本发明属于制药领域，具体涉及一类式2所示的2’-c-甲基取代核苷类化合物及其药学上可接受的盐，及其制备方法。此类化合物具有dot1l酶抑制剂活性，可在制备治疗或预防癌症的药物中应用。
背景技术：
已有多篇文献【1)olhava,e.j.methodsofsynthesizingsubstitutedpurinenucleosides.wo2014152566a2,2014；2)klaus,c.；raimondi,m.a.；daigle,s.r.；pollock,r.m.combinationofhistonemethyltransferasedotilinhibitorsandanticanceragentsfortreatmentofcancer.wo2014153001a1,2014；3)yu,w.；smil,d.；li,f.；tempel,w.；fedorov,o.；nguyen,k.t.；bolshan,y.；al-awar,r.；knapp,s.；arrowsmith,c.h.；vedadi,m.；brown,p.j.；schapira,m.,bromo-deaza-sah:apotentandselectivedot1linhibitor.bioorganic&medicinalchemistry2013,21(7),1787-1794；4)anglin,j.l.；deng,l.；yao,y.；cai,g.；liu,z.；jiang,h.；cheng,g.；chen,p.；dong,s.；song,y.,synthesisandstructure–activityrelationshipinvestigationofadenosine-containinginhibitorsofhistonemethyltransferasedot1l.journalofmedicinalchemistry2012,55(18),8066-8074；5)yu,w.；chory,e.j.；wernimont,a.k.；tempel,w.；scopton,a.；federation,a.；marineau,j.j.；qi,j.；barsyte-lovejoy,d.；yi,j.；marcellus,r.；iacob,r.e.；engen,j.r.；griffin,c.；aman,a.；wienholds,e.；li,f.；pineda,j.；estiu,g.；shatseva,t.；hajian,t.；al-awar,r.；dick,j.e.；vedadi,m.；brown,p.j.；arrowsmith,c.h.；bradner,j.e.；schapira,m.,catalyticsiteremodellingofthedot1lmethyltransferasebyselectiveinhibitors.natcommun2012,3,1288.】描述了核苷类dot1l抑制剂。dot1l抑制剂通常具有1所示的结构。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一类式2所示的2’-c-甲基取代的核苷类化合物或其药学上可接受的盐，此类化合物具有良好的dot1l酶抑制剂活性，以及更低的毒性。
本发明的另一个目的是提供上述2’-c-甲基取代的核苷类化合物的制备方法。
本发明的另一个目的是提供包含上述2’-c-甲基取代的核苷类化合物和/或其药学上可接受的盐的药物组合物。
本发明的再一个目的是提供上述2’-c-甲基取代的核苷类化合物和/或其药学上可接受的盐在制备治疗或预防癌症的药物上的用途。
本发明提供的是如下式2所示的2’-c-甲基取代的核苷类化合物：
其中，
x和y各自独立地选自碳或氮，z选自碳、氮、cr0，其中r0为卤素或氰基；优选地，x和z同时为氮，y为碳；x和z同时为碳，y为氮；y和z同时为氮，x为碳；或，x为氮，y为碳和z为碳；
m为
ar选自未取代的或被c1-c6烷基或卤素取代的c6-c12芳基，
环a为未取代的或被c1-c6烷基或卤素取代的c6-c12芳基，
l选自被取代或未被取代的c2-c6直链或支链亚烷基，取代或未被取代的c2-c6直链或支链亚烯基，取代或未被取代的c2-c6直链或支链亚炔基，取代或未被取代的c3-c6亚环状烷基，或取代或未被取代的c2-c6亚烷基c3-c6亚环状烷基，所述取代的取代基选自卤素、c1-c6烷氧基，所述c3-c6亚环状烷基优选为
r4选自c1-c6酰基或h；
m优选为
优选地，所述式2所示的化合物为由以下通式之一所示的2’-c-甲基取代的核苷类化合物：
其中，m与通式2中的限定相同。
在本发明一个优选的实施方案中，所述通式2所示的2’-c-甲基取代的核苷类化合物选自下列化合物中：
及其药学上可接受的盐。
本发明的2’-c-甲基取代的核苷类化合物可含有一个或多个手性中心，并因此可以产生能够根据绝对立体化学定义为(r)-型或(s)-型的对映异构体、非对映异构体和其他立体异构体形式。除非另有说明，本发明意在包括所有这些可能的异构体，包括所有可能的光学异构体和非对映异构体混合物和纯的或部分纯的化合物。
用于测定对映体的量的适当的方法为本领域技术人员所熟知。例如手性固定基础(stationarybase)上的hplc和使用手性位移试剂的nmr光谱研究。
本发明所使用术语中，c-核苷类似物按照核糖的1-和5-位的取代基在核糖两侧的相对位置的不同可以分为alpha-c-核苷类似物和beta-c-核苷类似物，具体而言，当核糖的1-和5-位的取代基为在核糖的异侧时，核苷的构型定义为alpha-型；当核糖的1-和5-位的取代基在核糖的同一侧时，核苷的构型定义为beta-型，例如，核苷类似物2；
在本发明中，术语“c1-c6烷基”是指主链上具有1至6个碳原子的直链或支链烷基，非限制性地包括甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、已基等；优选乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基。
在本发明中，术语“c3-c6环状烷基”是指在环上具有3至6个碳原子的环状烷基，非限制性地包括环丙基、环丁基、环戊基和环己基。
在本发明中，术语“c6-c12芳基”是指碳原子数为6～12个的不含杂原子的芳香族环基，例如苯基、萘基。
在本发明中，术语“酰基”包括具有在羰基碳原子的两个可用价位置之一连接的烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基或芳基烷基的基团，例如，烷羰基、环烷羰基、芳基羰基。“c1-c6酰基”是指c1-c6烷羰基等。
在本发明中，术语“异构体”是指具有相同分子式，但原子排列和构象不同非不同化合物。此外，本发明所述的术语“立体异构体”是指对于本发明的给定化合物来说可存在的任何各种立体异构构型并且包括几何异构体。
本发明的第二方面，还提供了所述2’-c-甲基取代的核苷类化合物2的制备方法，所述的方法包括如下步骤中的一步或多步：
(a)将杂环化合物3的氨基与rcl或ror发生保护反应，得到化合物4；
(a3)将糖化合物5的羟基与pgbr或pgcl发生羟基保护反应，得到内酯化合物5-1；
(b)将氨基被保护的化合物4脱除质子，进行br-金属交换后，与内酯化合物5-1发生加成反应，再还原得到核苷化合物6；
(c)将化合物6脱除羟基的保护基pg，得到化合物11；
(d)将碱基化合物8与酰基保护的糖化合物9发生缩合反应，得到核苷化合物10；
(e)化合物10脱除o-酰基保护，得到核苷化合物11；
(f)再将核苷化合物11用保护试剂保护，得到化合物7；
(g)化合物7与酰化剂lgcl或lg2o发生酰化反应，得到化合物12；
(h)将化合物7或化合物12叠氮取代后得到化合物13，再还原和脱保护得到化合物14。
(i)将化合物7或12与pg1nh发生胺基取代后得到化合物15或15-1，化合物15或15-1的pg1脱保护为化合物14；
(j)化合物14发生还原胺化反应，得到化合物16；
(k)将化合物12的胺基取代，得到化合物16；
(l)化合物16与m＝o发生还原胺化反应，得到化合物17；
(m)化合物14与m＝o发生还原胺化反应，得到化合物16-1；
(n)化合物16-1发生还原胺化反应，得到化合物17；
(o)将化合物17脱除双羟基的缩醛保护，得到化合物2；
其中，
x和y各自独立地选自碳或氮，z选自碳、氮、cr0，其中r0为卤素或氰基；优选地，x和z同时为氮，y为碳；x和z同时为碳，y为氮；y和z同时为氮，x为碳；或，x为氮，y为碳和z为碳；
r选自叔丁氧羰基(boc)，苄氧羰基(cbz)，乙酰基，异丁酰基，叔丁酰基(piv)，苯甲酰基，被卤素或c1-c6烷基取代的苯甲酰基，优选地，所述r为叔丁氧羰基；
r1选自h，叔丁氧羰基(boc)，苄氧羰基(cbz)，乙酰基，异丁酰基，叔丁酰基(piv)，苯甲酰基，被卤素或c1-c6烷基取代的苯甲酰基，优选地，所述r1为h或叔丁氧羰基；
lg选自对甲基苯磺酰基、甲磺酰基、苯磺酰基、咪唑磺酰基或三氟甲磺酰基；
pg选自2-萘甲基，1-萘甲基，叔丁基二甲基硅基，叔丁基二苯基硅基，三异丙基硅基，三乙基硅基，苄基，对甲氧基苄基，被卤素或c1-c6烷基取代的苄基，优选为2-萘甲基，对甲氧基苄基；
pg1选自邻苯二甲酰基；
acyl选自c1-c16酰基，优选选自苯甲酰基，被卤素或c1-c6烷基取代的苯甲酰基，乙酰基，进一步优选为苯甲酰基和乙酰基；
m为
其中，
ar选自未取代的或被c1-c6烷基或卤素取代的c6-c12芳基，
环a为未取代的或被卤素或c1-c6烷基取代的c6-c12芳基，
l选自被取代或未被取代的c2-c6直链或支链亚烷基，取代或未被取代的c2-c6直链或支链亚烯基，取代或未被取代的c2-c6直链或支链亚炔基，取代或未被取代的c3-c6亚环状烷基，或取代或未被取代的c2-c6亚烷基c3-c6亚环状烷基，所述取代的取代基选自卤素、c1-c6烷氧基，
所述c3-c6亚环状烷基优选为
r4选自c1-c6酰基或h；
m优选为
优选地，
步骤(a)中，
所述氨基保护反应分a1和a2两步进行；
a1步：将杂环化合物3为原料，与氨基保护试剂a1rcl或ror，在溶剂a1、碱a1，以及催化剂存在下进行，得中间体a1；
所述溶剂a1可以是醚类、甲苯、己烷和二氯甲烷中的一种或多种的混合溶剂；所述醚类选自乙醚、叔丁基甲基醚(tbme)、异丙醚、二氧六环、2-甲基四氢呋喃和四氢呋喃(thf)中的一种或多种；所述溶剂a1优选为四氢呋喃和二氯甲烷；
