ZESTE增强子同源物2抑制剂的制作方法

本发明涉及化合物，其抑制zeste增强子同源物2(ezh2)并且因此用于在癌细胞中抑制增殖和/或诱导细胞凋亡。

背景技术：

表观遗传修饰在许多细胞过程(包括细胞增殖、分化和细胞存活)的调节中起着重要作用。总体表观遗传修饰在癌症中是常见的，且包括导致致癌基因、肿瘤抑制基因和信号通路的异常活化或失活的dna和/或组蛋白甲基化的总体变化、非编码rna的失调以及核小体重构。但是，不像癌症中出现的基因突变，这些表观遗传变化可通过选择性抑制所参与的酶而被逆转。已知参与组蛋白或dna甲基化的多个甲基化酶在癌症中失调。因此，特定甲基化酶的选择性抑制剂将有用于治疗增殖性疾病，例如癌症。

ezh2(人ezh2基因：cardoso，c，等人；europeanjofhumangenetics，第8卷，第3期，174-180页，2000)为多梳抑制复合物2(polycombrepressorcomplex2，prc2)的催化亚单位，其功能是通过将组蛋白h3的赖氨酸27三甲基化(h3k27me3)来使靶基因沉默。组蛋白h3是参与真核细胞染色质结构的五种主要组蛋白之一。以主要球状结构域和长的n末端尾为特征的组蛋白涉及核小体结构，即'串珠'结构。虽然组蛋白被高度地翻译后修饰，但组蛋白h3是五种组蛋白中被最广泛修饰的。单独的术语“组蛋白h3”是有意模糊的，因为它没有区分序列变体或修饰状态。组蛋白h3是表观遗传学(epigenetics)新领域中的重要蛋白，其中其序列变体和可变的修饰状态被认为在基因的动力学和长期调节中发挥着作用。

已经在许多实体瘤(包括前列腺、乳腺、皮肤、膀胱、肝、胰腺、头和颈的肿瘤)中观测到了增加的ezh2表达并且所述增加的ezh2表达与癌症进攻性、转移性和不良预后有关(varambally等人nature419:624-629,2002；kleer等人procnatlacadsciusa100:11606-11611,2003；breuer等人neoplasia6:736-743,2004；bachmann等人prostate65:252-259,2005；weikert等人int.j.mol.med.16:349-353,2005；sudo等人britishjournalofcancer92:1754-1758,2005；bachmann等人journalofclinicaloncology24:268-273,2006)。例如，在具有高ezh2水平的乳腺癌患者中，存在在前列腺切除术后表达高水平ezh2的肿瘤复发、转移增加、无疾病生存期缩短和死亡增加的风险(varambally等人nature419:624-629,2002；kleer等人procnatlacadsciusa100:11606-11611,2003)。最近，在utx(ubiquitouslytranscribedtetratricopeptiderepeatsx，泛转录的三十四肽重复x)(即h3k27去甲基化酶，其与ezh2的功能相反)中的失活突变已经在多个实体瘤和血液肿瘤类型(包括肾肿瘤、成胶质细胞瘤、食管肿瘤、乳腺肿瘤、结肠肿瘤、非小细胞肺肿瘤、小细胞肺肿瘤、膀胱肿瘤、多发性骨髓瘤和慢性髓样白血病肿瘤)中得以证实，且低utx水平与乳腺癌中低存活有关，意味着utx功能的丧失导致h3k27me3的增加和靶基因的抑制(wang等人genes&development24:327-332,2010)。总而言之，这些数据表明，在许多肿瘤类型中，增加的h3k27me3水平导致癌症的恶化，并且ezh2活性的抑制可提供治疗益处。

许多研究报道，通过sirna或shrna直接敲除ezh2或通过sah水解酶抑制剂3-去氮腺嘌呤a(deazaneplanocina，dznep)的治疗间接消耗ezh2均降低癌细胞系在体外的增殖与侵入并降低体内肿瘤生长(gonzalez等人，2008，gbm2009)。虽然不知道异常ezh2活性导致癌症进展的确切机理，但是许多ezh2靶基因是肿瘤抑制剂，意味着肿瘤抑制剂功能的丧失是关键机理。此外，ezh2在永生化或原代上皮细胞中的过表达促进无贴壁依赖性生长和侵入且需要ezh2催化活性(kleer等人，procnatlacadsciusa100:11606-11611,2003；cao等人oncogene27:7274-7284,2008)。

因此，有力的证据显示，ezh2活性的抑制降低了细胞增殖和侵入。因此，抑制ezh2活性的化合物将可用于治疗癌症。

由于位于病毒长末端重复序列(ltr)上的组蛋白的脱乙酰化和甲基化，潜伏的人类免疫缺陷病毒(hiv)前病毒被沉默。使用潜伏感染的jurkatt细胞系的染色质免疫沉淀实验证明ezh2在沉默的hiv前病毒的ltr中以高水平存在，并且在前病毒再活化之后迅速被置换。敲除ezh2诱导高达40％的潜伏hiv前病毒。敲除ezh2也使潜伏前病毒对外部刺激(如t细胞受体刺激)敏化，并且减缓了再激活的前病毒向潜伏期的逆转。类似地，对外部刺激反应不佳的细胞群体携带富集h3k27me3且相对缺乏h3k9me3的hiv前病毒。这些发现表明，prc2介导的沉默是hiv潜伏期的重要特征，并且组蛋白甲基化抑制剂可能在设计用于根除潜伏hiv池的诱导策略中发挥有用作用(friedman等人j.virol.85：9078-9089，2011)。另外的研究已经显示，在前病毒启动子上的h3k27去甲基作用在休眠cd4⁺t细胞的离体培养物中使潜伏hiv对伏立诺他的作用敏感(tripathy等人j.virol.89：8392-8405，2015)。

技术实现要素：

本发明涉及根据式(i)的化合物或其药学上可接受的盐:

其中:

r¹为(c1-c4)烷基或(c1-c4)烷氧基；

r²为(c1-c3)烷基；和

r³为(c1-c8)烷基、卤代(c1-c8)烷基、羟基(c1-c8)烷基、(c1-c4)烷氧基(c1-c8)烷基-、(c3-c5)环烷基、或(c6-c10)二环烷基，其中所述(c3-c5)环烷基或(c6-c10)二环烷基各自任选取代有一个或两个独立选自以下的基团：卤素、羟基、(c1-c4)烷氧基、(c1-c4)烷基和卤代(c1-c4)烷基。

本发明另一方面涉及诱导实体瘤的癌细胞凋亡；治疗实体瘤癌症方法。

本发明另一方面涉及药物制剂，其包含式(i)的化合物和药学上可接受的赋形剂。

在另一方面，提供了式(i)的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物在制备用于治疗ezh2介导的疾病的药物中的用途，如诱导癌细胞凋亡。

在另一方面，本发明提供式(i)的化合物或其药学上可接受的盐治疗ezh2介导的疾病的用途。本发明进一步提供式(i)的化合物或其药学上可接受的盐作为活性治疗物质治疗ezh2介导的疾病的用途。

在另一方面，本发明提供式(i)的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗。

在另一方面，提供了式(i)的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗ezh2介导的疾病。

在另一方面，提供了式(i)的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗细胞增殖疾病。

在另一方面，提供了式(i)的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗癌症，包括治疗实体瘤，例如脑癌(神经胶质瘤)、成胶质细胞瘤、白血病、淋巴瘤、bannayan-zonana综合征、考登病、lhermitte-duclos疾病、乳腺癌、炎性乳腺癌、威尔姆斯肿瘤、尤因肉瘤、横纹肌肉瘤、室管膜瘤、成神经管细胞瘤、结肠癌、胃癌、膀胱癌、头颈部癌症、肾癌、肺癌、肝癌、黑素瘤、肾癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、肉瘤癌症、骨肉瘤癌症、骨的巨细胞肿瘤和甲状腺癌。在另一方面，提供了式(i)的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗血液癌症，例如急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、急性成淋巴细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、骨髓增生性疾病、多发性骨髓瘤、骨髓增生异常综合征、霍奇金疾病和非霍奇金淋巴瘤，特别是非霍奇金淋巴瘤，例如弥漫型大b-细胞淋巴瘤(dlbcl)和滤泡性淋巴瘤。

在另一方面提供了共同给药本发明的式(i)的化合物与其它活性成分的方法。

在另一方面提供了式(i)的化合物或其药学上可接受的盐和至少一种抗肿瘤剂的组合，其用于治疗ezh2介导的疾病。

在另一方面提供了式(i)的化合物或其药学上可接受的盐和至少一种抗肿瘤剂的组合，其用于治疗细胞增殖疾病。

在另一方面提供了式(i)的化合物或其药学上可接受的盐和至少一种抗肿瘤剂的组合，其用于治疗癌症，包括治疗实体瘤，例如脑癌(神经胶质瘤)、成胶质细胞瘤、白血病、淋巴瘤、bannayan-zonana综合征、考登病、lhermitte-duclos疾病、乳腺癌、炎性乳腺癌、威尔姆斯肿瘤、尤因肉瘤、横纹肌肉瘤、室管膜瘤、成神经管细胞瘤、结肠癌、胃癌、膀胱癌、头颈部癌症、肾癌、肺癌、肝癌、黑素瘤、肾癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、肉瘤癌症、骨肉瘤癌症、骨的巨细胞肿瘤和甲状腺癌。在另一方面，提供了式(i)的化合物或其药学上可接受的盐和至少一种抗肿瘤剂的组合，其用于治疗血液癌症，例如急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、急性成淋巴细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、骨髓增生性疾病、多发性骨髓瘤、骨髓增生异常综合征、霍奇金疾病和非霍奇金淋巴瘤，特别是非霍奇金淋巴瘤，例如弥漫型大b-细胞淋巴瘤(dlbcl)和滤泡性淋巴瘤。

附图简述

图1显示实施例1化合物的盐酸盐(形式ii)的x-射线粉末衍射图。

图2显示实施例1化合物的盐酸盐(形式ii)的拉曼光谱。

图3显示实施例1化合物的盐酸盐(形式ii)的差示扫描量热踪迹。

图4显示实施例1化合物的盐酸盐(形式ii)的热重量分析踪迹。

图5显示实施例10化合物的盐酸盐(形式i)的x-射线粉末衍射图。

图6显示实施例10化合物的盐酸盐(形式i)的拉曼光谱。

图7显示实施例10化合物的盐酸盐(形式i)的差示扫描量热踪迹。

图8显示实施例10化合物的盐酸盐(形式i)的热重量分析踪迹。

发明详述

本发明涉及如上定义的式(i)的化合物或其药学上可接受的盐。

在一个实施方案中，本发明涉及式(i)的化合物，其中r¹为(c1-c4)烷基或(c1-c4)烷氧基。在另一实施方案中，本发明涉及式(i)的化合物，其中r¹为(c1-c4)烷基。在另一实施方案中，本发明涉及式(i)的化合物，其中r¹为甲基、乙基、正丙基或甲氧基。在另一实施方案中，本发明涉及式(i)的化合物，其中r¹为甲基或甲氧基。在一个具体实施方案中，本发明涉及式(i)的化合物，其中r¹为甲基。

在一个实施方案中，本发明涉及式(i)的化合物，其中r²为(c1-c3)烷基。在另一实施方案中，本发明涉及式(i)的化合物，其中r²为甲基、乙基、正丙基或异丙基。在另一实施方案中，本发明涉及式(i)的化合物，其中r²为甲基或乙基。在一个具体实施方案中，本发明涉及式(i)的化合物，其中r²为甲基。

在一个实施方案中，本发明涉及式(i)的化合物，其中r³为(c1-c8)烷基、卤代(c1-c8)烷基、羟基(c1-c8)烷基、(c1-c4)烷氧基(c1-c8)烷基-、(c3-c5)环烷基、或(c6-c10)二环烷基，其中所述(c3-c5)环烷基或(c6-c10)二环烷基各自任选取代有一个或两个独立选自以下的基团：卤素、羟基、(c1-c4)烷氧基、(c1-c4)烷基和卤代(c1-c4)烷基。在另一实施方案中，本发明涉及式(i)的化合物，其中r³为(c1-c6)烷基、卤代(c1-c6)烷基、(c3-c5)环烷基、或(c6-c10)二环烷基，其中所述(c3-c5)环烷基或(c6-c10)二环烷基各自任选取代有一个或两个独立选自以下的基团：卤素、羟基、(c1-c4)烷氧基、(c1-c4)烷基和卤代(c1-c4)烷基。在另一实施方案中，本发明涉及式(i)的化合物，其中r³为(c1-c6)烷基，卤代(c1-c6)烷基、(c3-c5)环烷基、或(c6-c10)二环烷基，其中所述(c3-c5)环烷基或(c6-c10)二环烷基各自任选取代有一个或两个独立选自以下的基团：卤素和(c1-c4)烷基。在另一实施方案中，本发明涉及式(i)的化合物，其中r³为(c1-c6)烷基、卤代(c1-c6)烷基、(c3-c5)环烷基、或(c6-c10)二环烷基，其中所述(c3-c5)环烷基或(c6-c10)二环烷基各自任选取代有氟或甲基。在另一实施方案中，本发明涉及式(i)的化合物，其中r³为(c1-c6)烷基或卤代(c1-c6)烷基。在另一实施方案中，本发明涉及式(i)的化合物，其中r³为(c1-c4)烷基。在另一实施方案中，本发明涉及式(i)的化合物，其中r³为叔丁基。在另一实施方案中，本发明涉及式(i)的化合物，其中r³为(c3-c5)环烷基或(c6-c10)二环烷基，其各自任选取代有一个或两个独立选自以下的基团：卤素和(c1-c4)烷基。在另一实施方案中，本发明涉及式(i)的化合物，其中r³为(c3-c5)环烷基或(c6-c10)二环烷基，其各自任选取代有氟或甲基。在另一实施方案中，本发明涉及式(i)的化合物，其中r³为任选取代有氟或甲基的(c3-c5)环烷基。在另一实施方案中，本发明涉及式(i)的化合物，其中r³为任选取代有甲基的(c3-c5)环烷基。在另一实施方案中，本发明涉及式(i)的化合物，其中r³为任选取代有甲基的环丁基。

本发明的具体化合物包括:

(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(1-新戊基哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮；

(r)-2-(1-(1-(环丁基甲基)哌啶-4-基)乙基)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮；

(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-(1-(1-异丁基哌啶-4-基)乙基)-3-甲基-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮；

(r)-2-(1-(1-(环戊基甲基)哌啶-4-基)乙基)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮；

(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-(1-(1-(2,2-二甲基丁基)哌啶-4-基)乙基)-3-甲基-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮；

(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-(1-(1-(2-氟-2-甲基丙基)哌啶-4-基)乙基)-3-甲基-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮；

(r)-2-(1-(1-(环丙基甲基)哌啶-4-基)乙基)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮；

(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(1-((1-甲基环戊基)甲基)哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮；

(r)-2-(1-(1-(双环[2.2.2]辛-1-基甲基)哌啶-4-基)乙基)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮；

(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(1-((1-甲基环丁基)甲基)哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮；和

(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(1-((1-甲基环丙基)甲基)哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮；

或其药学上可接受的盐。

典型地，但不是绝对地，本发明的盐是药学上可接受的盐。含有碱性胺官能团或其他碱性官能团的所公开的化合物的盐可通过本领域已知的任何合适的方法制备，包括用无机酸处理游离碱，所述无机酸诸如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等，或用有机酸处理游离碱，所述有机酸诸如乙酸、三氟乙酸、马来酸、琥珀酸、扁桃酸、富马酸、丙二酸、丙酮酸、草酸、乙醇酸、水杨酸、吡喃糖基酸诸如葡糖醛酸或半乳糖醛酸、α-羟基酸诸如柠檬酸或酒石酸、氨基酸诸如天冬氨酸或谷氨酸、芳族酸诸如苯甲酸或肉桂酸、磺酸诸如对甲苯磺酸、甲磺酸、乙磺酸等。药学上可接受的盐的实例包括硫酸盐、焦硫酸盐、硫酸氢盐、亚硫酸盐、亚硫酸氢盐、磷酸盐、氯化物、溴化物、碘化物、乙酸盐、丙酸盐、癸酸盐、辛酸盐、丙烯酸盐、甲酸盐、异丁酸盐、己酸盐、庚酸盐、丙炔酸盐(propiolate)、草酸盐、丙二酸盐、琥珀酸盐、辛二酸盐、癸二酸盐、富马酸盐、马来酸盐、丁炔-1,4-二酸盐、己炔-1,6-二酸盐、苯甲酸盐、氯苯甲酸盐、甲基苯甲酸盐、二硝基苯甲酸盐、羟基苯甲酸盐、甲氧基苯甲酸盐、邻苯二甲酸盐、苯乙酸盐、苯基丙酸盐、苯基丁酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐、γ-羟基丁酸盐、乙醇酸盐、酒石酸盐、扁桃酸盐和磺酸盐诸如二甲苯磺酸盐、甲磺酸盐、丙磺酸盐、萘-1磺酸盐和萘-2磺酸盐。

含有羧酸官能团或其他酸性官能团的所公开的化合物的盐可通过与合适的碱反应制备。所述药学上可接受的盐可用提供药学上可接受的阳离子的碱制得，所述盐包括碱金属盐(尤其是钠盐和钾盐)、碱土金属盐(尤其是钙盐和镁盐)、铝盐和铵盐，以及所述药学上可接受的盐可从生理学可接受的有机碱制得，所述有机碱诸如三甲基胺、三乙基胺、吗啉、吡啶、哌啶、甲基吡啶、二环己基胺、n,n’-二苄基乙二胺、2-羟基乙基胺、双-(2-羟基乙基)胺、三-(2-羟基乙基)胺、普鲁卡因、二苄基哌啶、去氢枞胺(dehydroabietylamine)、n,n’-双去氢枞胺、二葡萄糖胺、n-甲基葡萄糖胺、三甲基吡啶、奎宁、喹啉，和碱性氨基酸诸如赖氨酸和精氨酸。

不是药学上可接受的其他盐可用于制备本发明化合物，并且这些应被视为本发明的另一方面。这些盐诸如草酸盐或三氟乙酸盐，尽管它们本身不是药学上可接受的，但是可用于制备在获得本发明化合物和它们的药学上可接受的盐时用作中间体的盐。

式(i)化合物可以以结晶或非结晶形式存在，或以其混合物存在。本领域技术人员将理解，结晶或非结晶化合物可以形成药学上可接受的溶剂化物。在结晶溶剂化物中，溶剂分子在结晶过程中掺入到晶格中。溶剂化物可以包括非水溶剂，例如但不限于乙醇、异丙醇、dmso、乙酸、乙醇胺或乙酸乙酯，或者它们可以包括水作为掺入晶格中的溶剂。其中水是结合到晶格中的溶剂的溶剂化物通常被称为“水合物”。水合物包括化学计量的水合物以及含有可变量水的组合物。本发明包括所有这些溶剂化物。

本领域技术人员将进一步理解，以结晶形式存在的本发明化合物，包括其各种溶剂化物，可以表现出多晶型(即以不同晶体结构存在的能力)。这些不同的结晶形式通常称为“多晶型物”。本发明包括所有这些多晶型物。多晶型物具有相同的化学组成，但在堆积、几何排列和结晶固态的其他描述性质方面不同。因此，多晶型物可具有不同的物理性质，例如形状、密度、硬度、可变形性、稳定性和溶解性质。多晶型物通常表现出不同的熔点、ir光谱和x射线粉末衍射图案，其可用于鉴定。本领域技术人员将理解，可以例如通过改变或调节用于制备化合物的反应条件或试剂来产生不同的多晶型物。例如，温度、压力或溶剂的变化可能导致多晶型物。另外，一种多晶型物可在某些条件下自发地转化为另一种多晶型物。

本发明进一步涉及(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(1-新戊基哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮的盐酸盐的晶形。

在一些实施方案中，(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(1-新戊基哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮的盐酸盐的晶形的特征为当使用cukα辐射测量时，x-射线粉末衍射(xrpd)图包含至少9个衍射角，其选自约4.5、7.7、8.9、9.5、10.7、12.7、13.4、14.3、14.8、14.9、15.3、15.7、16.3、16.9、17.4、18.3、18.6、19.1、21.9、22.4、23.1、24.0、24.4、25.0、25.6、26.9、27.7、28.8和29.4度2θ。在另一实施方案中，(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(1-新戊基哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮的盐酸盐的特征为当使用cukα辐射测量时，x-射线粉末衍射(xrpd)图包含至少8个衍射角或至少7个衍射角或至少6个衍射角或至少5个衍射角或至少4个衍射角，其选自约4.5、7.7、8.9、9.5、10.7、12.7、13.4、14.3、14.8、14.9、15.3、15.7、16.3、16.9、17.4、18.3、18.6、19.1、21.9、22.4、23.1、24.0、24.4、25.0、25.6、26.9、27.7、28.8和29.4度2θ。在另一实施方案中，(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(1-新戊基哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮的盐酸盐的特征为当使用cukα辐射测量时，x-射线粉末衍射(xrpd)图包含至少3个衍射角，其选自约4.5、7.7、8.9、9.5、10.7、12.7、13.4、14.3、14.8、14.9、15.3、15.7、16.3、16.9、17.4、18.3、18.6、19.1、21.9、22.4、23.1、24.0、24.4、25.0、25.6、26.9、27.7、28.8和29.4度2θ。

