本发明属于天然产物的纯化领域，具体涉及一种使用超临界流体色谱制备胆固醇的方法。
背景技术：
胆固醇，英文名称为cholesterol，胆固醇在血液中存在于脂蛋白中，其存在形式包括高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、极低密度脂蛋白胆固醇几种。在血中存在的胆固醇绝大多数都是和脂肪酸结合的胆固醇酯，仅有10%不到的胆固醇是以游离态存在的。高密度脂蛋白有助于清除细胞中的胆固醇，而低密度脂蛋白超标一般被认为是心血管疾病的前兆，血液中胆固醇含量每单位在140~199毫克之间，是比较正常的胆固醇水平。
超临界co2流体萃取（sfe）分离过程的原理是利用超临界流体的溶解能力与其密度的关系，即利用压力和温度对超临界流体溶解能力的影响而进行的。在超临界状态下，将超临界流体与待分离的物质接触，使其有选择性地把极性大小、沸点高低和分子量大小的成分依次萃取出来。当然，对应各压力范围所得到的萃取物不可能是单一的，但可以控制条件得到最佳比例的混合成分，然后借助减压、升温的方法使超临界流体变成普通气体，被萃取物质则完全或基本析出，从而达到分离提纯的目的，所以超临界co2流体萃取过程是由萃取和分离过程组合而成的。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种分离纯化胆固醇的方法，以得到一种高纯度的胆固醇，具体方案如下：以裸硅胶、c18、c8或氨基作为固定相，超临界co2做流动相，甲醇、乙醇和异丙醇为夹带剂，分离纯化得到纯度95%以上的胆固醇。包括以下步骤：
a．使用三氯甲烷溶解薄荷脑粗品，0.45um的微孔滤膜过滤；
b．配置夹带剂，具体为甲醇：乙醇：异丙醇=1:4:3；
c．使用含低比例夹带剂的流动相体系平衡系统15min，进样，洗脱70min后开始接收目标组分，接收约10min后使用含高比例的夹带剂进行洗脱；
d.将收集到的液体馏分使用旋转蒸发仪进行后处理，得到的白色粉末即为目标产物。
优选地，步骤c中的，洗脱固定相为裸硅胶、c18硅胶、c8硅胶或氨基类硅胶。
优选地，步骤c中的低比例夹带剂中co2：夹带剂比例为90：10~98：2。
本发明具有以下技术优势：使用超临界流体色谱纯化得到纯度大于95%的胆固醇，使用co2做流动相，仅添加少量有机溶剂，减少了有机溶剂对环境的污染，绿色环保，同时，制备过程简单，易于操作。
具体实施方式
实施例1
使用三氯甲烷溶解胆固醇粗品，然后使用0.45um的微孔滤膜进行过滤，配置甲醇：乙醇：异丙醇=1:4:3的夹带剂，裸硅胶作为固定相，使用超临界co2：夹带剂=90:10的流动相体系平衡系统15min，进样，洗脱约70min后开始接收目标组分，接收约10min，然后使用高比例的夹带剂进行洗脱。将接收的液体流份使用旋转蒸发仪进行后处理，得到的白色粉末即为目标产物。
实施例2
使用三氯甲烷溶解胆固醇粗品，然后使用0.45um的微孔滤膜进行过滤，配置甲醇：乙醇：异丙醇=1:4:3的夹带剂，c18胶作为固定相，使用超临界co2：夹带剂=95:5的流动相体系平衡系统15min，进样，洗脱约70min后开始接收目标组分，接收约10min，然后使用高比例的夹带剂进行洗脱。将接收的液体流份使用旋转蒸发仪进行后处理，得到的白色粉末即为目标产物。
实施例3
使用三氯甲烷溶解胆固醇粗品，然后使用0.45um的微孔滤膜进行过滤，配置甲醇：乙醇：异丙醇=1:4:3的夹带剂，c18胶作为固定相，使用超临界co2：夹带剂=98:2的流动相体系平衡系统15min，进样，洗脱约70min后开始接收目标组分，接收约10min，然后使用高比例的夹带剂进行洗脱。将接收的液体流份使用旋转蒸发仪进行后处理，得到的白色粉末即为目标产物。