本发明涉及吲唑类化合物，还涉及其制备方法和作为IDO抑制剂的用途。
背景技术：
吲哚胺2,3-双加氧酶(Indoleamine 2,3-dioxygenase，IDO)是催化色氨酸等吲哚胺类分子中吲哚环氧化裂解，使其按犬尿酸途径分解代谢的限速酶。
IDO在肿瘤免疫豁免及肿瘤发生过程中起着重要作用。正常情况下，IDO在体内呈低水平表达，而大多数肿瘤细胞则会组成的高表达IDO，将L-色氨酸转化为N-甲酰犬尿氨酸，降低了细胞微环境中的色氨酸浓度，使得色氨酸依赖的T细胞合成停滞于G1期，T细胞增殖受到抑制，从而抑制了机体免疫系统对肿瘤组织的杀伤作用。同时，IDO作用下色氨酸的代谢产物存在细胞毒性，可对T细胞产生直接溶解作用。
因此，抑制IDO的活性可以有效地阻止肿瘤细胞周围色氨酸的降解，促进T细胞的增殖，从而增强机体对肿瘤细胞的攻击能力。并且，IDO抑制剂还可以与化疗药物合用，降低肿瘤细胞的耐药性，从而增强常规细胞毒疗法的抗肿瘤活性。同时服用IDO抑制剂也可提高癌症病人的治疗性疫苗的疗效。
除了在肿瘤细胞耐药性方面发挥着重要作用，IDO还与多种与细胞免疫激活相关的疾病的发病机制密切相关。IDO已被证实是与细胞免疫激活相关的感染、恶性肿瘤、自身免疫性疾病、艾滋病等重大疾病的靶标。同时，抑制IDO还是对于患有神经系统疾病如抑郁症，阿尔茨海默病的病人的重要治疗策略。因此，IDO抑制剂具有广阔的临床应用前景。
技术实现要素：
为解决上述问题，本发明提供了一种化合物或其光学异构体、或其外消旋体混合物、或其药学上可接受的盐、或其溶剂合物，所述化合物的结构如式(Ⅰ)所示：
其中，
R1选自氢或C1～C6烷基；
R2选自氢或-NH-R6；
R3选自氢或卤素；
R4选自氢或卤素；
R5选自氢或-NH-R6；
R6选自环己酮基、-CH2-R7或-CH2-CH(R8)-R9；
R7、R9选自-CON(OH)-R10、取代的或非取代的4～6元环烷基或4～6元杂环基，所述取代的环烷基或杂环基被选自羟基、-COOH或-COOR11的取代基所取代；
R8选自C1～C6烷基或羟基取代的C1～C6烷基；
R10选自4～6元杂环基；
R11选自C1～C6烷基；
其中，仅当R2选自-NH-R6时，R5选自氢。
进一步地，R2选自氢、R3选自卤素、R4选自氢、R5选自-NH-R6；
或者，R2选自-NH-R6、R3选自氢、R4选自卤素、R5选自氢。
进一步地，所述杂环基的杂原子为氮或氧。
进一步地，所述环烷基为环己基。
进一步地，所述卤素选自氟、氯或溴。
进一步地，所述R6选自如下基团之一：
进一步地，所述化合物选自如下化合物之一：
本发明还提供了前述化合物、或其前药、或其光学异构体、或其外消旋体混合物、或其药学上可接受的盐、或其溶剂合物在制备IDO抑制剂类药物上的用途。
进一步地，所述药物是预防和/或治疗阿尔茨海默病、白内障、细胞免疫激活相关的感染、自身免疫性疾病、艾滋病、癌症、抑郁症或色氨酸代谢异常的药物。
本发明还提供了一种药物组合物，它是前述的化合物、或其前药、或其光学异构体、或其外消旋体混合物、或其药学上可接受的盐、或其溶剂合物为活性成分，加上药学上可接受的辅料制备而成的制剂。
所述C1～C6烷基是指C1、C2、C3、C4、C5、C6的烷基，即具有1～6个碳原子的直链或支链的烷基，例如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、戊基、己基等等。
所述前药是前述化合物的衍生物，它们自身可能具有较弱的活性或甚至没有活性，但是在给药后，在生理条件下(例如通过代谢、溶剂分解或另外的方式)被转化成相应的生物活性形式。
所述的制剂可以包括注射剂或口服制剂。
本发明中的关键中间体和化合物进行分离和纯化，所使用的方式是有机化学中常用的分离和纯化方法。