在另一实施方案中，(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(1-新戊基哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮的盐酸盐的特征为当使用cukα辐射测量时，x-射线粉末衍射(xrpd)图包含以下衍射角：约8.9、10.7、14.3、14.8、16.9和24.0度2θ。在另一实施方案中，(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(1-新戊基哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮的盐酸盐的特征为x-射线粉末衍射(xrpd)图基本上与图1一致。

在其它实施方案中，(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(1-新戊基哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮的盐酸盐的特征为拉曼光谱包含至少12个峰，其位置选自约455、479、505、534、542、565、612、693、758、791、854、995、1047、1114、1148、1209、1241、1279、1315、1390、1438、1473、1551、1628、1655、2735、2917和2953cm^-1。在另一实施方案中，(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(1-新戊基哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮的盐酸盐的特征为拉曼光谱包含至少11个峰或至少10个峰或至少9个峰或至少8个峰或至少7个峰，其位置选自约455、479、505、534、542、565、612、693、758、791、854、995、1047、1114、1148、1209、1241、1279、1315、1390、1438、1473、1551、1628、1655、2735、2917和2953cm^-1。在另一实施方案中，(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(1-新戊基哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮的盐酸盐的特征为拉曼光谱包含至少6个峰，其位置选自约455、479、505、534、542、565、612、693、758、791、854、995、1047、1114、1148、1209、1241、1279、1315、1390、1438、1473、1551、1628、1655、2735、2917和2953cm^-1。

在另一实施方案中，(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(1-新戊基哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮的盐酸盐的特征为拉曼光谱包含位于以下的峰：约505、534、612、1241、1315、1390、1438、1473、1551、1628、2917和2953cm^-1。在另一实施方案中，(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(1-新戊基哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮的盐酸盐的特征为拉曼光谱基本上与图2一致。

在其它实施方案中，(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(1-新戊基哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮的盐酸盐的特征为差示扫描量热踪迹基本上与图3一致和/或热重量分析踪迹基本上与图4一致。

在其它实施方案中，如本领域技术人员所理解，(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(1-新戊基哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮的盐酸盐的特征为表征上述实施方案的分析数据的任意组合。例如，在一个实施方案中，(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(1-新戊基哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮的盐酸盐的特征为x-射线粉末衍射(xrpd)图基本上与图1一致且拉曼光谱基本上与图2一致且差示扫描量热踪迹基本上与图3一致且热重量分析踪迹基本上与图4一致。在另一实施方案中，(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(1-新戊基哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮的盐酸盐的特征为x-射线粉末衍射(xrpd)图基本上与图1一致且拉曼光谱基本上与图2一致。在另一实施方案中，(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(1-新戊基哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮的盐酸盐的特征为x-射线粉末衍射(xrpd)图基本上与图1一致且差示扫描量热踪迹基本上与图3一致。在另一实施方案中，(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(1-新戊基哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮的盐酸盐的特征为x-射线粉末衍射(xrpd)图基本上与图1一致且热重量分析踪迹基本上与图4一致。在另一实施方案中，(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(1-新戊基哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮的盐酸盐的特征为当使用cukα辐射测量时，x-射线粉末衍射(xrpd)图包含以下衍射角：约8.9、10.7、14.3、14.8、16.9和24.0度2θ，且拉曼光谱包含以下峰：约505、534、612、1241、1315、1390、1438、1473、1551、1628、2917和2953cm^-1。在另一实施方案中，(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(1-新戊基哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮的盐酸盐的特征为当使用cukα辐射测量时，x-射线粉末衍射(xrpd)图包含以下衍射角：约8.9、10.7、14.3、14.8、16.9和24.0度2θ，且差示扫描量热踪迹基本上与图3一致。在另一实施方案中，(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(1-新戊基哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮的盐酸盐的特征为当使用cukα辐射测量时，x-射线粉末衍射(xrpd)图包含以下衍射角：约8.9、10.7、14.3、14.8、16.9和24.0度2θ，且热重量分析踪迹基本上与图4一致。

本发明进一步涉及(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(1-((1-甲基环丁基)甲基)哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮的盐酸盐的晶形。

在一些实施方案中，晶形(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(1-((1-甲基环丁基)甲基)哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮的盐酸盐的特征为当使用cukα辐射测量时，x-射线粉末衍射(xrpd)图包含至少9个衍射角，其选自约8.1、10.2、11.2、12.4、12.8、13.8、15.3、15.5、16.0、17.2、18.3、18.8、19.4、19.8、20.6、22.4、23.8、24.4、24.9、25.6、26.4和27.4度2θ。在另一实施方案中，(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(1-((1-甲基环丁基)甲基)哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮的盐酸盐特征为当使用cukα辐射测量时，x-射线粉末衍射(xrpd)图包含至少8个衍射角或至少7个衍射角或至少6个衍射角或至少5个衍射角或至少4个衍射角，其选自约8.1、10.2、11.2、12.4、12.8、13.8、15.3、15.5、16.0、17.2、18.3、18.8、19.4、19.8、20.6、22.4、23.8、24.4、24.9、25.6、26.4和27.4度2θ。在另一实施方案中，(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(1-((1-甲基环丁基)甲基)哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮的盐酸盐特征为当使用cukα辐射测量时，x-射线粉末衍射(xrpd)图包含至少3个衍射角，其选自约8.1、10.2、11.2、12.4、12.8、13.8、15.3、15.5、16.0、17.2、18.3、18.8、19.4、19.8、20.6、22.4、23.8、24.4、24.9、25.6、26.4和27.4度2θ。

在另一实施方案中，(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(1-((1-甲基环丁基)甲基)哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮的盐酸盐特征为当使用cukα辐射测量时，x-射线粉末衍射(xrpd)图包含以下衍射角：约11.2、13.8、15.5、18.8、19.4和22.4度2θ。在另一实施方案中，(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(1-((1-甲基环丁基)甲基)哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮的盐酸盐特征为x-射线粉末衍射(xrpd)图基本上与图5一致。

在其它实施方案中，(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(1-((1-甲基环丁基)甲基)哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮的盐酸盐特征为拉曼光谱包含至少12个峰，其位置选自约436、480、511、538、550、566、611、683、776、814、852、887、925、986、1050、1140、1169、1227、1252、1277、1313、1338、1373、1391、1428、1462、1482、1553、1620、2865、2922、2955和2973cm^-1。在另一实施方案中，(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(1-((1-甲基环丁基)甲基)哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮的盐酸盐特征为拉曼光谱包含至少11个峰或至少10个峰或至少9个峰或至少8个峰或至少7个峰，其位置选自约436、480、511、538、550、566、611、683、776、814、852、887、925、986、1050、1140、1169、1227、1252、1277、1313、1338、1373、1391、1428、1462、1482、1553、1620、2865、2922、2955和2973cm^-1。在另一实施方案中，(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(1-((1-甲基环丁基)甲基)哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮的盐酸盐特征为拉曼光谱包含至少6个峰，其位置选自约436、480、511、538、550、566、611、683、776、814、852、887、925、986、1050、1140、1169、1227、1252、1277、1313、1338、1373、1391、1428、1462、1482、1553、1620、2865、2922、2955和2973cm^-1。

在另一实施方案中，(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(1-((1-甲基环丁基)甲基)哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮的盐酸盐特征为拉曼光谱包含位于以下的峰：约611、1169、1227、1277、1313、1482、1553、1620、2922和2955cm^-1。在另一实施方案中，(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(1-((1-甲基环丁基)甲基)哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮的盐酸盐特征为拉曼光谱基本上与图6一致。

在其它实施方案中，(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(1-((1-甲基环丁基)甲基)哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮的盐酸盐特征为差示扫描量热踪迹基本上与图7一致和/或热重量分析踪迹基本上与图8一致。

在其它实施方案中，如本领域技术人员所理解，(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(1-((1-甲基环丁基)甲基)哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮的盐酸盐的特征为表征上述实施方案的分析数据的任意组合。例如，在一个实施方案中，(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(1-((1-甲基环丁基)甲基)哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮的盐酸盐特征为x-射线粉末衍射(xrpd)图基本上与图5一致且拉曼光谱基本上与图6一致且差示扫描量热踪迹基本上与图7一致且热重量分析踪迹基本上与图8一致。在另一实施方案中，(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(1-((1-甲基环丁基)甲基)哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮的盐酸盐特征为x-射线粉末衍射(xrpd)图基本上与图5一致且拉曼光谱基本上与图6一致。在另一实施方案中，(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(1-((1-甲基环丁基)甲基)哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮的盐酸盐特征为x-射线粉末衍射(xrpd)图基本上与图5一致且差示扫描量热踪迹基本上与图7一致。在另一实施方案中，(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(1-((1-甲基环丁基)甲基)哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮的盐酸盐特征为x-射线粉末衍射(xrpd)图基本上与图5一致且热重量分析踪迹基本上与图8一致。在另一实施方案中，(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(1-((1-甲基环丁基)甲基)哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮的盐酸盐特征为当使用cukα辐射测量时，x-射线粉末衍射(xrpd)图包含以下衍射角：约11.2、13.8、15.5、18.8、19.4和22.4度2θ，且拉曼光谱包含以下峰：约611、1169、1227、1277、1313、1482、1553、1620、2922和2955cm^-1。在另一实施方案中，(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(1-((1-甲基环丁基)甲基)哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮的盐酸盐特征为当使用cukα辐射测量时，x-射线粉末衍射(xrpd)图包含以下衍射角：约11.2、13.8、15.5、18.8、19.4和22.4度2θ，且差示扫描量热踪迹基本上与图7一致。在另一实施方案中，(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(1-((1-甲基环丁基)甲基)哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮的盐酸盐特征为当使用cukα辐射测量时，x-射线粉末衍射(xrpd)图包含以下衍射角：约11.2、13.8、15.5、18.8、19.4和22.4度2θ，且热重量分析踪迹基本上与图8一致。

当xrpd图包括在指定值的±0.3度2θ范围内的衍射角时，xrpd图案将被理解为包括“约”这里指定的值的衍射角(以2θ表示)。此外，本领域技术人员熟知和理解所使用的装置、湿度、温度、粉末晶体的取向以及获得x射线粉末衍射(xrpd)图所涉及的其他参数可能导致衍射图中线条的外观、强度和位置一些变化。与本文提供的图1或图5的“基本上一致”的x射线粉末衍射图是本领域技术人员认为的表示具有与提供了图1或5的xrpd图的化合物相同的晶形的化合物的xrpd图。也就是说，xrpd图可以与图1或图5相同，或者更可能是稍微不同。这样的xrpd图可能不一定显示本文所呈现的任何一种衍射图案的每条线，和/或可能表现出所述线的外观、强度或位置的微小变化，这是由于在获取数据时所涉及的条件的差异造成的。通过比较它们的xrpd图，本领域技术人员能够确定结晶化合物的样品具有的形式与本文公开的形式相同还是不同。例如，本领域技术人员可以用图1覆盖(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(1-新戊基哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮的盐酸盐的样品的xrpd图，使用本领域的专业知识和技术，可以容易地确定样品的xrpd图谱是否基本上与本文公开的(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(1-新戊基哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮的盐酸盐(形式ii)的xrpd图一致。如果xrpd图基本上与图1一致，则该样品形式可以容易且准确地鉴定为具有与本文公开的(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(1-新戊基哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮的盐酸盐(形式ii)相同的形式。类似地，如果(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(1-((1-甲基环丁基)甲基)哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮的盐酸盐样品的xrpd图基本上与图5一致，则该样品形式可以容易和准确地鉴定为具有与本文公开的(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(1-((1-甲基环丁基)甲基)哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮的盐酸盐(形式i)相同的形式。

当拉曼光谱包括在指定值的±5.0cm^-1范围内的峰时，拉曼光谱将被理解为包括“约”这里指定的值的峰(以cm^-表示)。此外，本领域技术人员熟知和理解所使用的装置、湿度、温度、粉末晶体的取向以及获得拉曼光谱所涉及的其他参数可能导致光谱中峰的外观、强度和位置一些变化。与本文提供的图2或6的“基本上一致”的拉曼光谱是本领域技术人员认为的表示具有与提供了图2或6的拉曼光谱的化合物相同的晶形的化合物的拉曼光谱。也就是说，拉曼光谱可以与图2或6相同，或者更可能是稍微不同。这样的拉曼光谱可能不一定显示本文所呈现的任何一种光谱的每个峰，和/或可能表现出所述峰的外观、强度或位置的微小变化，这是由于在获取数据时所涉及的条件的差异造成的。通过比较它们的拉曼光谱，本领域技术人员能够确定结晶化合物的样品具有的形式与本文公开的形式相同还是不同。例如，本领域技术人员可以用图2覆盖(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(1-新戊基哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮的盐酸盐的样品的拉曼光谱，使用本领域的专业知识和技术，可以容易地确定样品的拉曼光谱是否基本上与本文公开的(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(1-新戊基哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮的盐酸盐(形式ii)的拉曼光谱一致。类似的，如果拉曼光谱基本上与图6一致，则该样品形式可以容易且准确地鉴定为具有与本文公开的(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(1-((1-甲基环丁基)甲基)哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮的盐酸盐(形式i)相同的形式。

式(i)化合物或其盐可按立体异构形式存在(例如，其含有一个或多个不对称碳原子)。单独的立体异构体(对映异构体和非对映异构体)和这些异构体的混合物包括在本发明范围内。同样地，应理解式(i)的化合物或盐可按不同于该式中所示的互变异构形式存在，并且这些也包括在本发明范围内。应理解，本发明包括上文定义的具体组的所有组合和亚类。本发明的范围包括立体异构体的混合物以及纯化的对映异构体或对映异构体/非对映异构体富集的混合物。应理解，本发明包括上文定义的具体组的所有组合和亚类。

本发明还包括同位素标记的化合物，其除以下事实外与式(i)所述的那些化合物相同：一个或多个原子被原子质量或质量数不同于天然常见的原子质量或质量数的原子代替。可引入本发明化合物及其药学上可接受的盐中的同位素的实例包括氢、碳、氮、氧、磷、硫、氟、氯和碘的同位素，诸如²h、³h、¹¹c、¹³c、¹⁴c、¹⁵n、¹⁷o、¹⁸o、³¹p、³²p、³⁵s、¹⁸f、³⁶cl、¹²³i和¹²⁵i。

含有上述同位素和/或其他原子的其他同位素的本发明的化合物和所述化合物的药学上可接受的盐在本发明范围内。同位素标记的本发明的化合物，例如引入了放射性同位素诸如³h或¹⁴c的那些化合物，用于药物和/或底物组织分布测定。氚代的即³h和碳-14即¹⁴c同位素由于其易于制备及可检测性而是特别优选的。¹¹c和¹⁸f同位素特别用于pet(正电子发射断层扫描术)，以及¹²⁵i同位素特别用于spect(单光子发射计算机断层扫描)，所有这些都用于脑成像。此外，用较重的同位素诸如氘即²h取代可提供某些导致更大的代谢稳定性的治疗益处，例如体内半衰期增加或剂量需求减小，由此在一些情况中是优选的。通常可通过进行下文的方案和/或实施例中披露的操作，通过用容易获得的同位素标记的试剂代替非同位素标记的试剂来制备同位素标记的式(i)化合物和本发明的以下化合物。

本发明还提供了药物组合物(也称为药物制剂)，其包含式(i)化合物或其药学上可接受的盐和一或多种赋形剂(在制药领域也称为载体和/或稀释剂)。所述赋形剂在与该制剂的其他成分相容且对其接受者(即，患者)无毒方面是可接受的。

合适的药学上可接受的赋形剂将根据所选具体的剂型而变化。此外，可根据在组合物中所起的具体功能来选择合适的药学上可接受的赋形剂。例如，可根据促进制备均一剂型的能力来选择某些药学上可接受的赋形剂。可根据促进制备稳定的剂型的能力来选择某些药学上可接受的赋形剂。可根据在给药至患者后促进本发明化合物从身体的一个器官或部分携带或运输至身体的另一器官或部分的能力来选择某些药学上可接受的赋形剂。某些药学上可接受的赋形剂可根据其提高患者顺应性的能力进行选择。

合适的药学上可接受的赋形剂包括下列赋形剂类型：稀释剂、填充剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂、助流剂、粒化剂、包衣剂、润湿剂、溶剂、共溶剂、助悬剂、乳化剂、增甜剂、矫味剂、掩味剂、着色剂、防结块剂、保湿剂、螯合剂、增塑剂、增粘剂、抗氧化剂、防腐剂、稳定剂、表面活性剂和缓冲剂。本领域技术人员将理解，某些药学上可接受的赋形剂可以以多于一种功能和以替代性功能来使用，取决于所述赋形剂在制剂中存在多少和在制剂中存在何种其它成分。

具有本领域的知识和技术的技术人员能够选择出以适当量用于本发明的合适的药学上可接受的赋形剂。此外，有许多本领域技术人员可用的资源，这些资源描述了药学上可接受的赋形剂且其可用于选择合适的药学上可接受的赋形剂。实例包括remington'spharmaceuticalsciences(mackpublishingcompany)，thehandbookofpharmaceuticaladditives(gowerpublishinglimited)，和thehandbookofpharmaceuticalexcipients(theamericanpharmaceuticalassociationandthepharmaceuticalpress)。

本发明的药物组合物使用本领域技术熟练人员已知的技术和方法制备。通常用于本领域的一些方法描述在remington'spharmaceuticalsciences(mackpublishingcompany)中。

药物组合物可为每个剂量单位含有预定量的活性成分的单位剂量形式。所述单位可含有治疗有效剂量的式(i)化合物或其盐，或一定比例的治疗有效剂量的式(i)化合物或其盐，从而在给定的时间可给予多个单位剂量形式以达到期望的治疗有效剂量。优选的单位剂量制剂是本申请上文所述的含有活性成分的每日剂量或亚剂量或其适当的比例的那些。此外，所述药物组合物可通过药学领域熟知的任何方法制备。

药物组合物可适应于通过任何适当的途径给药，例如，经口服(包括口腔或舌下)、直肠、鼻、局部(包括口腔、舌下或经皮)、阴道或胃肠外(包括皮下、肌内、静脉内或皮内)途径给药。所述组合物可通过药学领域已知的任何方法制备，例如，通过使活性成分与一种或多种赋形剂结合。

当适应于口服给药时，药物组合物可为离散单位诸如片剂或胶囊剂、粉末或颗粒、于水性或非水性液体中的溶液或悬浮液、可食用泡沫或搅打剂(whip)，或水包油型液体乳液或油包水型乳液。本发明的化合物或其盐或本发明的药物组合物也可被掺入到糖果、薄片剂(wafer)和/或条型(tonguetape)制剂中，用于作为“快速溶解”的药物给药。

例如，就以片剂或胶囊剂形式进行的口服给药而言，可将活性药物组分与口服的无毒的药学上可接受的惰性载体如乙醇、甘油、水等混合。粉末剂或颗粒剂如下制备：将化合物研磨至合适的微细尺寸，然后与经类似研磨的药物载体如可食用的碳水化合物(如淀粉或甘露醇)混合。也可存在矫味剂、防腐剂、分散剂和着色剂。

胶囊剂如下制备：如上所述制备粉末混合物，然后填充到成形的明胶或非明胶壳中。可将助流剂和润滑剂如胶体二氧化硅、滑石、硬脂酸镁、硬脂酸钙或固体聚乙二醇加到粉末混合物中，然后进行填充操作。也可加入崩解剂或增溶剂如琼脂、碳酸钙或碳酸钠以改善胶囊剂被摄入时的药物利用度。

此外，当期望或需要时，也可将合适的粘合剂、润滑剂、崩解剂和着色剂掺到混合物中。合适的粘合剂包括淀粉、明胶、天然糖(如葡萄糖或β-乳糖)、玉米甜味剂、天然胶和合成胶如阿拉伯胶、西黄蓍胶、海藻酸钠、羧甲基纤维素、聚乙二醇、蜡等。在这些剂型中使用的润滑剂包括油酸钠、硬脂酸钠、硬脂酸镁、苯甲酸钠、乙酸钠、氯化钠等。崩解剂包括但不限于淀粉、甲基纤维素、琼脂、膨润土、黄原胶等。