所述氨基保护试剂a1rcl或ror选自二碳酸二叔丁酯(boc2o)，氯甲酸叔丁酯(boc-cl)，苄氧甲酸酐(cbz2o)，氯甲酸苄酯(cbzcl)，特戊酰氯，醋酸酐，乙酰氯，异丁酸酐，异丁酰氯，苯甲酰氯，苯甲酸酐，卤素或c1-c6烷基取代的苯甲酰基，卤素或c1-c6烷基取代的苯甲酸酐，所述氨基保护试剂优选为boc2o；
所述碱a1选自吡啶、三乙胺、二异丙基乙胺、二甲氨基吡啶；所述碱a1优选为三乙胺；
所述催化剂为二甲氨基吡啶；
所述a1步反应的温度在-30摄氏度到+60摄氏度之间，反应时间为0.5小时至24小时；
a2步：将a1步制得的中间体a1，在溶剂a2存在下，与碱a2进行；
所述溶剂a2可以是醚类、醇类、水中的一种或多种的混合溶剂；所述醚类选自乙醚、tbme、异丙醚、二氧六环、2-甲基四氢呋喃和四氢呋喃中的一种或多种；所述醇类选自甲醇，乙醇，异丙醇中的一种或多种；所述溶剂a2优选为水；
所述碱a2选自氢氧化钠，氢氧化钾，氢氧化锂，碳酸钠，碳酸钾，碳酸锂，三乙胺，二异丙基乙基胺，氢氧化钙；
所述碱a2和溶剂a2混合后，碱的浓度选自1m到20m，优选为2m到4m之间；
所述a2步反应的温度在0摄氏度到+100摄氏度之间，反应时间为0.5小时至24小时。
步骤(a3)中，
所述羟基保护反应是以糖化合物5为原料，与羟基保护试剂pgbr或pgcl，在溶剂a3以及碱a3存在下进行反应，得到化合物5-1；
所述溶剂a3可以是醚类、酰胺类溶剂中的一种或多种的混合溶剂；所述醚类选自乙醚、tbme、异丙醚、2-甲基四氢呋喃和四氢呋喃中的一种或多种；所述酰胺类选自n，n-二甲基甲酰胺(dmf)，n，n-二甲基乙酰胺，甲酰胺；所述溶剂优选为四氢呋喃和n，n-二甲基甲酰胺；
所述羟基保护试剂pgbr或pgcl选自溴代试剂pgbr和氯代试剂pgcl；所述羟基保护试剂优选为2-萘甲基溴和对甲氧基苄氯；
所述碱a3选自吡啶、三乙胺、二异丙基乙胺、二甲氨基吡啶、氢化钠nah、六甲基二硅氨基钠，所述碱优选为nah；
所述羟基保护反应的温度在-30摄氏度到+150摄氏度之间，反应时间为0.5小时至12小时。
步骤(b)中，
所述反应的底物5-1中的pg，选自叔丁基二甲基硅基，叔丁基二苯基硅基，三乙基硅基，三异丙基硅基，三甲基硅基，苄基，对甲氧基苄基，卤素取代的苄基，1-萘甲基，2-萘甲基，优选为2-萘甲基和对甲氧基苄基；
所述脱质子反应是在溶剂b1存在下，以化合物4为原料，与金属有机试剂进行；
所述溶剂b1可以是醚类、甲苯、己烷和二氯甲烷中的一种或多种的混合溶剂；所述醚类选自乙醚、tbme、异丙醚、2-甲基四氢呋喃和四氢呋喃中的一种或多种；所述溶剂b1优选为四氢呋喃；
所述金属有机试剂选自异丙基氯化镁，甲基溴化镁，异丙基氯化镁-licl混合物(turbo-grignard试剂)，异丁基氯化镁，异丁基氯化镁-licl混合物，二氯化镁(2,2,6,6-四甲基哌啶)锂盐，二异丙胺基锂，六甲基二硅胺烷基锂，正丁基锂，异丁基锂，叔丁基锂，甲基锂，苯基锂中的一种或多种；优选为异丙基氯化镁，二异丙胺基锂；
所述脱质子反应的温度在-78摄氏度到+30摄氏度之间，反应时间为0.5小时至12小时。
所述br-金属交换反应是在溶剂b2存在下，与金属有机试剂b2进行反应；
所述溶剂b2可以是醚类、甲苯、己烷和二氯甲烷中的一种或多种的混合溶剂；所述醚类选自乙醚、tbme、异丙醚、2-甲基四氢呋喃和四氢呋喃中的一种或多种；所述溶剂优选为四氢呋喃。
所述金属有机试剂b2选自异丙基氯化镁，甲基溴化镁，异丙基氯化镁-licl混合物(turbo-grignard试剂)，异丁基氯化镁，异丁基氯化镁-licl混合物，二氯化镁(2,2,6,6-四甲基哌啶)锂盐，二异丙胺基锂，六甲基二硅胺烷基锂，正丁基锂，异丁基锂，叔丁基锂，甲基锂，苯基锂中的一种或多种；优选为异丙基氯化镁-licl混合物(turbo-grignard试剂)，正丁基锂；
所述br-金属交换反应的温度在-100摄氏度到-40摄氏度之间，反应时间为0.5小时至12小时。
所述加成反应是在溶剂b3存在下进行；
所述溶剂b3可以是醚类、甲苯、己烷和二氯甲烷中的一种或多种的混合溶剂；所述醚类选自乙醚、tbme、异丙醚、2-甲基四氢呋喃和四氢呋喃中的一种或多种；所述溶剂b3优选为四氢呋喃。
优选的，所述的加成反应是在路易斯酸催化剂存在下进行，所述路易斯酸催化剂选自cui、三氟甲磺酸亚铜(cuotf)、cucn、licl、cubr、cubr-二甲硫醚配合物、三氟化硼乙醚或tmscl等。
所述加成反应的温度在-100摄氏度到-10摄氏度之间，反应时间为0.5小时至12小时。
优选地，上述脱质子反应、br-金属交换反应、加成反应优选以“一锅煮”的方式进行。
所述还原反应是以上述脱质子反应、br-金属交换反应、加成反应“一锅煮”的粗产物为原料，在溶剂b4、还原剂b4，以及路易斯酸b4存在下进行,得到核苷化合物6；
所述还原剂b4选自氢化硅衍生物，优选为三乙基硅烷、聚甲基氢硅氧烷；
所述还原性反应是在路易斯酸催化剂b4的存在下进行，所述路易斯酸催化剂b4选自三氟化硼乙醚或三氟甲磺酸三甲基硅酯(tmsotf)等；所述路易斯酸催化剂b4优选为三氟甲磺酸三甲基硅酯(tmsotf)。
所述溶剂b4可以是醚类、甲苯、己烷和卤代烷烃中的一种或多种的混合溶剂；所述醚类选自乙醚、tbme、异丙醚、2-甲基四氢呋喃和四氢呋喃中的一种或多种；所述卤代烷烃选择二氯甲烷，1,2-二氯乙烷，1,1-二氯乙烷，三氯甲烷中的一种或多种。所述溶剂优选为二氯甲烷。
所述还原性反应的温度在-100摄氏度到-40摄氏度之间，反应时间为0.5小时至12小时；
步骤(c)中，
所述脱除保护基pg的反应选自在含氟试剂c1存在下，以化合物6为原料，在氧化剂c2和溶剂c2存在下或在含有pd、pt或者ni的催化剂c3、氢供体c3和溶剂c3存在下进行，得到化合物11；
当所述脱除保护基pg的反应是在含氟试剂c1存在下进行时，所述含氟试剂c1选自四丁基氟化铵三水合物(tbaf)、氟化氢钾(khf2)或氟化钾(kf)等；
当所述脱除保护基pg的反应是在氧化剂c2和溶剂c2存在下进行时，所述氧化剂c2选自二氯二氰基苯醌(ddq)等；
所述溶剂c2选自二氯甲烷，三氯甲烷，甲醇，乙醇，水中的一种或多种的混合溶剂；所述溶剂c2优选为二氯甲烷和甲醇的混合物；
所述脱除保护基pg的反应是在含有pd、pt或者ni的催化剂c3存在下，与氢供体c3，在溶剂c3中进行时；
所述含有pd、pt或者ni的催化剂c3包括但不仅限于钯碳、钯黑、氧化钯、醋酸钯、铂炭、氧化铂、雷尼镍等；
所述氢供体c3包括氢气、转移氢化氢供体或采用活泼金属与质子溶剂的组合作为氢供体；所述转移氢化氢供体选自甲酸铵，环己烯，四氢化萘，环己二烯，甲基环己二烯，或2,6-二甲基-1,4-二氢-3,5-吡啶二羧酸二乙酯(hantzschester)等；所述采用活泼金属与质子溶剂的组合作为氢供体，其中活泼金属选自锌、锌汞齐、钠汞齐、或镁，质子溶剂选自甲醇、乙醇、异丙醇或水；
所述溶剂c3选自甲醇、乙醇、异丙醇、二氯甲烷、三氯甲烷、乙腈、丙酮、水、tbme、dmf和thf中的一种或多种溶剂的混合物；
所述脱保护反应c的反应温度在-20摄氏度到+70摄氏度之间，反应时间为0.5小时至24小时；
优选地，所述脱保护反应为在完成一次脱保护反应后，将产物再次在选自在含氟试剂存在下、在氧化剂和溶剂c2存在下或在含有pd、pt或者ni的催化剂、氢供体和溶剂c3存在下进行反应。
步骤(d)中，
所述缩合反应是以化合物8和化合物9为原料，与硅烷化试剂d，在溶剂d，以及路易斯酸d存在下进行，得到核苷化合物10；
所述缩合反应的底物中9的acyl为酰基，选自苯甲酰基，取代苯甲酰基，乙酰基，优选为苯甲酰基和乙酰基。
所述溶剂d可以是醚类、甲苯、己烷、乙腈和卤代烷烃中的一种或多种的混合溶剂；所述醚类选自乙醚、tbme、异丙醚、2-甲基四氢呋喃和四氢呋喃中的一种或多种；所述卤代烷烃选择二氯甲烷，1,2-二氯乙烷，1,1-二氯乙烷，三氯甲烷中的一种或多种；所述溶剂d优选为乙腈。
所述硅烷化试剂为n,o-双(三甲基硅烷基)乙酰胺(bsa)。
所述路易斯酸d选自四氯化锡，四氯化钛，四溴化钛，三氯化铝，以及三氟甲磺酸三甲基硅酯。所述路易斯酸优选为三氟甲磺酸三甲基硅酯。
所述缩合反应的温度在0摄氏度到+100摄氏度之间，反应时间为1小时至24小时。
步骤(e)中，脱o-酰基保护反应选自条件e1或条件e2
条件e1：所述脱o-酰基保护是以化合物10为原料，在碱e1、溶剂e1存在下进行，得到核苷化合物11；
所述碱e1选自氢氧化钠，氢氧化钾，氢氧化锂，碳酸钠，碳酸钾，碳酸锂，三乙胺，二异丙基乙基胺，氢氧化钙；
所述碱e1和溶剂e1混合后，碱的浓度选自1m到20m，优选为2m到4m之间；
所述溶剂e1可以是醚类、甲苯、己烷、乙腈和卤代烷烃中的一种或多种的混合溶剂；所述醚类选自乙醚、tbme、异丙醚、2-甲基四氢呋喃和四氢呋喃中的一种或多种；所述溶剂优选为四氢呋喃；
反应温度在-20摄氏度到+100摄氏度之间，反应时间为1小时至24小时；
所述脱酰基保护反应的化合物10和化合物11中的r1选自苯甲酰，特戊酰，乙酰基。
条件e2：所述脱o-酰基保护在碱e2的存在下，于溶剂e2中进行；
所述碱选自氨水、氨气，甲醇钠，碳酸钾，三乙胺，优选为氨气；
所述溶剂e2选自甲醇，乙醇，异丙醇，优选为甲醇；
反应温度在-20摄氏度到+100摄氏度之间，反应时间为1小时至24小时；
所述脱o-酰基保护反应的化合物10中的r1选自苯甲酰，特戊酰，乙酰基，化合物11中的r1选自苯甲酰；
步骤(f)中，
所述保护反应是以化合物11为原料与保护试剂，在溶剂f1以及酸催化剂存在下进行反应，得到核苷化合物7；
所述溶剂f1选自丙酮、甲醇、乙醇、二氯甲烷、三氯甲烷、乙腈、叔丁基甲基醚(tbme)、n，n-二甲基甲酰胺(dmf)、水和四氢呋喃(thf)中的一种或多种溶剂的混合物；
所述保护试剂选自丙酮，2,2-二甲氧基丙烷(cas＝77-76-9)；
所述酸催化剂选自对甲苯磺酸，苯磺酸，三氟甲磺酸，甲磺酸，盐酸，硫酸，樟脑磺酸；
所述保护反应的温度在-20摄氏度到+100摄氏度之间，反应时间为1小时至24小时。
步骤(g)中，
所述酰化反应是以化合物7为原料与酰化剂lgcl或lg2o，在溶剂g1和缚酸剂存在下进行反应，得到核苷化合物12；
所述酰化剂lgcl或lg2o选自对甲苯磺酰氯、甲磺酰氯、苯磺酰氯或三氟甲磺酸酐等；
