本发明涉及真菌提取领域，尤其涉及一种高羊茅叶片中内生真菌的提取方法。
背景技术：
高羊茅学名：festucaelatakengexe.alexeev，又名：羊茅，属禾本目，禾本科多年生地被植物。按功能用途分类：分草坪型(观赏)、牧草型(作为牧草饲养牲畜)。性喜寒冷潮湿、温暖的气候，在肥沃、潮湿、富含有机质、ph值为4.7～8.6的细壤土中生长良好。大量应用于运动场草坪和防护草坪。作为牧草饲养牲畜。
目前，已经在高羊茅中发现内生真菌，但还没有对其进行提取的成熟方法。
技术实现要素：
发明目的：针对现有技术的不足与缺陷，本发明提供一种真菌提取效率高、提取存活率高、成本低的高羊茅叶片中内生真菌的提取方法。
技术方案：本发明所述的高羊茅叶片中内生真菌的提取方法，包括下述步骤，
(1)将高羊茅植株的叶片取下，在无菌操作台中放置15至20小时；
(2)将叶片放入75％酒精溶液中清洗30至45秒，然后放入0.5％次氯酸钠溶液中清洗10至15秒，使用清水清洗2至3次后放在无菌纸上干燥待用；
(3)将步骤(2)获得的叶片利用打孔器进行打孔，并将获得的圆形叶片放置在玻璃皿的培养基上；
(4)将玻璃皿进行密封，并通过酒精灯将密封条进行融合；
(5)将玻璃皿放置在暗室25摄氏度的环境下培养10至15天，获得内生真菌菌落；
(6)利用接种针将菌落挑出进行单独培养，获得内生真菌菌株。
其中，所述的步骤(3)的打孔器通过预先的高温高压灭菌操作。
其中，所述的步骤(3)的玻璃皿为直径9厘米的透明玻璃皿。
其中，所述的步骤(4)中采用保鲜膜进行玻璃皿的密封。
其中，所述的步骤(6)的接种针通过预先的高温高压灭菌操作。
有益效果：与现有技术相比，本发明具有以下显著优点：本发明高羊茅叶片中内生真菌的提取方法的真菌提取效率高、提取存活率高、成本低。
具体实施方式
实施例1：
本实施例的高羊茅叶片中内生真菌的提取方法，包括下述步骤，
(1)将高羊茅植株的叶片取下，在无菌操作台中放置15小时；
(2)将叶片放入75％酒精溶液中清洗30秒，然后放入0.5％次氯酸钠溶液中清洗10秒，使用清水清洗2次后放在无菌纸上干燥待用；
(3)将步骤(2)获得的叶片利用预先经过高温高压灭菌操作的打孔器进行打孔，并将获得的圆形叶片放置在直径9厘米玻璃皿的培养基上；
(4)采用保鲜膜对玻璃皿进行密封，并通过酒精灯将密封条进行融合；
(5)将玻璃皿放置在暗室25摄氏度的环境下培养10天，获得内生真菌菌落；
(6)利用预先经过高温高压灭菌操作的接种针将菌落挑出进行单独培养，获得内生真菌菌株。
实施例2：
本实施例的高羊茅叶片中内生真菌的提取方法，包括下述步骤，
(1)将高羊茅植株的叶片取下，在无菌操作台中放置20小时；
(2)将叶片放入75％酒精溶液中清洗45秒，然后放入0.5％次氯酸钠溶液中清洗15秒，使用清水清洗3次后放在无菌纸上干燥待用；
(3)将步骤(2)获得的叶片利用预先经过高温高压灭菌操作的打孔器进行打孔，并将获得的圆形叶片放置在直径9厘米玻璃皿的培养基上；
(4)采用保鲜膜对玻璃皿进行密封，并通过酒精灯将密封条进行融合；
(5)将玻璃皿放置在暗室25摄氏度的环境下培养15天，获得内生真菌菌落；
(6)利用预先经过高温高压灭菌操作的接种针将菌落挑出进行单独培养，获得内生真菌菌株。
实施例3：
本实施例的高羊茅叶片中内生真菌的提取方法，包括下述步骤，
(1)将高羊茅植株的叶片取下，在无菌操作台中放置18小时；
(2)将叶片放入75％酒精溶液中清洗40秒，然后放入0.5％次氯酸钠溶液中清洗12秒，使用清水清洗3次后放在无菌纸上干燥待用；
(3)将步骤(2)获得的叶片利用预先经过高温高压灭菌操作的打孔器进行打孔，并将获得的圆形叶片放置在直径9厘米玻璃皿的培养基上；
(4)采用保鲜膜对玻璃皿进行密封，并通过酒精灯将密封条进行融合；
(5)将玻璃皿放置在暗室25摄氏度的环境下培养12天，获得内生真菌菌落；
(6)利用预先经过高温高压灭菌操作的接种针将菌落挑出进行单独培养，获得内生真菌菌株。