片剂如下配制：例如制备粉末混合物，制粒或预压片，加入润滑剂和崩解剂，然后压制成片剂。粉末混合物如下制备：将经合适研磨的化合物与上述稀释剂或基质以及任选的粘合剂(如羧甲基纤维素、海藻酸盐、凝胶或聚乙烯吡咯烷酮)、溶液延迟剂(solutionretardant)(如石蜡)、吸收促进剂(如季胺盐)和/或吸收剂(如膨润土、高岭土或磷酸二钙)混合。粉末混合物可如下制粒：润湿粘合剂如糖浆、淀粉糊、阿拉伯胶液、纤维素溶液或聚合物溶液，然后挤压过筛。作为可选择的制粒方法，粉末混合物可通过压片机来处理，导致不完全成形的预压片破裂成颗粒。可通过加入硬脂酸、硬脂酸盐、滑石或矿物油的方式来对颗粒进行润滑以防止与片剂成形模粘连。然后将经润滑的混合物压制成片剂。本发明的化合物或盐也可与自由流动的惰性载体组合，并在不经历制粒或预压片步骤的情况下直接压制成片剂。可提供透明的或不透明的保护性包衣，所述包衣由以下包衣层构成：由虫胶形成的隔离包衣层、由糖或聚合物形成的包衣层和由蜡形成的光亮包衣层。可将染料加到这些包衣中以区分不同的剂量。

口服流体如溶液剂、糖浆剂和酏剂可按剂量单位形式来制备，从而使给定的量含有预定量的活性成分物。糖浆剂可通过将本发明的化合物或其盐溶于经合适矫味的水溶液中来制备，而酏剂通过使用无毒的含醇媒介物来制备。悬浮剂可通过将本发明的化合物或其盐分散在无毒的媒介物中来制备。也可加入增溶剂和乳化剂(如乙氧基化的异硬脂醇和聚氧乙烯山梨醇醚)、防腐剂、矫味添加剂(如薄荷油、天然甜味剂、糖精或其它人造甜味剂)等。

当适当时，可对用于口服给药的剂量单位制剂进行微囊化。也可例如通过将颗粒物质包衣或包埋到聚合物、蜡等中来制备制剂以延长或维持释放。

在本发明中，对于递送药物组合物而言，片剂和胶囊剂是优选的。

根据本发明的另一方面，提供了制备药物组合物的方法，其包括将式(i)化合物或其盐与至少一种赋形剂混合(或掺合)。

本发明还提供了在哺乳动物，尤其是人中的治疗方法。本发明的化合物和组合物用于治疗细胞增殖性疾病。可通过本文提供的方法和组合物得到治疗的疾病包括，但不限于，癌症(下文进一步讨论)、自身免疫性疾病、真菌病症、关节炎、移植排斥、炎性肠病、医疗程序(medicalprocedure)后诱导的增殖，所述医疗程序包括，但不限于，手术、血管成形术等。应理解，在一些情况下，细胞可能并不在高增殖或低增殖状态(异常状态)但仍需要进行治疗。例如，在伤口愈合过程中，尽管细胞可能是“正常”增殖的，但仍可能需要增殖强化。因此，在一个实施方案中，本发明包括施用至患有或即将患有任一这些疾病或病症的细胞或个体。

本文提供的组合物和方法尤其被认为是用于治疗癌症，包括肿瘤，例如前列腺癌、乳腺癌、脑癌、皮肤癌、宫颈癌、睾丸癌等。它们尤其用于治疗转移性或恶性肿瘤。更具体地，可通过本发明的组合物和方法得到治疗的癌症包括，但不限于以下肿瘤类型，例如星形细胞癌、乳腺癌、宫颈癌、结肠直肠癌、子宫内膜癌、食道癌、胃癌、头颈癌、肝细胞癌、喉癌、肺癌、口腔癌、卵巢癌、前列腺癌和甲状腺癌和肉瘤。更具体地，这些化合物可用于治疗：心脏：肉瘤(血管肉瘤、纤维肉瘤、横纹肌肉瘤、脂肪肉瘤)、粘液瘤、横纹肌瘤、纤维瘤、脂肪瘤和畸胎瘤；肺：支气管癌(鳞状上皮细胞癌、未分化小细胞癌、未分化大细胞癌、腺癌)、肺泡(细支气管)癌、支气管腺瘤、肉瘤、淋巴瘤、软骨错构瘤、间皮瘤；胃肠道：食道(鳞状上皮细胞癌、腺癌、平滑肌肉瘤、淋巴瘤)、胃(癌、淋巴瘤、平滑肌肉瘤)、胰腺(导管腺癌、胰岛瘤、胰高血糖素瘤、胃泌素瘤、类癌瘤、舒血管肠肽瘤(vipoma))、小肠(腺癌、淋巴瘤、类癌瘤、卡波西肉瘤、平滑肌瘤、血管瘤、脂肪瘤、神经纤维瘤、纤维瘤)、大肠(腺癌、管状腺瘤、绒毛状腺瘤、错构瘤、平滑肌瘤)；泌尿生殖道：肾(腺癌、威尔姆斯肿瘤(wilm'stumor)(肾胚细胞瘤)、淋巴瘤、白血病)、膀胱和尿道(鳞状上皮细胞癌、移行细胞癌、腺癌)、前列腺(腺癌、肉瘤)、睾丸(精原细胞瘤、畸胎瘤、胚胎性癌、畸胎癌、绒毛膜癌、肉瘤、间质细胞癌、纤维瘤、纤维腺瘤、腺瘤样瘤、脂肪瘤)；肝：肝癌(肝细胞癌)、胆管癌、肝母细胞瘤、血管肉瘤、肝细胞性腺瘤、血管瘤；胆道：胆囊癌、壶腹癌、胆管癌；骨：成骨性肉瘤(骨肉瘤)、纤维肉瘤、恶性纤维组织细胞瘤、软骨肉瘤、尤因肉瘤、恶性淋巴瘤(网状细胞肉瘤)、多发性骨髓瘤、恶性巨细胞瘤脊索瘤、骨软骨瘤(骨软骨外生骨疣(osteocartilaginousexostose))、良性软骨瘤、软骨母细胞瘤、软骨粘液纤维瘤(chondromyxofibroma)、骨样骨瘤和巨细胞瘤；神经系统：头骨(骨瘤、血管瘤、肉芽肿、黄色瘤、畸形性骨炎)、脑膜(脑膜瘤、脑膜肉瘤(meningiosarcoma)、神经胶质瘤病)、脑(星形细胞瘤、成神经管细胞瘤、神经胶质瘤、室管膜瘤、生殖细胞瘤(松果体瘤)、多形性成胶质细胞瘤、少突神经胶质瘤(oligodendroglioma)、神经鞘瘤、视网膜母细胞瘤、先天性肿瘤)、脊髓神经纤维瘤、脑膜瘤、神经胶质瘤、肉瘤)；妇科：子宫(子宫内膜癌)、宫颈(宫颈癌、肿瘤前宫颈病变(pre-tumorcervicaldysplasia))、卵巢(卵巢癌(浆液性囊腺癌、粘液性囊腺癌、未分类癌(unclassifiedcarcinoma))、颗膜细胞瘤(granulosa-thecalcelltumor)、塞-莱细胞瘤(sertoli-leydigcelltumor)、无性细胞瘤、恶性畸胎瘤)、外阴(鳞状上皮细胞癌、上皮内癌、腺癌、纤维肉瘤、黑色素瘤)、阴道(透明细胞癌、鳞状上皮细胞癌、葡萄状肉瘤(胚胎性横纹肌肉瘤)、输卵管癌)；血液方面：血液(髓细胞性白血病(急性和慢性)、急性成淋巴细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、骨髓增生性疾病、多发性骨髓瘤、骨髓增生异常综合征(myelodysplasticsyndrome))、霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤(恶性淋巴瘤、弥漫型大b-细胞淋巴瘤(dlbcl)、滤泡性淋巴瘤)；皮肤：恶性黑色素瘤、基底细胞癌、鳞状上皮细胞癌、卡波西肉瘤、发育不良痣(molesdysplasticnevi)、脂肪瘤、血管瘤、皮肤纤维瘤、瘢痕瘤、牛皮癣；和肾上腺：神经母细胞瘤。因此，本文所述术语“癌细胞”包括患有任一上述病症或相关病症的细胞。

本发明的化合物和组合物也可用于治疗或治愈人免疫缺陷病毒(hiv)感染。在一个实施方案中，提供了治疗hiv感染的方法，包括向患有hiv的患者给药治疗有效量的式(i)的化合物或其药学上可接受的盐。在另一实施方案中，提供了治愈hiv感染的方法，包括向患有hiv的患者给药治疗有效量的式(i)的化合物或其药学上可接受的盐。在另一实施方案中，提供了式(i)的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物在制备用于治疗hiv感染的药物中的用途。在另一实施方案中，提供了式(i)的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物在制备用于治愈hiv感染的药物中的用途。在另一实施方案中，提供了式(i)的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗hiv感染。在另一实施方案中，提供了式(i)的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治愈hiv感染。

本发明化合物可与其他治疗剂，尤其是可提高化合物活性及体内处置时间的药剂组合或共同给药。本发明的组合疗法包括施用至少一种本发明化合物并使用至少一种其他治疗方法。在一个实施方案中，本发明的组合疗法包括施用至少一种本发明化合物和手术治疗。在一个实施方案中，本发明的组合疗法包括施用至少一种本发明化合物和放射疗法。在一个实施方案中，本发明的组合疗法包括施用至少一种本发明化合物和至少一种支持疗法药物(例如，至少一种镇吐药)。在一个实施方案中，本发明的组合疗法包括施用至少一种本发明化合物和至少一种其他化疗剂。在一个具体实施方案中，本发明包括施用至少一种本发明化合物和至少一种抗肿瘤药。在另一实施方案中，本发明包括治疗方案，其中本公开的ezh2抑制剂本身并没有活性或并没有显著活性，但是当其与另一疗法组合时(所述另一疗法作为单独疗法时可以是有活性的或无活性的)，该组合提供有用的治疗效果。

本文所用的术语“共同给药”及其衍生词语是指同时给药或以任意单独的方式相继给药本文所述的ezh2抑制化合物和已知用于治疗癌症(包括化疗和放射治疗)的一种或多种其他活性成分。当向有治疗癌症需要的患者给药时，本文所用术语一种或多种活性成分还包括已知的或被证明有有益性质的任意化合物或治疗剂。优选地，如果所述给药不是同时的，那么该化合物以彼此极接近的时间进行给药。此外，所述化合物是否以同一剂型施用并不重要，例如一种化合物可局部给药而另一化合物可口服给药。

通常，任何对待治疗的易感肿瘤具有活性的抗肿瘤剂可以共同给药以治疗本发明的癌症。这些药剂的实例可参见v.t.devita、t.s.lawrence和s.a.rosenberg(编辑)的cancerprinciplesandpracticeofoncology，第10版(2014年12月5日)，lippincottwilliams&wilkins出版社。基于药物的特定特征和所涉及的癌症，本领域普通技术人员将能够辨别哪种药剂组合是有用的。可用于本发明的典型抗肿瘤剂包括但不限于抗微管或抗有丝分裂剂；铂配位络合物；烷化剂；抗生素剂；拓扑异构酶i抑制剂；拓扑异构酶ii抑制剂；抗代谢物；激素和激素类似物；信号转导途径抑制剂；非受体酪氨酸激酶血管发生抑制剂；免疫治疗剂；促凋亡剂；细胞周期信号传导抑制剂；蛋白酶体抑制剂；热休克蛋白抑制剂；癌症代谢抑制剂；和癌症基因治疗剂。

用于与本发明ezh2抑制化合物组合或共同给药的其他一种或多种活性成分的实例为抗肿瘤剂。抗肿瘤剂的实例包括，但不限于，化疗剂；免疫调节剂；免疫调节；和免疫刺激辅助剂。

抗微管或抗有丝分裂剂是时相特异性药物(phasespecificagent)，其在细胞周期中的m期或有丝分裂期对肿瘤细胞的微管具有活性。抗微管剂的实例包括但不限于二萜类化合物(diterpenoid)和长春花生物碱(vincaalkaloid)。

铂配位络合物(platinumcoordinationcomplex)是非时相特异性的抗癌剂，其与dna相互作用。铂络合物进入肿瘤细胞，进行水合作用，并与dna形成链内部和之间的交联，导致对肿瘤不利的生物学作用。铂配位络合物的实例包括但不限于顺铂和卡铂。

烷化剂是非时相特异性的抗癌药物和强亲电试剂。通常，烷化剂借助于烷基化作用，通过dna分子的亲核部分如磷酸基(phosphate)、氨基、巯基、羟基、羧基和咪唑基，与dna形成共价键。这种烷基化作用破坏核酸功能，导致细胞死亡。烷化剂的实例包括但不限于氮芥(如环磷酰胺、美法仑和苯丁酸氮芥)、磺酸烷基酯(如白消安、亚硝基脲如卡莫司汀)，以及三氮烯(如达卡巴嗪)。

抗生素类抗癌剂(antibioticanti-neoplastics)是非时相特异性的药物，其结合或嵌入dna中。这种作用破坏核酸的正常功能，导致细胞死亡。抗生素类抗肿瘤药物的实例包括但不限于放线菌素(如放线菌素d)；蒽环类(anthrocyclins)(如柔红霉素和多柔比星)；以及博来霉素。

拓扑异构酶i抑制剂包括，但不限于，喜树碱。认为喜树碱的细胞毒活性与其拓扑异构酶i抑制活性相关。

拓扑异构酶ii抑制剂包括但不限于表鬼臼脂毒素。表鬼臼脂毒素(epipodophyllotoxins)是来源于曼德拉草(mandrake)植物的时相特异性的抗肿瘤药物。表鬼臼脂毒素通常通过与拓扑异构酶ii和dna形成三元复合物，导致dna链断裂来影响处于细胞周期的s和g2期的细胞。链断裂积聚，接着细胞死亡。表鬼臼脂毒素的实例包括但不限于依托泊苷和替尼泊苷。

抗代谢肿瘤药物(antimetaboliteneoplasti)是时相特异性的抗肿瘤药物，其作用于细胞周期的s期(dna合成)，通过抑制dna的合成，或者通过抑制嘌呤或嘧啶碱基的合成进而限制dna的合成。因此，s期不能继续下去，接着细胞死亡。抗代谢类抗肿瘤药物的实例包括但不限于氟尿嘧啶、甲氨蝶呤、阿糖胞苷、巯基嘌呤、硫鸟嘌呤，以及吉西他滨。

激素和激素类似物是治疗癌症有用的化合物，其中在激素与癌的生长和/或不生长之间存在关联。可用于治疗癌症的激素和激素类似物的实例包括但不限于肾上腺皮质类固醇如地塞米松，泼尼松和泼尼松龙；氨鲁米特和其它芳香酶抑制剂如阿那曲唑、来曲唑、伏罗唑(vorazole)、及依西美坦；孕酮类如乙酸甲地孕酮；雌激素、雄激素和抗雄激素如氟他胺，尼鲁米特，比卡鲁胺，乙酸环丙孕酮和5α-还原酶如非那雄胺和度他雄胺；抗雌激素类如他莫昔芬，托瑞米芬，雷洛昔芬，屈洛昔芬，iodoxyfene，以及选择性雌激素受体调节剂(serms)；和促性腺素-释放激素(gnrh)及其类似物，其刺激促黄体生成激素(leutinizinghormone)和/或促卵泡激素(fsh)的释放，lhrh激动剂、和拮抗剂如乙酸戈舍瑞林和亮丙瑞林。

信号转导途径抑制剂是阻断或抑制引起细胞内变化的化学过程的抑制剂。这里所用的变化是指细胞的增殖或分化。用于本发明的信号转导抑制剂包括但不限于，受体酪氨酸激酶、非受体酪氨酸激酶、sh2/sh3域阻断剂、丝氨酸/苏氨酸激酶、磷酯酰肌醇-3激酶、肌醇信号和ras致癌基因的抑制剂。

若干蛋白酪氨酸激酶催化细胞生长的调节中所涉及的各种蛋白质中的特定酪氨酰残基的磷酸化。这种蛋白酪氨酸激酶可以广义地分为受体或非受体激酶。

受体酪氨酸激酶是跨膜蛋白，其具有细胞外配体结合域、跨膜域和酪氨酸激酶域。受体酪氨酸激酶与细胞生长的调节有关，并且通常称为生长因子受体。已经表明，这些激酶中很多不适当和非受控活化，即异常的激酶生长因子受体活性，例如由过度表达或突变引起的上述活化，会导致非受控的细胞生长。因此，这种激酶的异常活性已经和恶性组织生长联系在一起。因此，这种激酶的抑制剂可提供癌症治疗方法。例如，生长因子受体包括表皮生长因子受体(egfr)、血小板来源的生长因子受体(pdgfr)、erbb2、erbb4、血管内皮生长因子受体(vegfr)、具有类免疫球蛋白样和表皮生长因子同源域(homologydomains)的酪氨酸激酶(tie-2)、胰岛素生长因子-i(igfi)受体、巨噬细胞集落刺激因子(cfms)、btk、ckit、cmet、成纤维细胞生长因子(fgf)受体、trk受体(trka、trkb和trkc)、ephrin(eph)受体、及ret原癌基因。正在开发若干生长因子受体的抑制剂，其包括配体拮抗剂、抗体、酪氨酸激酶抑制剂和反义寡核苷酸。有关生长因子受体以及抑制生长因子受体功能的药物的描述，参见例如kathj.c.，exp.opin.ther.patents，10(6):803-818(2000)；shawverl.k.，等人，drugdiscov.today，2(2)：50-63(1997)；和lofts，f.j.和gullickw.j.，“growthfactorreceptorsastargets.”innewmoleculartargetsforcancerchemotherapy，kerrd.j.andworkmanp.(editors)，(june27，1994)，crcpress。生长因子受体抑制剂的非限制性实例包括帕唑帕尼和索拉非尼。

酪氨酸激酶，其不是生长因子受体激酶，称为非受体酪氨酸激酶。用于本发明的作为抗癌药物靶标(target)或潜在靶标的非受体酪氨酸激酶包括csrc、lck、fyn、yes、jak、cabl、fak(黏着斑激酶)、brutons酪氨酸激酶、及bcr-abl。有关这种非受体激酶和抑制非受体酪氨酸激酶功能的药物的描述，参见sinhas.和coreys.j.，j.hematother.stemcellres.,8(5)：465-480(2004)和bolen，j.b.，brugge，j.s.，annu.rev.immunol.，15：371-404(1997)。

sh2/sh3域阻断剂是破坏结合于各种酶或衔接蛋白(adaptorproteins)中的sh2或sh3域的药物，所述酶或衔接蛋白包括pi3-kp85亚单元、src家族激酶、衔接分子(shc、crk、nck、grb2)、及ras-gap。有关sh2/sh3域作为抗癌药物靶标的论述，参见smithgallt.e.，j.pharmacol.toxicol.methods，34(3)：125-32(1995)。

丝氨酸/苏氨酸激酶的抑制剂包括但不限于map激酶级联阻断剂，其包括raf激酶(rafk)、促分裂原或细胞外调节激酶(mek)和细胞外调节激酶(erk)的阻断剂；蛋白激酶c家族成员阻断剂，包括pkc(α、β、γ、ε、μ、λ、ι、ζ)；ikb激酶(ikka，ikkb)；pkb家族激酶；akt激酶家族成员；tgfβ受体激酶的阻断剂；以及雷帕霉素(mtor)抑制剂的哺乳动物靶标，包括但不限于雷帕霉素(fk506)和rapalogs、rad001或依维莫司cci-779或替西罗莫司、ap23573、azd8055、wye-354、wye-600、wye-687和pp121。丝氨酸/苏氨酸激酶抑制剂的实例包括但不限于曲美替尼、达拉菲尼和akt抑制剂afuresertib和n-{(1s)-2-氨基-1-[(3,4-二氟苯基)甲基]乙基}-5-氯-4-(4-氯-1-甲基-1h-吡唑-5-基)-2-呋喃甲酰胺。

包括pi3-激酶、atm、dna-pk和ku的阻断剂的磷脂酰肌醇3-激酶家族成员的抑制剂也可用于本发明。这些激酶在abrahamr.t.,curr.opin.immunol.,8(3):412-418(1996)；canmanc.e.,andlimd.s.,oncogene,17(25):3301-3308(1998)；jacksons.p.,int.j.biochem.cellbiol.,29(7):935-938(1997)；和zhongh.,等人,cancerres.,60(6):1541-1545(2000)中讨论。

在本发明中也有用的是肌醇信号传导抑制剂，例如磷脂酶c阻断剂和肌醇类似物。此类信号抑制剂描述于newmoleculartargetsforcancerchemotherapy中的powisg.和kozikowskia.,“inhibitorsofmyo-inositolsignaling.”,kerrd.j.和workmanp.(编辑),(1994年6月27日),crcpress。

另一组信号转导途径抑制剂是ras癌基因的抑制剂。此类抑制剂包括法呢基转移酶、香叶基-香叶基转移酶和caax蛋白酶的抑制剂以及反义寡核苷酸、核酶和其他免疫疗法。已经显示这种抑制剂阻断含有野生型突变体ras的细胞中的ras活化，从而起到抗增殖剂的作用。ras致癌基因抑制在scharovskyo.g.等人，j.biomed.sci.，7(4)：292-298(2000)；ashbym.n.，curr.opin.lipidol.，9(2)：99-102(1998)；和bennettc.f.andcowsertl.m.，biochim.biophys.acta.，1489(1)：19-30(1999)中讨论。