所述缚酸剂选自三乙胺、n，n-二异丙基乙胺(dipea)或二氮杂二环(dbu，cas：6674-22-2)等；
所述溶剂g1可以是醚类、甲苯、己烷和卤代烷烃中的一种或多种的混合溶剂；所述醚类选自乙醚、tbme、异丙醚、2-甲基四氢呋喃和四氢呋喃中的一种或多种；所述卤代烷烃选择二氯甲烷，1,2-二氯乙烷，1,1-二氯乙烷，三氯甲烷中的一种或多种；所述溶剂g1优选为二氯甲烷。
所述酰化反应的温度在-100摄氏度到+100摄氏度之间，反应时间为1小时至24小时。
步骤(h)中，
当以化合物7为原料，
所述叠氮取代反应为化合物7与叠氮磷酸二苯酯，在溶剂h1以及碱h1的存在下进行，得到核苷化合物13；
或，所述叠氮取代反应也可以分h2-1和h2-2两步进行，得到核苷化合物13；
所述溶剂h1选自二甲基甲酰胺，二甲基乙酰胺，四氢呋喃，二氧六环，乙二醇二甲醚，甲苯，二甲苯，氯苯，优选为甲苯和二氧六环；
所属碱h1选自二氮杂二环(dbu)，二异丙基乙基胺，优选为二氮杂二环(dbu)；所述叠氮取代反应的温度在0摄氏度到+150摄氏度之间，反应时间为1小时至24小时。
所述h2-1步为与叠氮磷酸二苯酯，以化合物7为原料，在溶剂h2-1中，以及碱h2-1的存在下进行；
所述溶剂h2-1选自二甲基甲酰胺，二甲基乙酰胺，四氢呋喃，二氧六环，乙二醇二甲醚，甲苯，二甲苯，氯苯，优选为甲苯和二氧六环；
所述碱h2-1选自二氮杂二环(dbu)，二异丙基乙基胺，优选为二氮杂二环(dbu)；
所述h2-1反应的温度在0摄氏度到+150摄氏度之间，反应时间为1小时至24小时。
所述h2-2步为以h2-1步的产物为原料，与叠氮化钠，碱h2-2、在相转移催化剂h2-2存在下，在溶剂h2-2中进行，得到核苷化合物13；
所述溶剂h2-2选自二甲基甲酰胺，二甲基乙酰胺，四氢呋喃，二氧六环，乙二醇二甲醚，甲苯，二甲苯，氯苯，优选为二氧六环；
所述碱h2-2选自二氮杂二环(dbu)，二异丙基乙基胺，优选为二氮杂二环(dbu)。
所述相转移催化剂h2-2选自溴化四正丁铵，氯化四正丁铵，碘化四正丁铵，冠醚；所述相转移催化剂优选为15-冠-5；
所述反应的温度在0摄氏度到+150摄氏度之间，反应时间为1小时至24小时；
优选的，所述叠氮取代反应为分h2-1和h2-2两步进行；
当以化合物12为原料，所述的叠氮取代反应为在溶剂h3中，与叠氮化钠进行，得到核苷化合物13；
所述溶剂h3选自二甲基甲酰胺，二甲基乙酰胺，四氢呋喃，二氧六环，乙二醇二甲醚，优选为二甲基甲酰胺。
所述叠氮取代反应的温度在0摄氏度到+150摄氏度之间，反应时间为1小时至24小时。
所述化合物13的还原反应可以为在膦试剂h4、或氢化物h4存在下，在溶剂h4中进行，得到核苷化合物14，
或，
所述化合物13的还原反应也可在催化剂h5、氢供体h5、以及溶剂h5存在下进行，得到核苷化合物14；
当化合物13的还原反应在膦试剂h4、或氢化物h4存在下，在溶剂h4中进行时，
所述膦试剂h4选自三苯基膦、三甲基磷或三正丁基膦；
所述氢化物h4选自硼氢化钠、氰基硼氢化钠或三乙酰氧基硼氢化钠等；
所述溶剂h4选自水、二氯甲烷、三氯甲烷、乙腈、tbme、dmf和thf中的一种或多种溶剂的混合物；
所述还原反应的温度在-20摄氏度到+100摄氏度之间，反应时间为1小时至24小时。
当所述化合物13的还原反应h5是在溶剂h5、催化剂h5、以及氢供体h5存在下进行时，
所述溶剂h5选自甲醇、乙醇、异丙醇、二氯甲烷、三氯甲烷、乙腈、丙酮、水、tbme、dmf和thf中的一种或多种溶剂的混合物；
所述催化剂h5是含有pd、pt或者ni的催化剂，包括但不仅限于钯碳、钯黑、氧化钯、醋酸钯、铂炭、氧化铂、雷尼镍等；
所述氢供体h5包括氢气、转移氢化氢供体或采用活泼金属与质子溶剂的组合作为氢供体；所述转移氢化氢供体选自甲酸铵，环己烯，四氢化萘，环己二烯，甲基环己二烯，或2,6-二甲基-1,4-二氢-3,5-吡啶二羧酸二乙酯(hantzschester)等；所述采用活泼金属与质子溶剂的组合作为氢供体，其中活泼金属选自锌、锌汞齐、钠汞齐、或镁，质子溶剂选自甲醇、乙醇、异丙醇或水。
所述还原反应的温度在-100摄氏度到+100摄氏度之间，反应时间为1小时至24小时。
步骤(i)中，
当以化合物7为原料，
所述的胺基取代反应为化合物7与胺基化试剂pg1nhi1，以及三苯基膦，以及缩合剂i1，在溶剂i1中进行，得到核苷化合物15；
所述胺基化试剂pg1nhi1为邻苯二甲酰亚胺；
所述缩合剂i1选自偶氮二羧酸二乙酯，偶氮二甲酸二异丙酯；
所述溶剂i1选自二甲基甲酰胺，二甲基乙酰胺，四氢呋喃，二氧六环，乙二醇二甲醚，乙醇，甲醇，水，二氯甲烷，三氯甲烷，乙腈，叔丁基甲基醚(tbme)中的一种或多种溶剂的混合物，所述溶剂优选为thf；
所述胺基取代反应温度在-20摄氏度到+100摄氏度之间，反应时间为1小时至24小时；
当以化合物12为原料，
所述的胺基取代反应为化合物12与胺基化试剂i2，在溶剂i2中进行，得到核苷化合物15或15-1；
所述胺基化试剂i2选自邻苯二甲酰亚胺，邻苯二甲酰亚胺钾盐；
所述溶剂i2选自二甲基甲酰胺，二甲基乙酰胺，四氢呋喃，二氧六环，乙二醇二甲醚，乙醇，甲醇，水，二氯甲烷，三氯甲烷，乙腈，tbme中的一种或多种溶剂的混合物；
所述胺基取代反应的温度在0摄氏度到+150摄氏度之间，反应时间为1小时至24小时。
所述的脱保护反应是化合物15或15-1与水合肼，在溶剂i3中进行，得到核苷化合物14；
所述溶剂i3选自二甲基甲酰胺，二甲基乙酰胺，四氢呋喃，二氧六环，乙二醇二甲醚，乙醇，甲醇，水、二氯甲烷、三氯甲烷、乙腈、tbme中的一种或多种溶剂的混合物；所述溶剂i3优选为乙醇；
所述脱保护反应的温度在0摄氏度到+150摄氏度之间，反应时间为1小时至24小时。
步骤(j)中，
所述还原胺化反应j1是以化合物14为原料，在烷基化试剂j1，还原剂j1，酸催化剂j1，以及溶剂j1中进行，得到核苷化合物16；
所述烷基化试剂j1选自丙酮，二甲氧基丙酮缩酮，优选为丙酮；
所述还原剂j1选自氰基硼氢化钠或三乙酰氧基硼氢化钠，优选为三乙酰氧基硼氢化钠；
所述酸催化剂j1控制反应液的ph在2到10之间，所述酸催化剂选自三氟乙酸、盐酸、甲酸或乙酸，优选为乙酸；
所述溶剂j1中进行，所述溶剂j1选自二氯甲烷、三氯甲烷、乙腈、tbme、甲醇、乙醇、丙酮、水和thf中的一种或多种溶剂的混合物，优选为甲醇；
所述还原胺化反应j1的温度在-20摄氏度到+100摄氏度之间，反应时间为1小时至24小时。
步骤(k)中，
所述化合物12的胺基取代反应为化合物12与胺基化试剂，在溶剂k1中进行，得到核苷化合物16；
所述胺基化试剂选自异丙胺，异丙胺钾盐；
所述溶剂k1选自异丙胺、二甲基甲酰胺，二甲基乙酰胺，四氢呋喃，二氧六环，乙二醇二甲醚，乙醇，甲醇，水、二氯甲烷、三氯甲烷、乙腈、tbme中的一种或多种溶剂的混合物；所述溶剂k1优选为乙醇或异丙胺；
所述胺基取代反应的温度在0摄氏度到+150摄氏度之间，反应时间为1小时至24小时。
步骤(l)中，
所述还原胺化反应是以化合物16为原料，在烷基化试剂m＝o，还原剂，酸催化剂，以及溶剂l1中进行，得到核苷化合物17；
所述烷基化试剂m＝o选自酮类试剂
所述还原剂选自氰基硼氢化钠或三乙酰氧基硼氢化钠；优选为三乙酰氧基硼氢化钠；
所述还原胺化反应过程中控制反应液的ph在2到10之间；
所述酸催化剂选自三氟乙酸、盐酸、甲酸或乙酸；优选为乙酸；
所述溶剂l1选自二氯甲烷、三氯甲烷、乙腈、tbme、甲醇、乙醇、水和thf中的一种或多种溶剂的混合物，优选为乙腈；
所述还原胺化反应的温度在0摄氏度到+100摄氏度之间，反应时间为12小时至36小时。
步骤(m)中，
所述还原胺化反应是以化合物14为原料，在烷基化试剂m＝o，还原剂，酸催化剂，以及溶剂m1中进行，得到核苷化合物16-1；
所述烷基化试剂m＝o选自酮类试剂
所述还原剂选自氰基硼氢化钠或三乙酰氧基硼氢化钠；优选为三乙酰氧基硼氢化钠；
所述还原胺化反应过程中控制反应液的ph在2到10之间；
所述酸催化剂选自三氟乙酸、盐酸、甲酸或乙酸，优选为乙酸；
所述溶剂m1选自二氯甲烷、三氯甲烷、乙腈、tbme、甲醇、乙醇、水和thf中的一种或多种溶剂的混合物，优选为甲醇或乙腈；
所述还原胺化反应的温度在0摄氏度到+100摄氏度之间，反应时间为12小时至36小时。
步骤(n)中，
所述还原胺化反应是以化合物16-1为原料，在烷基化试剂，还原剂，酸催化剂，以及溶剂n1中进行，得到核苷化合物17；
所述烷基化试剂选自丙酮，2,2-二甲氧基丙烷，优选为丙酮；
所述还原剂选自氰基硼氢化钠或三乙酰氧基硼氢化钠；优选为三乙酰氧基硼氢化钠；
所述还原胺化反应过程中控制反应液的ph在2到10之间；
所述酸催化剂选自三氟乙酸、盐酸、甲酸或乙酸，优选为乙酸；
所述溶剂n1选自二氯甲烷、三氯甲烷、乙腈、tbme、甲醇、乙醇、水和thf中的一种或多种溶剂的混合物，优选为甲醇或乙腈；
所述还原胺化反应的温度在0摄氏度到+100摄氏度之间，反应时间为12小时至36小时。
步骤(o)中，
所述脱保护反应是以化合物17为原料，在酸性物质存在下，于溶剂o1中进行，得到核苷化合物2；
所述酸性物质选自对甲苯磺酸、樟脑磺酸、氯化氢、醋酸、硫酸或三氟乙酸等；所述酸性物质优选为氯化氢和三氟乙酸；
所述溶剂o1选自二氯甲烷、三氯甲烷、乙腈、tbme、甲醇、乙醇、水和thf中的一种或多种溶剂的混合物；所述溶剂o1优选为二氯甲烷或水；
所述脱保护反应温度在-20摄氏度到+100摄氏度之间，反应时间为1小时至24小时。
本发明中使用的术语“一锅煮”表示有关反应各阶段的反应产物不经分离和纯化，在一个步骤中进行。
本发明的第三方面是提供一种药物组合物，它含有治疗有效量的选自根据本发明通式2的2’-c-甲基取代的核苷类化合物和/或其药学上可接受的盐中的一种或多种作为活性成分，以及任选的药学上可接受的载体和/或赋形剂(例如，稀释剂等)。