本发明的一种或多种化合物可以彼此联合使用，也可选择将本发明的化合物与任何其它的活性试剂结合使用，用于制备IDO抑制剂。如果使用的是一组化合物，则可将这些化合物同时、分别或有序地对受试对象进行给药。
本发明所述药学上可接受的辅料，是指除活性成分以外包含在剂型中的物质。
经试验证明，本发明提供的吲唑类化合物对IDO具有优异的抑制作用，可以用于预防和/或治疗多种疾病，如阿尔茨海默病、白内障、细胞免疫激活相关的感染、自身免疫性疾病、艾滋病、癌症、抑郁症或色氨酸代谢异常等。
显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
本发明中，英文缩写的涵义如下所示：
DCM：Dichloromethane，二氯甲烷。
DMAP：4-Dimethylaminopyridine，4-二甲氨基吡啶。
DIBAL-H：Diisobutylaluminum hydride，二异丁基氢化铝。
MeOH：Methyl alcohol，甲醇。
EA：Ethyl acetate，乙酸乙酯。
Et3N：Triethylamine，三乙胺。
SOCl2：Thionyl chloride，二氯亚砜。
PE：Petroleum ether，石油醚。
TFA：Tallow Fatty Acid，三氟乙酸。
THF：Tetrahydrofuran，四氢呋喃。
具体实施方式
关键中间体LWQ-148、LWQ-193的制备方法为实验室自行合成，其余本发明所用的试剂和初始原料均价廉易得，除特殊说明外均购于成都科龙化学试剂公司。
(1)化合物LWQ-148的合成
1化合物4a的合成：
室温下，将原料TCCA(640mg，2.74mmol)缓慢加入到2d(1g，5.49mmol)的浓硫酸(25mL)溶液中，加毕，开至130℃搅拌4h；TLC显示原料反应完全，最后得到白色粉末872.6mg，收率：73.6％。
2化合物5a的合成：
将原料4a(5.9g，23.60mmol)用甲醇(10mL)1,4-二氧六环(5mL)溶解，冰浴下加入10N HCl(12mL)Fe(3.96g，70.80mmol)，加毕，80℃搅拌3h，TLC显示原料反应完全。最后收到淡黄色粉末3.55g，收率：68.4％。
3化合物LWQ-147的合成：
将原料5a(3.55g，16.13mmol)用AcOH(15mL)溶解，0℃下加入亚硝酸钠(2.23g，32.26mmol)的水溶液(5mL)，加毕，rt搅拌6h；TLC显示原料反应完全，最后收到橘黄色粉末2.7g，收率：72.5％。
1H NMR(400MHz,CDCl3,ppm):δ14.04(s,1H),8.56(s,1H),8.23(s,1H),8.13(s,1H,)；13C NMR(300MHz,CDCl3,ppm):δ140.3,133.3,133.1,130.4,118.9,118.0,114.8；HRMS(AP-ESI)Calcd.for C7H4ClN3O2:219.9890(M+Na)+.Found:219.0458.
4化合物LWQ-148的合成
将原料LWQ-147(3.4g，14.05mmol)用乙醇(20mL)和水(10mL)溶解，rt下加入氯化铵(376mg，7.02mmol)和Fe(3.9g，70.25mmol)，加毕，80℃搅拌4h；TLC显示原料反应完全，最后收到橘黄色粉末2.73g，收率：70.2％。
1H NMR(400MHz,DMSO,ppm)δ12.75(s,1H),8.10(s,1H),6.62(s,1H),6.13(s,1H).13C NMR(300MHz,d6-DMSO,ppm):δ145.0,143.6,131.9,127.8,112.0,107.1,100.4；HRMS(AP-ESI)Calcd.for C7H6ClN3:190.0148(M+Na)+.Found:190.0677.