受体激酶配体结合的拮抗剂也可作为信号转导抑制剂。该类信号转导途径抑制剂包括使用人源化抗体或受体酪氨酸激酶的细胞外配体结合结构域的其它拮抗剂。受体激酶配体结合的抗体或其它拮抗剂的实例包括，但不限于，西妥昔单抗曲妥单抗曲妥单抗emtansine帕妥珠单抗erbb抑制剂，包括拉帕替尼、埃罗替尼和吉非替尼；和2c3vegfr2特异性抗体(参见brekkenr.a.，等人，癌症res.，60(18)：5117-5124(2000))。

非受体激酶血管生成抑制剂也可用于本发明。与血管生成有关的vegfr和tie2抑制剂，已在上面关于信号转导抑制剂中讨论过(二者的受体均为受体酪氨酸激酶)。血管生成通常与erbb2/egfr信号传导相关联，因为已经表明erbb2和egfr的抑制剂抑制血管生成，主要是vegf的表达。因此，非受体酪氨酸激酶抑制剂可与本发明的egfr/erbb2抑制剂组合。例如，抗-vegf抗体不能识别vegfr(受体酪氨酸激酶)，但却与配体结合；整联蛋白(αvβ3)的小分子抑制剂会抑制血管生成；也证实了内皮抑制素和血管生成抑制素(非-rtk)可与公开的化合物组合使用(参见brunsc.j.，等人，癌症res.，60(11)：2926-2935(2000)；schreibera.b.，等人，science，232(4755)：1250-1253(1986)；yenl.，等人，致癌基因，19(31)：3460-3469(2000))。

免疫治疗方法中使用的药物也可用于式(i)的化合物组合。有许多免疫策略，以对erbb2或egfr产生免疫反应。这些策略一般属于肿瘤疫苗接种领域。通过用小分子抑制剂组合抑制erbb2/egfr信号传递途径，可以大大地增强免疫方法的疗效。有关抗erbb2/egfr的免疫/肿瘤疫苗方法的讨论，参见reillyr.t.，等人，cancerres.，60(13)：3569-3576(2000)；和cheny.，等人，癌症res.，58(9)：1965-1971(1998)。

用于促细胞凋亡方法的药物(例如bcl-2反义寡核苷酸)也可用于本发明的组合。蛋白质的bcl-2家族的成员阻断细胞凋亡。因此，bcl-2的上调与药物抗性相联系。研究表明，表皮生长因子(egf)刺激bcl-2家族的抗细胞凋亡成员(即mcl-1)。因此，设计下调bcl-2在肿瘤中的表达的策略已经证实在临床上是有益的。有关这种利用bcl-2的反义寡核苷酸促细胞凋亡的策略的讨论，参见watersj.s.，等人，j.clin.oncol.，18(9)：1812-1823(2000)；和kitadas.，等人，antisenseres.dev.，4(2)：71-79(1994)。小分子bcl-2抑制剂的实例包括，但不限于维奈妥拉。

细胞周期信号抑制剂抑制细胞周期控制中所涉及的分子。称作细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶(cdk)的蛋白激酶家族，及其与称作细胞周期蛋白的蛋白质家族的相互作用，通过真核细胞周期控制细胞发展。对于通过细胞周期的正常细胞发展而言，不同细胞周期蛋白/cdk复合物的协同活化和钝化是必要的。若干细胞周期信号抑制剂正在开发中。例如，包括cdk2、cdk4和cdk6的细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶及其抑制剂的实例，可参见例如，rosaniag.r.和changy.t.，exp.opin.ther.patents，10(2)：215-230(2000)。此外，p21waf1/cip1已被描述为细胞周期蛋白依赖性激酶(cdks)的有效且通用的抑制剂(ballk.l.，prog.cellcycleres.，3：125-134(1997))。已知诱导p21waf1/cip1表达的化合物涉及抑制细胞增殖和具有肿瘤抑制活性(richonv.m.，等人，proc.natl.acad.sci.usa，97(18)：10014-10019(2000))，并作为细胞周期信号传导抑制剂包括在内。组蛋白去乙酰化酶(hdac)抑制剂涉及p21waf1/cip1的转录激活(vigushind.m.，andcoombesr.c.，anticancerdrugs，13(1)：1-13(2002))，并且是用于本文的组合的合适细胞周期信号传导抑制剂。此类hdac抑制剂的实例包括但不限于伏立诺他、罗米地辛、帕比司他、丙戊酸和mocetinostat。

蛋白酶体抑制剂是阻断蛋白酶体作用的药物，是分解蛋白质的细胞复合物，如p53蛋白。几种蛋白酶体抑制剂已经上市或正在研究用于治疗癌症。适用于本文的组合的蛋白酶体抑制剂包括但不限于硼替佐米、双硫仑、表没食子儿茶素没食子酸酯、salinosporamidea和卡非佐米。

70千道尔顿热休克蛋白(hsp70s)和90千道尔顿热休克蛋白(hsp90s)是普遍表达的热休克蛋白家族。hsp70s和hsp90s过度表达某些癌症类型。正在研究几种hsp70和hsp90抑制剂用于治疗癌症。用于本文组合的hsp70和hsp90抑制剂的实例包括但不限于坦螺旋霉素和根赤壳菌素。

许多肿瘤细胞显示出与正常组织明显不同的代谢。例如，糖酵解的速率(将葡萄糖转化为丙酮酸的代谢过程)增加，并且产生的丙酮酸被还原为乳酸，而不是通过三羧酸(tca)循环在线粒体中进一步氧化。即使在有氧条件下也经常看到这种效应，并且被称为warburg效应。

乳酸脱氢酶a(ldh-a)是肌肉细胞中表达的乳酸脱氢酶的同种型，通过将丙酮酸还原成乳酸(然后可以将其输出细胞)，在肿瘤细胞代谢中起关键作用。该酶已被证明在许多肿瘤类型中被上调。warburg效应中描述的葡萄糖代谢的改变对于癌细胞的生长和增殖是至关重要的，并且已经显示使用rna-i敲低ldh-a导致异种移植物模型中细胞增殖和肿瘤生长的减少(tennantd.a.，等人，nat.rev.cancer，10(4)：267-277(2010)；fantinv.r.，等人，cancercell，9(6)：425-434(2006))。

已经在癌症前体病变中发现了高水平的脂肪酸合酶(fas)。fas的药理学抑制影响癌症发展和维持中涉及的关键癌基因的表达。allip.m.，等人，oncogene，24(1)：39-46(2005)。

癌症代谢的抑制剂，包括ldh-a的抑制剂和脂肪酸生物合成的抑制剂(或fas抑制剂)，适合在本文中组合使用。

癌症基因治疗涉及使用病毒或非病毒基因递送载体选择性转移重组dna/rna以修改癌症细胞以用于治疗目的。癌症基因疗法的实例包括但不限于自杀和溶瘤细胞基因疗法，以及过继性t细胞疗法。

本文使用的“免疫调节剂”是指包括影响免疫系统的单克隆抗体的任何物质。免疫调节剂可用作抗肿瘤剂以治疗癌症。例如，免疫调节剂包括，但不限于，ctla-4的抗体或其它拮抗剂，如易普利单抗和pd-1，如纳武单抗和派姆单抗其它免疫调节剂包括，但不限于，pd-l1、ox-40、lag3、tim-3、41bb和gitr的抗体或其它拮抗剂。

如本文所用，“pd-1拮抗剂”是指阻断癌细胞上表达的pd-l1与免疫细胞(t细胞、b细胞或nkt细胞)上表达的pd-1结合的任何化学化合物或生物分子，并且优选还阻断癌细胞上表达的pd-l2与免疫细胞表达的pd-1的结合。pd-1及其配体的替代名称或同义词包括：对于pd-1的pdcd1、pd1、cd279和sleb2；对于pd-l1的pdcd1l1、pdl1、b7h1、b7-4、cd274和b7-h；和对于pd-l2的pdcd1l2、pdl2、b7-dc、btdc和cd273。人pd-1氨基酸序列可以在ncbilocusno.：np_005009中找到。人pd-l1和pd-l2氨基酸序列可分别在ncbilocusno.：np_054862和np_079515中找到。

可用于本发明任何方面的pd-1拮抗剂包括单克隆抗体(mab)或其抗原结合片段，其特异性结合pd-1或pd-l1，并且优选特异性结合人pd-1或人pd-l1。mab可以是人抗体、人源化抗体或嵌合抗体，并且可以包括人恒定区。在一些实施方案中，人恒定区选自igg1、igg2、igg3和igg4恒定区，并且在优选的实施方案中，人恒定区是igg1或igg4恒定区。在一些实施方案中，抗原结合片段选自fab、fab'-sh、f(ab')2、scfv和fv片段。结合人pd-1并且可用于本发明的各个方面和实施方案的mab的实例描述于美国专利号8,552,154；美国专利号8,354,509；美国专利号8,168,757；美国专利号8,008,449；美国专利号7,521,051；美国专利号7,488,802；wo2004072286；wo2004056875；和wo2004004771。

可用于本发明任何方面和实施方案的其他pd-1拮抗剂包括特异性结合pd-1的免疫粘附素，并且优选特异性结合人pd-1，例如含有细胞外或pd-l1或pd-l2的pd-1结合部分的融合蛋白，该pd-l1或pd-l2与免疫球蛋白分子的恒定区如fc区融合。在wo2010027827和wo2011066342中描述了特异性结合pd-1的免疫粘附素分子的实例。在本发明的治疗方法、药物和用途中用作pd-1拮抗剂的特异性融合蛋白包括amp-224(也称为b7-dcig)，其是pd-l2-fc融合蛋白并且与人pd-1结合。

纳武单抗是一种人源化单克隆抗pd-1抗体，以商购。纳武单抗适用于治疗一些不可切除或转移性黑素瘤。纳武单抗通过其配体pd-l1和pd-l2结合并阻断pd-1(ig超家族跨膜蛋白)的活化，导致t细胞的活化和针对肿瘤细胞或病原体的细胞介导的免疫应答。活化的pd-1通过抑制p13k/akt途径激活来负调节t细胞活化和效应功能。纳武单抗的其他名称包括：bms-936558、mdx-1106和ono-4538。纳武单抗的氨基酸序列以及使用和制备方法公开于美国专利us8,008,449中。

派姆单抗为人源化单克隆抗pd-1抗体，以商购。派姆单抗适用于治疗一些不可切除或转移性黑素瘤。派姆单抗的氨基酸序列和使用方法公开于美国专利号8,168,757。

抗pd-l1抗体及其制备方法是本领域已知的。这种针对pd-l1的抗体可以是多克隆的或单克隆的，和/或重组的，和/或人源化的。pd-l1抗体正在开发中作为用于治疗癌症的免疫调节剂。

示例性pd-l1抗体公开于美国专利号9,212,224；美国专利号8,779,108；美国专利no8,552,154；美国专利号8,383,796；美国专利号8,217,149；美国专利公开号20110280877；wo2013079174；和wo2013019906。pd-l1的其它示例性抗体(也称为cd274或b7-h1)和使用方法公开于美国专利号8,168,179；美国专利号7,943,743；美国专利号7,595,048；wo2014055897；wo2013019906；和wo2010077634。可用作本发明的治疗方法、药物和用途中的pd-1拮抗剂的特异性抗人pd-l1单克隆抗体包括mpdl3280a、bms-936559、medi4736、msb0010718c。

阿特珠单抗为完全人源化单克隆抗pd-l1抗体，以tecentriq^tm商购。阿特珠单抗适用于治疗一些局部晚期或转移性尿路上皮癌。阿特珠单抗阻断pd-l1与pd-1和cd80的相互作用。

cd134，也称为ox40，是受体的tnfr-超家族的成员，与cd28不同，其在静息的天然t细胞上不组成型表达。ox40是次级共刺激分子，在激活后24至72小时表达；其配体ox40l也不在静息抗原呈递细胞上表达，而是在其活化后表达。ox40的表达依赖于t细胞的完全活化；没有cd28，ox40的表达被延迟并且水平降低为四分之一。ox-40抗体、ox-40融合蛋白及其使用方法公开于美国专利号：us7,504,101；us7,758,852；us7,858,765；us7,550,140；us7,960,515；wo2012027328；wo2013028231。

用于与本发明的ezh2抑制化合物组合或共同给药的其它一种或多种活性成分(抗肿瘤剂)的其它实例为cd20的抗体或其它拮抗剂、类维生素a、或其它激酶抑制剂。这些抗体或拮抗剂的实例包括，但不限于利妥昔单抗(和)、奥伐木单抗和贝沙罗汀这种抗体或拮抗剂可另外与其它活性剂组合，包括烷化剂、抗生素抗肿瘤剂(如插入剂)，其它抗肿瘤剂(如长春花生物碱)，和肾上腺皮质类固醇。例如该组合可包含利妥昔单抗、环磷酰胺、多柔比星、长春新碱和泼尼松(r-chop)。

用于与本发明的ezh2抑制化合物组合或共同给药的其它一种或多种活性成分(抗肿瘤剂)的其它实例为toll-样受体4(tlr4)拮抗剂，包括但不限于氨基烷基氨基葡萄糖苷磷酸盐(agp)。

已知agp可用作疫苗佐剂和免疫刺激剂，用于刺激细胞因子产生，激活巨噬细胞，促进先天免疫应答，并增强免疫动物中的抗体产生。agp是tlr4的合成配体。agp及其通过tlr4的免疫调节作用在专利公开中公开，例如wo2006016997、wo2001090129和/或美国专利no.6,113,918，并且已在文献中报道。另外的agp衍生物公开在美国专利号7,129,219、美国专利号6,911,434和美国专利号6,525,028中。某些agp充当tlr4的激动剂，而其他agp被认为是tlr4拮抗剂。

用于与本发明的ezh2抑制化合物组合或共同施用的另外的一种或多种活性成分(抗肿瘤剂)的其它非限制性实例是icos的抗体。

具有激动剂活性的针对人icos的鼠抗体的cdr显示在pct/ep2012/055735(wo2012131004)中。icos的抗体也公开于wo2008137915、wo2010056804、ep1374902、ep1374901和ep1125585中。

用于与本发明的ezh2抑制化合物组合或共同给药的另外的一种或多种活性成分(抗肿瘤剂)的其它非限制性实例是sting调节化合物、cd39抑制剂和a2a和a2a腺苷拮抗剂。

用于与式(i)的化合物或其药学上可接受的盐组合使用的选择的抗肿瘤剂包括但不限于：阿巴瑞克、abemaciclib、阿比特龙、阿法替尼、阿柏西普、aldoxorubicin、阿雷替尼、阿仑单抗、三氧化二砷、门冬酰胺酶、阿西替尼、azd-9291、贝利司他、苯达莫司汀、贝伐单抗、博纳吐单抗、博舒替尼、维汀-布仑妥昔单抗、卡巴他赛、卡博替尼、卡培他滨、色瑞替尼、氯法拉滨、考比替尼、克唑替尼、达雷木单抗、达沙替尼、地加瑞克、狄诺塞麦、地努图希单抗、多西紫杉醇、埃罗妥珠单抗、恩替诺特、恩杂鲁胺、表柔比星、艾日布林、非格司亭、氟马替尼、氟维司群、呋喹替尼、吉妥珠单抗奥佐米星、替伊莫单抗、依鲁替尼、艾代拉里斯、伊马替尼、伊立替康、伊沙匹隆、艾沙佐米、来那度胺、乐伐替尼、甲酰四氢叶酸、氮芥、耐昔妥珠单抗、奈拉滨、奈妥吡坦、尼洛替尼、奥妥珠单抗、奥拉帕尼、高三尖杉酯碱、奥西替尼、奥沙利铂、紫杉醇、帕博西尼、帕洛诺司琼、帕尼单抗、培非格司亭、聚乙二醇干扰素α-2b、培美曲塞、普乐沙福、泊马度胺、帕纳替尼、普拉曲沙、奎扎替尼、镭-223、雷莫芦单抗、瑞戈非尼、罗拉匹坦、瑞卡帕布、西普鲁塞-t、索尼吉布、舒尼替尼、talimogenelaherparepvec、tipiracil、拓扑替康、曲贝替定、三氟尿苷、曲普瑞林、尿苷、凡德他尼、velaparib、威罗菲尼、维奈妥拉、长春新碱、维莫德吉和唑来膦酸。

此外，式(i)的化合物可与一种或多种可用于治疗或治愈hiv的其它药物组合使用。

这些药物的实例包括，但不限于:

核苷酸逆转录酶抑制剂如齐多夫定、去羟肌苷、拉米夫定、扎西他滨、阿巴卡韦、司他夫定、阿德福韦、阿德福韦二匹伏酯、福齐夫定、todoxil、恩曲他滨、阿洛夫定、氨多索韦、艾夫他滨和类似药物；

非核苷酸逆转录酶抑制剂(包括具有抗氧化活性的药物如怡妙康，奥替普拉等)如奈韦拉平、地拉韦啶、依非韦伦、洛韦胺、怡妙康、奥替普拉、卡普韦林、来司韦林、gsk2248761、tmc-278、tmc-125、依曲韦林和类似药物；

蛋白酶抑制剂如沙奎那韦、利托那韦、茚地那韦、奈非那韦、安泼那韦、福沙那韦、布瑞那韦、达芦那韦、阿扎那韦、替拉那韦、帕利那韦、拉西那韦和类似药物；

进入、附着和融合抑制剂如恩夫韦地(t-20)、t-1249、pro-542、pro-140、tnx-355、bms-806、bms-663068和bms-626529、5-helix和类似药物；

整合酶抑制剂如雷特格韦、埃替格韦、度鲁特韦、cabotegravir和类似药物；

成熟抑制剂如pa-344和pa-457和类似药物；以及

cxcr4和/或ccr5抑制剂如维立韦罗(sch-c)、sch-d、tak779、马拉维若(uk427,857)、tak449，以及wo02/74769、pct/us03/39644、pct/us03/39975、pct/us03/39619、pct/us03/39618、pct/us03/39740和pct/us03/39732公开的那些，和类似药物。

本发明的化合物可与用于预防或治疗hiv的一种或多种药物组合使用的其它实例可参见表1。

表1:

本发明化合物与hiv药物的组合范围不限于上面提到的那些，而是原则上包括与任何可用于治愈或治疗hiv的药物组合物的组合。如上所述，在这样的组合中，本发明的化合物和其他hiv药学上可以分开或联合给药。另外，一种药物可以在给予其他药物之前、同时或之后给药。

本发明化合物可与一种或多种可用作药理学增强剂的药物在有或没有其它预防或治疗hiv的化合物的情况下组合使用。该药理学增强剂(或药代动力学促进剂)的实例包括，但不限于，利托那韦、gs-9350和spi-452。利托那韦为10-羟基-2-甲基-5-(1-甲基乙基)-1-1[2-(1-甲基乙基)-4-噻唑基]-3,6-二氧代-8,11-二(苯基甲基)-2,4,7,12-四氮杂十三烷-13-酸5-噻唑基甲基酯[5s-(5s*,8r*,10r*,11r*)]且可获自abbottlaboratoriesofabbottpark、illinois，作为norvir。利托那韦为hiv蛋白酶抑制剂，其指示与其它抗逆转录病毒剂一起用于治疗hiv感染。利托那韦也抑制p450介导的药物代谢以及p-糖蛋白(pgp)细胞运输系统，从而导致活性化合物在有机体中的浓度增加。gs-9350为gileadsciencesoffostercitycalifornia作为药理学增强剂开发的化合物。spi-452为sequoiapharmaceuticalsofgaithersburg，maryland，作为药理学增强剂开发的化合物。

本文提供了治疗或预防自身免疫性和炎性病症和疾病的方法，所述病症和疾病可通过抑制ezh1和/或ezh2而改善，从而，例如，调节甲基化活化和甲基化抑制的靶基因的表达水平或调节信号蛋白的活性。一种方法可以包括向人，例如有此需要的人给药治疗有效量的本文所述药剂。

炎症代表针对创伤的一组血管、细胞和神经系统反应。炎症可以表征为炎性细胞如单核细胞、嗜中性粒细胞和粒细胞进入组织的运动。这通常与减少的内皮屏障功能和水肿进入组织有关。炎症可分为急性或慢性。急性炎症是身体对有害刺激的初始反应，并且是通过血浆和白细胞从血液向损伤组织的运动增加而实现的。生物化学事件的级联传播和使炎症反应成熟，涉及局部血管系统、免疫系统和损伤组织内的各种细胞。被称为慢性炎症的长期炎症导致存在于炎症部位的细胞类型的逐渐变化，且其特征在于炎症过程中组织的同时破坏和愈合。

当发生作为对感染的免疫应答的一部分或作为对创伤的急性反应时，炎症可以是有益的并且通常是自限性的。然而，炎症在不同条件下可能是有害的。这包括响应于感染因子产生过度炎症，其可导致显著的器官损伤和死亡(例如，在败血症的情况中)。此外，慢性炎症通常是有害的，并且是许多慢性疾病的根源，对组织造成严重的和不可逆的损害。在这种情况下，免疫应答通常针对自身组织(自身免疫)，尽管对外来实体的慢性反应也可能导致对自身组织的旁观者损伤(bystanderdamage)。