本发明的第四方面是提供通式2的2’-c-甲基取代的核苷类化合物或其药学上可接受的盐、和包含该化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物在制备用于抗癌药物中的用途。本发明所述的化合物或其药学上可接受的盐可以单独给药，或者与其他药学上可接受的化学治疗剂、或激酶抑制剂、表观遗传学靶点药物、抗体类抗肿瘤药物联合给药，特别是与其他抗癌症药物组合。所述化学治疗剂包括但不限于：奥沙利铂(oxaliplatin)、异长春花碱(vinorebine)、紫杉醇(paclitaxel)、多西他赛(docetaxel)、吉西他滨(gemcitabine)、卡培他滨(capecitabine)、利妥昔单抗(rituximab)、羟基喜树碱(hydroxycampothecin)、吡柔比星(pirarubicin)、表柔比星(epirubicin)、阿扎胞苷(azacitidine)、地西他滨(decitabine)、阿糖胞苷(cytarabine)；所述激酶抑制剂包括但不限于：mek(mitogen-activatedproteinkinasekinase)抑制剂，所述mek抑制剂包括但不限于曲美替尼(trametinib)、考比替尼(cobimetinib)；egfr抑制剂(epidermalgrowthfactorreceptor)，所述egfr抑制剂包括但不限于易瑞沙(gefitinib)、厄洛替尼(erlotinib)、阿法替尼(afatinib)、brigatinib、埃克替尼(icotinib)、奥斯替尼(osimertinib)；所述表观遗传学靶点药物包括但不限于组蛋白去乙酰化酶(histonedeacetylase，hdac)抑制剂，所述hdac抑制剂包括但不限于伏立诺他(vorinostat)、帕比司他(panobinostat)、贝利司他(belinostat)；所述抗体类抗肿瘤药物包括但不仅限于贝伐单抗(bevacizumab)、西妥昔单抗(cetuximab)、易普利姆玛(ipilimumab)、纳武单抗(nivolumab)、派姆单抗(pembrolizumab)。待组合的各成分可同时或顺序地给予，以单一制剂形式或以不同制剂的形式给予。所述组合不仅包括本发明的化合物和一种其它活性剂的组合，而且包括本发明的化合物和两种或更多种其它活性剂的组合。
因此，在本发明的第五方面，提供了一种药物组合物，其包含治疗有效量的选自根据本发明的2’-c-甲基取代的核苷类化合物和其药学上可接受的盐中的一种或多种作为活性成分以及其他药学上可接受的治疗剂，特别是其他抗癌症药物。所述药物组合物任选可以进一步包含药学上可接受的载体和/或赋形剂(例如，稀释剂等)。
在本发明的第六方面，提供了一种治疗或预防癌症的方法，所述方法包括给需要该治疗的患者给药治疗有效量的选自根据本发明的2’-c-甲基取代的核苷类化合物和其药学上可接受的盐中的一种或多种，或根据本发明的包含治疗有效量的选自根据本发明的2’-c-甲基取代的核苷类化合物和其药学上可接受的盐中的一种或多种作为活性成分的药物组合物。
在本发明中，所述所述癌症为非实体瘤，所述非实体瘤包括但不仅限于血液肿瘤，所述血液肿瘤包括：淋巴瘤、急性白血病、慢性白血病。
有益效果
本发明提供了一类具有2-c-甲基取代的核苷类化合物2及其制备方法。相对于已知的，具有结构1特征的核苷类dot1l抑制剂，化合物2具有相当的dot1l酶抑制剂活性、相当的体内药效，以及较低的毒性。
附图说明
图1显示了cis-2e在mv(4,11)移植瘤动物模型上皮下给药对动物体重以及肿瘤抑制情况。
具体实施方式
本发明进一步参考以下实施例，所述实施例详细描述本发明的盐及晶型的制备和应用。对本领域技术人员显而易见的是，对于材料和方法两者其中的许多改变可在不脱离本发明范围的情况下实施。
下述制备例中，1h-nmr用varianmercuryamx300型仪、varianmercury-300highperformancedigitalft-nmr型仪、brukerultrashield500nmr型仪、varianmercury-400highperformancedigitalft-nmr型仪、agilent1260prospekt2brukerascend600nmr型仪测定，氘代氯仿(cdcl3)、氘代甲醇(meod-d4)为溶剂，四甲基硅烷(tms)为内标。质谱用thermofinniganmat-95型仪、watersq-tofultimaglobalspectrometer型仪测定。熔点在sgwx-4熔点仪上测定。
下述制备例中，沸程为60～90℃的石油醚，乙醇，乙酸乙酯等试剂均为分析纯，由国药集团化学试剂有限公司提供，所用试剂和溶剂除特别说明外，均未经特别处理。所有溶剂在使用前均经过重新蒸馏，所使用的无水溶剂均是按标准方法干燥处理获得。除说明外，所有反应均是在氮气保护下进行并用tlc跟踪，后处理时均经饱和食盐水洗和无水硫酸镁干燥过程。产品的纯化除说明外均使用硅胶(200-300目)的柱色谱法，所使用的硅胶包括200-300目，gf254为青岛海洋化工厂或烟台缘博硅胶公司生产。
除特别说明外，常用试剂和溶剂购自上海毕得医药科技有限公司、上海书亚医药科技有限公司、上海泰坦科技股份有限公司、安耐吉化学或国药集团化学试剂有限公司。
旋光度(+/-)通过日本表面化学株式会社(jasco)制造的or-2090手性检测器(hg-xe灯，150w)测量。
高效液相色谱(hplc)测定条件：agilent1260分析型高效液相色谱系统(安捷伦公司)和lc3000制备型高效液相色谱系统(北京创新通恒科技有限公司)。
手性od或oj柱购自大赛璐药物手性技术(上海)有限公司，柱尺寸2cmфx25cm。
分析型高效液相色谱条件：c18柱(5μm,4.6x250mm)，紫外检测波段为214和280nm，洗脱条件0-90％乙腈(含0.1％v/vtfa)梯度洗30分钟。
制备高效液相色谱条件：c18柱(5μm,19x250mm)，紫外检测波段为214和280nm，洗脱条件0-90％乙腈(含0.1％v/vtfa)梯度洗30分钟。
在上述讨论和下述实施例中，下列缩写具有如下含义。如果某一缩写没有定义，则它具有通常被接受的含义。
tlc为薄层色谱；
dmf为n，n-二甲基甲酰胺；
etoac为乙酸乙酯；
dmap为4-二甲氨基吡啶；
thf为四氢呋喃；
dmso为二甲基亚砜；
dcm为二氯甲烷；
et3n为三乙胺；
tbme为叔丁基甲基醚；
boc2o为二碳酸二叔丁酯；
cbz2o为苄氧甲酸酐；
cbzcl为氯甲酸苄酯；
tmsotf为三氟甲磺酸三甲基硅酯；
ddq为二氯二氰基苯醌；
bsa为n,o-双(三甲基硅烷基)乙酰胺；
stab为三乙酰氧基硼氢化钠。
实施例1
化合物5-1a的制备：
将原料5(5.0g,30.84mmol)【根据tetrahedron:asymmetry2007,18,500-512方法制备】溶于无水dmf(200ml)中，氮气保护,冷却至-10℃，缓慢加入60％nah(1.6g，40.09mmol)，在-10℃搅拌反应1小时后，缓慢加入2-溴甲基萘(10.2g，46.26mmol)，继续搅拌30分钟后，再按上述操作加入60％nah(1.6g，40.09mmol)和2-溴甲基萘(10.2g，46.26mmol)，重复两次，保持温度在-10℃搅拌反应48小时后，将反应液倒入500ml冰水中淬灭反应，用乙酸乙酯(100mlx4)萃取，合并有机相，200ml饱和食盐水洗涤有机层，无水硫酸钠干燥，浓缩，硅胶柱分离(10:1，v/v，石油醚:etoac)得无色油状产物5-1a(12.6g，21.59mmol)，产率：70％。
高分辨质谱(esi+)：c39h35o5+理论值为583.2479，实测值为583.2471。
实施例2
化合物4a的制备：
将化合物3a(5.0g，23.36mmol)悬浮于thf(100ml)中，加入三乙胺(16.3ml,0.12mol)和二甲氨基吡啶(287mg,2.35mmol)，分批缓慢加入boc2o(15.4g,70.42mmol)，室温搅拌反应过夜，反应完毕后，加入3m氢氧化钠水溶液(100ml)，加热至60℃，搅拌反应6小时，待恢复至室温，分离有机层，乙酸乙酯(20mlx3)萃取水层，合并有机相，饱和食盐水(100ml)洗涤有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩，硅胶柱分离(10:1，v/v，石油醚:etoac)，得白色固体产物4a(6.3g，20.09mmol)，产率：86％。
m.p.160.5–163.8℃(石油醚–etoac)；rf＝0.29(5:1，v/v，石油醚:etoac)；hplctr＝2.72min；1h-nmr(400mhz,cdcl3)δ8.62(s,1h,arh),8.58(s,1h,nh),7.70(s,1h,arh),1.57(s,9h,c(ch3)3)；13c-nmr(126mhz,cdcl3)δ149.51(c＝o),149.41,148.68,133.48,129.16,103.44,83.87(c(ch3)3),28.14(c(ch3)3)；高分辨质谱(esi+)：c10h12brn5nao2+理论值为336.0067，实测值为336.0058。
实施例3
化合物4b的制备：
将化合物3b(5.0g,23.47mmol)悬浮于thf(100ml)中，加入三乙胺(16.3ml,0.12mol)和二甲氨基吡啶(287mg,2.35mmol)，分批缓慢加入boc2o(15.4g,70.42mmol),室温搅拌反应过夜，反应完毕后，加入3m氢氧化钠水溶液(100ml)，加热至60℃，搅拌反应6小时，待恢复至室温，分离有机层，乙酸乙酯(20mlx3)萃取水层，合并有机相，饱和食盐水(100ml)洗涤有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩，硅胶柱分离(10:1，v/v，石油醚:etoac)，得白色固体产物4b(6.6g，21.12mmol)，产率：90％。
m.p.180.0℃(分解),rf＝0.21(10:1，v/v，石油醚:etoac)；hplctr＝2.79min；1h-nmr(400mhz,cdcl3)δ8.28(s,1h,arh),8.24(s,1h,nh),7.39(d,j＝4.8hz,1h,arh),6.90(d,j＝4.8hz,1h,arh),1.58(s,9h,c(ch3)3)；13c-nmr(126mhz,cdcl3)δ151.52(c＝o),150.60,147.00,116.57,115.34,108.71,103.35,83.13(c(ch3)3),28.29(c(ch3)3)；高分辨质谱(esi+)：c11h13brn4nao2+理论值为335.0114，实测值为335.0119。
实施例4
化合物6a的制备：