(2)化合物LQW-193的合成
1化合物11的合成：
将原料10(1.00g,4.32mmol)用15mL AcOH溶解，0℃下加入亚硝酸钠(0.66mg,9.52mmol)的水溶液(2mL)。加毕，rt搅拌6h。TLC监测原料反应完全，旋干反应液，萃取，粗品经柱层析纯化，得到橘黄色粉末化合物(0.5mg，2.07mmol)，收率：47.7％。
2化合物LQW-193的合成：
将化合物11(0.34g,1.40mmol)用乙醇(10mL)水(5mL)溶解，室温搅拌下加入氯化铵(38mg,0.70mmol)和Fe(0.39g,7.02mmol)，加毕，升温至80℃搅拌4h；TLC显示原料反应完全，滤去反应液中的固体，滤饼用EA洗涤多次，滤液旋干，残余物加水稀释，EA萃取3次，饱和食盐水洗涤3次，干燥浓缩。粗品经柱层析(PE:EA＝1:1)得淡黄色粉末化合物LQW-193(0.15mg,0.71mmol)，收率：50.5％。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.76(s,1H),7.90(s,1H),7.11(d,J＝1.1Hz,1H),6.58(d,J＝0.9Hz,1H),5.67(s,1H).13C NMR(101MHz,DMSO)δ139.9,133.4,125.8,122.8,120.4,120.1,110.0.ESI-MS:211.9745[M+H].
实施例1 化合物LWQ-136、LWQ-138、LWQ-156、LWQ-167、LWQ-223的合成
合成路线如下所示：
1原料LWQ-221的合成：
取干燥的50mL梨形瓶，以30mL浓硫酸将2-甲基-1，3-二硝基苯(CAS：606-20-2，5.00g，27.45mmol，购于成都瑞欧克试剂公司)溶解，冰浴搅拌下缓慢加入1,3-二溴-5，5-二甲基海因(CAS：77-48-5，4.29g，15.00mmol，购于成都瑞欧克试剂公司)，滴加完毕，室温搅拌反应15h，TLC显示原料反应完全，将反应液缓慢倒入冰水中，过滤，滤饼真空干燥，得白色固体粉末5-溴-2甲基-1，3-二硝基苯(6.59g，收率92％)。
取干燥的50mL梨形瓶，以20mL甲醇和10mL二氧六环将5-溴-2甲基-1，3-二硝基苯(5.00g，19.16mmol)溶解，室温搅拌下缓慢加入16.48mL浓盐酸和铁粉(3.22g，57.47mmol)，加毕，升至80℃搅拌回流反应12h，TLC显示原料基本反应完全，将反应液浓缩，粗品经柱层析(PE:EA＝5：1)纯化得淡黄色固体粉末5-溴-2-甲基-3-硝基苯胺((2.74g，收率62％)。
取一干燥的25mL梨形瓶，以7mL冰醋酸将5-溴-2-甲基-3-硝基苯胺(0.40g，1.73mmol)溶解，0℃机械搅拌下将2mL亚硝酸钠(0.24g，3.46mmol)溶液缓慢滴加到反应液中，加毕，升至室温搅拌反应12h，TLC显示原料反应完全，向反应液中加水稀释有固体析出，过滤，滤饼真空干燥，再经柱层析(PE:EA＝5：1)纯化得黄色固体粉末6-溴-4硝基-1H-吲唑LWQ-221(0.40g，收率96％)。
结构鉴定：与相同结构的对照品CAS:885518-46-7(购于江苏南通生物科技有限公司)对比HPLC图谱，完全一致。纯度经HPLC测试为98％；1H-NMR(400MHz,d6-DMSO,ppm):δ12.46(br,1H),8.30(s,1H),8.20(s,1H),8.12(s,1H),4.60(br,2H).