因此，抗炎治疗的目的是减少这种炎症，当存在时抑制自身免疫并允许生理过程或愈合和组织修复进展。

这些药剂可用于治疗身体的任何组织和器官的炎症，包括肌肉骨骼炎症、血管炎症、神经炎症、消化系统炎症、眼部炎症、生殖系统的炎症和其它炎症，如下所示。

肌肉骨骼炎症是指肌肉骨骼系统的任何炎症病症，特别是影响骨骼关节，包括手、手腕、肘部、肩部、颌、脊柱、颈部、髋部、膝盖、脚踝和脚部的关节的那些病症以及影响连接肌肉与骨骼的组织(例如腱)的病症。可用本发明化合物治疗的肌肉骨骼炎症的实例包括关节炎(包括例如，骨关节炎、牛皮癣关节炎、强直性脊柱炎、急性和慢性感染性关节炎、与痛风和假性关节炎相关的关节炎和幼年特发性关节炎)、肌腱炎、滑膜炎、腱鞘炎、滑囊炎、纤维组织炎(纤维肌痛)、上髁炎、肌炎和骨炎(包括，例如，佩吉特氏病、耻骨骨炎和纤维性骨炎)。

眼部炎症是指眼睛任何结构的炎症，包括眼睑。可以在本发明中治疗的眼部炎症的实例包括眼睑炎、眼睑皮肤松弛症、结膜炎、泪腺炎、角膜炎、干燥性角结膜炎(干眼症)、巩膜炎、倒睫症和葡萄膜炎。

可以在本发明中治疗的神经系统的炎症的实例包括脑炎、格-巴二氏综合征、脑膜炎、神经性肌强直、发作性睡病、多发性硬化、脊髓炎和精神分裂症。

可在本发明中治疗的脉管系统或淋巴系统炎症的实例包括关节硬化、关节炎、静脉炎、血管炎和淋巴管炎。

可在本发明中治疗的消化系统的炎性病症的实例包括胆管炎、胆囊炎、肠炎、小肠结肠炎、胃炎、胃肠炎、回肠炎和直肠炎。

可以在本发明中治疗的生殖系统的炎性病症的实例包括宫颈炎、绒毛膜羊膜炎、子宫内膜炎、附睾炎、脐炎、卵巢炎、睾丸炎、输卵管炎、输卵管卵巢脓肿、尿道炎、阴道炎、外阴炎和外阴痛。

所述药剂可用于治疗具有炎性成分的自身免疫病症。这些病症包括急性播散性脱发、贝赫切特病、查加斯病、慢性疲劳综合征、自主神经机能异常、脑脊髓炎、强直性脊柱炎、再生障碍性贫血、化脓性汗腺炎、自身免疫性肝炎、自身免疫性卵巢炎、乳糜泻、克罗恩病、1型糖尿病、巨细胞动脉炎、肺出血肾炎综合征、格雷夫病、格-巴二氏综合征、桥本病、过敏性紫癜、川崎病、红斑狼疮、微观结肠炎、微观多动脉炎、混合性结缔组织病、多发性硬化、重症肌无力、眼肌阵挛综合征、视神经炎、ord’s甲状腺炎、天疱疮、结节性多动脉炎、多肌痛、赖特综合征、干燥综合征、颞动脉炎、韦格纳肉芽肿病、温热自身免疫性溶血性贫血、间质性膀胱炎、莱姆病、硬斑病、结节病、硬皮病、溃疡性结肠炎和白癜风。

所述药剂可用于治疗具有炎性成分的t细胞介导的超敏反应性疾病。这些病症包括接触性超敏反应、接触性皮炎(包括由有毒常春藤引起的)、荨麻疹、皮肤过敏、呼吸道过敏(花粉症、过敏性鼻炎)和麸质敏感性肠病(乳糜泻)。

可在本发明中治疗的其它炎性病症包括例如，阑尾炎、皮炎、皮肌炎、心内膜炎、纤维组织炎、牙龈炎、舌炎、肝炎、化脓性汗腺炎、虹膜炎、喉炎、乳腺炎、心肌炎、肾炎、耳炎、胰腺炎、腮腺炎、心包炎、腹膜炎、咽头炎、胸膜炎、肺炎、前列腺炎、肾盂肾炎和口内炎、移植排斥反应(涉及肾脏、肝脏、心脏、肺、胰腺(如胰岛细胞)、骨髓、角膜、小肠、皮肤同种异体移植物、皮肤同种移植物和心脏瓣膜异种移植物、血清病(sewrumsickness)和移植物抗宿主病)、急性胰腺炎、慢性胰腺炎、急性呼吸窘迫综合征、sexary综合征、先天性肾上腺增生、非化脓性甲状腺炎、与癌症相关的高钙血症、天疱疮、大疱性疱疹性皮炎、严重多形红斑、剥脱性皮炎、脂溢性皮炎、季节性或常年性变应性鼻炎、支气管哮喘、接触性皮炎、异位性皮炎、药物超敏反应、变应性结膜炎、角膜炎、眼部带状疱疹、虹膜炎和虹膜睫状体炎、脉络膜视网膜炎、视神经炎、症状性结节病、暴发性或播散性肺结核化疗、成人特发性血小板减少性紫癜、成人继发性血小板减少症、获得性(自身免疫性)溶血性贫血、成人白血病和淋巴瘤、儿童的急性白血病、局限性肠炎、自身免疫性血管炎、多发性硬化、慢性阻塞性肺疾病、实体器官移植排斥、败血症。

优选的治疗包括移植排斥、牛皮癣关节炎、多发性硬化、1型糖尿病、哮喘、系统性红斑狼疮、慢性肺疾病和伴随感染的传染性疾病(例如败血症)的治疗中的任一种。

药物组合物可按照每单位剂量含有预定量的活性成分的单位剂量形式存在。该单位依据所治疗的疾病、给药途径和患者的年龄、体重和状况，可含有，例如，0.5mg-1g，优选1mg-700mg，更优选5mg-100mg的式(i)化合物，或药物组合物可按照每单位剂量含有预定量的活性成分的单位剂量形式存在。优选的单位剂量组合物是含有如上文所述的活性成分的日剂量或亚剂量或其适当分数的那些。此外，该药物组合物可通过药学领域熟知的任意方法制备。

药物组合物可适于任意合适的途径的施用，例如，口服(包括口腔或舌下)、直肠、鼻、局部(包括口腔、舌下或经皮)、阴道或胃肠外(包括皮下、肌内、静脉内或真皮内)途径。该组合物可通过药物领域已知的任意方法制备，例如，通过将式(i)化合物与一种或多种载体或赋形剂组合。

适用于口服给药的药物组合物可为离散单位，例如片剂或胶囊；粉剂或颗粒；水性或非水液体中的溶液或混悬液；食用泡沫或搅打剂；水包油的液体乳液或油包水的液体乳液。

胶囊是通过以下制备的：按上述制备粉末混合物并填充到成形的明胶鞘中。可在填充操作前，将助流剂和润滑剂，例如胶体二氧化硅、滑石、硬脂酸镁、硬脂酸钙、固体聚乙二醇加至该粉末混合物中。还可加入崩解剂或增溶剂，例如琼脂、碳酸钙或碳酸钠，使得当该胶囊被摄取时提高药物的可用性。

此外，当需要或必要时，还可将合适的粘合剂、润滑剂、崩解剂和着色剂掺入到该混合物中。合适的粘合剂包括淀粉、明胶、天然糖(例如葡萄糖或β-乳糖)、玉米甜味剂、天然和合成树胶(例如阿拉伯胶、黄蓍胶)、海藻酸钠、羧甲基纤维素、聚乙二醇、蜡等。在这些剂型中所用的润滑剂包括油酸钠、硬脂酸钠、硬脂酸镁、苯甲酸钠、乙酸钠、氯化钠等。崩解剂包括，但不限于，淀粉、甲基纤维素、琼脂、膨润土、黄原胶等。片剂是通过如下制备的，例如，制备粉末混合物、制粒或预压(slugging)、添加润滑剂和崩解剂并压制成片。粉末混合物是通过以下制备的，将适当粉碎的化合物与上述稀释剂或碱混合，并任选地，与粘合剂(例如羧甲基纤维素和藻酸盐)、明胶或聚乙烯吡咯烷酮、溶液延迟剂(例如石蜡)、再吸收加速剂(例如季盐)和/或吸收剂(例如膨润土、高岭土或磷酸二钙)混合。用片剂成形模，通过加入硬脂酸、硬脂酸盐、滑石或矿物油可将该粉末混合物制粒。然后将该润滑的混合物压制成片。本发明化合物还可与自由流动的惰性载体组合且无需进行制粒或预压步骤而直接压制成片。可提供由虫胶隔离层、糖或聚合材料的包衣和蜡的抛光包衣组成的澄清或不透明的保护包衣。可将染料加至这些包衣以区分不同的剂量。

口服流体(例如溶液、糖浆和酏剂)可以单位剂量形式制备，使得给定量含有预定量的式(i)化合物。糖浆可通过将该化合物溶于适当矫味的水溶液中进行制备，而酏剂通过使用无毒醇媒介物制备。混悬液可通过将该化合物分散于无毒媒介物中进行配制。还可加入增溶剂和乳化剂(例如乙氧基化的异硬脂醇和聚氧乙烯山梨醇醚)、防腐剂、矫味添加剂(例如薄荷油)、天然甜味剂、糖精或其他人造甜味剂等。

当适当时，可对用于口服给药的剂量单位制剂进行微囊化。也可例如通过将颗粒物质包衣或包埋到聚合物、蜡等中来制备制剂以延长或维持释放。

适用于直肠给药的药物组合物可以栓剂或灌肠剂存在。

适用于阴道给药的药物组合物可以阴道栓剂、棉塞、霜剂、凝胶剂、糊剂、泡沫剂或喷雾制剂存在。

适用于胃肠外给药的药物制剂包括水性和非水无菌注射溶液，其可含有抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂和溶质，其使得该组合物与预期接受者的血液等渗；和水性和非水无菌混悬液，其可包含悬浮剂和增稠剂。该药物组合物可存在于单位剂量或多剂量容器中，例如密闭的安瓿和小瓶且可储存于冷冻干燥的(冻干的)条件下，其仅需在使用前立即加入无菌液体载体，例如注射用水。临时注射溶液和混悬液可由无菌粉末、颗粒和片剂制备。

应理解，除了上面特别提及的成分，该药物组合物可根据所探讨的制剂类型包含本领域常用的其他试剂，例如适用于口服给药的那些可包含矫味剂。

本发明化合物的治疗有效量将取决于许多因素，包括，例如，预期接受者的年龄和体重、需要治疗的精确病症和其严重性、该制剂的性质和给药途径且最终由开处方人员慎重决定。但是，治疗贫血的式(i)化合物的有效量的通常范围是每天0.001-100mg/kg接受者体重，适当地范围为每天0.1-10mg/kg体重。对于70kg成年哺乳动物，每天的实际量将适当地为7-700mg且该量可以每日单一剂量给予或以每天若干(例如2、3、4、5或6个)亚剂量给予，使得总的剂量相同。有效量的盐或溶剂合物等可按式(i)化合物本身有效量的比例来确定。预期类似的剂量将适用于治疗上述其他病症。

在某些实施方案中，本发明涉及药物组合物，其包含(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(1-新戊基哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮的盐酸盐。在另一实施方案中，本发明涉及药物组合物，其包含(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(1-新戊基哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮的盐酸盐，其中至少10％重量的(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(1-新戊基哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮的盐酸盐以本文所述的(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(1-新戊基哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮的盐酸盐的晶形(形式ii)存在。在另一实施方案中，本发明涉及药物组合物，其包含(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(1-新戊基哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮的盐酸盐，其中至少20％重量，或至少30％重量，或至少40％重量，或至少50％重量，或至少60％重量，或至少70％重量，或至少80％重量，或至少90％重量的(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(1-新戊基哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮的盐酸盐以本文所述的(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(1-新戊基哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮的盐酸盐的晶形(形式ii)存在。在另一实施方案中，本发明涉及药物组合物，其包含(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(1-新戊基哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮的盐酸盐，其中至少95％重量，或至少96％重量，或至少97％重量，或至少98％重量，或至少99％重量，或至少99.5％重量，或至少99.8％重量，或至少99.9％重量的(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(1-新戊基哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮的盐酸盐以本文所述的(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(1-新戊基哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮的盐酸盐的晶形(形式ii)存在。

在某些实施方案中，本发明涉及药物组合物，其包含(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(1-((1-甲基环丁基)甲基)哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮的盐酸盐。在另一实施方案中，本发明涉及药物组合物，其包含(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(1-((1-甲基环丁基)甲基)哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮的盐酸盐，其中至少10％重量的(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(1-((1-甲基环丁基)甲基)哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮的盐酸盐以本文所述的(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(1-((1-甲基环丁基)甲基)哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮的盐酸盐的晶形(形式i)存在。在另一实施方案中，本发明涉及药物组合物，其包含(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(1-((1-甲基环丁基)甲基)哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮的盐酸盐，其中至少20％重量，或至少30％重量，或至少40％重量，或至少50％重量，或至少60％重量，或至少70％重量，或至少80％重量，或至少90％重量的(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(1-((1-甲基环丁基)甲基)哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮的盐酸盐以本文所述的(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(1-((1-甲基环丁基)甲基)哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮的盐酸盐的晶形(形式i)存在。在另一实施方案中，本发明涉及药物组合物，其包含(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(1-((1-甲基环丁基)甲基)哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮的盐酸盐，其中至少95％重量，或至少96％重量，或至少97％重量，或至少98％重量，或至少99％重量，或至少99.5％重量，或至少99.8％重量，或至少99.9％重量的(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(1-((1-甲基环丁基)甲基)哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮的盐酸盐以本文所述的(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(1-((1-甲基环丁基)甲基)哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮的盐酸盐的晶形(形式i)存在。

在另一实施方案中，本发明涉及药物组合物，其包含(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(1-新戊基哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮的盐酸盐，其中不超过90％重量的盐是无定形的。在另一实施方案中，本发明涉及药物组合物，其包含(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(1-新戊基哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮的盐酸盐，其中不超过80％重量，或不超过70％重量，或不超过60％重量，或不超过50％重量，或不超过40％重量，或不超过30％重量，或不超过20％重量，或不超过10％重量的盐是无定形的。在另一实施方案中，本发明涉及药物组合物，其包含(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(1-新戊基哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮的盐酸盐，其中不超过5％重量，或不超过4％重量，或不超过3％重量，或不超过2％重量，或不超过1％重量，或不超过0.5％重量，或不超过0.2％重量，或不超过0.1％重量的盐是无定形的。

在另一实施方案中，本发明涉及药物组合物，其包含(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(1-((1-甲基环丁基)甲基)哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮的盐酸盐，其中不超过90％重量的盐是无定形的。在另一实施方案中，本发明涉及药物组合物，其包含(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(1-((1-甲基环丁基)甲基)哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮的盐酸盐，其中不超过80％重量，或不超过70％重量，或不超过60％重量，或不超过50％重量，或不超过40％重量，或不超过30％重量，或不超过20％重量，或不超过10％重量的盐是无定形的。在另一实施方案中，本发明涉及药物组合物，其包含(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(1-((1-甲基环丁基)甲基)哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮的盐酸盐，其中不超过5％重量，或不超过4％重量，或不超过3％重量，或不超过2％重量，或不超过1％重量，或不超过0.5％重量，或不超过0.2％重量，或不超过0.1％重量的盐是无定形的。

在另一实施方案中，本发明涉及药物组合物，其包含(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(1-新戊基哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮的盐酸盐，其中不超过90％重量的(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(1-新戊基哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮的盐酸盐以除了本文所述的(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(1-新戊基哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮的盐酸盐的晶形(形式ii)之外的形式存在。在另一实施方案中，本发明涉及药物组合物，其包含(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(1-新戊基哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮的盐酸盐，其中不超过80％重量，或不超过70％重量，或不超过60％重量，或不超过50％重量，或不超过40％重量，或不超过30％重量，或不超过20％重量，或不超过10％重量的(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(1-新戊基哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮的盐酸盐以除了本文所述的(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(1-新戊基哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮的盐酸盐的晶形(形式ii)之外的形式存在。在另一实施方案中，本发明涉及药物组合物，其包含(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(1-新戊基哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮的盐酸盐，其中不超过5％重量，或不超过4％重量，或不超过3％重量，或不超过2％重量，或不超过1％重量，或不超过0.5％重量，或不超过0.2％重量，或不超过0.1％重量的(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(1-新戊基哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮的盐酸盐以除了本文所述的(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(1-新戊基哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮的盐酸盐的晶形(形式ii)之外的形式存在。

在另一实施方案中，本发明涉及药物组合物，其包含(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(1-((1-甲基环丁基)甲基)哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮的盐酸盐，其中不超过90％重量的(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(1-((1-甲基环丁基)甲基)哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮的盐酸盐以除了本文所述的(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(1-((1-甲基环丁基)甲基)哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮的盐酸盐的晶形(形式i)之外的形式存在。在另一实施方案中，本发明涉及药物组合物，其包含(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(1-((1-甲基环丁基)甲基)哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮的盐酸盐，其中不超过80％重量，或不超过70％重量，或不超过60％重量，或不超过50％重量，或不超过40％重量，或不超过30％重量，或不超过20％重量，或不超过10％重量的(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(1-((1-甲基环丁基)甲基)哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮的盐酸盐以除了本文所述的(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(1-((1-甲基环丁基)甲基)哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮的盐酸盐的晶形(形式i)之外的形式存在。在另一实施方案中，本发明涉及药物组合物，其包含(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(1-((1-甲基环丁基)甲基)哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮的盐酸盐，其中不超过5％重量，或不超过4％重量，或不超过3％重量，或不超过2％重量，或不超过1％重量，或不超过0.5％重量，或不超过0.2％重量，或不超过0.1％重量的(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(1-((1-甲基环丁基)甲基)哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮的盐酸盐以除了本文所述的(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(1-((1-甲基环丁基)甲基)哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮的盐酸盐的晶形(形式i)之外的形式存在。

定义

术语以其被接受的含义使用。以下定义旨在阐明，而非限制所定义的术语。

本文所用术语“烷基”表示具有指定碳原子数的饱和、直链或支链烃部分。术语“(c1-c4)烷基”是指含有1-4个碳原子的烷基。示例性烷基包括，但不限于，甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、己基、庚基和辛基。

“烷氧基”是指包含通过氧连接原子连接的如上定义的烷基的基团。术语“(c1-c4)烷氧基”是指通过氧连接原子连接的直链-或支链的-链烃基团，其具有至少1个且至多4个碳原子。可用于本发明的示例性“(c1-c4)烷氧基”基团包括甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、仲丁氧基、异丁氧基和叔丁氧基。

当术语“烷基”与其他取代基组合使用时，例如“卤代(c1-c8)烷基”、“羟基(c1-c8)烷基”或“(c1-c4)烷氧基(c1-c8)烷基-”，术语“烷基”旨在涵盖二价直链或支链烃基，其中连接点通过烷基部分。术语“卤代(c1-c4)烷基”旨在表示在含有1-4个碳原子的烷基基团的1个或多个碳原子上具有1个或多个可相同或不同的卤素原子的基团，其可以是直链或支链碳基。在本发明中所用的“卤代(c1-c4)烷基”的实例包括，但不限于，-cf3(三氟甲基)、-ccl3(三氯甲基)、1,1-二氟乙基、2-氟-2-甲基丙基、2,2-二氟丙基、2,2,2-三氟乙基和六氟异丙基。可用于本发明的“羟基(c1-c8)烷基”基团的实例包括，但不限于，羟基甲基、羟基乙基和羟基异丙基。可用于本发明的“(c1-c4)烷氧基(c1-c8)烷基”基团的实例包括，但不限于，甲氧基甲基、甲氧基乙基、甲氧基异丙基、乙氧基甲基、乙氧基乙基、乙氧基异丙基、异丙氧基甲基、异丙氧基乙基、异丙氧基异丙基、叔丁氧基甲基、叔丁氧基乙基和叔丁氧基异丙基。

如本文所述，术语“环烷基”是指包含指定数量碳原子的非芳族、饱和、环状烃环。术语“(c3-c5)环烷基”是指具有3至5个环碳原子的非芳族环状烃环。可用于本发明的示例性“(c3-c5)环烷基”基团的实例包括环丙基、环丁基和环戊基。

如本文所述，术语“二环烷基”是指含有指定碳原子数的饱和、桥接、稠合或螺环的双环烃环体系。示例性“(c6-c10)二环烷基”基团包括，但不限于双环[2.1.1]己基、双环[2.1.1]庚基、双环[3.2.1]辛基、双环[2.2.2]辛基、双环[3.2.2]壬基、双环[3.3.1]壬基、双环[3.3.2]癸基、双环[4.3.1]癸基、双环[2.2.0]己基、双环[3.1.0]己基、双环[3.2.0]庚基、双环[4.1.0]庚基、八氢并环戊二烯基、双环[4.2.0]辛基、十氢萘基、螺[3.3]庚基、螺[2.4]庚基、螺[3.4]辛基、螺[2.5]辛基、螺[4.4]壬基、螺[3.5]壬基和螺[4.5]癸基。