无水无氧条件下，将4b(1.0g，3.19mmol)的thf(20ml)溶液冷却至-30℃，滴加二异丙胺基锂thf溶液(2.1ml，4.15mmol，2m四氢呋喃溶液)，控制温度在-30℃，搅拌反应50min后，继续降温至-78℃，滴加n-buli(5.0ml，7.98mmol，1.6m己烷溶液)，滴加完毕后，搅拌反应5min，再滴加5-1a(5.6g，9.58mmol)的thf(20ml)溶液，保持温度在-78℃，反应2小时，tlc检测反应完毕后，加饱和nh4cl水溶液(50ml)淬灭反应，恢复至室温后，用乙酸乙酯(40ml×4)萃取4次，合并有机层，用饱和碳酸氢钠溶液和饱和食盐水洗，用无水硫酸钠干燥，浓缩，将残余物溶于20ml干燥的ch2cl2中，冷却至-78℃，加入et3sih(2.0ml,12.77mmol)，搅拌5min后，滴加tmsotf(1.2ml,6.39mmol)，保持温度在-78℃反应2h，tlc检测反应完毕后，加饱和碳酸氢钠水溶液(40ml)淬灭反应，水层用ch2cl2(15ml×3)萃取3次,合并有机层，无水硫酸钠干燥，浓缩，硅胶柱分离纯化(4:1，v/v，石油醚:etoac)得到白色无定型固体产物6a(1.9g,2.40mmol)，产率：75％。
1h-nmr(400mhz,cdcl3)beta-构型特征峰δ6.0(s,1h,h-1)；高分辨质谱(esi+)：c50h49n4o6+理论值为801.3647，实测值为801.3643。
实施例5
化合物6b的制备：
无水无氧条件下，将4a(0.5g，1.59mmol)的thf(10ml)溶液冷却至-30℃，滴加二异丙胺基锂thf溶液(1.03ml，2.07mmol，2m四氢呋喃溶液)，控制温度在-30℃，搅拌反应50min后，继续降温至-78℃，滴加n-buli(2.5ml，3.98mmol，1.6m己烷溶液)，滴加完毕后，搅拌反应5min，再滴加5-1a(2.8g，4.77mmol)的thf(20ml)溶液，保持温度在-78℃，反应2小时，tlc检测反应完毕后，加饱和nh4cl水溶液(40ml)淬灭反应，恢复至室温后，用乙酸乙酯(20ml×4)萃取4次，合并有机层，用无水硫酸钠干燥，浓缩，得到中间体粗品；在氮气保护下，将上述所得粗品溶于干燥的mecn中，冷却至-40℃，加入et3sih(1.02ml,6.37mmol)，搅拌5min后，滴加bf3·et2o(402μl,3.18mmol)，自然升温至室温后，反应2h，tlc检测反应完毕后，加饱和碳酸氢钠水溶液(10ml)淬灭反应，水层用ch2cl2(15ml×3)萃取3次,合并有机层，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，硅胶柱分离纯化(25:1，v/v，二氯甲烷:甲醇)得到白色泡状固体6b(726mg,1.03mmol)，产率：65％。
1h-nmr(400mhz,cdcl3)beta-构型特征峰δ5.8(s,1h,h-1)；高分辨质谱(esi+)：c44h40n5o4+理论值为702.3075，实测值为702.3070。
实施例6
化合物7a的制备：
室温下，将中间体6a(1.5g,1.87mmol)溶于40ml二氯甲烷/甲醇(4:1)中，加入10滴水，加入ddq(2.6g，11.24mmol)，室温搅拌反应72小时，反应完毕后加入50ml饱和碳酸氢钠溶液淬灭反应，分离有机层，无水硫酸钠干燥，浓缩，得到略带红棕色无定型固体11a。高分辨质谱(esi+)：c17h25n4o6+理论值为381.1769，实测值为381.1777。
将中间体11a溶于40ml丙酮中，加入2,2-二甲氧基丙烷(20ml，v/v＝2)，滴加浓hcl调ph至3左右，室温搅拌过夜反应，反应结束后，加饱和碳酸氢钠溶液调至中性，旋干反应液，硅胶柱分离纯化(15:1，二氯甲烷：甲醇)得白色无定型固体7a(432mg，1.35mmol)，产率：72％。
高分辨质谱(esi+)：c15h21n4o4+理论值为321.1557，实测值为321.1565。
实施例7
化合物7b的制备：
室温下，将中间体6b(1.0g,1.42mmol)溶于40ml二氯甲烷/甲醇(4:1)中，加入10滴水，加入ddq(1.9g，8.55mmol)，室温搅拌反应72小时，反应完毕后加入50ml饱和碳酸氢钠溶液淬灭反应，分离有机层，无水硫酸钠干燥，浓缩，得到略带红棕色无定型固体11b。高分辨质谱(esi+)：c11h16n5o4+理论值为282.1197，实测值为282.1203。
将中间体11b溶于40ml丙酮中，加入2,2-二甲氧基丙烷(20ml，v/v＝2)，滴加浓hcl调ph至3左右，室温搅拌过夜反应，反应结束后，加饱和碳酸氢钠溶液调至中性，旋干反应液，硅胶柱分离纯化(15:1，二氯甲烷:甲醇)得白色无定型固体7b(321mg，1.00mmol)，产率：70％。
高分辨质谱(esi+)：c14h20n5o4+理论值为322.1510，实测值为322.1517。
实施例8
化合物12a的制备：
将中间体7a(1.0g，3.12mmol)溶于20ml干燥的dcm中，冷却至0℃，加入三乙胺(2.2ml，15.61mmol)，缓慢滴入mscl(0.3ml，3.75mmol)，保持温度在0℃搅拌反应30min，反应完毕后，加2ml甲醇淬灭反应，搅拌10min，用20ml饱和碳酸氢溶液洗反应液，分离有机层，无水硫酸钠干燥，浓缩，硅胶柱分离纯化(1:1，v/v，石油醚:etoac)得白色无定型固体12a(1.0g，2.56mmol)，产率：82％。
高分辨质谱(esi+)：c16h23n4o6s+理论值为399.1333，实测值为399.1339。
实施例9
化合物13a的制备：
将化合物7a(1.0g，3.12mmol)溶于20ml无水thf中，在氮气保护下，降温至0℃，加入三苯基膦(983mg，3.75mmol)，再逐滴加入偶氮二甲酸二异丙酯(0.7ml，3.75mmol)，保持温度在0℃继续搅拌反应10分钟后，加入叠氮磷酸二苯酯(0.8ml，3.75mmol)，升至室温反应5小时，反应完毕后，浓缩反应液，硅胶柱分离纯化(25:1，v/v，二氯甲烷:甲醇)得白色无定型固体13a(927mg，2.68mmol)，产率：86％。
高分辨质谱(esi+)：c15h20n7o3+理论值为346.1622，实测值为346.1628。
实施例10
化合物12b的制备：
将中间体7b(4.3g，13.38mmol)溶于150ml干燥的dcm中，冷却至0℃，加入三乙胺(9.2ml，66.20mmol)，缓慢滴入mscl(1.23ml，15.89mmol)，保持温度在0℃搅拌反应30min，反应完毕后，加2ml甲醇淬灭反应，搅拌10min，用100ml饱和碳酸氢溶液洗反应液，分离有机层，无水硫酸钠干燥，浓缩，硅胶柱分离纯化(30:1，v/v，dcm:meoh)得白色固体12b(4.0g，10.01mmol)，产率：75％。
高分辨质谱(esi+)：c15h22n5o6s+理论值为400.1285，实测值为400.1277。
实施例11
化合物16a的制备：
将化合物12a(1.0g，2.51mmol)溶于10ml异丙胺中，于耐压反应管加热至50℃反应48小时，反应完毕后，蒸干异丙胺，残留物硅胶柱分离纯化(15:1，v/v，dcm:meoh)得浅棕色无定型固体16a(844mg，2.33mmol)，产率：93％。
高分辨质谱(esi+)：c18h28n5o3+理论值为362.2187，实测值为362.2181。
实施例12
化合物16b的制备：
将化合物12b(4.0g，10.01mmol)溶于50ml异丙胺中，于耐压反应管加热至50℃反应48小时，反应完毕后，蒸干异丙胺，残留物硅胶柱分离纯化(15:1，v/v，dcm:meoh)得浅棕色无定型固体16b(3.4g，9.51mmol)，产率：95％。
高分辨质谱(esi+)：c17h27n6o3+理论值为363.2139，实测值为363.2135。
实施例13
化合物14a的制备：
将化合物12a(1.0g，2.51mmol)溶解于无水dmf(10ml)中，加入nan3(326mg,5.02mmol)，搅拌成悬浊液，升温至80℃搅拌反应2小时，原料完全后，将反应液冷却至室温，用dcm(50ml)稀释，依次用水(20ml)、饱和nacl溶液(20ml)洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩得化合物粗品13a；高分辨质谱(esi+)：c15h20n7o3+理论值为346.1622，实测值为346.1628。将粗品13a溶于thf(20ml)中，依次向该溶液中加入pph3(790mg,3.01mmol)、水(2.0ml)，加热至40℃搅拌反应过夜，反应完全后，将反应液浓缩，过柱纯化得化合物14a(601mg，1.88mmol)，产率：75％。
高分辨质谱(esi+)：c15h22n5o3+理论值为320.1717，实测值为320.1723。
实施例14
化合物14b的制备：
将化合物12b(5.0g，12.52mmol)溶解于无水dmf(50ml)中，加入nan3(1.6g,25.04mmol)，搅拌成悬浊液，升温至80℃搅拌反应2小时，原料完全后，将反应液冷却至室温，用dcm(150ml)稀释，依次用水(100ml)、饱和nacl溶液(100ml)洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩得化合物粗品13b；高分辨质谱(esi+)：c14h19n8o3+理论值为347.1575，实测值为347.1570。将粗品13b溶于thf(50ml)中，依次向该溶液中加入pph3(306g,13.77mmol)、水(5.0ml)，加热至40℃搅拌反应过夜，反应完全后，将反应液浓缩，过柱纯化得化合物14b(2.8g，8.76mmol)，产率：70％。
高分辨质谱(esi+)：c14h21n6o3+理论值为321.1670，实测值为321.1661。
实施例15
化合物16a的制备：
在氮气保护下，将化合物14a(1.0g，3.13mmol)溶于20ml无水甲醇中，加入丙酮(2.4ml，v/m＝2.4),acoh(0.4ml，6.26mmol)，室温搅拌10分钟后，缓慢加入stab(1.3g，6.26mmol)，继续反应2小时，tlc检测反应结束后，加入二氯甲烷(40ml)稀释反应液，用饱和碳酸氢钠溶液(40ml)洗涤，饱和食盐水(50ml)洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，硅胶柱分离纯化得无定型白色固体16a(996mg，2.76mmol)，产率：88％。
