腺肽的提取方法按以下步骤进行：
一、清洗：将牛胸腺用醋酸溶液进行酸洗，时间1.5h；然后用水洗一次，再用醋酸溶液酸洗一次，时间0.5h，再水洗一次，得到清洗过的牛胸腺；。
二、蒸煮：向常温蒸煮罐中加入水，边搅拌边升温，同时加入步骤一中清洗过的牛胸腺(洗净的牛胸腺组织应不超过30min投入常温蒸煮罐)与食用醋酸，升温至蒸煮罐下部55℃上部65℃，保温60min；停止搅拌，静置15h，上清即为一次汤；
三、除渣：静置结束立即用真空抽提罐将一次汤泵入灭菌后的一次汤储罐；此时汤温在55℃左右；
四、水解：将一次汤泵入灭菌后的水解罐，升温至100℃保持15min灭菌，降温至55℃并保持，加入配置NaOH溶液调整pH值至中性，投入酶制剂水解9h，然后升温至90℃保温15min灭酶活；
五、过滤：按比例投入硅藻土、活性炭搅拌，静置，依次采用桶式过滤器和两级板框过滤器过滤后，利用板框过滤器循环过滤0.5h，得到清液；
六、浓缩：利用真空浓缩器将清液浓缩至浓度20°Bé，得到浓缩液；
七、喷雾干燥：此时浓缩液浑浊，先将浓缩液进行板框过滤或用管式离心机分离，然后再进行喷雾干燥，即制得胸腺肽；
步骤一中醋酸溶液为食用醋酸与水的混合溶液，醋酸溶液中食用醋酸的量为10～40vol％；
步骤一中牛胸腺与醋酸溶液的质量比为1:2～10；步骤二中的蒸煮罐为常温蒸煮罐；
进风温度200℃，出风温度95℃。
实施例5
本实施例的胸腺肽的提取方法按以下步骤进行：
一、清洗：将牛胸腺用醋酸溶液进行酸洗，时间0.5h；然后用水洗一次，再用醋酸溶液酸洗一次，时间1.5h，再水洗一次，得到清洗过的牛胸腺；。
二、蒸煮：向常温蒸煮罐中加入水，边搅拌边升温，同时加入步骤一中清洗过的牛胸腺(洗净的牛胸腺组织应不超过30min投入常温蒸煮罐)与食用醋酸，升温至蒸煮罐下部55℃上部65℃，保温60min；停止搅拌，静置0.5h，上清即为一次汤；
三、除渣：静置结束立即用真空抽提罐将一次汤泵入灭菌后的一次汤储罐；此时汤温在55℃左右；
四、水解：将一次汤泵入灭菌后的水解罐，升温至100℃保持15min灭菌，降温至65℃并保持，加入配置NaOH溶液调整pH值至中性，投入酶制剂水解7h，然后升温至90℃保温15min灭酶活；
五、过滤：按比例投入硅藻土、活性炭搅拌，静置，依次采用桶式过滤器和两级板框过滤器过滤后，利用板框过滤器循环过滤1h，得到清液；
六、浓缩：利用真空浓缩器将清液浓缩至浓度18°Bé，得到浓缩液；
七、喷雾干燥：此时浓缩液澄清时，进行喷雾干燥，即制得胸腺肽；
步骤一中醋酸溶液为食用醋酸与水的混合溶液，醋酸溶液中食用醋酸的量为10～40vol％；
步骤一中牛胸腺与醋酸溶液的质量比为1:2～10；步骤二中的蒸煮罐为常温蒸煮罐；
进风温度200℃，出风温度95℃。
以上实施例通过安全而先进的生物提取技术，将牛胸腺中其丰富的组织蛋白经过生物酶解定向酶切成小分子活性肽，即胸腺肽。其结构和功能与人体非常接近，而且分子小，可被肠道直接吸收，快捷参与人体的正常代谢与调节，在药理学上，具有更高的生化机制合理性和特异治疗有效性。胸腺肽具有针对性强、无毒副作用、疗效显著、营养价值高、易被人体吸收等特点。
经验证，以上实施例的方法制得的胸腺肽无需搅拌即可迅速溶于水，水溶液清亮透明，为淡黄色透明液体，不会析出任何杂质和沉淀物。因此，本发明的方法制备得到的胸腺肽利用率可达到95％。
虽然以上描述了本发明的具体实施方式，但是本领域的技术人员应当理解，这些仅是举例说明，本发明的保护范围是由所附权利要求书限定的。本领域的技术人员在不背离本发明的原理和实质的前提下，可以对这些实施方式作出多种变更或修改，但这些变更和修改均落入本发明的保护范围。