术语"卤素"和"卤"表示氟、氯、溴或碘取代基。"羟基"或“羟基”预期是指基团-oh。

本文所用术语“任选地”是指随后描述的事件可能发生或不发生，且包括发生的事件和不发生的事件二者。

本文所用术语“治疗”是指在先前患有或确诊的患者或受试者中，减轻具体病症、消除或减少该病症的一种或多种症状、减缓或消除该病症的进展和预防或延迟该病症的复发。

在患者中“治愈”疾病被用来表示根除、停止、中止或终止人类免疫缺陷病毒或症状、或症状或病毒的进展，达一定时间段。例如，在一个实施方案中，“治愈”是指单独或与一种或多种其它化合物组合的治疗性施用或施用的组合诱导和在没有任何其它治疗干预至少两年后维持持续的人免疫缺陷病毒的病毒控制(血浆病毒血症不可检测的水平，例如通过聚合酶链式反应(pcr)测试、bdna(支链dna)测试或nasba(基于核酸序列的扩增)测试)。上述pcr、bdna和nasba测试使用本领域技术人员已知和熟悉的技术进行。例如，人体免疫缺陷病毒或症状，或症状或病毒的进展的根除、停止、中止或终止可持续至少两年。

本文所用术语“有效量”是指由例如研究人员或临床医师所探索的将引起组织、系统、动物或人的生物学或医学响应的药物或药剂的量。

术语“治疗有效量”是指与未接受该量的相应受试者相比，引起疾病、障碍或副作用的改进的治疗、治愈或改善，或降低疾病或障碍进展速度的任意量。术语在其范围内还包括提高正常生理功能的有效量。对于在疗法中的用途，治疗有效量的式(i)化合物及其盐可以化学原料施用。此外，所述活性成分可以药物组合物存在。

化合物制备

缩写

acoh乙酸

arar气

boc叔丁基氧基羰基

bu4ncl四丁基氯化铵

ch3cn乙腈

cs2co3碳酸铯

dce1,2-二氯乙烷

dcm二氯甲烷

dmfn,n-二甲基甲酰胺

dmso二甲基亚砜

edc1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺

es电喷雾

et2o乙醚

etoac乙酸乙酯

etoh乙醇

h小时

h2氢气

hcl盐酸

h2o水

hoat1-羟基-7-氮杂苯并三唑

h2so4硫酸

hplc高效液相色谱法

lcms液相色谱质谱分析

lialh4氢化铝锂

meoh甲醇

mgso4硫酸镁

min分钟

m摩尔

ms质谱分析

n正常

n2氮气

nabh4硼氢化钠

nabh(oac)3三乙酰氧基硼氢化钠

na2co3碳酸钠

nahco3碳酸氢钠

nahmds二(三甲基甲硅烷基)胺基钠

naoh氢氧化钠

na2so4硫酸钠

nbsn-溴代琥珀酰亚胺

nh4cl氯化铵

nh4oac乙酸铵

nh4oh氢氧化铵

nmmn-甲基吗啉

pd(oac)2乙酸钯(ii)

pd(pph3)4四(三苯基膦)钯(0)

plm偏振光显微术

(r,r)-[cod]ir[cy2pthrephox]((4r,5r)-(+)-o-[1-苄基-1-(5-甲基-2-苯基-4,5-二氢噁唑-4-基)-2-苯基乙基](二环己基膦氧基)(1,5-环辛二烯)铱(i)四(3,5-二(三氟甲基)苯基硼酸盐

r.t.室温

sat.饱和

tbme叔丁基甲基醚

tfa三氟乙酸

thf四氢呋喃

一般性合成方案

本发明化合物可通过各种方法，包括熟知的标准合成方法制备。示例性的一般性合成方法如下所示，然后具体的本发明化合物在工作实施例中进行制备。本领域技术人员将理解，如果本文所描述的取代基对本文所述的合成方法不相容，则该取代基可用对该反应条件稳定的合适的保护基团进行保护。该保护基团可在反应顺序中合适的点进行脱除以提供所需的中间体或目标化合物。在下文所述的全部方案中，根据合成化学的一般原则，在有必要的位置，使用敏感或反应性基团的保护基团。保护基团根据有机合成的标准方法进行处理(t.w.green和p.g.m.wuts，(1991)protectinggroupsinorganicsynthesis，johnwiley&sons，其保护基团引入本文作为参考)。使用本领域技术人员熟悉的方法，在该化合物合成的合适的阶段将这些基团脱除。方法及反应条件的选择以及它们的执行顺序应与本发明化合物的制备一致。起始材料是市售可得的或使用本领域技术人员已知的方法从市售可得的起始材料制备的。

某些式(i)化合物可根据方案1或类似方法制备。铱介导的硼基化，然后与适当取代的三氟甲磺酸酯的suzuki偶联得到相应的偶联烯烃。铱介导的烯烃不对称还原，然后溴化，得到溴噻吩。溴噻吩与烯丙醇的钯介导的heck偶联，然后用适当取代的胺还原胺化得到的醛，得到仲胺。酯的皂化和分子内酰胺的形成提供了复杂的噻吩内酰胺。除去甲基和叔丁基羰基保护基团得到吡啶酮。用适当取代的醛进行还原胺化，得到式(i)化合物。

方案1：式(i)的化合物的合成。

实验

以下指引适用于本文所述的全部实验操作。除非另外提及，否则所有反应是在氮正压下，使用烘干的玻璃器具进行的。所指定的温度是外部的(即浴温度)且是近似的。通过注射器转移对空气和湿度敏感的液体。试剂按原样使用。所用的溶剂是那些供应商标注为“无水”的溶剂。溶液试剂所标注的摩尔浓度是近似的且使用前并未相对相应的标准进行滴定。除非另外提及，否则所有的反应是通过搅拌棒进行搅拌的。除非另外提及，否则加热是使用含有硅油的加热浴进行的。反应是使用配有biotage微波exp小瓶(0.2–20ml)和隔垫和瓶盖的initiator2.0仪器，用微波辐射(0–400w，2.45ghz)进行的。基于溶剂和离子电荷所使用的辐射水平(即高、正常、低)是基于供应商的说明。使用干冰/丙酮或干冰/2-丙醇将温度冷却至-70℃以下。用作干燥剂的硫酸镁和硫酸钠是无水级别的且可互换使用。被描述为“真空”或“减压下”除去的溶剂是通过旋转蒸发完成的。

制备型正相硅胶色谱是使用以下进行的：配有redisep或gold硅胶柱(4g-330g)的teledynecombiflashcompanion仪器或配有sf25硅胶柱(4g–300g)的if280仪器或配有硅胶柱(10g–100g)的sp1仪器。除非另外提及，否则反相hplc纯化是使用ymc-pack柱(ods-a75x30mm)作为固相进行的。除非另外提及，否则使用25ml/mina(ch3cn-0.1％tfa):b(水-0.1％tfa)的移动相，10-80％梯度a(10min)，在214nm处进行uv检测。

peapi150单四极质谱仪(pesciex，thornhill，ontario，canada)是阳离子检测模式下，使用电喷雾电离进行操作。该雾化气体产生自零空气发生器(balstoninc.，haverhill，ma，usa)并在65psi递送，而所述气帘气(curtaingas)是从dewar液氮容器中以50psi递送的高纯氮。施加到电喷雾针上的电压是4.8kv。室口(orifice)设定在25v且质谱仪以0.5扫描/秒的速率进行扫描，其使用0.2amu的步幅质量并收集分布数据。

方法a，lcms。使用配有10ul注射器(其执行向valco10孔进样阀的注入)的pal自动采样器(leaptechnologies，carrboro，nc)，将样品送入该质谱仪。所述hplc泵是lc-10advp(shimadzuscientificinstruments，columbia，md)，其以0.3ml/min和线性梯度4.5％a至90％b操作3.2分钟，保持0.4分钟。流动相由容器a中的100％(h2o0.02％tfa)和容器b中的100％(ch3cn0.018％tfa)组成。固定相是(c18)且柱尺寸为1mmx40mm。检测是由214nm处的uv、蒸发光散射(elsd)和ms进行的。

方法b，lcms。或者，使用具有lc/ms的1100分析型hplc系统并以1ml/min和线性梯度5％a至100％b操作2.2min，保持0.4min。流动相由容器a中的100％(h2o0.02％tfa)和容器b中的100％(ch3cn0.018％tfa)组成。固定相是具有3.5um颗粒尺寸的(c8)且柱尺寸为2.1mmx50mm。检测是由214nm处的uv、蒸发光散射(elsd)和ms进行的。

方法c，lcms。或者，使用配有毛细管柱(50×4.6mm，5μm)的api2000。hplc是在配有柱sb-c18(50×4.6mm，1.8μm)的200系列uplc系统上进行的，其用ch3cn:nh4oac缓冲液进行洗脱。

¹h-nmr谱在400mhz进行记录，其使用avance400mhz仪器，配有acdspectmanagerv.10用于再处理。所指代的多重性为：s＝单峰，d＝二重峰，t＝三重峰，q＝四重峰，quint＝五重峰，sxt＝六重峰，m＝多重峰，dd＝双二重峰，dt＝双三重峰等和br表示宽信号。除非另外提及，否则所有nmr是在dmso-d6中进行。

分析型hplc：产物用以下进行分析，1100分析型色谱系统，具有4.5x75mmxdb-c18柱(3.5um)，梯度从5％ch3cn(0.1％甲酸)至95％ch3cn(0.1％甲酸)的h2o溶液(0.1％甲酸)以2ml/min进行4min，和保持1min。

中间体

中间体1

4-甲基噻吩-3-甲酸甲酯

在室温氮气下，向3-溴-4-甲基噻吩(20.0g，113mmol)在thf(100ml)中的搅拌溶液中滴加异丙基氯化镁氯化锂复合物1.3n在thf(90ml，117mmol)中的溶液。将该反应搅拌过夜。将反应冷却至-78℃且用氯甲酸甲酯(12ml，155mmol)处理。反应温热至室温且搅拌1小时。该反应用etoac稀释，用饱和nahco3洗涤，搅拌30分钟，(形成停留在水相中的白色悬浮液)，用盐水洗涤，干燥(na2so4)，过滤且真空浓缩。产物在44至50℃(油浴50至75℃)在真空短程蒸馏(4至2mmhg)。将主要和最后的级分合并以得到产物4-甲基噻吩-3-甲酸甲酯(13.2g，85mmol，74.8％产率)，其为澄清液体。ms(es)[m+h]⁺156.8。

或者，中间体1如下制备:

在氮气下在室温向3-溴-4-甲基噻吩(250g，1412mmol)在thf(1200ml)中的搅拌溶液中在1小时内滴加异丙基氯化镁氯化锂复合物(1.3m在thf中)(1086ml，1412mmol)的溶液。将反应混合物在氮气氛在室温搅拌过夜。第二天，在干冰/丙酮浴中将反应冷却至-78℃且用氯甲酸甲酯(153ml，1977mmol)处理。反应温热至室温且搅拌3h。然后将反应混合物用et2o(750ml)稀释且用饱和nahco3(300ml)搅拌20min。水层再次用et2o(2x250ml)萃取。合并的有机层用盐水(250ml)洗涤，干燥(na2so4)，过滤且真空浓缩以得到粗化合物(239g)，为淡黄色液体。粗产物通过短程蒸馏真空纯化(～3mmhg)。产物在50-55℃使用加热罩蒸馏。收集前馏分、主要馏分和后期馏分。随后合并主要馏分和后期馏分以得到包含极性较小的杂质的产物。然后将残余物在硅胶柱上层析，用0-20％et2o/己烷的梯度洗脱。将通过tlc所示对应于产物的级分合并且在减压下浓缩以得到4-甲基噻吩-3-甲酸甲酯(194g，1242mmol，88％产率)，以～90％纯度，为淡黄色油状物。¹hnmr(400mhz，cdcl3)δ8.08(d，j＝3.5hz，1h)，6.94-6.89(m，1h)，3.85(s，3h)，2.48(d，j＝1.0hz，3h)。ms(es)[m+h]⁺156.9.

中间体2

(2-甲氧基-4,6-二甲基吡啶-3-基)甲胺

向2-甲氧基-4,6-二甲基烟腈(10g，61.7mmol)在et2o(200ml)中的冷却的(冰水浴)溶液中滴加1mlialh4在et2o中的溶液(123ml，123mmol)。去除冰浴且将反应混合物在室温搅拌16h。反应混合物在冰水浴中冷却且用最少量的水淬灭(直到不再产生氢气)。将反应物过滤且不溶物质用10:1dcm/meoh洗涤。将合并的有机滤液浓缩。残余物通过柱色谱纯化(0–30％meoh/dcm；100g-hp-硅胶柱)以得到(2-甲氧基-4,6-二甲基吡啶-3-基)甲胺(8.9g)，其为淡黄色半固体。

或者，中间体2如下制备:

向2-甲氧基-4,6-二甲基烟腈(50g，308mmol)在et2o(1000ml)中的冷却的(冰水浴)悬浮液中经30分钟滴加2mlialh4在thf(308ml，617mmol)中的溶液。将反应搅拌60分钟，此时移除冰浴。将反应混合物在室温搅拌20h。反应混合物重新冷却(冰水浴)且用h2o(25ml)、3mnaoh(25ml)和额外的h2o(75ml)逐滴淬灭。移除冷却浴且添加mgso4(10勺堆)。将混合物搅拌1h，此时将其通过过滤。固体用et2o洗涤且将母液浓缩。将残余物真空干燥(hivac)2h以得到(2-甲氧基-4,6-二甲基吡啶-3-基)甲胺(50g，98％产率)，为黄色油状物，其在冷冻后固化。ms(es)[m+h]⁺167.0.

实施例

实施例1

(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(1-新戊基哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮

a)4-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)噻吩-3-甲酸甲酯

在氩气下向500ml圆底烧瓶添加(1,5-环辛二烯)(甲氧基)铱(i)二聚体(1.3g，1.961mmol)。在搅拌下，通过注射器添加4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(32ml，222mmol)，然后添加4,4'-二-叔丁基-2,2'-联吡啶(1.04g，3.87mmol)在正己烷(75ml)中的溶液(该反应在冰浴中保持冷却5-10℃)。搅拌1分钟后，添加4-甲基噻吩-3-甲酸甲酯(20.0g，128mmol)(观察到气体逸出)。反应在室温搅拌过夜。将反应真空蒸发至干且通过硅胶色谱纯化(rediseprfgold330g，0至10％etoac在己烷中)。将纯的级分合并且蒸发至干以得到4-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)噻吩-3-甲酸甲酯(33.1g，117mmol，92％产率)，其为无色油状物，将其在真空固化为蜡状白色固体。ms(es)[m+h]⁺200.9(硼酸)，283.1(硼酸酯)。

b)4-(1-(((三氟甲基)磺酰基)氧基)乙烯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯

在-78℃在氮气下向4-乙酰基哌啶-1-甲酸叔丁酯(25g，110mmol)在thf(250ml)中的搅拌溶液中滴加1nnahmds的thf溶液(130ml，130mmol)。将反应在-78℃搅拌1h。然后经15min滴加1,1,1-三氟-n-(吡啶-2-基)-n-((三氟甲基)磺酰基)甲烷磺酰胺(45g，126mmol)在thf(100ml)中的溶液。将反应在-78℃搅拌1h，然后在0℃搅拌30min。该反应用冷却水(500ml)淬灭，用etoac萃取(2x250ml)，用盐水洗涤，干燥(na2so4)，过滤且真空浓缩。粗产物通过硅胶色谱纯化(rediseprfgold330g，0至20％etoac在己烷中)。(uv阴性，通过h2so4的etoh溶液炭化来显现)。将包含产物的级分合并且蒸发至干以得到4-(1-(((三氟甲基)磺酰基)氧基)乙烯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(29.1g，81mmol，73.6％产率)，其为无色油状物。(lcms和¹hnmr显示约16％的n-boc-4-乙炔基哌啶)ms(es)[m+h]⁺304.0(-异丁烯)，283.1(-boc)。

c)4-(1-(4-(甲氧基羰基)-3-甲基噻吩-2-基)乙烯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯

将4-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)噻吩-3-甲酸甲酯(50g，177mmol)、4-(1-(((三氟甲基)磺酰基)氧基)乙烯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(76g，211mmol)和na2co3(45g，536mmol)在1,4-二噁烷(450ml)和水(150ml)中的搅拌溶液用n2通过鼓泡吹洗5min。向反应添加pd(pph3)4(8g，6.92mmol)且在70℃n2下加热1h(强烈气体逸出)。该反应用etoac(500ml)稀释，用水(500ml)和盐水洗涤，干燥(na2so4)，且真空浓缩。残余物通过硅胶色谱纯化(rediseprfgold330g，0至20％etoac/己烷)以得到4-(1-(4-(甲氧基羰基)-3-甲基噻吩-2-基)乙烯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(58.8g，161mmol，91％产率)，其为淡黄色油状物。ms(es)[m+h]⁺266.1(-boc)，[m+h]⁺278.0(-异丁烯，-meoh)，[m+h]⁺310.1(-异丁烯)，[m+na]⁺388.1。

d)(r)-4-(1-(4-(甲氧基羰基)-3-甲基噻吩-2-基)乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯

将4-(1-(4-(甲氧基羰基)-3-甲基噻吩-2-基)乙烯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(31.0g，85mmol)在dcm(500ml)中的溶液用n2气流吹洗10min。向该吹洗溶液中添加(r,r)-[cod]ir[cy2pthrephox](2.64g，1.527mmol)。向混合物中通入h2(50psi)且摇动(parr反应器)22h，此时将其通过过滤，用dcm(50ml)洗涤，且浓缩。纯化残余物(330克二氧化硅柱；梯度b：3-30％；a＝庚烷；b＝etoac)得到(r)-4-(1-(4-(甲氧基羰基)-3-甲基噻吩-2-基)乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(30.9g，80mmol，94％产率)，其为浓稠的油状物。ms(es)[m+h]⁺390.2。通过手性hplc测定的产物的光学纯度为97.6％ee(chiralpakay-h，5微米，4.6mmx150mm；245，250nmuv；90:10:0.1正庚烷:etoh:异丙基胺，等度洗脱，1.0ml/min)。绝对构型通过对应的boc-脱保护的胺的l-(+)-酒石酸盐的小分子x-射线晶体学证实。

e)(r)-4-(1-(5-溴-4-(甲氧基羰基)-3-甲基噻吩-2-基)乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯

向(r)-4-(1-(4-(甲氧基羰基)-3-甲基噻吩-2-基)乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(33.2g，90mmol)在dmf(500ml)中的溶液中添加nbs(20.9g，117mmol)。将反应保持约4h，此时将其用水稀释且用et2o(1.5l)萃取。有机物用水、盐水洗涤，用mgso4干燥，过滤且蒸发。通过柱色谱纯化残余物(5至20％etoac/己烷)得到(r)-4-(1-(5-溴-4-(甲氧基羰基)-3-甲基噻吩-2-基)乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(34g，72.4mmol，80％产率)。ms(es)[m+h]⁺468.2，470.2(m+na)。

f)(r)-4-(1-(4-(甲氧基羰基)-3-甲基-5-(3-氧代丙基)噻吩-2-基)乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯

向(r)-4-(1-(5-溴-4-(甲氧基羰基)-3-甲基噻吩-2-基)乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(50g，112mmol)在dmf(1l)中的溶液中添加丙-2-烯-1-醇(0.023l，560mmol)、bu4ncl(37.4g，134mmol)和nahco3(37.6g，448mmol)。将反应混合物用n2脱气且添加pd(oac)2(3.77g，16.8mmol)。反应混合物在65℃加热2h，此时将其冷却至室温。将混合物用水(1.3l)稀释且用et2o(2x)萃取。合并的萃取物干燥(mgso4)且浓缩。残余物通过柱色谱纯化(硅胶，10至40％etoac/己烷)以得到(r)-4-(1-(4-(甲氧基羰基)-3-甲基-5-(3-氧代丙基)噻吩-2-基)乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(42g，94mmol，84％产率)，其为淡黄色油状物。ms(es)[m+h]⁺446.2(m+na)464.3(m+mecn)。

g)(r)-4-(1-(5-(3-(((2-甲氧基-4,6-二甲基吡啶-3-基)甲基)氨基)丙基)-4-(甲氧基羰基)-3-甲基噻吩-2-基)乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯

向(r)-4-(1-(4-(甲氧基羰基)-3-甲基-5-(3-氧代丙基)噻吩-2-基)乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(36.3g，86mmol)在meoh(600ml)中的溶液中添加(2-甲氧基-4,6-二甲基吡啶-3-基)甲胺(16.38g，99mmol)，其为冷冻固体。将反应在室温保持1.5h。然后反应在冰浴中冷却10分钟，此时nabh4(8.11g，214mmol)作为固体添加(一些发泡/气体逸出)。将混合物搅拌15min。移除冰浴且将反应在室温搅拌2h。反应在冰浴中再冷却且用饱和nh4cl水溶液(200ml)淬灭。移除冰浴且将反应真空浓缩至～1/4体积。将混合物用饱和nh4cl水溶液稀释且用etoac萃取(2x)。合并的有机物用饱和nh4cl水溶液洗涤，用mgso4干燥(搅拌15min)，通过过滤，且浓缩以得到(r)-4-(1-(5-(3-(((2-甲氧基-4,6-二甲基吡啶-3-基)甲基)氨基)丙基)-4-(甲氧基羰基)-3-甲基噻吩-2-基)乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(55.5g，87mmol，基于90％纯度，通过hplc测定，100％产率)，其为油状物。将材料真空干燥30min。ms(es)[m+h]⁺574.5。

h)(r)-5-(1-(1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基)乙基)-2-(3-(((2-甲氧基-4,6-二甲基吡啶-3-基)甲基)氨基)丙基)-4-甲基噻吩-3-甲酸

向(r)-4-(1-(5-(3-(((2-甲氧基-4,6-二甲基吡啶-3-基)甲基)氨基)丙基)-4-(甲氧基羰基)-3-甲基噻吩-2-基)乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(55g，96mmol)在meoh(600ml)和thf(130ml)中的溶液中添加5nnaoh(192ml，959mmol)。反应在63℃加热22h，此时将其真空浓缩。残余物用水(400ml)和dcm(400ml)稀释且在冰浴中冷却。向混合物中添加6nhcl(158ml，949mmol)以将ph调节至5-6(ph试纸)。将混合物充分搅拌且分离层。水层用dcm(200ml)萃取且合并的有机物用mgso4干燥(搅拌30min)，通过过滤且浓缩以得到(r)-5-(1-(1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基)乙基)-2-(3-(((2-甲氧基-4,6-二甲基吡啶-3-基)甲基)氨基)丙基)-4-甲基噻吩-3-甲酸(52.5g，87mmol，91％产率)。残余物真空干燥2h。ms(es)[m+h]⁺560.4。

i)(r)-4-(1-(5-((2-甲氧基-4,6-二甲基吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-4-氧代-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-2-基)乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯

向(r)-5-(1-(1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基)乙基)-2-(3-(((2-甲氧基-4,6-二甲基吡啶-3-基)甲基)氨基)丙基)-4-甲基噻吩-3-甲酸(52.5g，94mmol)、edc(21.58g，113mmol)和hoat(15.32g，113mmol)在dmso(400ml)中的溶液中添加nmm(25.8ml，234mmol)。将反应保持18h，此时将其缓慢倒入冰水(1500ml)中。将混合物剧烈搅拌(顶置式搅拌器)40min。将混合物过滤且固体用水洗涤且风干～1h。将仍然湿的固体溶于dcm且用饱和nh4cl水溶液洗涤，干燥(mg2so4)，通过过滤，且浓缩。通过柱色谱纯化残余物(330g二氧化硅柱；梯度b：4-40％；a＝庚烷。b＝3:1etoac/etoh)得到(r)-4-(1-(5-((2-甲氧基-4,6-二甲基吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-4-氧代-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-2-基)乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(34.3g，60mmol，64％产率)，其为玻璃状黄色固体。ms(es)[m+h]⁺542.4。

j)(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮

向(r)-4-(1-(5-((2-甲氧基-4,6-二甲基吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-4-氧代-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-2-基)乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(34.3g，63.3mmol)在meoh(450ml)中的溶液中添加4nhcl在1,4-二噁烷中的溶液(222ml，886mmol)。将反应在室温保持15分钟，然后在70℃加热24h。该反应冷却至室温且浓缩。残余物用dcm(500ml)和水(300ml)稀释且将ph用浓nh4oh调节至约11。将混合物搅拌15分钟，此时分离层。水层用dcm萃取且将合并的有机物干燥(mg2so4)，过滤，且浓缩。残余物真空干燥18h以得到(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮(29.3g，65.1mmol，100％产率)。ms(es)[m+h]⁺428.3。

k)(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(1-新戊基哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮

向(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮(1.15g，2.69mmol)在dce(30ml)中的溶液中添加新戊醛(0.747ml，6.72mmol)。将反应搅拌5分钟，此时添加acoh(0.308ml，5.38mmol)。15分钟后，nabh(oac)3(1.710g，8.07mmol)作为固体添加且将反应在室温搅拌18h。该反应用dcm(20ml)和h2o稀释。将ph用饱和nahco3和饱和na2co3的组合调节至10。将混合物搅拌30分钟且分离层。水层用dcm萃取且合并的有机物用mg2so4干燥，过滤且浓缩。残余物通过柱色谱纯化(40g二氧化硅柱；梯度b：15-90％；a＝庚烷；b＝3:1etoac/etoh+1％nh4oh)。纯化的残余物用dcm处理且浓缩。残余物然后用tbme处理且浓缩(2x)。固体进一步在真空烘箱中在45℃干燥4h以得到(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(1-新戊基哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮(912mg，1.777mmol，66.1％产率)。¹hnmr(dmso-d6)δ11.58(s，1h)，5.91(s，1h)，4.61(d，j＝13.7hz，1h)，4.50(d，j＝13.4hz，1h)，3.16-3.28(m，2h)，2.75-2.90(m，2h)，2.62-2.73(m，3h)，1.93-2.20(m，13h)，1.74(d，j＝8.9hz，1h)，1.65(quin，j＝6.7hz，2h)，1.33(d，j＝9.4hz，1h)，1.11-1.28(m，7h)，0.81(s，9h)。ms(es)[m+h]⁺498.4.

或者，实施例1化合物如下制备:

a')4-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)噻吩-3-甲酸甲酯

向(1,5-环辛二烯)(甲氧基)铱(i)二聚体(1.6g，2.41mmol)和4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(25ml，173mmol)的冷却的(冰浴)混合物添加4,4'-二-叔丁基-2,2'-联吡啶(1.3g，4.84mmol)在正己烷(75ml)中的溶液。搅拌1分钟后，添加4-甲基噻吩-3-甲酸甲酯(25g，160mmol)(观察到气体逸出)。反应温热至室温且搅拌过夜。将反应浓缩且残余物通过硅胶色谱法纯化(0–10％etoac/己烷)以得到4-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)噻吩-3-甲酸甲酯(29.2g，104mmol，65％产率)，其为无色油状物，其在真空固化为蜡状白色固体。ms(es)[m+h]⁺200.9(硼酸)，283.1(硼酸盐)。

b')4-(1-(((三氟甲基)磺酰基)氧基)乙烯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯

在氮气下向4-乙酰基哌啶-1-甲酸叔丁酯(25g，110mmol)在thf(250ml)中的冷却的(-78℃)溶液中滴加1n二(三甲基甲硅烷基)氨基钠在thf(130ml，130mmol)中的溶液。将反应在-78℃保持1h，此时经15min滴加1,1,1-三氟-n-(吡啶-2-基)-n-((三氟甲基)磺酰基)甲磺酰胺(45g，126mmol)在thf(100ml)中的溶液。将反应在-78℃保持1h，然后在0℃保持30min。该反应用冷却水(500ml)淬灭，用etoac(2x250ml)萃取，用盐水洗涤，干燥(na2so4)，且浓缩。残余物通过硅胶色谱法纯化(0–20％etoac/己烷)以得到4-(1-(((三氟甲基)磺酰基)氧基)乙烯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(28.8g，80mmol，73％产率)，其为无色油状物。ms(es)[m+h]⁺-异丁烯304.0，[m+h]⁺-boc260.0.

c')4-(1-(4-(甲氧基羰基)-3-甲基噻吩-2-基)乙烯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯

将4-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)噻吩-3-甲酸甲酯(33g，117mmol)、4-(1-(((三氟甲基)磺酰基)氧基)乙烯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(50g，139mmol)和nahco3(30g，357mmol)在1,4-二噁烷(300ml)和水(100ml)中的混合物用氮气吹洗。向反应填充四(三苯基膦)钯(0)(6.8g，5.88mmol)且在70℃在n2下加热2h。该反应用etoac(300ml)稀释，用水(300ml)和盐水洗涤，干燥(na2so4)，且浓缩。残余物通过硅胶色谱法纯化(0–20％etoac/己烷)以得到4-(1-(4-(甲氧基羰基)-3-甲基噻吩-2-基)乙烯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(34.5g，81％产率)，其为淡黄色油状物。ms(es)[m+h]⁺-boc266.1，[m+h]⁺-异丁烯-meoh278.0，[m+h]⁺-异丁烯310.1，[m+na]⁺388.1.

d')(r)-4-(1-(4-(甲氧基羰基)-3-甲基噻吩-2-基)乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯

将4-(1-(4-(甲氧基羰基)-3-甲基噻吩-2-基)乙烯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(42.7g，117mmol)和(r,r)-[cod]ir[cy2pthrephox](2.83g，1.636mmol)在dcm(250ml)中的溶液在parr振动器上在60psi氢气压下氢化15h。将混合物浓缩且残余物通过柱色谱法纯化(0–25％etoac/己烷)以提供(r)-4-(1-(4-(甲氧基羰基)-3-甲基噻吩-2-基)乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(38.3g，89％产率)，其为淡黄色油状物。手性hplc(ay-h，5微米(4.6mmx150mm)；240，250nmuv；1.0ml/min；90:10:0.1正庚烷:etoh:异丙基胺(等度))显示材料为98.5％ee。ms(es)[m+h]⁺368.3.

e')(r)-4-(1-(5-溴-4-(甲氧基羰基)-3-甲基噻吩-2-基)乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯

向(r)-4-(1-(4-(甲氧基羰基)-3-甲基噻吩-2-基)乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(72.5g，200mmol)在dmf(200ml)中的冷却的(0℃)溶液中添加nbs(49.1g，276mmol)。移除冰浴且将混合物在室温搅拌6h。将混合物倒入水中且用et2o(3x400ml)萃取。合并的有机物浓缩至一半体积，用连二亚硫酸钠水溶液洗涤，且浓缩至干。通过柱色谱法纯化残余物(0–30％etoac/己烷)得到(r)-4-(1-(5-溴-4-(甲氧基羰基)-3-甲基噻吩-2-基)乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(79.8g，91％产率)，其为淡黄色油状物。¹hnmr(400mhz，cdcl3)δ4.24-3.99(m，2h)，3.92-3.85(m，3h)，2.89(dd，j＝7.1，8.4hz，1h)，2.72-2.51(m，2h)，2.23(s，3h)，1.90-1.79(m，1h)，1.54-1.48(m，1h)，1.45(s，9h)，1.31-1.27(m，1h)，1.26-1.22(m，3h)，1.20-1.02(m，2h)。ms(es)[m+h]⁺468.2，470.2(m+na)。

f')(r)-4-(1-(4-(甲氧基羰基)-3-甲基-5-(3-氧代丙基)噻吩-2-基)乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯

向(r)-4-(1-(5-溴-4-(甲氧基羰基)-3-甲基噻吩-2-基)乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(44g)在meoh(450ml)中的溶液中添加活性炭(40g)。混合物在45℃加热90分钟，此时将其通过过滤且用热meoh(500ml)洗涤。将滤液浓缩且将残余物溶于etoac和庚烷中。将溶液浓缩且真空干燥(hivac)1h以回收38g起始材料。

向(r)-4-(1-(5-溴-4-(甲氧基羰基)-3-甲基噻吩-2-基)乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(38g，85mmol)在dmf(400ml)中的溶液中添加丙-2-烯-1-醇(20.3ml，300mmol)、bu4ncl(23.7g，85mmol)和na2co3(22.6g，213mmol)。反应混合物用n2脱气10–15分钟且添加pd(oac)2(2.9g，12.8mmol)。将反应容器抽真空且用n2(3x)回填且在65℃加热40min。反应冷却至室温，倒入饱和nh4cl(1200ml)中，且用et2o(2x)萃取。合并的萃取物干燥(mgso4)，通过过滤，且浓缩。残余物通过柱色谱纯化(3–25％etoac/庚烷)以得到(r)-4-(1-(4-(甲氧基羰基)-3-甲基-5-(3-氧代丙基)噻吩-2-基)乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(26.2g，65％产率)。ms(es)[m+h]⁺446.4(m+na)。

g')(r)-4-(1-(5-(3-(((2-甲氧基-4,6-二甲基吡啶-3-基)甲基)氨基)丙基)-4-(甲氧基羰基)-3-甲基噻吩-2-基)乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯

向(r)-4-(1-(4-(甲氧基羰基)-3-甲基-5-(3-氧代丙基)噻吩-2-基)乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(20g，47mmol)在meoh(300ml)中的溶液中以冷冻固体添加(2-甲氧基-4,6-二甲基吡啶-3-基)甲胺(9.4g，57mmol)。将反应在室温保持1.5h。反应然后在冰浴中冷却10分钟，此时以固体添加nabh4(4.5g，120mmol)(剧烈发泡/气体逸出)。将混合物搅拌15min。移除冰浴且将反应在室温搅拌1h。反应在冰浴中再冷却且用饱和nh4cl水溶液(120ml)淬灭。移除冰浴且将反应浓缩至～1/4体积。将混合物用饱和nh4cl水溶液稀释且用etoac(2x)萃取。合并的有机物用盐水洗涤，用mgso4干燥(搅拌15min)，通过过滤，且浓缩以得到(r)-4-(1-(5-(3-(((2-甲氧基-4,6-二甲基吡啶-3-基)甲基)氨基)丙基)-4-(甲氧基羰基)-3-甲基噻吩-2-基)乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(27g，99％产率)，其为白色泡沫。ms(es)[m+h]⁺574.5.

h')(r)-5-(1-(1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基)乙基)-2-(3-(((2-甲氧基-4,6-二甲基吡啶-3-基)甲基)氨基)丙基)-4-甲基噻吩-3-甲酸

向(r)-4-(1-(5-(3-(((2-甲氧基-4,6-二甲基吡啶-3-基)甲基)氨基)丙基)-4-(甲氧基羰基)-3-甲基噻吩-2-基)乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(27g，47mmol)在meoh(400ml)和thf(80ml)中的溶液中添加5nnaoh(93ml，470mmol)。反应在63℃加热18h，此时将其浓缩。残余物用水(150ml)和dcm(300ml)稀释且在冰浴中冷却。向混合物添加6nhcl(77ml，460mmol)以调节ph至5-6。将混合物充分搅拌且分离层。水层用dcm(200ml)萃取且合并的有机物用mgso4干燥(搅拌30min)，通过过滤且浓缩以得到(r)-5-(1-(1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基)乙基)-2-(3-(((2-甲氧基-4,6-二甲基吡啶-3-基)甲基)氨基)丙基)-4-甲基噻吩-3-甲酸(25g，80％产率)。ms(es)[m+h]⁺560.4.

i')(r)-4-(1-(5-((2-甲氧基-4,6-二甲基吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-4-氧代-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-2-基)乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯

向(r)-5-(1-(1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基)乙基)-2-(3-(((2-甲氧基-4,6-二甲基吡啶-3-基)甲基)氨基)丙基)-4-甲基噻吩-3-甲酸(25.2g，45mmol)、edc(10.4g，54mmol)和hoat(6.74g，49.5mmol)在dmso(200ml)中的溶液中添加nmm(12.4ml，113mmol)。将反应保持18h，此时将其缓慢倒入冰水(1000ml)中。将混合物剧烈搅拌(顶置式搅拌器)30min。将混合物过滤且固体用水洗涤且风干20min。将仍然湿的固体溶于dcm且用饱和nh4cl水溶液洗涤，干燥(mgso4)，通过过滤，且浓缩。通过柱色谱法(庚烷中的8–40％3:1etoac/etoh)纯化残余物得到(r)-4-(1-(5-((2-甲氧基-4,6-二甲基吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-4-氧代-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-2-基)乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(18.2g，72％产率)。ms(es)[m+h]⁺542.3.

j')(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮

向(r)-4-(1-(5-((2-甲氧基-4,6-二甲基吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-4-氧代-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-2-基)乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(18.2g，33.6mmol)在meoh(200ml)中的溶液中添加4nhcl在1,4-二噁烷(126ml，504mmol)中的溶液。将反应在室温保持15分钟，然后在70℃加热30h。反应冷却至室温且浓缩。残余物用dcm(300ml)和水(150ml)稀释且ph用浓nh4oh调节至～11。将混合物搅拌15分钟，此时分离层。水层用dcm(2x)萃取且将合并的有机物干燥(mgso4)，过滤，且浓缩。将残余物溶于tbme(200ml)且在45℃水浴中涡旋30min。形成白色固体。将混合物浓缩且进一步真空干燥(hivac)4h以得到(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮(15.6g，106％产率)，其为灰白色固体，将其使用而不用进一步纯化。ms(es)[m+h]⁺428.3.

k')(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(1-新戊基哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮

向(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮(28g，66mmol)在dce(400ml)中的溶液中添加新戊醛(15ml，140mmol)。将反应搅拌3分钟，此时添加acoh(7.9ml，140mmol)。10分钟后，nabh(oac)3(41.6g，196mmol)作为固体添加且将反应在室温搅拌40h。将反应倒入冰和dcm中且充分搅拌。将ph用饱和nahco3和饱和na2co3的组合调节至～10。将混合物搅拌15分钟且分离层。水层用dcm萃取且合并的有机物用mgso4干燥，通过过滤且浓缩。残余物通过柱色谱纯化(10–80％3:1etoac/etoh+1％nh4oh在庚烷中)。纯化的残余物真空干燥(hivac)18h以得到(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(1-新戊基哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮(24.5g，74％产率)。¹hnmr(400mhz，dmso-d6)δ0.81(s，9h)1.07-1.29(m，6h)1.33(d，j＝9.63hz，1h)1.65(quin，j＝6.72hz，2h)1.74(d，j＝10.14hz，1h)1.92-2.05(m，3h)2.06-2.20(m，10h)2.62-2.73(m，3h)2.74-2.91(m，2h)3.16-3.29(m，2h)4.50(d，j＝13.43hz，1h)4.61(d，j＝13.69hz，1h)5.90(s，1h)11.57(s，1h)。ms(es)[m+h]⁺498.4.

实施例1化合物的结晶盐酸盐的制备

将(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(1-新戊基哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮(20mg)与丙酮(0.2ml)合并。将混合物在搅拌下加热至40℃。向溶液添加hcl水溶液(3.0m，13μl)。将浆液以1小时的区间在40℃和5℃之间温度循环过夜。将得到的浆液在室温下搅拌，通过plm检查双折射并通过过滤分离，得到结晶hcl盐(形式i)，其将用于对更大规模的制备种晶。

使用50mg(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(1-新戊基哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮重复该实验，并用上述i型晶体种晶。然而，该实验产生了新的结晶形式的hcl盐，称为形式ii。由于形式i晶种转化为形式ii，hcl盐的形式ii似乎是更稳定的形式，并且通过dsc观察到更高的吸热。

将(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(1-新戊基哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮(462mg；0.928mmol)与丙酮(9.0ml；20体积)在40℃在搅拌下合并。向溶液中加入hcl水溶液(3.0m；309μl)，然后加入晶种(形式ii)。混合物在几分钟内显示出沉淀。将浆液在40℃下加热1小时，然后以0.1℃/min的冷却速率缓慢冷却至5℃。然后在24小时内重复加热-冷却循环3次。将浆液在室温下平衡1小时。过滤固体，通过xrpd分析湿滤饼。将剩余的固体在40℃下真空干燥，氮气吹扫4小时。产率为89.3％(443mg；0.829mmol)的结晶hcl盐。

通过xrpd分析结晶hcl盐，并且在干燥之前和之后与作为湿饼的形式ii一致。热数据显示，在高达200℃下重量损失为0.8％，并且在294℃下有伴随分解的大吸热。plm图像显示出小的不规则形状的颗粒。通过离子色谱分析测定，该物质是化学计量的1:1的盐。dvs数据显示在第一个循环期间在40-75％rh的总吸湿量为0.5％。第二个循环，从5-80％rh，显示出1.0％的相当线性的吸附，然后是在80-90％rh之间有0.4％降低。dvs实验后hcl盐的xrpd数据未显示形式变化或结晶性变化。

该材料(形式ii)的x射线粉末衍射(xrpd)图示于图1中，衍射角和d-间距的总结在下表i中给出。使用x'celerator^tmrtms(realtimemulti-strip)检测器，在si零背景晶片上的pananalyticalx'pertpro衍射仪上进行xrpd分析。采集条件包括：cukα辐射，发生器电压：45kv，发生器电流：40ma，步长：0.02°2θ。附带光束侧的配置：固定发散狭缝(0.25°)，0.04rad索勒狭缝，防散射狭缝(0.25°)和10mm光束掩模。衍射光束侧的配置：固定发散狭缝(0.25°)和0.04rad索勒狭缝。

表i

该物质(形式ii)的拉曼光谱在nicoletnxr9650ft-拉曼光谱仪上以4cm^-1的分辨率记录，其中激发来自nd:yvo4激光(λ＝1064nm)。该材料的拉曼光谱如图2所示，其中观察到的主峰位于455.0、478.7、505.2、533.5、541.7、565.1、612.1、693.5、757.9、791.3、853.9、995.1、1046.7、1113.8、1148.2、1208.9、1240.9、1279.4、1315.4、1390.2、1437.7、1473.5、1550.7、1628.2、1654.8、2735.5、2917.4和2953.0cm^-1。

将该材料(形式ii)的差示扫描量热法(dsc)温谱图记录在配备有自动取样器和冷却系统的tainstrumentsq100差示扫描量热仪上，以40ml/minn2吹扫，如图3所示。在卷边的铝盘中使用15℃/min的加热速率进行实验。该材料(形式ii)的dsc温谱图显示出大的单一吸热，其起始温度为约250℃，峰值温度为约298℃，焓为195.4j/g。本领域技术人员将认识到，吸热的起始温度、峰值温度和焓可以根据实验条件而变化。

在tainstrumentsq500热重分析仪上记录该材料(形式ii)的热重分析(tga)温谱图，并显示在图4中。实验在40ml/minn2流和15℃/min的加热速率下进行。该材料(形式ii)的tga温谱图显示在最终热分解之前观察到单一重量损失事件。减重事件发生在30℃至200℃的温度范围内，重量损失约为0.8％。

实施例2

(r)-2-(1-(1-(环丁基甲基)哌啶-4-基)乙基)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮

按照实施例1的大体步骤，制备(r)-2-(1-(1-(环丁基甲基)哌啶-4-基)乙基)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮。¹hnmr(dmso-d6)δ11.58(s，1h)，5.90(s，1h)，4.60(d，j＝13.7hz，1h)，4.50(d，j＝13.7hz，1h)，3.15-3.30(m，2h)，2.76-2.90(m，2h)，2.62-2.75(m，3h)，2.34-2.45(m，1h)，2.04-2.31(m，11h)，1.90-2.02(m，2h)，1.55-1.83(m，8h)，1.36(d，j＝12.2hz，1h)，1.05-1.31(m，7h)。ms(es)[m+h]⁺496.4.