高分辨质谱(esi+)：c18h28n5o3+理论值为362.2187，实测值为362.2181。
实施例16
化合物16b的制备：
在氮气保护下，将化合物14b(2.5g，7.80mmol)溶于50ml无水甲醇中，加入丙酮(6ml，v/m＝2.4)，acoh(0.9ml，15.61mmol)，室温搅拌10分钟后，缓慢加入stab(3.0g，14.30mmol)，继续反应2小时，tlc检测反应结束后，加入dcm和meoh(50ml，10:1，v/v)稀释反应液，用饱和碳酸氢钠溶液(50ml)洗涤，饱和食盐水(50ml)洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，硅胶柱分离纯化得无定型白色固体16b(2.4g，6.63mmol)，产率：85％。
高分辨质谱(esi+)：c17h27n6o3+理论值为363.2139，实测值为363.2132。
实施例17
化合物10a的制备：
称取化合物8a(20.0g，83.60mmol)混悬于300ml乙腈中，加入n,o-双(三甲基硅烷基)乙酰胺(53.4ml，217.36mmol)，室温搅拌至反应液澄清，加入9a(53.4g，91.96mmol)，补加200ml乙腈搅拌至全部溶解，加入三氟甲磺酸三甲基硅酯(53.0ml，292.51mmol)，加热至80℃，搅拌反应8小时，反应完毕后，加饱和碳酸氢钠溶液调ph＝7，蒸除乙腈，加二氯甲烷500ml溶解残留物，分离有机层，饱和食盐水(200ml)洗涤一次，无水硫酸钠干燥，浓缩，硅胶柱分离纯化(1:1，v/v，石油醚:etoac)，得无定型白色固体产物10a(47.2g，67.72mmol)，产率：81％。
1h-nmr(400mhz,cdcl3)δ9.17(s,1h),8.91(s,1h),8.29(s,1h),8.19–7.95(m,8h),7.68–7.32(m,12h),6.84(s,1h),6.24(d,j＝6.0hz,1h),5.01–4.89(m,2h),4.75(td,j＝6.0,3.7hz,1h),1.79(d,j＝0.7hz,3h)。
实施例18
化合物11a的制备：
将化合物10a(40.0g，57.33mmol)溶于乙醇/四氢呋喃(600ml，1:2)中，加入3mol/l氢氧化钠水溶液100ml，室温搅拌反应2小时，用1mol/l盐酸水溶液中和反应液，蒸除有机溶剂，用二氯甲烷和甲醇的混合溶剂(1000ml，10:1，v/v)溶解残留物，加入200ml饱和食盐水，分离有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩，得化合物11a。
高分辨质谱(esi+)：c18h20n5o5+理论值为386.1459，实测值为386.1451。
实施例19
化合物7c的制备：
将实施例17所得化合物11a粗品混悬于200ml丙酮中，加入2,2-甲氧基丙烷(200ml)，再加入对甲苯磺酸(39.5g，229.33mmol)，室温搅拌反应10小时，反应完全后，加入碳酸氢钠(19.3g，229.33mmol)，搅拌1小时，蒸除有机溶剂，用600ml乙酸乙酯稀释残留物，用600ml水洗涤，分离有机相，再用乙酸乙酯(400mlx3)萃取水层，合并有机层，饱和食盐水(500ml)洗涤，无水硫酸钠干燥，硅胶柱分离纯化(40:1，v/v，dcm:meoh)得白色固体产物7c(15.6g，36.69mmol)，两步产率：64％。
1h-nmr(400mhz,meod-d4)δ11.24(s,1h),8.77(s,1h),8.70(s,1h),8.05(dd,j＝8.4,1.4hz,2h),7.69–7.61(m,1h),7.55(ddd,j＝8.3,6.6,1.3hz,2h),6.38(s,1h),4.64(d,j＝2.1hz,1h),4.30(td,j＝3.9,2.0hz,1h),3.75(qd,j＝12.2,3.9hz,2h),1.60(s,3h),1.39(s,3h),1.16(s,3h)。高分辨质谱(esi+)：c21h24n5o5+理论值为426.1772，实测值为426.1765。
实施例20
化合物12c的制备：
将化合物7c(15.6g，36.69mmol)溶于无水二氯甲烷(150ml)中，冰浴冷却至0℃，加入n，n-二异丙基乙胺(12.1ml，73.33mmol)，再缓慢滴入甲磺酰氯(3.4ml，44.00mmol)，滴加完毕后，室温搅拌反应1小时，加入10ml甲醇淬灭反应，用饱和碳酸氢钠溶液(200ml)洗涤，分离有机相，饱和食盐水(200ml)洗，无水硫酸钠干燥，浓缩后经硅胶柱分离纯化，得无定型白色固体产物12c(15.9g，31.53mmol)，产率：86％。
高分辨质谱(esi+)：c22h26n5o7s+理论值为504.1547，实测值为504.1540。
实施例21
化合物13c的制备：
将化合物12c(15.9g，31.53mmol)溶于100ml无水dmf中，加入nan3(6.2g，94.73mmol)，升温至80℃，过夜反应，减压蒸除dmf，残留物用硅胶柱分离纯化得白色固体产物13c(12.1g，26.84mmol)，产率：85％。
1h-nmr(400mhz,dmso-d6)δ11.25(s,1h),8.80(s,1h),8.60(s,1h),8.06(d,j＝7.4hz,2h),7.66(t,j＝7.3hz,1h),7.56(t,j＝7.6hz,2h),6.42(s,1h),4.60(d,j＝2.7hz,1h),4.41(dt,j＝7.1,3.9hz,1h),3.94(dd,j＝13.1,7.2hz,1h),3.72(dd,j＝13.1,4.3hz,1h),1.62(s,3h),1.40(s,3h),1.25(s,3h)。
实施例22
化合物15a的制备：
将化合物7c(500mg，1.18mmol)混悬于10ml四氢呋喃中，加入邻苯二甲酰亚胺(346mg，2.35mmol)和三苯基膦(617mg，2.35mmol)，冰浴冷却至0℃，缓慢滴入diad(466μl，2.35mmol)，滴加完毕后，恢复至室温搅拌反应过夜，蒸干溶剂，硅胶柱分离纯化得化合物15a(521mg，0.94mmol)，产率：80％。
高分辨质谱(esi+)：c29h27n6o6+理论值为555.1987，实测值为555.1993。
实施例23
化合物15-1a的制备：
将化合物12c(500mg，0.99mmol)溶于10ml无水乙醇中，加入邻苯二甲酰亚胺(730mg，4.96mmol)，封管加热至100℃过夜反应，反应完后，浓缩反应液，硅胶柱分离纯化得化合物15-1a(358mg，0.79mmol)，产率：80％。
高分辨质谱(esi+)：c22h23n6o5+理论值为451.1724，实测值为451.1728。
实施例24
化合物14c的制备：
将化合物15a(500mg，0.90mmol)溶于10ml乙醇中，加入一水合肼(168μl，5.41mmol)，回流反应2小时后，蒸干反应液，残留物硅胶柱分离纯化得化合物14c(257mg，0.80mmol)产率：89％。
高分辨质谱(esi+)：c14h21n6o3+理论值为321.1670，实测值为321.1676。
实施例25
化合物14c的制备：
将化合物15-1a(500mg，1.11mmol)溶于10ml乙醇中，加入一水合肼(207μl，6.65mmol)，回流反应2小时后，蒸干反应液，残留物硅胶柱分离纯化得化合物14c(326mg，1.02mmol)产率：92％。
高分辨质谱(esi+)：c14h21n6o3+理论值为321.1670，实测值为321.1675。
实施例26
化合物14c的制备：
将化合物13c(12.0g，26.64mmol)溶于120ml四氢呋喃中，加入三苯基膦(9.1g，34.63mmol)和水(2.4ml，133.20mmol)，加热至40℃，搅拌过夜反应，反应完毕后，蒸除溶剂，残留物溶于7mol/l的氨甲醇溶液(100ml)中，室温搅拌5小时，蒸除溶剂，得粗品14c。
高分辨质谱(esi+)：c14h21n6o3+理论值为321.1670，实测值为321.1665。
实施例27
化合物16c的制备：
在氮气保护下，将14c粗品溶于100ml无水甲醇中，搅拌下加入丙酮(20.5ml)，和乙酸(3.1ml，53.28mmol)，室温搅拌10分钟后，分批加入三乙酰氧基硼氢化钠(11.3g，53.28mmol)，继续室温反应5小时，反应完毕后用饱和碳酸氢钠水溶液调ph至7，用二氯甲烷和甲醇的混合溶剂(10:1，v/v)萃取反应液(200mlx3)，合并有机相，饱和食盐水(200ml)洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，硅胶柱分离纯化(15:1，v/v，dcm:meoh)得到无定型白色固体16c(6.2g，17.05mmol)，产率：64％。
1h-nmr(400mhz,meod-d4)δ8.29(s,1h),8.21(s,1h),6.27(s,1h),4.54–4.51(m,1h),4.42–4.34(m,1h),3.08(dd,j＝12.5,8.4hz,1h),3.00(dd,j＝12.5,4.5hz,1h),2.93(p,j＝6.4hz,1h),1.65(s,3h),1.43(s,3h),1.21(s,3h),1.12(d,j＝6.3hz,6h),nh2从缺。高分辨质谱(esi+)：c17h27n6o3+理论值为363.2139，实测值为363.2133。
实施例28
化合物16c的制备：
将化合物12c(5.0g，9.93mmol)溶于50ml异丙胺中，于耐压反应管加热至50℃反应48小时，反应完毕后，蒸干异丙胺，残留物硅胶柱分离纯化(20:1,dcm:meoh)得浅棕色无定型固体16c(3.2g，8.94mmol)，产率：90％。
1h-nmr(400mhz,meod-d4)δ8.29(s,1h),8.21(s,1h),6.27(s,1h),4.54–4.51(m,1h),4.42–4.34(m,1h),3.08(dd,j＝12.5,8.4hz,1h),3.00(dd,j＝12.5,4.5hz,1h),2.93(p,j＝6.4hz,1h),1.65(s,3h),1.43(s,3h),1.21(s,3h),1.12(d,j＝6.3hz,6h),nh2从缺。高分辨质谱(esi+)：c17h27n6o3+理论值为363.2139，实测值为363.2134。