2化合物33的合成：
将原料LWQ-221(30mg，0.1239mmol)溶于THF(5ml)中，0℃下加入氢化钠(10mg，0.1488mmol)，加毕，搅拌3h，再加入甲基碘(8.5μL，0.1325mmol)，加毕，移至rt搅拌3h。TLC显示原料反应完全。最后拿到淡黄色固体19mg，收率：67.9％.
3化合物34的合成：
将原料33(19mg，0.0745mmol)，氯化铵(5mg，0.0372mmol)溶于乙醇和水(3ml:1.5ml)中，搅拌下加入Fe(21mg，0.357mmol)，加毕，开至80℃搅拌回流4h。TLC显示原料反应完全,最后拿到淡黄色固体12mg，收率：74％；
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.88(d,J＝0.9Hz,1H),6.98(d,J＝1.1Hz,1H),6.49(d,J＝1.3Hz,1H),4.30–4.09(m,1H),4.00(s,1H).
4化合物LWQ-136的合成
将原料34(70mg,0.2431mmol)与原料35(50mg,0.3159mmol)和二氢吡啶酯(109mg,0.4298mmol)溶解在DCM；MeOH＝6:2ml中，搅拌下加入TFA(23ul,0.2431mmol)。加毕，开至40℃搅拌回流3h。TLC显示原料反应完全，最后拿到淡黄色泡沫状固体23mg。收率：22.1％.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.32(s,1H),8.18(s,1H),7.22–7.15(m,3H),6.98(s,1H),6.74(d,J＝8.5Hz,2H),6.11(d,J＝1.1Hz,1H),4.30(s,1H),3.91(s,3H).13C NMR(101MHz,DMSO)δ143.88,141.87,131.60,122.30,112.86,100.66,99.18,71.71,46.19,44.60,35.84,31.17,29.63,25.47,24.94.HRMS(AP-ESI)Calcd.for C16H22BrN3O 374.0844(M+Na)+.Found:374.0677.
化合物LWQ-138、LWQ-156分别以化合物LWQ-148、LWQ-193和化合物35为原料，参照化合物LWQ-136的合成方法制得。
LWQ-156：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.94(s,1H),6.96(s,1H),6.33(s,1H),3.53(dt,J＝14.3,4.9Hz,1H),3.30(m,2H),2.07–1.95(m,1H),1.91–1.65(m,4H),1.44–1.19(m,3H).13C NMR(101MHz,CDCl3)δ142.78,141.80,131.87,123.05,112.67,102.78,101.12,49.34,44.08,36.09,30.95,29.66,25.22,24.56.ESI-MS:346.0525[M+Na]
LWQ-138：收率：52.8％；黄白色固体；1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.77(s,1H),8.19(s,1H),6.64(s,1H),6.59(s,1H),6.06(s,1H),4.75(d,J＝5.2Hz,1H),3.78-3.50(m,1H),3.18(dd,J＝9.8,4.9Hz,1H),2.91-2.83(m,1H),1.93(d,J＝12.7Hz,1H),1.69-1.46(m,1H),1.32-0.90(m,1H).HRMS(AP-ESI)Calcd.for C14H18ClN3O 302.1036(M+Na)+.Found:302.0978.
LWQ-167以化合物7和化合物35a为原料。参照化合物LWQ-136的合成方法制得。1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.97(s,1H),8.12(s,1H),6.34(s,1H),6.79(s,1H),6.16(s,1H),4.72(d,J＝5.2Hz,1H),3.78–3.50(m,1H),3.18(dd,J＝9.8,4.9Hz,1H),2.91–2.83(m,1H),1.93(d,J＝12.7Hz,1H),1.69–1.46(m,1H),1.32–0.90(m,1H).HRMS(AP-ESI)Calcd.for C14H18BrN3O 346.0633(M+Na)+.Found:346.0778.