实施例3

(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-(1-(1-异丁基哌啶-4-基)乙基)-3-甲基-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮

按照实施例1的大体步骤，制备(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-(1-(1-异丁基哌啶-4-基)乙基)-3-甲基-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮。¹hnmr(dmso-d6)δ11.58(s，1h)，5.91(s，1h)，4.60(d，j＝13.4hz，1h)，4.50(d，j＝13.4hz，1h)，3.16-3.29(m，2h)，2.79-2.93(m，2h)，2.74(d，j＝11.2hz，1h)，2.66(t，j＝7.2hz，2h)，2.09-2.20(m，9h)，1.95(d，j＝7.4hz，2h)，1.59-1.83(m，6h)，1.38(d，j＝11.9hz，1h)，1.07-1.29(m，6h)，0.81(d，j＝6.3hz，6h)。ms(es)[m+h]⁺484.4.

实施例4

(r)-2-(1-(1-(环戊基甲基)哌啶-4-基)乙基)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮

按照实施例1的大体步骤，制备(r)-2-(1-(1-(环戊基甲基)哌啶-4-基)乙基)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮。¹hnmr(dmso-d6)δ11.51-11.64(m，1h)，5.91(s，1h)，4.56-4.68(m，1h)，4.45-4.54(m，1h)，3.24(t，j＝5.45hz，2h)，2.74-2.93(m，j＝8.36hz，3h)，2.67(t，j＝7.22hz，2h)，2.12-2.20(m，9h)，1.96-2.11(m，3h)，1.66(d，j＝6.84hz，8h)，1.33-1.57(m，5h)，1.12-1.22(m，7h)。ms(es)[m+h]⁺510.5.

实施例5

(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-(1-(1-(2,2-二甲基丁基)哌啶-4-基)乙基)-3-甲基-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮

按照实施例1的大体步骤，制备(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-(1-(1-(2,2-二甲基丁基)哌啶-4-基)乙基)-3-甲基-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮。¹hnmr(dmso-d6)δ11.58(br.s.，1h)，5.91(s，1h)，4.56-4.66(m，1h)，4.46-4.54(m，1h)，3.23(d，j＝13.18hz，1h)，2.74-2.87(m，j＝11.41hz，2h)，2.65-2.70(m，3h)，2.16(s，3h)，2.13(d，j＝1.52hz，7h)，1.99(s，3h)，1.74(d，j＝8.87hz，1h)，1.60-1.69(m，j＝6.84hz，2h)，1.33(d，j＝7.86hz，1h)，1.10-1.26(m，9h)，0.73-0.79(m，9h)。ms(es)[m+h]⁺512.4.

实施例6

(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-(1-(1-(2-氟-2-甲基丙基)哌啶-4-基)乙基)-3-甲基-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮

a)(r)-5-((2-甲氧基-4,6-二甲基吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮

将(r)-4-(1-(5-((2-甲氧基-4,6-二甲基吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-4-氧代-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-2-基)乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(3.0g，5.54mmol)用tfa(5.12ml，66.5mmol)在dcm(17ml)中的溶液处理。将反应保持3.5h。lcms显示～8％起始材料剩余。向该反应缓慢滴加更多tfa(0.7ml)。30分钟后，lcms显示反应完成。在搅拌下将反应缓慢倒入冰、水和饱和nahco3的混合物中。将混合物用dcm稀释且搅拌15分钟(测量的ph8)。分离层且水层用dcm萃取。将有机物合并，干燥(mgso4)，且浓缩以得到(r)-5-((2-甲氧基-4,6-二甲基吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮(2.7g)。ms(es)[m+h]⁺442.2.

b)(r)-2-(1-(1-(2-氟-2-甲基丙基)哌啶-4-基)乙基)-5-((2-甲氧基-4,6-二甲基吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮

向(r)-5-((2-甲氧基-4,6-二甲基吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮(1.6g，3.62mmol)在ch3cn(20ml)中的溶液中添加三氟甲磺酸2-氟-2-甲基丙基酯(1.624g，7.25mmol)和cs2co3(3.54g，10.87mmol)。混合物在50℃加热6h，此时将其用dcm(30ml)稀释且过滤。将滤液浓缩且残余物使用柱色谱法纯化(0–60％etoac/己烷)以得到(r)-2-(1-(1-(2-氟-2-甲基丙基)哌啶-4-基)乙基)-5-((2-甲氧基-4,6-二甲基吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮(1.2g)，其为浅棕色固体。ms(es)[m+h]⁺516.4.

c)(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-(1-(1-(2-氟-2-甲基丙基)哌啶-4-基)乙基)-3-甲基-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮

向(r)-2-(1-(1-(2-氟-2-甲基丙基)哌啶-4-基)乙基)-5-((2-甲氧基-4,6-二甲基吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮(1.20g，2.327mmol)在1,4-二噁烷(12ml)中的溶液中添加6nhcl(3.88ml，23.27mmol)。将混合物在70℃搅拌18h。将混合物浓缩且将残余物溶于meoh(10ml)。添加nahco3(0.586g，6.98mmol)且将混合物搅拌15分钟且过滤。将滤液浓缩且残余物使用柱色谱法纯化(10–80％3:1etoac/meoh+1％nh4oh在庚烷中)以得到(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-(1-(1-(2-氟-2-甲基丙基)哌啶-4-基)乙基)-3-甲基-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮(960mg，81％)，其为白色固体。¹hnmr(400mhz，甲醇-d4)δ1.23-1.51(m，12h)，1.76-1.92(m，3h)，1.95-2.13(m，2h)，2.22(s，3h)，2.28(s，3h)，2.30-2.35(m，3h)，2.38-2.43(m，1h)，2.44-2.49(m，1h)，2.78(t，j＝7.35hz，2h)，2.85-2.97(m，2h)，3.04(d，j＝11.41hz，1h)，3.35-3.43(m，2h)，4.68-4.85(m，2h)，6.15(s，1h)。ms(es)[m+h]⁺502.6.

实施例7

(r)-2-(1-(1-(环丙基甲基)哌啶-4-基)乙基)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮

按照实施例1的大体步骤，制备(r)-2-(1-(1-(环丙基甲基)哌啶-4-基)乙基)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮。¹hnmr(dmso-d6)δ11.58(s，1h)5.91(s，1h)4.40-4.66(m，2h)3.24(t，j＝6.21hz，2h)2.98(d，j＝11.15hz，1h)2.84-2.92(m，2h)2.67(t，j＝7.22hz，2h)2.15(d，j＝10.65hz，9h)2.10(d，j＝6.59hz，2h)1.61-1.86(m，5h)1.39(d，j＝11.91hz，1h)1.10-1.26(m，6h)0.72-0.83(m，1h)0.38-0.45(m，2h)-0.01-0.06(m，2h)。ms(es)[m+h]⁺482.4.

实施例8

(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(1-((1-甲基环戊基)甲基)哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮

按照实施例1的大体步骤，制备(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(1-((1-甲基环戊基)甲基)哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮。¹hnmr(400mhz，甲醇-d4)δ0.90(m，3h)，1.12-1.29(m，8h)，1.29-1.45(m，3h)，1.50-1.72(m，6h)，1.76(d，j＝7.86hz，1h)，1.96-2.11(m，2h)，2.11-2.24(m，11h)，2.60-2.72(m，2h)，2.77(d，j＝11.66hz，1h)，2.81-2.93(m，2h)，3.19-3.29(m，2h)，4.50(d，j＝13.69hz，1h)，4.61(d，j＝13.69hz，1h,)，5.91(s，1h)，8.17(s，1h)。ms(es)[m+h]⁺524.4.

实施例9

(r)-2-(1-(1-(双环[2.2.2]辛-1-基甲基)哌啶-4-基)乙基)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮

按照实施例1的大体步骤，制备(r)-2-(1-(1-(双环[2.2.2]辛-1-基甲基)哌啶-4-基)乙基)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮。¹hnmr(400mhz，甲醇-d4)δ1.32(d，j＝6.84hz，3h)，1.49-1.85(m，20h)，2.10(b，1h)，2.23(s，3h)，2.28(s，3h)，2.32(s，3h)，2.72-3.19(m，7h)，3.35-3.55(m，4h)，4.73(d，j＝13.94hz，1h)，4.82(d，j＝13.94hz，1h)，6.15(s，1h)，8.51(s，1h)。ms(es)[m+h]⁺550.4.

实施例10

(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(1-((1-甲基环丁基)甲基)哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮

向(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮(43g，91mmol)在dce(600ml)中的溶液中添加1-甲基环丁烷-1-甲醛(15.43g，149mmol)。将反应搅拌3分钟，此时添加acoh(10.88ml，190mmol)。8分钟后，nabh(oac)3(57.5g，272mmol)作为固体添加且将反应在室温搅拌18h。lcms显示反应为80％完成。向反应混合物添加更多nabh(oac)3(5g，24mmol)。1h后，lcms显示无变化。向该混合物添加1-甲基环丁烷-1-甲醛(2g，20mmol)。将反应搅拌2h，此时将其倒入冰和dcm中。将ph用饱和nahco3和饱和na2co3的组合调节至10。将混合物搅拌15分钟且分离层。水层用dcm萃取且合并的有机物用mgso4干燥，通过过滤且浓缩。残余物通过柱色谱纯化(330g二氧化硅柱；梯度b：10-80％；a＝庚烷；b＝3:1etoac/etoh+1％nh4oh)。将含产物的级分真空浓缩直到白色固体沉淀。添加庚烷且过滤固体。将滤液浓缩直到形成白色沉淀。将固体过滤且用庚烷冲洗。将滤液第三次浓缩直到形成白色沉淀，将其过滤且用庚烷冲洗。将合并的固体在真空烘箱中在40℃干燥18h以得到(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(1-((1-甲基环丁基)甲基)哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮(37.15g，71.4mmol，79％产率)。¹hnmr(dmso-d6)δ1.10(s，4h)1.13-1.22(m，5h)1.35(d，j＝12.17hz，1h)1.51-1.60(m，2h)1.61-1.88(m，9h)2.04-2.21(m，11h)2.58-2.77(m，4h)2.84(quin，j＝6.97hz，1h)3.14-3.29(m，2h)4.51(d，j＝13.69hz，1h)4.60(d，j＝13.69hz，1h)5.90(s，1h)11.59(s，1h)。ms(es)[m+h]⁺510.3.

实施例10化合物的结晶盐酸盐的制备

将(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(1-((1-甲基环丁基)甲基)哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮(20mg)与ch3cn(0.2ml)合并。将混合物在搅拌下加热至40℃。向浆液添加hcl水溶液(3.0m，13μl)。将浆液在40℃和5℃之间温度循环3天。将混合物冷却至4℃并在4℃保持3天。使浆液温热至室温并使一部分溶剂缓慢蒸发。将浆液在室温下平衡1小时，通过过滤分离，并且通过raman分析得到结晶hcl盐(形式i)，其将用于对更大规模的制备种晶。

将ch3cn(6.0ml，20vol)加入到(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(1-((1-甲基环丁基)甲基)哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮(303.3mg，0.595mmol)。加入1当量的hcl酸水溶液(198μl；3m溶液)，然后加入晶种(形式i)。将浆料在40至5℃的温度下循环3天。通过真空过滤分离结晶hcl盐，空气干燥30分钟并在真空烘箱中在40℃下干燥过夜。结晶hcl盐的产率为72％(235mg，0.430mmol)。

dsc数据显示出明显的吸热，起点为296.6℃(δh＝136.5j/g)。tga数据显示在200℃以下可忽略不计的重量损失。在200℃和270℃之间观察到1.6％的重量损失。通过离子色谱法(ic)证实hcl盐的化学计量为1:1(母体：hcl酸)。dvs等温线图显示在5-75％rh之间约0.5％的水分吸收，从5-95％rh总吸收为0.6％的水，表明低水平的吸湿性。dvs后样品的xrpd图谱未显示晶体形式或结晶度的变化。在真空烘箱中在40℃下干燥过夜也没有改变晶形。

该材料(形式i)的x射线粉末衍射(xrpd)图案示于图5中，衍射角和d-间距的总结在下表ii中给出。使用x'celerator^tmrtms(realtimemulti-strip)检测器，在si零背景晶片上的pananalyticalx'pertpro衍射仪上进行xrpd分析。采集条件包括：cukα辐射，发生器电压：45kv，发生器电流：40ma，步长：0.02°2θ。附带光束侧的配置：固定发散狭缝(0.25°)，0.04rad索勒狭缝，防散射狭缝(0.25°)和10mm光束掩模。衍射光束侧的配置：固定发散狭缝(0.25°)和0.04rad索勒狭缝。

表ii

该材料(形式i)的拉曼光谱在nicoletnxr9650ft-拉曼光谱仪上以4cm^-1的分辨率记录，其中激发来自nd:yvo4激光(λ＝1064nm)。该材料的拉曼光谱如图6所示，其中观察到的主峰位于421.6、435.5、468.3、480.1、504.7、511.4、537.7、549.9、566.3、611.1、658.8、683.1、693.2、728.0、737.7、763.9、776.0、793.6、806.5、813.7、851.8、886.9、924.8、986.3、1000.6、1050.4、1115.8、1139.6、1169.2、1207.2、1226.7、1252.1、1276.7、1286.1、1312.7、1338.0、1372.6、1391.4、1427.9、1462.4、1482.4、1552.7、1595.3、1620.0、1646.7、2865.0、2921.8、2955.3、2973.3和3062.7cm^-1。

将该材料(形式ii)的差示扫描量热法(dsc)温谱图记录在配备有自动取样器和冷却系统的tainstrumentsq100差示扫描量热仪上，以40ml/minn2吹扫，如图3所示。在卷边的铝盘中使用15℃/min的加热速率进行实验。该材料(形式ii)的dsc温谱图显示出大的单一吸热，其起始温度为约265℃，峰值温度为约300℃，焓为136.5j/g。本领域技术人员将认识到，吸热的起始温度、峰值温度和焓可以根据实验条件而变化。

在tainstrumentsq500热重分析仪上记录该材料(形式ii)的热重分析(tga)温谱图，并显示在图4中。实验在40ml/minn2流和15℃/min的加热速率下进行。该材料(形式ii)的tga温谱图显示在最终热分解之前观察到单一重量损失事件。减重事件发生在30℃至260℃的温度范围内，重量损失约为1.6％。

实施例11

(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(1-((1-甲基环丙基)甲基)哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮

按照实施例1的大体步骤，制备(r)-5-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-2-(1-(1-((1-甲基环丙基)甲基)哌啶-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂环庚三烯-4-酮。¹hnmr(dmso-d6)δ0.11-0.33(m，4h)0.98(s，3h)1.07-1.28(m，6h)1.39(d，j＝12.17hz，1h)1.59-1.82(m，5h)1.97-2.07(m，2h)2.08-2.29(m，9h)2.66(t，j＝7.22hz，2h)2.81-2.92(m，2h)2.97(d，j＝10.39hz，1h)3.14-3.31(m，2h)4.51(d，j＝13.43hz，1h)4.60(d，j＝13.69hz，1h)5.91(s，1h)11.58(s，1h)。ms(es)[m+h]⁺496.6.

测试方案

评估本文包含的化合物抑制prc2复合物中ezh2的甲基转移酶活性的能力。人prc2复合物是通过如下制备的：在sf9细胞中共表达5个成员蛋白(flag-ezh2、eed、suz12、rbap48、aebp2)的每一个，然后共纯化。酶活性是通过闪烁迫近分析法(spa)测定的，其中将氚代甲基从3h-sam转移至衍生自组蛋白h3的生物素化的、未甲基化的肽底物上的赖氨酸残基上。肽在链亲和素包被的spa珠上被捕获并将所得信号在viewlux读板器上读取。

部分a.化合物的制备

1.将固体溶于100％dmso中制备10mm化合物储备液。

2.在384孔板上，将各测试化合物溶于100％dmso以建立11个点的连续稀释(1:4稀释，最高浓度10mm)，第6栏和第18栏为dmso对照。

3.将10nl化合物从稀释板分配至反应板(corning，384-孔聚苯乙烯nbs，cat#3673)。

部分b.试剂的制备

制备以下溶液：

1.1x基础缓冲液，50mmtris-hcl，ph8，2mmmgcl2:每1l基础缓冲液，混合1mtris-hcl，ph8(50ml)，1mmgcl2(2ml)和蒸馏水(948ml)。

2.1x测试缓冲液:每10ml1x测试缓冲液，混合1x基础缓冲液(9.96ml)，1mdtt(40ul)，和10％吐温-20(1ul)，得到终浓度为50mmtris-hcl，ph8，2mmmgcl2，4mmdtt，0.001％吐温-20。

3.2x酶溶液:每10ml2x酶溶液，混合1x测试缓冲液(9.99ml)和3.24umezh25成员复合物(6.17ul)，得到最终酶浓度为1nm。

4.pa珠溶液:每1mlspa珠溶液，混合链亲和素包被的spa珠(perkinelmer，cat#rpnq0261，40mg)和1x测试缓冲液(1ml)，得到工作浓度为40mg/ml。

5.2x底物溶液:每10ml2x底物溶液，混合40mg/mlspa珠溶液(375ul)、1mm生物素化的组蛋白h3k27肽(200ul)、12.5um3h-sam(240ul；1mci/ml)、1mm冷sam(57ul)和1x测试缓冲液(9.13ml)，得到终浓度为0.75mg/mlspa珠溶液、10um生物素化的组蛋白h3k27肽、0.15um3h-sam(～12uci/ml3h-sam)和2.85um冷sam。

6.2.67x淬灭溶液:每10ml2.67x淬灭溶液，混合1x测试缓冲液(9.73ml)和10mm冷sam(267ul)，得到终浓度为100um的冷sam。

部分c.在384孔grenierbio-one板上的测试反应

化合物的添加

1.将10nl/孔的1000x化合物分配至测试孔中(如上所述)。

2.将10nl/孔的100％dmso分配至第6和18栏(分别为高对照和低对照)。

测试

1.将5ul/孔的1x测试缓冲液分配至第18栏(低对照反应)。

2.将5ul/孔的2x底物溶液分配至第1-24栏(注:底物溶液应被混合以保证在分配至基质贮器之前为均匀的珠悬浮液)。

3.将5ul/孔的2x酶溶液分配至第1–17、19–24栏。

4.在室温培养该反应60分钟。

淬灭

1.将6ul/孔的2.67x淬灭溶液分配至第1-24栏。

2.密封测试板且以500rpm旋转约1分钟。

3.在viewlux仪器中将板暗适应15–60分钟。

读板

1.在viewlux读板器上读取测试板，其采用613nm的发射滤波器或滤光膜(300秒暴露)。

试剂的加入可采取手动完成或用自动液体处理器完成。

结果

对于每个化合物浓度，相对于dmso对照计算百分比抑制，并且使用abase数据拟合软件包中的标准ic50拟合参数拟合所得值。

实施例化合物通常是根据上述或类似的测试进行测定的且发现它们是ezh2的抑制剂。根据该测试测定的具体生物活性列于下表。ic50值≤10nm是指化合物的活性接近该测试中的检测限。重复测试流程可得到稍微不同的ic50值。