实施例29
化合物17b的制备：
在氮气保护下，将化合物16b(0.2g，0.55mmol)溶于无水乙腈(20ml)中，加入acoh(0.06ml，1.10mmol)和侧链1(根据w.yu,e.j.chory,a.k.wernimont,w.tempel,a.scopton,a.federation,j.j.marineau,j.qi,d.barsyte-lovejoy,j.yi,r.marcellus,r.e.iacob,j.r.engen,c.griffin,a.aman,e.wienholds,f.li,j.pineda,g.estiu,t.shatseva,t.hajian,r.al-awar,j.e.dick,m.vedadi,p.j.brown,c.h.arrowsmith,j.e.bradner,m.schapira,natcommun2012,3,1288中的方法制备；206mg，0.83mmol)，搅拌10分钟后，升温至60℃，分批加入三乙酰氧基硼氢化钠(stab，234mg，1.10mmol)，温度维持在60℃搅拌反应48小时后，反应液置于冰浴下，加入饱和碳酸氢钠溶液调至中性，再加入3m氢氧化钠溶液调ph至10，用dcm和meoh的混合溶液(20mlx3，8:1，v/v)萃取反应液，合并有机相，饱和食盐水(50ml)洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，硅胶柱分离纯化得白色无定型固体17b(246mg，0.41mmol)，产率：75％。
高分辨质谱(esi+)：c31h47n8o4+理论值为595.3715，实测值为595.3709。
实施例30
化合物2b的制备：
将化合物17b(50.0mg，0.08mmol)溶于三氟乙酸/水(9:1，v/v)中，室温搅拌反应2.5小时，反应完毕后蒸除三氟乙酸，加入15ml二氯甲烷和甲醇的混合溶剂(4:1，v/v)溶解残留物，用饱和碳酸氢钠水溶液调至碱性，分离有机层，饱和食盐水(10ml)洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，过柱纯化得白色固体产物2b(42.0mg，0.076mmol)，产率：90％。
高分辨质谱(esi+)：c28h43n8o4+理论值为555.3402，实测值为555.3394。
实施例31
化合物17c的制备：
在氮气保护下，将化合物16c(0.2g，0.55mmol)溶于无水乙腈(20ml)中，加入acoh(0.06ml，1.10mmol)和侧链1(根据w.yu,e.j.chory,a.k.wernimont,w.tempel,a.scopton,a.federation,j.j.marineau,j.qi,d.barsyte-lovejoy,j.yi,r.marcellus,r.e.iacob,j.r.engen,c.griffin,a.aman,e.wienholds,f.li,j.pineda,g.estiu,t.shatseva,t.hajian,r.al-awar,j.e.dick,m.vedadi,p.j.brown,c.h.arrowsmith,j.e.bradner,m.schapira,natcommun2012,3,1288中的方法制备；206mg，0.83mmol)，搅拌10分钟后，升温至60℃，分批加入三乙酰氧基硼氢化钠(stab，234mg，1.10mmol)，温度维持在60℃搅拌反应48小时后，反应液置于冰浴下，加入饱和碳酸氢钠溶液调至中性，再加入3m氢氧化钠溶液调ph至10，用dcm和meoh的混合溶液(20mlx3，8:1，v/v)萃取反应液，合并有机相，饱和食盐水(50ml)洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，硅胶柱分离纯化得无定型白色无定型固体17c(230mg，0.39mmol)，产率：70％。
高分辨质谱(esi+)：c31h47n8o4+理论值为595.3715，实测值为595.3709。
实施例32
化合物2c的制备：
将化合物17c(50.0mg，0.08mmol)溶于三氟乙酸/水(9:1，v/v)中，室温搅拌反应2.5小时，反应完毕后蒸除三氟乙酸，加入15ml二氯甲烷和甲醇的混合溶剂(4:1，v/v)溶解残留物，用饱和碳酸氢钠水溶液调至碱性，分离有机层，饱和食盐水(10ml)洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，过柱纯化得无定型白色固体产物2c(42.9mg，0.077mmol)，产率：92％。
rf＝0.53(8:1:0.01，v/v/v，dcm:meoh:nh4oh)；[α]d20＝17.00(c＝0.100,ch3oh)；hplctr＝2.47min；1h-nmr(500mhz,meod-d4)δ8.23(s,1h,arh),8.21(s,1h,arh),7.26–7.23(m,2h,arh),7.21–7.17(m,2h,arh),6.04(s,1h,h-1),4.31-4.28(m,2h,h-3,h-4),3.61–3.37(m,2h,h-5,异丙基-ch),3.30–3.17(m,3h,h-5’,-ch2-),3.09–2.83(m,2h,-ch2-),1.84(p,j＝6.6hz,2h,-ch2-),1.28(s,9h,c(ch3)3),1.23(d,j＝5.9hz,3h,异丙基-ch3),1.19(d,j＝6.5hz,3h,异丙基-ch3),0.92(s,3h,2-ch3),nh,nh2,oh从缺；13c-nmr(126mhz,meod-d4)δ158.76(arc),157.43(arc),153.88(arc),150.00(arc),146.57(arc),141.41(arc),137.93(arc),126.54(2xarc),120.69(arc),120.31(2xarc),94.29(c-1),80.64(c-4),79.73(c-2),77.32(c-3),54.83(异丙基-ch),53.01(c-5),50.26(-ch2-),38.66(-ch2-),35.00(c(ch3)3),31.85(c(ch3)3),28.10(-ch2-),20.14(2-ch3),17.42(异丙基-ch3),17.39(异丙基-ch3)；高分辨质谱(esi+)：c28h43n8o4+理论值为555.3402，实测值为555.3390。
实施例33
化合物17d的制备：
在氮气保护下，将化合物16b(0.2g，0.55mmol)溶于无水乙腈(20ml)中，加入acoh(0.06ml，1.10mmol)和侧链2(根据e.j.olhava,us20160024134a1中的方法制备；224mg，0.83mmol)，搅拌10分钟后，升温至60℃，分批加入stab(234mg，1.10mmol)，温度维持在60℃搅拌反应48小时后，反应液置于冰浴下，加入饱和碳酸氢钠溶液调至中性，再加入3m氢氧化钠溶液调ph至10，用dcm和meoh的混合溶液(20mlx3，8:1，v/v)萃取反应液，合并有机相，饱和食盐水(50ml)洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，硅胶柱分离纯化得无定型白色无定型固体17d(279mg，0.45mmol)，产率：82％。
高分辨质谱(esi+)：c34h49n8o3+理论值为617.3922，实测值为617.3920。
实施例34
化合物17d的制备：
在氮气保护下，将化合物14b(0.2g，0.62mmol)溶于无水乙腈(20ml)中，加入acoh(0.07ml，1.25mmol)和侧链2(根据e.j.olhava,us20160024134a1中的方法制备；251mg，0.93mmol)，搅拌10分钟后，分批加入三乙酰氧基硼氢化钠(265mg，1.25mmol)，室温搅拌反应48小时后，反应液置于冰浴下，加入饱和碳酸氢钠溶液调至中性，再加入3m氢氧化钠溶液调ph至10，用dcm和meoh的混合溶液(20mlx3，8:1，v/v)萃取反应液，合并有机相，饱和食盐水(50ml)洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩过柱纯化得16-1a；将16-1a溶于无水二氯乙烷(20ml)中，氮气保护下加入acoh(0.07ml，1.25mmol)和无水丙酮(0.6ml，v/m＝3)，搅拌30分钟后，分批加入三乙酰氧基硼氢化钠(265mg，1.25mmol)，室温搅拌反应72小时后，反应液置于冰浴下，加入饱和碳酸氢钠溶液调至中性，再加入3m氢氧化钠溶液调ph至10，用dcm和meoh的混合溶液(20mlx3，8:1，v/v)萃取反应液，合并有机相，饱和食盐水(50ml)洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，硅胶柱分离纯化得无定型白色固体17d(208mg，0.34mmol)，产率：54％。
高分辨质谱(esi+)：c34h49n8o3+理论值为617.3922，实测值为617.3929。
实施例35
化合物2d的制备：
将化合物17d(50.0mg，0.08mmol)溶于2ml甲醇中，室温下加入6nhcl溶液(0.4ml，v/v＝5)，升温至60℃，反应过夜，反应结束后，置于冰浴下，加入饱和碳酸氢钠溶液调至中性，再加入3m氢氧化钠溶液调ph至10，用dcm和meoh的混合溶液(10mlx4，4:1，v/v)萃取反应液，合并有机相，饱和食盐水(20ml)洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，硅胶柱分离纯化得无定型白色固体2d(42mg，0.07mmol)，产率：90％。
高分辨质谱(esi+)：c31h45n8o3+理论值为577.3609，实测值为577.3602。
实施例36
化合物cis-2d和trans-2d的制备：
将实施例30制备的化合物2d(36.0mg，0.06mmol)柱层析分离后得到cis-2d(23.5mg，0.04mmol)和trans-2d(7.5mg，0.01mmol)。