LWQ-223以化合物7和化合物35b为原料。参照化合物LWQ-136的合成方法制得。LWQ-223:收率：77.8％；褐黄色固体；1H NMR(400MHz,DMSO)δ13.31(s,2H),9.15(s,3H),8.10(s,3H),7.54(s,2H),7.04(s,2H),5.33(s,2H),2.52(s,7H),2.22(d,J＝5.6Hz,4H),1.96(d,J＝5.6Hz,5H),1.25(s,1H).HRMS(AP-ESI)Calcd.for C13H14BrN3O 331.0218(M+Na)+.Found:331.0129.
前述化合物的结构如下所示：
实施例2 化合物LWQ-154、LWQ-155、LWQ-158、LWQ-159、LWQ-165、LWQ-166的合成
合成路线如下所示：
1中间体37b的合成
在Ar气保护下，将三苯基磷甲基溴(5.34g,15.06mmol)用重蒸THF溶解，冷却至-78℃。缓慢滴加2.5M的正丁基锂(6.00mL,15.06mmol)，加毕，同温搅拌1h，加入化合物36(2.00g,10.04mmol)的THF溶液，搅拌1h，逐渐升至0℃。加入饱和氯化铵水溶液停止反应，旋干反应液，加水稀释残余物，EA萃取3次，饱和氯化钠水溶液洗涤2次，干燥，浓缩。粗品经柱层析(PE:EA＝20：1)纯化得无色油状液体化合物37b(600g,3.04mmol)，收率30％。
2中间体38a的合成
将化合物37a(1.00g,9.04mmol)溶于二氯甲烷中，加入间氯过氧苯甲酸(2.82g,16.35mmol)，加毕，升温至回流搅拌4h。冷却至室温，旋干反应液，粗品经柱层析(PE:EA＝20：1)纯化得无色油状液体38a(0.93g,7.33mmol)，收率81％。
以化合物37b为原料，参照化合物38a的合成方法进行，制得无色油状液体化合物38b，收率80％.
3化合物LWQ-159的合成
将化合物7(0.1g,0.47mmol)和化合物38a(59mg,0.47mmol)溶于乙醇和水(2:1)的混合溶剂中，用氢氧化钠水溶液调节pH至10～11。升温至110℃回流搅拌3h。反应过程中，注意维持反应液的pH至10～11。旋干反应液，粗品经柱层析(PE:EA＝1：1)纯化得黄色油状半固体化合物LWQ-159(73mg,0.22mmol)，收率47％。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.89(s,1H),6.98(s,1H),6.48(s,1H),4.25(s,1H),4.22-4.12(m,2H),3.88-3.84(m,1H),1.82–1.70(m,4H),1.51-1.43(m,1H),1.30-1.11(m,6H).ESI-MS:338.0790[M+H].
化合物LWQ-158和化合物LWQ-166是以化合物7和化合物38b为原料，参照化合物LWQ-159的合成方法进行，制得淡黄色泡沫状固体化合物LWQ-158和黄褐色固体化合物LWQ-166。收率分别为45％和40％。
化合物LWQ-158:1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.91(s,1H),6.96(s,1H),6.48(s,1H),4.33(s,2H),4.21-4.11(m,2H),4.03-3.98(m,1H),3.63-3.48(m,2H),3.31–3.09(m,2H),2.29-2.20(m,8.3Hz,1H),1.98-1.87(m,2H),1.47(s,9H).13C NMR(101MHz,CDCl3)δ154.5,142.1,141.1,130.9,122.4,113.1,107.2,101.7,79.4,73.3,72.3,60.4,52.9,50.6,48.6,47.7,45.8,45.4,42.6,41.6,41.2.ESI-MS:425.1110[M+H].
化合物LWQ-166:1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.33(s,1H),6.88(s,1H),6.11(d,J＝1.5Hz,1H),6.02(s,1H),5.29(d,J＝5.7Hz,1H),4.40–4.18(m,2H),3.84(s,1H),3.19–2.93(m,2H),2.16-2.10(m,2H),1.92–1.88(m,1H),1.80–1.55(m,2H),1.40(s,9H).ESI-MS:425.1110[M+H].
化合物LWQ-154和化合物LWQ-155是以化合物LWQ-193和化合物38a为原料，参照化合物LWQ-159的合成方法进行，制得淡黄色泡沫状固体化合物LWQ-154和黄褐色固体化合物LWQ-155。收率分别为45％和40％。
LWQ-154:1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.10(s,1H),7.01(d,J＝1.6Hz,1H),6.28(t,J＝30.2Hz,1H),5.65(s,2H),4.90(d,J＝5.9Hz,1H),3.73(s,1H),2.10(s,1H),1.89–0.97(m,11H).ESI-MS:338.0790[M+H].
LWQ-155:1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.87(s,1H),7.18(d,J＝1.7Hz,1H),6.70(d,J＝1.7Hz,1H),5.66(s,2H),5.54(d,J＝5.2Hz,1H),3.65–3.51(m,1H),3.18(d,J＝5.3Hz,1H),1.96–0.93(m,11H).ESI-MS:338.0790[M+H].
4化合物LWQ-165的合成
将化合物LWQ-158(50mg,0.12mmol)溶于3mLDCM中，搅拌下加入150μLTFA。加毕，室温搅拌1h。旋干反应液，加EA溶解残余物，饱和碳酸氢钠水溶液调节pH至碱性，饱和氯化钠水溶液洗涤3次，干燥，浓缩。粗品经柱层析(DCM:MeOH＝20：1)纯化得淡黄色油状半固体化合物LWQ-165(21mg,0.06mmol)，收率50％。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.11(s,1H),6.97(d,J＝5.2Hz,1H),6.28(s,1H),6.18(s,2H),4.25-4.23(m,2H),3.93-3.88(m,1H),3.19-2.98(m,3H),2.22-2.16(m,1H),2.00-1.82(m,2H).ESI-MS:325.0586[M+H].
实施例3 化合物LWQ-162、LWQ-163的合成
合成路线如下所示：
1中间体40的制备
将3-吖丁啶羧酸39(2.47g,24.46mmol)溶解于30mL甲醇中，0℃下缓慢滴加SOCl2(8.87mL,122.3mmol)。加毕，升温至室温搅拌10h。旋干反应液，残余物用二氯甲烷带旋去其中的SOCl2,带旋3次，得粗品为无色粘稠状液体，因为化合物40的水溶性非常好，故不进行进一步后处理，直接投下步，收率定量。
2中间体41的制备
将化合物40(3.68g,24.46mmol)溶解于乙腈中，依次加入Et3N(3.39mL,24.46mmol),(Boc)2O(5.87g,26.91mmol)的乙腈溶液和DMAP(0.30g,2.45mmol)。加毕，室温搅拌5h。TLC检测反应完全，滤去反应液中的固体，旋干滤液得粗品。粗品经柱层析(PE:EA＝40：1)纯化得无色油状液体化合物41(3.00g,14.02mmol)，收率57％。
3中间体42的制备
将化合物41(1.00g,5.30mmol)溶于二氯甲烷中，Ar保护下加入三颈瓶中，冷却至-78℃后，缓慢滴加DIBAL-H(11.7mL,11.7mmol),加毕，同温搅拌30min后缓慢升至0℃。加入2mL无水甲醇停止反应，加入200mL10％柠檬酸水溶液。此时有白色固体析出，保持温度搅拌至白色固体消失。用二氯甲烷萃取3次，干燥，浓缩粗品经柱层析(PE:EA＝5：1)得无色略粘稠液体化合物42(0.57g,3.24mmol)，收率61％。
4化合物LWQ-163的合成
将化合物7(0.1g,0.47mmol)、化合物42(0.18g,0.94mmol)和二氢吡啶酯(0.17g,0.66mmol)溶于DCM/MeOH的混合溶剂中，搅拌下加入TFA(5μL,0.05mmol)。加毕，升温至45℃反应4h。旋干反应液，用EA稀释，饱和碳酸氢钠调节pH至8～9。干燥，浓缩，粗品经柱层析纯化得黄褐色固体化合物LWQ-163(0.1g,0.26mmol)，收率54％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ10.41(s,1H),7.96(d,J＝0.9Hz,1H),7.05(d,J＝1.0Hz,1H),6.34(d,J＝1.1Hz,1H),4.43-4.40(m,1H),4.15-4.11(m,2H),3.76-3.72(m,2H),3.53-3.50(m,2H),2.96-2.87(m,1H),1.48(s,9H).ESI-MS:381.0848[M+H].