化合物cis-2d：高分辨质谱(esi+)：c31h45n8o3+理论值为577.3609，实测值为577.3601。
化合物trans-2d：高分辨质谱(esi+)：c31h45n8o3+理论值为577.3609，实测值为577.3598。
实施例37
化合物17e的制备：
在氮气保护下，将化合物16c(0.2g，0.55mmol)溶于无水乙腈(20ml)中，加入acoh(0.06ml，1.10mmol)和侧链2(根据e.j.olhava,us20160024134a1中的方法制备；224mg，0.83mmol)，搅拌10分钟后，升温至60℃，分批加入stab(234mg，1.10mmol)，温度维持在60℃搅拌反应48小时后，反应液置于冰浴下，加入饱和碳酸氢钠溶液调至中性，再加入3m氢氧化钠溶液调ph至10，用dcm和meoh的混合溶液(20mlx3，8:1，v/v)萃取反应液，合并有机相，饱和食盐水(20ml)洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，硅胶柱分离纯化得无定型白色固体17e(259mg，0.42mmol)，产率：76％。
高分辨质谱(esi+)：c34h49n8o3+理论值为617.3922，实测值为617.3915。
实施例38
化合物2e的制备：
将化合物17e(0.5g，0.81mmol)溶于5ml甲醇中，室温下加入6nhcl溶液(0.25ml)，升温至60℃，反应过夜，反应结束后，置于冰浴下，加入饱和碳酸氢钠溶液调至中性，再加入3m氢氧化钠溶液调ph至10，用dcm和meoh的混合溶液(10mlx4，4:1，v/v)萃取反应液，合并有机相，饱和食盐水(10ml)洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，硅胶柱分离纯化得无定型白色固体2e(0.4g，0.71mmol)，产率：87％。
高分辨质谱(esi+)：c31h45n8o3+理论值为577.3609，实测值为577.3602。
实施例39
化合物cis-2e和trans-2e的制备：
将实施例33制备的化合物2e(400mg，0.69mmol)柱层析分离后得到cis-2e(282mg，0.49mmol)和trans-2e(68mg，0.12mmol)。
化合物cis-2e：[α]d20＝26.43(c＝0.140,ch3oh)；1h-nmr(500mhz,meod-d4)δ8.42(s,1h,嘌呤-h),8.22(s,1h,嘌呤-h),7.47(s,1h,arh),7.37(d,j＝8.4hz,1h,arh),7.26(dd,j＝8.5,1.8hz,1h,arh),6.03(s,1h,h-1),4.10–4.01(m,2h,h-4,h-3),3.25(p,j＝9.1hz,1h,n-环丁基-ch-),3.07(p,j＝6.6hz,1h，异丙基-ch),3.02–2.90(m,2h,h-5,h-5’),2.76(p,j＝7.6hz,2h,-ch2-),2.25–2.14(m,2h,环丁基-ch2-),1.86(t,j＝5.7hz,3h，-ch2-,环丁基-ch-),1.64(p,j＝9.1hz,2h,环丁基-ch2-),1.36(s,9h,c(ch3)3),1.07(d,j＝6.7hz,3h,异丙基-ch3),1.00(d,j＝6.6hz,3h,异丙基-ch3),0.92(s,3h,2-ch3),nh,nh2,oh从缺；13c-nmr(126mhz,meod-d4)δ157.37(嘌呤-c),156.48(arc),153.90(嘌呤-c),150.29(嘌呤-c),146.63(arc),146.63(arc),146.62(arc),146.61(arc),141.34(嘌呤-c),121.10(arc),121.10(arc),120.41(嘌呤-c),93.39(c-1),82.68(c-4),79.79(c-2),77.13(c-3),53.48(n-环丁基-ch-),52.30(异丙基-ch),49.72(c-5),36.29(环丁基-ch2-),36.26(-ch2-),36.20(环丁基-ch2-),35.58(c(ch3)3),32.29(c(ch3)3),29.58(环丁基-ch-),27.73(-ch2-),20.27(2-ch3),19.08(异丙基-ch3),18.57(异丙基-ch3)；高分辨质谱(esi+)：c31h45n8o3+理论值为577.3609，实测值为577.3594。
化合物trans-2e：[α]d20＝20.87(c＝0.115,ch3oh)；1h-nmr(600mhz,meod-d4)δ8.45(s,1h,嘌呤-h),8.22(s,1h,嘌呤-h),7.47(s,1h,arh),7.38(d,j＝8.2hz,1h,arh),7.27(dd,j＝8.5,1.8hz,1h,arh),6.05(s,1h,h-1),4.08(ddd,j＝8.9,6.9,2.2hz,1h,h-4),4.04(d,j＝9.0hz,1h,h-3),3.68–3.61(m,1h,n-环丁基-ch-),3.07(p,j＝6.6hz,1h,异丙基-ch),3.02(dd,j＝14.9,2.0hz,1h,h-5),2.96(dd,j＝14.9,6.7hz,1h,h-5’),2.82–2.76(m,2h,-ch2-),2.28–2.19(m,2h,环丁基-ch2-),2.01(dq,j＝14.3,7.2hz,3h,-ch2-,环丁基-ch-),1.81(t,j＝9.4hz,2h,环丁基-ch2-),1.36(s,9h,c(ch3)3),1.07(d,j＝6.7hz,3h,异丙基-ch3),1.00(d,j＝6.6hz,3h,异丙基-ch3),0.93(s,3h,2-ch3),nh,nh2,oh从缺；13c-nmr(151mhz,meod-d4)δ157.36(嘌呤-c),156.51(arc),153.89(嘌呤-c),150.28(嘌呤-c),146.68(arc),146.66(arc),146.63(arc),146.61(arc),141.30(嘌呤-c),121.12(2xarc),120.36(嘌呤-c),93.31(c-1),82.83(c-4),79.80(c-2),77.03(c-3),54.42(n-环丁基-ch-),52.42(异丙基-ch),49.35(c-5),35.57(c(ch3)3),35.33(-ch2-),33.90(环丁基-ch2-),33.77(环丁基-ch2-),32.29(c(ch3)3),29.12(环丁基-ch-),28.25(-ch2-),20.27(2-ch3),19.33(异丙基-ch3),18.56(异丙基-ch3)；高分辨质谱(esi+)：c31h45n8o3+理论值为577.3609，实测值为577.3594。
实施例40
化合物的dot1l抑制活性测试。
多功能酶标仪:envision(perkinelmer,usa)。材料:dot1l购自bpsbioscience公司；检测试剂盒为alphalisadot1lhistoneh3lysine-n-methyltransferaseassay(perkinelmer)。检测方法：使用alphalisadot1lhistoneh3lysine-n-methyltransferaseassay(perkinelmer)检测活性。
dot1l活性检测方法：
人源重组dot1l蛋白购自bpsbioscience公司，其组蛋白甲基转移酶活性采用perkinselmer公司的dot1lhistoneh3lysine-n-methyltransferaseassay试剂盒检测，以核小体为底物，sam提供甲基，在dot1l的催化作用下，将核小体上的组蛋白h3上第79位赖氨酸进行甲基化后，利用alphalisa的方法，在680nm波长的激发光下，能够产生发射波长为615nm的荧光信号。根据荧光信号的变化反映dot1l的活力。
将2μl酶、2μl底物和1μl不同浓度的待测化合物分别加入384反应板中(proxiplatetm-384plus,perkinelmer)。室温孵育3个小时后，加入2.5μl终止液终止反应，之后用alphalisa试剂盒检测酶活性。同时设以dmso替代待测化合物的溶剂对照组、epz5676阳性对照组和空白对照组，每个样品每个浓度设3个复孔。反应终体积为12.5μl，具体反应体系为2％dmso，5nmdot1l，0.15ng/ml核小体，20μmsam。其数据处理以浓度的对数值对活性百分数作图，然后采用非线性回归算出拟和曲线，利用软件graphpadprism5公式log(inhibitor)vs.response--variableslope计算得到ic50值。
所述结构2中，代表性化合物的dot1l抑制活性如下：
表1化合物2的生物活性测试数据
***ic50在0.1-100nm之间。**ic50在100-200nm之间。*ic50在200nm以上。
实施例41
雌性裸小鼠(购自北京维通利华实验动物有限公司，中国)，17-23克，实验符合动物管理委员会要求。接种mv(4,11)细胞株接种裸小鼠右侧腋窝皮下，100μl/只，细胞接种量为5×106/只。待成瘤后，用游标卡尺测量移植瘤直径，肿瘤体积tv＝0.5×长×宽2，肿瘤长至100-300mm3，将动物按体重和肿瘤体积分为三组，即，阴性对照组、epz5676组和cis-2e组，每组6只。epz5676组和cis-2e组的小鼠分别给予皮下注射40mg/kg的epz5676和cis-2e，每天3次，每周给药5天，休息2天，给药2周。阴性对照组则给等量空白溶剂，每天3次，实验过程中，给药5天，休息2天，持续14天。实验过程中，每周2次测量移植瘤的直径，并称量小鼠体重，期间观察动物体重变化与t/c％。
以抗肿瘤活性指标t/c(％)和体重两方面综合评价化合物的疗效。t/c(％)＝(rtvt/rtvc)×100％，其中，rtv指相对肿瘤体积(治疗后的肿瘤体积与初始肿瘤体积之比)，脚标“t”指epz5676组或cis-2e组，“c”指阴性对照组。体重变化显示了化合物毒性情况。
如图1a所示，给药2周内，cis-2e相比较阳性药物epz-5676对动物体重影响较小，但其展示出与阳性相当的抗肿瘤活性(图1b)：化合物cis-2e的t/c＝49.1；同批测试阳性化合物epz-5676的t/c＝45.6。