5化合物LWQ-162的合成
将化合物LWQ-163(50mg,0.13mmol)溶于1M的二氧六环盐酸盐中，室温搅拌1h。旋干反应液，用碳酸氢钠水溶液稀释，EA萃取3次，饱和氯化钠水溶液洗涤1次，干燥，浓缩，粗品经柱层析得黄色固体化合物LWQ-162(20mg,0.07mmol)，收率53％。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.00(s,1H),6.98(s,1H),6.45(s,1H),6.30(s,1H),6.14(s,1H),4.24-4.20(m,1H),4.08-4.04(m,2H),3.69-3.66(m,2H),3.44–3.41(m,2H).13C NMR(101MHz,DMSO)δ145.8,137.6,127.8,121.7,110.1,107.2,101.7,55.2,48.9.ESI-MS:281.0392[M+H]
实施例4 化合物LWQ-192的合成
合成路线如下所示：
1中间体44的合成
中间体7(300mg,1.41mmol)、43(422mg，2.12mmol)二氢吡啶酯(358mg，1.41mmol)加入反应瓶中，用10mL二氯甲烷和甲醇混合液(1：1)溶解，缓慢滴加三氟乙酸(10μL，0.14mmol)，45℃回流3h，TLC检测反应完全，将二氯甲烷和甲醇旋干，粗品经柱层析(DCM:MeOH＝80:1→40:1)纯化得黄色固体432mg中间体44，收率77％。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ10.41(s,1H),7.96(d,J＝0.9Hz,1H),7.05(d,J＝1.0Hz,1H),6.34(d,J＝1.1Hz,1H),4.43-4.40(m,1H),4.15-4.11(m,2H),3.76-3.72(m,2H),3.43-3.51(m,2H),2.96-2.87(m,2H),1.38(s,9H).HRMS(AP-ESI)Calcd.For C13H15BrN4O2339.0378(M+H)+.Found:339.0354.
2化合物LWQ-192的合成
将中间体44(35mg,0.09mmol)、钯碳(5％)(10mg)加入三颈瓶中，用5mL甲醇溶解，通过三通充入氢气，换气三次，室温反应1h后TLC检测反应完全，将钯碳过滤除去，旋去甲醇，得化合物LWQ-192 28mg,收率93％。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.67(s,1H),11.23(s,1H)8.01(s,1H),6.94(s,1H),6.74(s,1H),4.72(m,1H),3.78-3.50(m,4H),3.18(dd,J＝9.8,4.9Hz,2H),1.83(m,1H),1.39(m,2H).13C NMR(300MHz,d6-DMSO)δ160.42,148.43,128.0,124.8,110.25,108.75,59.44,35.16,46.46,37.64,30.53.
实施例5 化合物LWQ-186的合成
合成路线如下所示：
1中间体46的合成
将氯铬酸吡啶盐(445mg,)加入反应瓶中，用5mL二氯甲烷溶解，将45(200mg,)缓慢滴加到氯铬酸吡啶盐的二氯甲烷溶液中，室温反应1.5h，TLC检测反应完全，用硅藻土过滤，经柱层析(PE:EA＝5:1)得无色透明液体124mg，收率63％。
2中间体47的合成
将化合物46(100mg,0.90mmol)、羟胺盐酸加入反应瓶中，用10mL(90％的乙醇)溶解，缓慢分批加入氢氧化钠(327mg,8.17mmol)，室温搅拌30min，然后升至80℃回流1h，TLC检测反应完全，待反应液冷至室温，加入10mL稀盐酸，用二氯甲烷提取，干燥浓缩得中间体47为无色透明液体123mg，收率100％。
3中间体48的合成
将化合物47(210mg,1.63mmol)用5mL甲醇溶解，0℃搅拌下加入氰基硼氢化钠(174mg,2.77mmol)然后缓慢滴加12N的浓盐酸，室温下反应4h。待原料反应完全，用6N的氢氧化钠水溶液调pH至9，然后用二氯甲烷：异丙醇＝3:1提取，干燥浓缩后得粗品100mg，为淡黄色液体，收率47％。
4化合物LWQ-186的合成
将中间体29(50mg,0.18mmol)用3mL N,N-二甲基甲酰胺溶解，将1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺(45mg,0.23mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(85mg,0.22mmol)、N,N-二异丙基乙胺(60μL,0.36mmol)分别加入反应瓶中，最后将中间体48(50mg,0.36mmol)加入混合液中，室温反应3h，TLC检测反应完全，加入大量水，用乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗涤，干燥、浓缩厚得粗品，粗品经柱层析(DCM:MeOH＝80:1→40:1)纯化得黄色固体LWQ-186 37mg，收率53％。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.02(s,1H),8.07(s,1H),6.77(s,1H),6.29(s,1H),6.16(s,2H),5.25(s,2H),3.85(d,J＝13.2Hz,2H),3.42(d,J＝7.2Hz,2H),3.29(t,J＝11.2Hz,2H),2.06–1.80(m,1H),1.57(d,J＝12.9Hz,2H),1.24–1.05(m,2H).HRMS(AP-ESI)Calcd.For C16H20BrN3O3 404.0688(M+H)+.Found:404.1054.
实施例6 本发明化合物对IDO蛋白的抑制活性
重组人IDO蛋白经大肠杆菌表达，镍亲合层析纯化而得。化合物对IDO抑制活性实验采用L-色氨酸作为底物。待测化合物溶解在10％DMSO溶液中配制成稀释液。取5uL稀释液加入到100μL反应体系中。100μL反应体系中含有0.5％DMSO，40nmol/L IDO，900μmol/L L-色氨酸，以及其他反应共存物(磷酸钾缓冲液、抗坏血酸、过氧化氢酶，亚甲基蓝)。反应混合物于37度下培育180分钟，再加入三氯乙酸终止反应。使用Tecan Infinite M1000酶标仪在321nm处测定产生的N-甲酰基犬尿氨酸的浓度，从而评价化合物对IDO的抑制活性。阴性对照物是以5μL的缓冲液代替IDO。临床III期的IDO抑制剂INCB024360作为阳性对照，验证本实验建立的IDO活性检测体系是否有效。
每个浓度设立三复孔。使用软件Graphpad Prism进行数据分析。在不含待测化合物的反应液中，吸光度(At)定义为100％活性。在不含IDO的反应液中，吸光度(Ab)定义为0％活性。对于待测化合物，活性的计算公式为：％activity＝[(A-Ab)/(At-Ab)]×100，其中A为含待测化合物的反应液的吸光度。抑制率的计算公式为：％inhibition＝100-％activity.
通过以上实验方法，测试了本发明中的部分化合物针对IDO的抑制活性。具体部化合物在10μM、浓度下的抑制活性见表1。
其中A表示抑制率大于80％、B表示抑制率为60-79％，C表示抑制率为30-59％；D表示抑制率为10-39％，E表示抑制率小于10％；阳性对照物在浓度为0.05μM时的抑制率为46％。
表1 本发明化合物对IDO的抑制活性分级
经试验证明，本发明提供的吲唑类化合物对IDO具有优异的抑制作用，可以用于预防和/或治疗多种疾病，如阿尔茨海默病、白内障、细胞免疫激活相关的感染、自身免疫性疾病、艾滋病、癌症、抑郁症或色氨酸代谢异常等。